小鼠大脑亚硝酸盐暴露与DNA甲基化和组蛋白去乙酰化

目的 观察慢性亚硝酸盐暴露对小鼠大脑皮质炎症损伤的影响及其探讨DNA甲基化和组蛋白去乙酰化等相关机制。方法 选取8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组（生理盐水）、低剂量亚硝酸盐组（3g/L）和高剂量亚硝酸盐组(6g/L),建立亚硝酸盐暴露模型,收集各组小鼠大脑皮质,利用免疫荧光染色法和Western blotting法分析大脑皮质炎症损伤,组蛋白去乙酰化酶和DNA甲基化相关酶的表达情况。结果 慢性亚硝酸盐暴露后小鼠大脑皮质炎症损伤因子环氧化酶2（COX2）、白细胞介素-1β（IL-1β）、离子钙接头蛋白分子1（Iba1）、c-Fos、IL-6表达量明显多于对照组（P<0.01）,同时高剂量暴露组DNA甲基化相关酶5-甲基胞嘧啶（5-mC）、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3a、和组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）表达明显低于对照组（P<0.01）且都呈亚硝酸盐剂量依赖性。结论 亚硝酸盐暴露可通过促进细胞免疫炎症对小鼠大脑皮质造成损伤,并且DNA甲基化和组蛋白去乙酰化可能参与了慢性亚硝酸盐暴露过程中的应答过程及其调控机制。     

孕期亚硝酸盐暴露对仔鼠海马损伤的影响

目的 探讨孕期亚硝酸盐暴露对海马损伤的作用。 方法 利用C57BL/6J小鼠建立孕期亚硝酸盐暴露模型,分为对照组（生理盐水）、低剂量亚硝酸盐组（60mg/kg）和高剂量亚硝酸盐组(120mg/kg)。收集出生当日（P0）、P7、P14及P30各年龄点仔鼠大脑,用于免疫荧光染色、彗星实验、Western blotting蛋白半定量分析,对海马损伤进行研究。 结果 不论是亚硝酸盐暴露组还是对照组,仔鼠齿状回增殖的神经干细胞数目均随着年龄的增长逐渐减少;在P0、P7、P14和P30年龄点,暴露组仔鼠增殖的神经干细胞的数量明显比对照组少,且具有剂量依赖性（P<0.05,n=96）。为了鉴别这种抑制作用是否具有选择性,我们对P0仔鼠室管膜下区神经干细胞的增殖情况进行了观察。结果发现,亚硝酸盐暴露组室管膜下区的神经干细胞增殖较对照组也减少,同样具有剂量依赖性（P<0.05）;亚硝酸盐暴露组仔鼠门区炎症损伤细胞和凋亡细胞的数目比对照组多,具有剂量依赖性（P<0.05）;彗星实验结果显示,亚硝酸盐暴露组P0仔鼠海马细胞的彗尾比对照组长,具有剂量依赖性(P<0.01);与对照组P0仔鼠相比,亚硝酸盐暴露组仔鼠海马组织内Caspase-8和核因子κB（NF-κB）蛋白的表达量较高（P<0.05）。
结论 孕期亚硝酸盐暴露可通过抑制神经干细胞增殖,促进细胞损伤和凋亡而对仔鼠海马造成损伤。     

Smad7和组蛋白去乙酰化酶1在小鼠马兜铃酸肾病中的表达

目的 探讨Smad7、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)在小鼠马兜铃酸肾病(AAN)中的表达及两者在马兜铃酸肾病发生、发展中的作用.方法 将32只体重(20±2)g 的SPF(无菌)雄性昆明小鼠随机分为4组,其中3组为实验组,灌胃给予不同剂量的马兜铃酸(AA)Ⅰ,分别为4 mg/(kg·d)、8 mg/(kg·d)、16mg/(kg·d).另设对照组,PBS灌胃.应用免疫组织化学、免疫印迹法及RT-PCR技术,检测AAN小鼠和正常对照组中Smad7和HDAC1的表达情况.结果 HDAC1阳性着色主要分布于细胞核上,且在AAN中的表达强度明显高于正常对照组.免疫印迹法检测和RT-PCR提示,Smad7在AAN中的表达低于对照组,而HDAC1的表达显著高于对照组.结论 在AAN中Smad7低表达以及HDAC1高表达,提示Smad7和HDAC1可能在AAN的发生、发展中起重要作用.     

小鼠神经母细胞瘤N2a细胞脑啡肽酶基因的表达与启动子区甲基化和组蛋白修饰相关

目的研究小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a(N2a)细胞中脑啡肽酶(NEP)基因表达的表观调控机制,探讨DNA甲基化与组蛋白乙酰化之间的相互作用。方法体外培养N2a细胞,以3μmol/L、5μmol/L DNA甲基化酶抑制5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-dc)及(300、500、700)nmol/L组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)分别处理N2a细胞48 h和24 h。采用逆转录PCR(RT-PCR)、Western blot法分别检测NEP的mRNA、蛋白表达;亚硫酸氢盐测序聚合酶链反应(BSP)法检测NEP基因启动子区DNA的甲基化水平;染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测NEP基因启动子区组蛋白H3的乙酰化水平。结果 5-Aza-dc和TSA均能剂量依赖地提高NEP基因的表达(P0.01);5-Aza-dc可诱导NEP基因去甲基化(P0.01);TSA可增高NEP组蛋白H3乙酰化水平(P0.05),但不能明显改变NEP基因DNA的甲基化水平(P0.05)。结论在小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中NEP基因的表达受DNA甲基化及组蛋白乙酰化的调控,组蛋白乙酰化水平并不影响DNA甲基化状态。     

孕期亚硝酸盐暴露对子鼠视皮质突触改变的影响

目的 建立亚硝酸盐暴露模型,探讨孕期亚硝酸盐暴露对子鼠视皮质突触数量的影响及其改变机制。 方法 采用免疫荧光染色法观察对照组和模型组（低剂量组与高剂量组）子鼠出生后0d(P0)、P7、P14、P30的的视皮质突触素(SYN)和γ突触核蛋白(γ-synuclein)的改变,利用Western blotting和水迷宫实验对SYN蛋白的表达进行进一步验证。 结果 横向比较（剂量）发现,亚硝酸盐暴露组SYN减少(P<0.05)而γ-synuclein 阳性细胞增多(P<0.05),且与亚硝酸盐存在剂量依赖关系(P<0.05)。纵向比较(年龄)发现,P0、P7、P14、P30 SYN表达随着年龄增长而增多(P<0.05),γ-synuclein表达减少 (P<0.05),剂量(MS=2.00, F=55.22,P<0.05)与年龄(MS=1.11, F=30.68, P<0.05)之间存在交互作用且剂量的影响作用更大。Western blotting和水迷宫实验结果与免疫荧光统计结果一致。 结论 孕期亚硝酸盐暴露会影响子代视皮质突触的发育,减少突触数量,且对其影响与亚硝酸盐暴露剂量存在依赖关系,而γ突触核蛋白的过度表达可能是突触丢失的主要原因。     

不同光照制对雄性小鼠生殖影响的研究

目的 探讨不同光照制对雄性小鼠生殖的影响。方法 取昆明种雄性小鼠作短期持续光照、持续黑暗、反相光照3种光照制处理。观察小鼠睾丸、附睾重量及光镜下睾丸、附睾组织学变化、精子数量、精子活动度、精子畸形率。结果 各组小鼠睾丸、附睾重量无显著性差异,而且各实验组光镜下睾丸、附睾组织学均未见异常。与对照组相比,黑暗小鼠和反相光照组小鼠精子数量明显降低,此外,反相光照组小鼠精子畸形率显著增加。结论 异常光照周期可能影响雄性小鼠生殖能力。     

生殖周期中小鼠子宫巨噬细胞的分布

为了认识生殖周期中子宫巨噬细胞的分布，用Ｆ４／８０单克隆抗体，对小鼠子宫巨噬细胞进行了免疫组织化学标记。结果显示，间情期子宫内膜中有大量巨噬细胞，动情前期数量略有减少，但子宫系膜三角区出现较多巨噬细胞。动情期子宫内膜中有少量巨噬细胞，动情后期显著减少。在动情期和动情后期，子宫系膜三角区中均有较多巨噬细胞，妊娠１ｄ的子宫内膜中巨噬细胞数量很少，妊娠７ｄ的子宫蜕膜中则消失。妊娠１４ｄ子宫的壁蜕膜组织中有少量巨噬细胞，在子宫肌间偶见，基蜕膜与子宫腺区中未见巨噬细胞。妊娠１８ｄ子宫中，壁蜕膜中巨噬细胞明显增多，子宫腺区也有少量，同时子宫系膜基部可见许多，但基蜕膜中未见巨噬细胞。产后１ｄ子宫中，巨噬细胞在内膜中数量极多，子宫肌间可见成簇分布。产后３ｄ子宫内膜结构基本恢复正常，其内仍有许多巨噬细胞。实验结果提示：子宫巨噬细胞在妊娠早期数量减少可能与胚泡着床有关；分娩前后子宫巨噬细胞的增多可能与产后子宫的修复有关     

缺血、缺氧对小鼠海马DNA甲基化的影响

目的建立缺血、缺氧脑片模型,探讨缺血、缺氧对小鼠海马的损伤及其机制。方法利用C57BL/6J小鼠建立海马脑片缺血、缺氧性脑损伤(HIBD)模型,采用免疫组织化学染色法和Western blotting法分析正常对照组海马脑片与HIBD实验组海马脑片炎症损伤、DNA甲基化相关酶的表达情况。结果 HIBD实验组海马脑片氧化应激、炎症损伤细胞明显多于对照组(P0.01),诱发海马应激损伤;同时HIBD实验组海马脑片DNA甲基化水平高于对照组(P0.01)。结论脑片缺血、缺氧可促发炎症反应对海马组织造成损伤,DNA甲基化水平升高,提示DNA甲基化可能参与缺血、缺氧组织损伤过程;机制可能是HIBD影响DNA代谢活动,诱导DNA甲基化水平升高,DNA甲基化调控相关基因表达产生氧化应激,促发炎症反应,对海马造成损伤。     

DNA甲基转移酶1和组蛋白去乙酰化酶1在子宫内膜异位症在位内膜的表达

目的 探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）和组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）在子宫内膜异位症患者子宫内膜中的表达及其两者在子宫内膜异位症发生、发展中的作用。方法 选取子宫内膜异位症患者在位内膜18例, 无子宫内膜异位症的对照子宫内膜20例,应用免疫组织化学法测定DNMT1的分布,应用免疫印迹法检测内膜组织中DNMT1和HDAC1蛋白的表达。结果 免疫组织化学提示,DNMT1主要分布于子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的胞核;子宫内膜异位症在位内膜中DNMT1的表达强度显著高于对照组子宫内膜（P<0.01）。免疫印迹发现,子宫内膜异位症在位内膜DNMT1和HDAC1蛋白的表达高于对照组子宫内膜, 差异有统计学意义（P<0.05）;且两者的表达呈正相关 （P<0.05）。结论 DNMT1和HDAC1在EMs患者的高表达可能在子宫内膜异位症的发生、发展中起着重要作用。     

Histopathologic,biochemical and genotoxic investigations on chronic sodium nitrite toxicity in mice

The aim of this study was to investigate the effects of long term Sodium nitrite (NaNO₂) consumption. Swiss albino mice were given NaNO₂ (0, 10 and 20 mg/kg/day) as mixed in feed for 8 months. At the end of treatments, animals were sacrificed and selected organs were processed for histopathologic, imunohistochemical, biochemical and genotoxic investigations. Mild to moderate degenerative changes were observed in liver, kidney, intestine, lung and spleen of NaNO₂-given mice. Inducible nitric oxide synthase and nitrotyrosine activities increased in liver and kidney of NaNO₂-given mice. Proliferating cell nuclear antigen activity increased in liver. Apoptotic cell death was observed in livers of the treatment groups. Liver malondialdehyde level was higher in the treatment groups while no change was seen in kidney. Nitric oxide levels in both liver and kidney of the treatment groups were lower than those of the control group. In genotoxic investigations, the number of chromosome and chromatid breaks, chromatid association, and polyploidy increased while mitotic index decreased in NaNO₂-given mice. The results showed that NaNO₂ would cause histopathologic changes, nitrosative tissue damage, and lipid peroxidation in liver and kidney, as well as induce chromosomal aberrations even if it was given at low levels for long time.     

孕期酒精暴露诱导神经鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠海马苔藓细胞凋亡

目的 探讨神经酰胺对孕期酒精暴露所诱导的小鼠神经细胞凋亡的影响.方法 建立神经鞘磷脂合成酶2基因敲除(SMS-/-2)小鼠和野生型(WT)小鼠的孕期酒精暴露模型,将出生后的不同基因型仔鼠(共360只)分为对照组和酒精组.用酶学法检测生后0 d(P0)仔鼠血清神经鞘磷脂(SM)含量,利用免疫荧光染色法观察对照组与模型组各年龄点仔鼠齿状回苔藓细胞凋亡数量的变化,免疫印迹法检测P7、P14仔鼠海马组织Caspase-8、Caspase-3激活蛋白的相对表达量.结果 酒精暴露后仔鼠血清SM水平降低,且具有剂量依赖性(F=41.08,P<0.05);SMS-/-2仔鼠血清SM水平低于同组WT仔鼠(F=53.34,P<0.01).酒精诱导WT和SMS-/-2仔鼠苔藓细胞凋亡(F=15.61,P<0.05),有剂量依赖性和长时程效应,与同年龄、相同处理条件的WT仔鼠相比,SMS-/-2仔鼠苔藓细胞凋亡数量较多(F=11.72,P<0.05).Western blotting检测结果 与免疫荧光结果 一致.结论 SMS2基因缺失使血清SM水平降低,可引起神经酰胺在体内蓄积;神经酰胺促进酒精暴露诱导神经细胞凋亡的过程;孕期酒精暴露主要通过死亡受体途径诱导神经细胞凋亡的发生.     

RTCB在小鼠不同组织中的表达

目的 检测RTCB在小鼠各种组织中的表达和分布。 方法 提取小鼠胃、前列腺、子宫、卵巢等组织的总蛋白,利用免疫印迹技术,检测RTCB在各组织的相对表达量;通过免疫组织化学技术,检测RTCB在各组织的表达定位情况。 结果 免疫印迹结果显示,小鼠17种组织中RTCB均有表达,输卵管、骨骼肌、肾脏的相对表达量较高,而在膀胱和小肠的相对表达量较低。免疫组织化学结果显示,RTCB在不同组织或同一组织的不同细胞中免疫染色存在差异,尤其在睾丸、附睾、卵巢、子宫、输卵管、小肠等组织某些特定细胞中免疫染色较强。 结论 RTCB可能参与小鼠生殖系统功能的维持。     

孕期酒精暴露诱发仔鼠小脑普肯耶细胞的自噬孕期酒精暴露诱发仔鼠小脑普肯耶细胞的自噬

目的 探讨孕期酒精暴露对仔鼠小脑普肯耶细胞自噬的影响.方法 从妊娠母鼠第5天酒精灌胃至仔鼠出生,建立孕期酒精暴露动物模型,出生后的仔鼠分对照组和酒精组共计180只;采用透射电子显微镜、免疫荧光染色和免疫印迹技术观察P7、P14和P30仔鼠小脑普肯耶细胞自噬的发生.结果 电子显微镜下,模型组仔鼠小脑普肯耶细胞内出现较多自噬体或自噬溶酶体样结构,细胞器损伤严重.光镜下,可见模型组普肯耶细胞结构紊乱、胞体变小、树突分支减少、树突棘密度下降等一般形态学改变,模型组P7、P14自噬细胞数(PAC)及自噬指数(PAI)明显高于对照组(P<0.001),高剂量酒精组明显高于低剂量组 (P<0.001),P30各组间差别不明显(P>0.05);对照组间随着年龄的增长PAC及PAI值逐渐增高(F=58.29, P<0.001);Beclin-1免疫细胞化学染色结果与MAPLC3一致,两者在同一细胞中基本呈重叠表达.免疫印迹法检测各组间普肯耶细胞MAPLC3和Beclin-1蛋白的相对表达量与上述结果一致.结论 自噬参与了小脑普肯耶细胞的正常发育,在一定时期内,随着年龄的增长,自噬作用增强; 孕期酒精暴露能够导致仔鼠小脑普肯耶细胞自噬作用增强,且有剂量依赖性和长时程效应.     

自然衰老小鼠室管膜下区神经干细胞增龄性改变

目的 探讨自然衰老小鼠室管膜下区（SVZ）神经干细胞（NSCs）在衰老过程中生物学特点的改变。 方法 2月龄、28月龄小鼠,各10只,体外分离、培养、鉴定NSCs,5-溴-2-脱氧尿苷（BrdU）染色比较两组细胞的增殖水平;β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测细胞衰老水平;细胞内活性氧（ROS）试剂盒检测细胞ROS表达水平;Western blotting 检测细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、p16及p19蛋白表达水平;体内用巢蛋白（Nestin）/性别决定基因高迁移率组蛋白-2（Sox2）检测两组小鼠SVZ区厚度的差异。 结果 年轻、年老小鼠的神经干细胞能表达Nestin及Sox2,符合神经干细胞的表达特性。与年轻小鼠相比,年老小鼠神经干细胞的BrdU阳性细胞比例显著下降,SA-β-Gal阳性细胞百分比显著升高,细胞活性氧水平显著升高,SVZ区厚度明显变薄,差异具有统计学意义（P<0.05）。在分子水平上表现为cyclin D1蛋白表达水平明显下降,p16、p19蛋白表达水平显著升高。 结论 年老小鼠NSCs出现增龄性变化,这些变化可能在大脑衰老中起重要作用。     

同型半胱氨酸对小鼠卵母细胞成熟过程中组蛋白表观遗传修饰的影响

目的 探讨卵母细胞发育过程中同型半胱氨酸（HCY）对组蛋白表观遗传修饰的影响。 方法 首先使用10只2周ICR雌性小鼠建立完整卵泡的体外培养体系,在卵母细胞发育早期,利用免疫组织化学方法,观察HCY对甲基化组蛋白H3K4、H3K9以及乙酰化组蛋白H3K9分布的影响;其次使用10只4周ICR雌性小鼠,利用卵母细胞的体外成熟培养体系,观察HCY对卵母细胞成熟过程的影响,同时利用实时定量PCR方法,观察在此成熟过程中HCY对卵母细胞内组蛋白乙酰化水平的调控酶GCN5和HDAC表达的影响。 结果 HCY明显抑制卵母细胞的体外成熟,在HCY作用下,甲基化组蛋白H3K4、H3K9以及乙酰化组蛋白H3K9的分布没有变化,但是表达强度降低,核呈现去浓缩的趋势。成熟过程中HCY并不改变基因GCN5的表达水平,却明显抑制卵母细胞内HDAC基因的表达。 结论 卵母细胞发育过程中高水平的同型半胱氨酸影响组蛋白的表观遗传修饰,HCY对卵母细胞核内组蛋白甲基化和乙酰化修饰的影响有可能是造成核染色体稳定性下降的重要原因。