索拉菲尼增强TRAIL 诱导人肝癌细胞凋亡的作用及机制探讨

目的观察索拉菲尼(Sorafenib)是否能增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人肝癌细胞凋亡并探讨其作用机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,MTT法测定细胞增殖活性,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)和细胞凋亡ELISA检测试剂盒检测细胞凋亡,Western blotting分析Mcl-1的表达。结果索拉菲尼具有增强TRAIL诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用,并呈剂量和时间依赖的方式抑制Mcl-1的表达。Mcl-1过表达能抑制索拉菲尼增强TRAIL诱导HepG2细胞凋亡的作用。结论索拉菲尼通过抑制Mcl-1的蛋白表达增强TRAIL诱导人肝癌细胞凋亡的作用。     

干扰素γ诱导肝癌HepG2细胞表达B7分子的实验研究

目的研究干扰素γ(IFN-γ)对人肝癌细胞B7分子表达的影响。方法选用人肝癌HepG2细胞进行体外培养,经过不同浓度的IFN-γ干预后,采用MTT法检测细胞增殖作用,RT-PCR检测B7-1和B7-2mRNA的表达。结果不同浓度的IFN-γ对HepG2细胞体外生长有明显抑制作用;干预后HepG2细胞的B7基因表达明显增加。结论IFN-γ能直接抑制HepG2细胞增殖,显著上调HepG2细胞B7基因的表达,具有一定的抗肿瘤效应。     

红枣多糖对人肝癌 HepG2细胞的抑制作用

目的：研究红枣多糖对体外培养肝癌细胞增殖的抑制作用并初步探究其可能的作用机理。方法采用M T T法测定红枣多糖对体外培养的人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用;流式细胞术检测红枣多糖对人肝癌细胞HepG2周期和凋亡的影响;Real time RT-PCR检测红枣多糖对人肝癌细胞HepG2中Bcl-2和caspase3 mRNA表达的影响。结果 MTT检测发现随着药物浓度的增高OD值呈现梯度递减,红枣多糖对 HepG2的IC50＝13 mg／mL ,最高浓度40 mg／mL下所得最大抑制率为68．79％;流式细胞仪检测细胞凋亡结果可见早期凋亡率随药物浓度的增加而变大;流式细胞周期分析结果可见G0-G1期细胞数逐渐增多,S期细胞数有下降趋势,并有剂量依赖性;Real time RT-PCR检测发现Bcl-2凋亡抑制基因mRNA表达随药物浓度增高而降低,而凋亡关键基因caspase-3 mRNA的表达随药物浓度增高而升高。结论红枣多糖对体外培养的肝癌细胞增值具有抑制作用,将肝癌细胞HepG2阻滞于G1期,并通过下调Bc 1-2而上调caspase-3 mRNA表达诱导 HepG2细胞凋亡。     

翻白草油对肝癌HepG2细胞CDK4蛋白的影响

目的:检测翻白草油对肝癌HepG2细胞CDK4蛋白表达的影响,探讨翻白草油抗肝癌的机制.方法:翻白草油作用肝癌HepG2细胞后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞增殖活性和IC50;western blot法检测CDK4蛋白的表达.结果:翻白草油能抑制HepG2细胞增殖,且呈剂量依赖性,IC50值为2.03mg...     

钠钾泵抑制剂通过调节细胞周期相关蛋白的生成介导肝癌HepG2细胞周期S期阻滞与凋亡

目的研究钠泵抑制剂哇巴因(ouabain)和华蟾毒配基(cinobufogenin)对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及细胞周期的改变,初步分析其机制。方法以人肝癌细胞HepG2为靶细胞,MTT比色法检测哇巴因和华蟾毒配基对HepG2细胞增殖的影响;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期;实时定量PCR和Western blot检测CyclinA1、CDK2、PCNA和p21CIP1表达的变化。结果哇巴因和华蟾毒配基可明显抑制HepG2细胞增殖,抑制作用呈时间-浓度依赖性。荧光染色显示药物处理24h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征;细胞周期分析显示,实验组S期细胞比例升高,实时定量PCR和Western blot结果显示:哇巴因和华蟾毒配基可下调CyclinA1、CDK2和PC-NA的表达(P<0.05),上调p21CIP1的表达(P<0.05)。结论钠泵抑制剂可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,引起细胞周期S期阻滞,诱导细胞凋亡,这与其调节细胞周期相关蛋白的生成关系密切。     

贝伐单抗对肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用

目的通过体外实验探讨贝伐单抗(bevacizumab)对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用及可能的分子机制。方法MTT法检测贝伐单抗对肝癌细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR分析肝癌细胞株VEGF、Flt-1、KDR mRNA表达量的变化。结果不同质量浓度的贝伐单抗对肝癌细胞株HepG2的增殖有抑制作用;贝伐单抗可诱导肝癌细胞株HepG2的凋亡;贝伐单抗作用于肝癌细胞株HepG2后,其VEGF、KDR mRNA表达量均减少。结论贝伐单抗可能通过阻断VEGF的促增殖作用而抑制HepG2细胞增殖。     

全反式维甲酸联合索拉菲尼对人SMMC-7721肝癌细胞株的作用

目的观察全反式维甲酸联合索拉菲尼对SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响。方法选用ATRA(10-5mol/L)及不同浓度的索拉菲尼(6μmol/L、9μmol/L、12μmol/L),并选用10-5mol/L的ATRA分别联合索拉菲尼(6μmol/L、9μmol/L、12μmol/L)作用于SMMC-7721肝癌细胞24h、48h、72h;期间药物对SMMC-7721肝癌细胞生长的抑制阻滞作用通过MTT比色法进行观测,同时细胞生长过程中利用倒置显微镜观察形态变化,其后药物作用48h时SMMC-7721细胞的周期分布和凋亡的情况利用流式细胞术分析。结果不同浓度的索拉菲尼单药、全反式维甲酸单药及联合用药均对SMMC-7721肝癌细胞的生长明显抑制并改变细胞的形态,促进肝癌细胞的凋亡比例增加。其凋亡作用有随剂量-时间改变的依赖性。两药联合应用相比单用全反式维甲酸或索拉菲尼其细胞凋亡作用更为显著。12μmol/L索拉菲尼、9μmol/L索拉菲尼分别与ATRA联合作用于细胞48h及72h相比较,其抑制作用无明显差异。两药联合作用时可见细胞周期阻滞在S期的肝癌细胞较单药应用时显著增多(P<0.01),凋亡率增加。结论 ATRA、索拉菲尼均有阻滞肝癌SMMC-7721细胞增殖及促凋亡的作用,联合索拉菲尼作用增强并具协同作用。     

白花丹醌对人肝癌细胞HepG2侵袭和凋亡的影响

目的探讨白花丹醌对人肝癌HepG2细胞侵袭和凋亡的影响。方法人肝癌HepG2细胞进行体外培养,经不同浓度的白花丹醌处理后,MTT法检测细胞的增殖抑制作用;Transwell细胞体外侵袭实验观察细胞的侵袭能力;流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况;免疫组化法检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT结果显示,与对照组比较,白花丹醌干预组抑制HepG2细胞增殖,并呈剂量-效应关系(P<0.05);Transwell细胞体外侵袭实验显示,随白花丹醌用药浓度的递增,细胞侵袭能力明显下降,尤其以4、8μmol·L~(-1)明显(P<0.01);流式细胞术结果显示,白花丹醌作用HepG2细胞48 h,4、8μmol·L~(-1)组细胞凋亡率均明显高于对照组;免疫组化显示,随着白花丹醌浓度增加,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,并呈剂量依赖性(P<0.01)。结论白花丹醌能够抑制HepG2细胞增殖,促进HepG2细胞凋亡,同时具有抑制HepG2细胞侵袭的能力。     

杠柳毒苷体外抑制肝癌细胞和乳腺癌细胞增殖的实验研究

目的探讨杠柳毒苷在体外对人乳腺癌MDA—MB．468细胞和人肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法MTT法观察杠柳毒苷对人乳腺癌MDA-MB-468细胞和人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术观察杠柳毒苷对两种肿瘤细胞的细胞增殖周期作用。结果与对照组比较,杠柳毒苷能明显抑制两种肿瘤细胞的增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关。流式细胞仪检测发现,杠柳毒苷对乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞持续作用24h后,可以使GdG1期细胞增多,G2／M期细胞减少。结论杠柳毒苷具有抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞增殖的作用,并可将乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞的细胞生长周期阻滞在G0／G1期。     

曲马多对体外培养人肝癌细胞株HepG 2 的影响

目的观察曲马多对体外培养人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,实验组在RPMI-1640培养液中加入不同浓度的曲马多（0．1,1,10,100,1000,10000,100000,um01．L^-1）,对照组RPMI-1640培养液中不加曲马多,分别孵育48小时后,采用MTT比色法检测曲马多对HepG2细胞增殖活性的影响,采用流式细胞技术检测曲马多对HepG2细胞周期的影响,用Hoechst3328染色方法分析鉴定曲马多对HepG2细胞凋亡的影响。结果曲马多浓度≥1000μmol．L^-1时。细胞增殖活性较对照组显著下降（P〈0．05）;随着曲马多浓度的增加,G0／G1期比例逐渐增高,（S＋G2）／M期逐渐降低;用Hoechst33258染色后在表面荧光显微镜下发现实验组部分HepG2细胞发生凋亡,曲马多浓度≥10000μmol．L^-1时,荧光显微镜下一个视野内凋亡细胞数占细胞总数的比例较对照组显著增加（P〈0．05）。结论曲马多在临床常用剂量范围内对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡无明显影响,浓度≥1000μmol．L^-1时可以抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,浓度≥10000μmol．L^-1时可引起人肝癌细胞株HepG2凋亡。     

Cucurbitacin E inhibits the proliferation of hepatoma cells in vitro and in vivo through induction of G2/M phase arrest

Objective Cucurbitacins are the highly oxygenated tetracyclic triterpenes,which are predominantly found in the Cucurbitaceae family but are also present in several other families of the plant kingdom.A number of compounds of this group have been investigated for their cytotoxic,hepatoprotective,anti-inflammatory,cardiovascular and anti-diabetic activities.In China,the cucurbitacin preparation,which contains mostly cucurbitacin B and cucurbitacin E,has been clinically used for the treatment of the primary liver carcinoma.It has been previously reported that cucurbitacin E could produce cytotoxicity against a variety of cancer cells,and various mechanisms were implicated in its cytotoxic effect.The present study is to investigate the effect of cucurbitacin E on hepatoma cells in vitro and in vivo and to study their potential mechanisms of action.Methods The MTT assay was used to assess the viability of human HepG2 and BEL7402 hepatoma cells in vitro after treatment with different concentrations of cucurbitacin E.The cell cycle distribution was determined by flowcytometric analysis after propidium iodide(PI)staining.The cell cycle-related proteins were detected using western blotting analysis.Implanted mouse hepatoma H22 model was built to evaluate the growth inhibitory effect of cucurbitacin E in vivo in mice.Results Our studies found that cucurbitacin E(10-300 nM)produced anti-proliferative effect on human HepG2 and BEL7402 hepatoma cells in vitro without cytotoxicity.According to flowcytometric analysis,cucurbitacin E arrested the cell cycle at G2/M phase in both HepG2 and BEL7402 hepatoma cells after 24 h treatment.Cucurbitacin E induced the decrease in the level of CDK1 protein and the increase in the level of p21 protein,but had no effect on the levels of cyclin A,cyclin B1 and Cdc25C protein.In in vivo anti-tumor experiment,cucurbitacin E had significant inhibitory effects on the growth of mouse H22 hepatoma cells.Conclusions Cucurbitacin E inhibited the proliferation of hepatoma cells in vitro and in vivo,at least in part,through induction of cell cycle arrest at G2/M phase,which was mediated by concomitant upregulation of p21 and downregulation of CDK1.We consider that cucurbitacin E may be useful in the treatment of liver cancer.     

Anti-tumor effect of germacrone on human hepatoma cell lines through inducing G2/M cell cycle arrest and promoting apoptosis

Germacrone is one of the main bioactive components in the traditional Chinese medicine Rhizoma curcuma. In this study, the anti-proliferative effect of germacrone on the human hepatoma cell lines and the molecular mechanism underlying the cytotoxicity of germacrone were investigated. Treatment of human hepatoma cell lines HepG2 and Bel7402 with germacrone resulted in cell cycle arrest and apoptosis in a dose-dependent manner as measured by MTT assay, flow cytometric and fluorescent microscopy analysis, while much lower effect on normal human liver cell L02 was observed. Flow cytometric analysis revealed that germacrone induced G2/M arrest in the cell cycle progression that was associated with an obvious decrease in the protein expression of cyclin B1 and its activating partner CDK1 with concomitant inductions of p21. Hoechst 33258 and Annexin V/PI staining results showed that the total cell number in apoptosis associated with a dose-dependent up-regulation of Bax and down-regulation of Bcl-2/Bcl-xl was increased. In the meantime, the up-regulation of p53 and reactive oxygen species increase were observed, which suggested that germacrone might be a new potent chemopreventive drug candidate for liver cancer via regulating the expression of proteins related to G2/M cell cycle and apoptosis, and p53 and oxidative damage may play important roles in the inhibition of human hepatoma cells growth by germacrone.     

PI3K/mTOR抑制剂BEZ235抑制HepG2细胞增殖及与阿霉素的协同效应

目的探讨PI3K/Akt和mTOR双重抑制剂BEZ235对HepG2肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并观察BEZ235与阿霉素合用的联合作用。方法采用MTT法检测HepG2细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期变化;AnnexinⅤ-FITC试剂盒检测细胞凋亡;免疫印迹法检测蛋白表达水平。结果BEZ235 2.5μmol.L-1～7.5μmol.L-1能够抑制HepG2细胞的增殖,且抑制作用呈时间和剂量依赖性。HepG2细胞经BEZ235处理后,细胞阻滞于G1期,cyclinD1表达水平下调,而cyclinB1的表达则不受影响。BEZ235明显增强了阿霉素对HepG2细胞的抑制作用,并促进阿霉素下调β-catenin的表达。结论 BEZ235对人肝癌细胞HepG2的生长具有显著的抑制作用;联合应用BEZ235和DOX协同抑制HepG2细胞的增殖,其机制可能与共同调节β-catenin通路相关。     

塞来昔布对肝癌HepG2 HepG3细胞的免疫增敏作用

目的探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布（Celecoxib）对人肝癌HepG2和HepG3细胞株对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）的增敏作用及其可能机制。方法以人HepG2 HepG3肝癌细胞为研究对象,以塞来昔布和TRAIL作为干预手段,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测塞来昔布对肝癌细胞株的增殖抑制作用,采用流式细胞术,检测塞来昔布联合TRAIL对HepG2,HepG3细胞的凋亡及DR4,DR5的表达。塞来昔布与不同效靶比的细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）联合作用于人肝癌细胞株,经LDH检测法检测其杀伤作用。结果塞来昔布及TRAIL对人肝癌HepG2和HepG3细胞株均有显著抑制作用,塞来昔布联合TRAIL可显著增敏TRAIL对HepG2和HepG3的杀伤,其差异具有统计学意义（P〈0.05）,经过塞来昔布预处理的肝癌细胞更易被CIK细胞杀伤。结论塞来昔布对人肝癌HepG2和HepG3细胞株具有明显细胞毒性,联合TRAIL及CIK可显著增敏后者对肝癌细胞的杀伤效应,其机制可能与塞来昔布上调DR4,DR5有关。     

二甲基黄青霉素抑制肿瘤细胞增殖的机制

目的:研究二甲基黄青霉素抑制人肿瘤细胞增殖的作用机制。方法:用MTT法检测细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞内活性氧自由基的水平,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果:二甲基黄青霉素明显地抑制人肝癌HepG2细胞、人乳腺癌MCF-7细胞和人口腔上皮癌KB细胞的增殖,其IC50值分别为0.18,0.38,0.44μg.mL-1。进一步研究发现:二甲基黄青霉素使细胞阻滞在G2/M期,增加细胞内活性氧自由基水平,激活细胞凋亡通路。结论:二甲基黄青霉素具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,其机制与诱导细胞凋亡有关。     

苦参碱对肝癌细胞增殖及其细胞自噬的影响

目的探索苦参碱对肝癌HepG2细胞增殖及其细胞自噬的影响,为临床探索有效的肝癌综合治疗方案提供实验依据。方法采用MTF法和流式细胞仪检测肝癌HepG2细胞增殖抑制率及其细胞周期的变化;荧光显微镜定性观察肝癌细胞自噬情况。结果苦参碱抑制肝癌HepG2细胞的增殖,且随苦参碱浓度的增加和时间的延长,肝癌HepG2细胞的抑制率增加（P〈0．05）。流式细胞仪检测示：苦参碱组细胞周期中G1期细胞增多,S期细胞减少（P〈0．05）。荧光显微镜检测：肝癌HepG2细胞质中有自噬体形成,且随苦参碱浓度的增加,自噬体越来越多。结论苦参碱对肝癌HepG2细胞增殖有一定的抑制作用,苦参碱抑制肝癌细胞的同时诱导了自噬的产生。苦参碱诱导肝癌HepG2细胞自噬多发生在细胞周期的G1期。     

熊去氧胆酸选择性诱导人肝肿瘤细胞凋亡及抑制增殖的实验研究

目的探讨熊去氧胆酸(UDCA)对肝肿瘤细胞株诱导凋亡及抑制增殖的作用和机制。方法用四氮唑蓝法、流式细胞术、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法、Wright-Giemsa染色法、电镜及免疫细胞化学等方法,观察UDCA对肝肿瘤细胞株HepG2、BEL7402和正常人肝细胞株L-02的生长活力、细胞凋亡、细胞周期及Bax/bcl-2基因表达的影响。结果UDCA对HepG2、BEL7402细胞株具有显著地抑制生长、诱导凋亡、阻滞细胞周期于S期、降低bcl-2和提升Bax表达的作用。UDCA对HepG2及BEL7402的IC50分别为0.92,0.86mmol/L。UDCA(1.0mmol/L)对HepG2及BEL7402的凋亡率分别为42%及44%,明显高于对照组(P<0.01)。UDCA对L-02细胞无明显作用。结论UDCA对HepG2、BEL7402细胞株有显著地抑制增殖及诱导凋亡作用,该作用可能与UDCA阻滞细胞周期、降低bcl-2和提升Bax的表达有关。     

3，3’-二甲氧基鞣花酸对HepG2细胞增殖影响及其分子机制研究

目的：探讨3,3’-二甲氧基鞣花酸对体外培养的人肝癌细胞HepG2增殖影响及其对Bcl-2和Bax基因mRNA水平的影响。方法：采用MTY法检测3,3’-二甲氧基鞣花酸对HepG2细胞增殖的影响,提取Bcl-2和Bax基因的mRNA,以RT—PCR方法研究3,3’-二甲氧基鞣花酸对Bcl-2和Bax基因表达的影响。结果：3,3’-二甲氧基鞣花酸使人HepG2细胞增殖率明显下降,且呈剂量依赖效应;Bcl-2基因mRNA水平随3,3’-二甲氧基鞣花酸浓度升高而降低而Bax基因mRNA水平随3,3’-二甲氧基鞣花酸浓度升高而升高。结论：3,3’-二甲氧基鞣花酸对人HepG2细胞增殖有抑制作用,且抗肿瘤的治疗作用与其能下调癌基因Bcl-2的表达和上调Bax的表达有关。