根癌农杆菌介导水稻香味基因的遗传转化

以日本腈为材料,研究根癌农杆菌介导水稻香味基因的遗传转化。研究结果表明,通过农杆菌介导的方法将水稻香味基因badh2导入了水稻粳稻品种日本腈中,并获得转基因植株。通过PCR检测,初步证明外源基因badh2已整合到日本腈基因组中。      

根癌农杆菌介导酿酒酵母的遗传转化

根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）可以将它的Ti质粒的一段T-DNA序列转化到广泛的宿主细胞并能整合到宿主染色体中.作者利用根癌农杆菌转化系统成功地实现了产甘油假丝酵母（Candida glycerinogenes）乳清苷酸脱羧酶基因（Ura3）对酿酒酵母（Saccharamyces cerevisiae）W303-1A的Ura3缺陷遗传互补转化,转化率约为3.2个转化子/10^5个酵母细胞.通过转化子PCR和表型验证说明了T-DNA已经整合进入酵母染色体,并能够稳定地进行遗传表达.     

根癌农杆菌介导的亚麻遗传转化研究进展

随着亚麻组织培养技术的逐渐成熟,有关应用根癌农杆菌介导进行的亚麻遗传转化方面的研究工作开展得越来越多,根癌农杆菌介导法已成为亚麻遗传转化的主要方法。概述了农杆菌介导法的转化机理、转化亚麻具体方法的优缺点以及基因型、农杆菌菌株、侵染时间和菌液浓度等对亚麻遗传转化的影响,并从亚麻抗病、抗除草剂等方面对近年来亚麻的转基因研究进展进行了总结。     

根癌农杆菌介导花生高效遗传转化体系的优化

本文研究表面活性剂（MES,methyl ester sulfonate）、真空渗入法和二次侵染对提高花生转化效率的影响,建立了一种农杆菌介导的花生快速高效遗传转化体系。该体系以带子叶的胚轴为外植体,在OD600为0.7的菌液中,加入150mg/L的MES,40kPa真空处理10min,共培养3d后进行二次侵染。采用该体系可显著提高遗传转化率,GUS基因阳性表达率最高,达73.3%。     

根癌农杆菌介导抗菌肽基因转化大豆的研究

为利用抗菌肽基因培育转基因大豆抗病材料,采用根癌农杆菌介导法将抗菌肽基因和绿色荧光蛋白融合基因转入大豆胚尖外植体。结果表明,60mg/L的卡那霉素可以对转化植株进行有效的筛选;在共培养时添加200μmol/L乙酰丁香酮有利于抗菌肽基因的转化;在生根培养基中不添加卡那霉素更有利于转化苗的成活。目的基因特异的PCR检测和绿色荧光蛋白表达分析,发现抗菌肽基因已转入大豆,并得到表达。     

一种根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的新方法

设计了一种简单高效的根癌农杆菌介导转化平菇菌丝体的方法。利用嵌套平板的方法,在内层平板培养平菇菌丝,待菌丝生长至平板边缘,将经诱导的根癌农杆菌与共培养培养基(CCM)混合,倒入内层平板与外层平板的间隙中,与正在生长中的菌丝共培养,实现转化,利用潮霉素抗性筛选获得转化子,平均转化效率33%左右。此方法操作简单,周期短,极易扩大实验规模,为平菇的分子育种以及其他丝状真菌的遗传转化提供参考。     

影响根癌农杆菌的电击转化条件

采用电击转化方法将双元载体质粒pCAM3300导入根癌农杆菌LBA4404,研究了不同实验条件对转化率的影响.结果表明:当电场强度为11 kV/cm时,转化率最高,每微克DNA得到9.8×103CFU;在细胞OD600为1.0时进行电转化,转化率最高,每微克DNA得到9.54×103CFU;在一定的细胞浓度范围内,电击转化率与细菌浓度密切相关,转化率随着细菌浓度的上升而上升;质粒大小与电击转化率之间没有明确的关系.将含pCAMBIA3300的根癌农杆菌与粗糙脉胞菌共培养转化,在含有膦化麦黄桐(PPT)(405 mg/L)的平板上筛选到转化子.PCR扩增转化子的染色体,初步证明Bar基因整合进粗糙脉胞菌的染色体中.     

根癌农杆菌介导酸性蛋白酶在泡盛曲霉中表达的研究

利用Gateway克隆技术快速构建丝状真菌表达载体,以米曲霉α-淀粉酶A启动子（amyB）、α-糖苷酶终止子（agdA）及黑曲霉酸性蛋白酶基因（pepA）分别构建入门载体,以带有潮霉素抗性标记（hygB）的农杆菌双元载体pHGW为目的载体,通过LR连接反应,构建根癌农杆菌介导丝状真菌重组表达载体pHGW-apA。转化泡盛曲霉宿主菌,筛选的转化子经传代培养确定其遗传稳定性,PCR及测序分析表明,hygB和目的基因pepA整合到了泡盛曲霉基因组。转录水平上的RealTime-PCR定量分析、表达水平上的Western Blotting分析以及培养液酶活分析表明酸性蛋白酶基因pepA在泡盛曲霉中得到正确表达。为丝状真菌表达载体快速构建与外源基因在丝状真菌中快速表达提供了可行的方法。      

根癌农杆菌介导酸性蛋白酶在泡盛曲霉中表达的研究

利用Gateway克隆技术快速构建丝状真菌表达载体,以米曲霉α-淀粉酶A启动子(amyB)、α-糖苷酶终止子(agdA)及黑曲霉酸性蛋白酶基因(pepA)分别构建入门载体,以带有潮霉素抗性标记(hygB)的农杆菌双元载体pHGW为目的载体,通过LR连接反应,构建根癌农杆菌介导丝状真菌重组表达载体pHGW-apA。转化泡盛曲霉宿主菌,筛选的转化子经传代培养确定其遗传稳定性,PCR及测序分析表明,hygB和目的基因pepA整合到了泡盛曲霉基因组。转录水平上的RealTime-PCR定量分析、表达水平上的Western Blotting分析以及培养液酶活分析表明酸性蛋白酶基因pepA在泡盛曲霉中得到正确表达。为丝状真菌表达载体快速构建与外源基因在丝状真菌中快速表达提供了可行的方法。     

根瘤农杆菌介导的紫色红曲菌遗传转化体系的研究

通过构建根瘤农杆菌介导的红曲菌遗传转化体系,将含有桔霉素生物合成基因同源片段的T-DNA导入紫色红曲菌Monascus purpureus SM005的子囊孢子中,以期对产桔霉素的关键酶基因pksCT进行定向敲除.优化得到的遗传转化系统为进一步对红曲菌进行分子生物学操作提供了一条高效可行的途径.     

紫杉烯合酶基因遗传转化金针菇的研究

利用紫杉烯合酶基因（ts）和潮霉素抗性基因（hph）,采用PEG转化法共转化金针菇的原生质体。研究结果表明,18个拟转化子中有8个转化子同时整合了ts基因和hph基因,两个基因的共转化率为44.44%;RT-PCR鉴定结果表明,7个金针菇转化子实现了外源ts基因的转录。金针菇转化子在不含潮霉素（HmB）的PDA平板上经5次继代培养后仍检测到有HmB抗性,说明外源基因在金针菇转化子的无性繁殖（即有丝分裂）过程中是稳定的。本研究为通过基因工程手段定向、快速改良金针菇品种以及利用金针菇作为生物反应器生产一些具有重大经济价值的外源基因产物奠定了基础。      

紫杉烯合酶基因遗传转化金针菇的研究

利用紫杉烯合酶基因(ts)和潮霉素抗性基因(hph),采用PEG转化法共转化金针菇的原生质体.研究结果表明,18个拟转化子中有8个转化子同时整合了ts基因和hph基因,两个基因的共转化率为44.44％;RT-PCR鉴定结果表明.7个金针菇转化子实现了外源ts基因的转录.金针菇转化子在不含潮霉素(HmB)的PDA平板上经5次继代培养后仍检测到有HmB抗性,说明外源基因在金针菇转化子的无性繁殖(即有丝分裂)过程中是稳定的.本研究为通过基因工程手段定向、快速改良金针菇品种以及利用金针菇作为生物反应器生产一些具有重大经济价值的外源基因产物奠定了基础.     

南方香粳稻挥发性物质的指纹图谱分析

为研究我国南方香粳稻香味特点,本研究以南粳46、香软玉为实验材料,以茉莉香、巴斯马蒂、象牙香占、稻花香2号为对照,采用GC-IMS对其挥发性物质进行指纹图谱解析,深入分析我国南方香粳稻中挥发性物质与其它香稻品种的差异。研究发现：南方香粳稻香软玉、南粳46与茉莉香、巴斯马蒂和象牙香占中的挥发性物质具有较大差异。香软玉、南粳46中2-乙酰基-1-吡咯啉含量显著高于其它香稻品种。此外,香软玉、南粳46中2-正戊基呋喃、3-甲基丁酸乙酯、1-庚醇、反-2-庚烯醛、反-2-戊烯醛、反-2-己烯醛、1-戊醇、2-庚酮和戊醛等物质的含量显著高于其它香稻品种。本研究有助于揭示我国南方香粳稻的香味特点。     

Changes in volatile aroma compounds of organic fragrant rice during storage under different conditions

BACKGROUND: Aroma of fragrant rice greatly affects palatability as well as consumer acceptability. Loss of desirable volatile compounds such as 2‐acetyl‐1‐pyrroline (2‐AP) and increase in volatile lipid oxidation products in aged rice have been reported. The aim of this study was to monitor the changes in key volatile compounds of organic red fragrant rice cv. Hom Daeng during storage. Effects of packaging material, storage temperature and time were evaluated using solid phase microextraction/gas chromatography/mass spectrometry. RESULTS: Thirteen key volatile compounds including ten lipid oxidation products were monitored. For samples vacuum packed in Nylon/LLDPE pouches at ambient temperature, significant increases in hexanal, 2‐pentylfuran, 1‐octanol and 4‐vinyl guaiacol and significant decreases in 2‐AP and geranyl acetone were found after the second month (P?0.05). Vacuum packing in OPP/Al/LLDPE pouches or storage at 15 °C better retarded the formation of volatile lipid oxidation products and greater retained desirable odorants, including 2‐AP. However, accumulation of lipid oxidation products and 4‐vinyl guaiacol was apparent after the sixth month under these storage conditions. CONCLUSION: A greater extent and higher rate of undesirable changes in volatile compounds were found in samples stored under Nylon/LLDPE/ambient temperature condition. Nevertheless, this condition is acceptable for the retail trade of organic rice in Thailand. Storage conditions using reduced temperature or better packaging materials may be more appropriate for exported rice or superior‐grade fragrant rice to better maintain the desirable rice aroma. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

米糠增值转化应用的研究进展

米糠是一种营养丰富、应用前景广阔的高附加值资源,实现米糠的增值转化对提高我国粮食加工水平具有重要意义。从米糠的性质、稳定化、活性因子、在发酵及食品工业中的应用等方面综述了米糠增值转化应用的研究进展。     

芳香整理织物中丁香酚的GC/MS测定法

建立了芳香织物中丁香酚的气相色谱 质谱（GC/MS）分析方法。样品经甲醇超声萃取、浓缩、定容后,用DB 5MS柱分离,选择离子（SIM）模式下定量检测。在优化的试验条件下,线性范围为0.01～100 μg/mL,相关系数为0.999 1,定量下限为0.03 mg/kg,加标回收率在89.7%～92.3%,相对标准偏差小于4.7%。该方法灵敏度高、操作简单,可用于芳香织物中芳香剂丁香酚含量的快速检测。     

基于SPME-GC-MS的超高压镇江香醋香气变化分析

研究了超高压处理对调控镇江香醋香气品质及缩短镇江香醋后熟期的影响作用。新醋经超高压200、400、600MPa分别处理20min后,采用固相微萃取(SPME)与气质联用(GC-MS)技术结合进行香气萃取及检测分析。结果表明:超高压处理对香醋香气有影响,超高压香醋的酸类、醛类、酮类含量均有不同程度下降,醇类则含量增加。400MPa处理20min的样品中,乙酸含量下降30.8%,四甲基吡嗪含量增加8%,3-羟基-2-丁酮含量下降49.7%,乙酸乙酯含量增加21.6%,这与香醋陈酿过程中香气变化的规律较吻合。感官评定表明:超高压处理镇江香醋香气变得柔和,生醋的刺激味减弱,400MPa处理20min的香醋具有典型的镇江香醋风味,其口感与自然放置一年的陈醋相近,这与香气的检测分析结果一致。