CCl4皮下注射制备大鼠肝纤维化模型的研究

目的:研究CCl4皮下注射制备大鼠肝纤维化模型的血清纤维化指标变化以及病理组织学改变,为临床实验研究提供参考.方法:SD大鼠予50% CCl4植物油混悬液皮下注射建立大鼠肝纤维化模型,每周2次,共计12周,分别于给药3、6、9、12周末随机取10只大鼠,从对照组大鼠中取2只行病理、血液肝纤维化4项检查,观察大鼠生存率、血清学HA、PCⅢ、C-Ⅳ及LN水平变化和肝组织病理学变化情况.结果:造模时间与肝纤维化进程的关系及分级情况,随着造模时间的延长,肝细胞变性、坏死,逐渐形成纤维间隔,肝小叶结构紊乱,最终形成假小叶.给药3周S0期4只,S1期5只,S2期1只;给药6周S0期2只,S1期1只,S2期5只,S3期2只;给药9周S1期1只,S2期3只,S3期4只,S4期2只;给药12周S2期1只,S3期2只,S4期7只.肝纤维化进程(分级)与血清学关系,随着肝纤维化加重,HA、PCⅢ、C-Ⅳ及LN水平随肝纤维化加重呈上升趋势.HA、LN组间两两比较显示,对照组S1期、S2期与S3、S4期可区分(P<0.05);PCⅢ、C-Ⅳ组间两两比较显示,对照组S1期、S2期、S3期与S4期可区分(P<0.01).结论:大鼠CCl4油溶液皮下注射可以成功建立大鼠不同级别肝纤维化模型,是一种较为理想的实验性肝纤维化模型制备方法,值得在临床和实验研究中推广使用.     

参赤提取物对CCl4致大鼠实验性肝纤维化的治疗作用

目的 观察中药参赤提取物对实验性大鼠肝纤维化的治疗作用。方法 采用皮下注射四氯化碳（carbon tetrachloride，CCl4）诱导实验性大鼠肝纤维化模型。造模后，给予大鼠胃饲参赤提取物，以观察参赤提取物对实验性大鼠肝纤维化的治疗作用。结果 参赤提取物可使实验性肝纤维化大鼠血清中TP、ALB含量显著升高；ALT、AST、HA、LN、PC Ⅲ及IVC水平均有明显改善（P〈0．05）。病理学检查结果显示，参赤提取物治疗组肝纤维化比模型组有显著改善。结论 参赤提取物对CCl4所致的实验性大鼠肝纤维化具有良好的治疗作用。     

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化过程中肝内细胞骨架蛋白表达的 …

目的 探讨肝纤维化发生过程中，细胞骨架蛋白－结蛋白（Ｄｍ）的α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）阳性细胞动态变化的规律以及这些阳性细胞之间的关系。方法 用四氯化碳辅以低胆碱饲料诱导大鼠肝纤维化，应用免疫组化、电镜技术和图像分析方法对肝纤维化过程中出现的Ｄｍ和α－ＳＭＡ阳性细胞进行定位和定量研究。结果 α－ＳＭＡ阳性细胞的变化几乎与Ｄｍ阳性细胞同步，两者于实验早期均有增生，但前者秒于后者，至纤维间隔大量     

一贯煎对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织胶原代谢的影响

目的:探讨一贯煎对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝脏胶原代谢的影响.方法:腹腔注射CCl4 9周制备大鼠肝纤维化模型,于造模第3周、第6周末各处死6只大鼠作动态观察,自第7周起将模型大鼠随机分为模型对照组和干预组.干预组于继续造模的同时给予一贯煎灌胃3周,正常组与模型对照组大鼠给予同体积蒸馏水灌胃.第9周末处死全部大鼠,采集肝组织标本,检测肝组织组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhmitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、-2,基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)、-14,α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),I型胶原(collagen type I,Col I)等的蛋白表达以及MMP-2、-9的活性.结果:与正常大鼠比较,造模第3、6和9周时肝纤维化大鼠肝组织胶原纤维增生程度增加,肝组织α-SMA、ColI、TIMP-1、TIMP-2、MMP-13、MMP-14蛋白表达和MMP-2、MMP-9活性逐渐升高(P<0.05或P<0.01);与9周模型组比较,一贯煎组大鼠胶原纤维增生程度显著减轻(P<0.05),肝组织α-SMA、Col I、TIMP-1、TIMP-2、MMP-13和MMP-14蛋白表达及MMP-2、MMP-9活性显著降低(P<0.01).结论:一贯煎可以抑制肝星状细胞活化,抑制胶原的合成,促进过度增生的胶原纤维的降解,从而抑制CCl4诱导大鼠肝硬化的形成.     

粉防己碱抑制肝纤维化大鼠肝组织c-fos和c-jun mRNA表达

目的 探讨粉防己碱（tetrandrine,Tet)对肝纤维化大鼠肝组织c—fos及c-jun mRNA表达的影响。方法 皮下注射四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型，同时给予不同剂量(5、10、20mg/kg)Tet灌胃，采用RT—PCR法检测肝组织c—fos及c—jun mRNA的表达。结果 不同剂量Tet能不同程度地抑制肝纤维化大鼠肝组织c—fos及c-jun mRNA的表达。结论 Tet能有效地在转录及其上游水平抑制肝脏胶原合成，从而发挥抗肝纤维化作用。     

碱性成纤维细胞生长因子在大鼠肝组织中的表达及其与肝纤维化的关系

目的 研究四氯化碳(CCI4)损伤大鼠肝组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达及其与肝纤维化的关系。方法 用CCI4诱导大鼠肝纤维化模型，分别检测其血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)的含量。肝组织中bFGF表达采用免疫组化ABC法标记。结果 bFGF表达的强度及范围与肝内炎症及血清纤维化指标密切相关。结论 bFGF在肝纤维化的发展过程中起着重要的作用。     

柴胡总皂苷对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的保护作用

目的：研究柴胡总皂苷对CCl4,诱导的肝纤维化大鼠的保护作用,旁进一步临床应用提供理论基础。方法：对正常组,模型组,柴胡总皂苷高、中、低剂量组,秋水他碱组6组进行观寨比较。结果：柴胡总皂苷能明显降低血清ALT、AST的含量,显著升高血清ALB的含量,能明显降低血清HA、LN、PCⅢ含量。结论：柴胡总皂苷抑制胶原纤维的形成,具有保护肝细胞,抗肝纤维化的作用。     

CCl4肝纤维化大鼠功能性瘦素受体表达的动态变化

目的明确瘦素受体(OB-R)在正常和CCl4肝纤维化大鼠肝组织的表达,观察功能性瘦素受体(OB-Rb)表达在肝纤维化进程中的动态变化,以探讨瘦素在肝纤维化形成中的作用机制。方法建立大鼠CCl4肝纤维化模型,采用免疫组织化学方法观察瘦素受体在大鼠肝组织的表达及变化;采用RT-PCR方法观察大鼠肝组织OB-Rb mRNA表达的动态变化。结果正常肝组织可见OB-R在汇管区和血管周围间质细胞的胞质和胞膜有少量表达;OB-R在模型大鼠汇管区、小叶内窦周及纤维间隔的表达明显增加。正常肝组织表达OB-Rb mRNA,不同时间点其表达量差异无统计学意义;模型组造模4 d后,OB-Rb mRNA表达水平即开始增加,随着肝纤维化的形成,OB-Rb mRNA表达逐渐增强,其表达水平与肝纤维化分期呈正相关性(rs=0.804,P=0.000)。结论在大鼠CCl4肝纤维化形成过程中,功能性瘦素受体的表达在肝损伤早期即明显增加,并随纤维化程度加重而逐步升高,从而促进肝脏纤维化的发生。     

福尔肝健脾软肝方及拆方对CCl4肝纤维化大鼠肝功能的影响

目的：观察福尔肝健脾软肝方及拆方对CCl4肝纤维化大鼠肝功能的影响。方法：复制CCl4肝纤维化大鼠模型，观察等效剂量健脾软肝方及拆方灌胃，并以鳖甲软肝片为对照；观察血清肝功能ALT、AST、白蛋白、总蛋白；Jamall氏法检测肝组织羟脯氨酸（hydroxyproline，Hyp）。结果：与正常组大鼠比较，模型组血清ALT、AST明显升高，Alb、TP明显下降，肝组织Hyp含量显著增加，各组动物治疗后，肝功能、肝组织Hyp含量均有不同程度改善或降低，其中健脾软肝方全方组在降低ALT活性、肝组织Hyp含量较其他用药组为好，健脾理气类为主要治法的拆方组能提高白蛋白含量。结论：福尔肝肝健脾软肝方及拆方有良好的改善肝功能、抗肝纤维化作用，尤以健脾软肝方全方组作用为好。     

鸡骨草醇提物对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响

目的研究鸡骨草醇提物对四氯化碳所致大鼠肝纤维化的影响。方法复制肝纤维化大鼠模型,随机分成5组:模型组,阳性组(秋水仙碱0.2mg/kg),鸡骨草醇提物低、中、高剂量组(20、40、80mg/kg),并设立正常组。连续灌胃给药30天。检测大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平和谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活性以及肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的表达,采用Masson染色观察肝组织纤维化程度。结果与模型组比较,鸡骨草醇提物组显著降低肝纤维化大鼠血清中AST、ALT水平,提高GSH-Px活力(P<0.05),同时减少肝组织中Hyp含量(P<0.05),并减少大鼠肝脏胶原纤维。结论鸡骨草醇提物对CCl4所致的肝纤维化大鼠具有保护作用。     

软肝冲剂对四氯化碳所致小鼠肝纤维化模型的影响

目的 观察软肝冲剂对四氯化碳性肝纤维化小鼠模型的治疗作用.方法 取50只雄性SPF级C57B/L小鼠,随机分为空白对照组、模型组和软肝冲剂治疗组.给予空白对照组100％花生油1mL/kg腹腔注射,每周2次,共10周;模型组给予含20％四氯化碳的花生油1 mL/kg腹腔注射,2次/周,共10周;软肝冲剂3个治疗组第3周起给予软肝冲剂高、中、低7.5、5.0、3.5 g/(kg·d)剂量灌胃至第10周.在实验结束后,检测小鼠血清中的透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)、四型胶原(Ⅳ-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)的含量;计算肝脏指数;使用Masson和HE染色观察肝脏的病理组织学改变.结果 软肝冲剂组血清中的HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT和AST的含量均低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05);中剂量组和高剂量组肝脏指数与模型组相比具有统计学意义(P＜0.05);病理学检查发现软肝冲剂中、高剂量组小鼠肝脏的炎性浸润和脂肪空泡消失,Masson染色显示在汇管区无纤维素沉积.结论 软肝冲剂可以降低四氯化碳所致小鼠肝纤维化模型中血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT和AST的水平,对肝脏具有保护作用.     

血管内皮生长因子在四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中的表达

目的观察四氯化碳(CCl4)诱导的急性肝损伤小鼠肝组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达。方法采用1 g.L-1 CCl4在小鼠腹部皮下注射建立急性肝损伤模型;分别在诱导后3、6、12、24、30、36、42、48、54 h,对肝组织石蜡切片采用苏木素-伊红染色法观察肝脏病理变化情况,采用赖氏法检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性变化,采用Western blot法检测VEGF蛋白表达。结果与阴性对照组相比,CCl4诱导后小鼠血清ALT、AST在不同时间点均显著升高(P<0.05),在36 h达到高峰,随后逐渐恢复到接近正常水平。小鼠肝脏组织结构在不同时间点均有不同程度受损,在36 h时组织受损最为严重。模型组小鼠VEGF蛋白表达量显著增加,24 h时达到高峰,随后逐渐降低。结论 CCl4诱导小鼠急性肝损伤过程中VEGF蛋白表达变化明显,VEGF在CCl4诱导的小鼠急性肝损伤过程中可能起重要作用。     

莨菪类药物对四氧化碳所致大鼠肝钙积累的作用

以四氯化碳CCl_4 2.5mg/kg灌大鼠胃可导致其肝钙含量明显升高,同时伴有明显肝细胞损伤。在灌四氯化碳前1h和灌四氯化碳后6h各注射阿托品、东莨菪碱和山莨菪碱1次,可明显减轻肝钙积累(P>0.05)并伴有明显的组织学改善。提示大剂量莨菪类药物对肝细胞损伤具有一定的保护作用,这对抗中毒性休克可能有一定意义。     

CCl4致SD大鼠急性肝损伤模型制作的改进

目的本文筛选CCl4致SD大鼠急性肝损伤模型的最佳给药浓度和剂量,追踪观察模型大鼠肝损伤后修复过程。方法本文采用随机对照分组的研究方法,对不同的SD大鼠模型组给予不同剂量的CCl4一次性腹腔注射。给药后48 h检测大鼠血清ALT, AST。各组随机处死一只SD大鼠,取肝组织制成病理切片镜下观察。追踪观察筛选后的CCl4模型大鼠肝组织病理变化恢复情况。结果本实验发现3A-7A组的ALT,AST较对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),随着CCl4的剂量的增加,大鼠肝组织的病理损伤加重,6A和7A组可见自然死亡大鼠。结论本试验筛选了CCl4致SD大鼠急性肝损伤模型的较好CCl4的剂量。该模型肝损伤明显,死亡率低,对其他重要脏器影响小,可作为急性肝损伤研究的较好模型。     

山楂总黄酮对四氯化碳致大鼠肝纤维化的保护作用及其机制研究

目的:观察山楂总黄酮对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:用CCl4复制大鼠中毒性肝纤维化模型,观察山楂总黄酮对大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(Alb),肝组织病理学及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的影响;免疫组化方法测定肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果:与模型组相比,山楂总黄酮给药组血清学指标ALT、AST浓度明显降低,Alb浓度升高,肝组织内SOD浓度升高,MDA、Hyp浓度降低,且肝组织中α-SMA和TGF-β1的表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:山楂总黄酮对CCl4致大鼠肝纤维有较好的保护作用,其机制可能与减少自由基生成、减轻脂质过氧化及抑制α-SMA和TGF-β1的表达有关。     

四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化机理研究

目的观察四氯化碳腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型时相关细胞因子的变化,初步探讨四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理。方法以四氯化碳腹腔注射的方法[四氯化碳0.025 mL（用花生油1∶6稀释）/次,每周3次,共14周]制作大鼠肝纤维化模型,设立正常、溶剂对照组,检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）含量;ELISA法检测转化生因子-β1（TGF-β1）、肿瘤坏死因子（TNF-α）;化学法检测血清氧化亚氮（NO）。肝组织行HE和Masson胶原染色,光镜下观察病理学改变,并按SSS计分系统进行评分。免疫组化染色观察肝组织血小板源生长因子-BB（PDGF-BB）的变化,专业图像分析软件进行图像分析。结果与正常对照组、溶剂对照组比较,模型组血清ALT、AST、HA、LN、PC-Ⅲ、NO、TGF-β1、TNF-α明显升高（P〈0.05）,大鼠肝组织肝纤维化评分明显升高（P〈0.05）,肝组织PDGF-BB表达明显增多（P〈0.05）。结论促进相关细胞因子的表达可能是四氯化碳腹腔注射致大鼠肝纤维化的机理之一。     

4-苯基卤代黄皮酰胺衍生物对CCl4及D-gal致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的观察合成的4-苯基卤代黄皮酰胺衍生物对四氯化碳(CCl4)和D-半乳糖(D-gal)致小鼠急性肝损伤的影响。方法4-苯基卤代黄皮酰胺衍生物预防给药后观察其对CCl4和D-gal致急性肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)及还原型谷胱甘肽(GSH)水平的影响。结果4-苯基卤代黄皮酰胺衍生物可降低急性肝损伤小鼠血清ALT、TBIL、AST、ALP,还原型谷胱甘肽(GSH)含量升高。结论4-苯基卤代黄皮酰胺衍生物对CCl4和D-Gal所致小鼠急性肝损伤具有保护作用。     

补骨脂素对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的改善作用

研究补骨脂素（psoralen,PSO）对四氯化碳（CCl₄）致小鼠急性肝损伤的改善作用及其机制。雌性C57BL/6J小鼠连续灌胃补骨脂素或阳性对照药烯丙基化硫（DAS） 4 d,第4天腹腔注射CCl₄,建立CCl₄致急性肝损伤小鼠模型。检测血清生化指标丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平;HE染色观察肝脏病理学变化;Western blot检测细胞色素P450 2E1（CYP2E1）的蛋白水平;免疫组织化学染色（IHC）检测CYP2E1的蛋白水平;RT-PCR检测CYP2E1以及炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6 （IL-6）的基因水平。与模型组相比,补骨脂素能够改善CCl₄引起的炎性细胞浸润以及肝细胞坏死情况,显著降低血清ALT、AST水平,下调炎症因子TNF-α和IL-6的水平,抑制CYP2E1的蛋白表达。结果表明,补骨脂素对CCl₄致小鼠急性肝损伤具有改善作用,其机制可能是通过抑制CYP2E1的蛋白表达发挥药效作用。     

四氯化碳亚急性中毒引起肝脏损害机理及部位

利用CCl_4亚急性中毒动物模型发现:CCl_4对大鼠亚急性中毒引起肝匀浆MDA含量显著升高,Schiff碱荧光强度显著增强,并伴随肝匀浆GSH含量显著降低,肝匀浆TG含量显著升高,血清SGPT活性显著增高,这三项肝损害指标变化与LPO指标变化存在平行关系。肝线粒体和微粒体MDA含量均显著升高,肝线粒体标志酶SDHase活性和肝微粒体标志酶G-6-Pase活性均显著降低,且分别与各自亚细胞器MDA含量升高存在平行关系。结果表明:CCl_4亚急性中毒引起肝脏损害的机理之一是LPO;CCl_4亚急性中毒引起肝细胞中的线粒体和微粒体发生LPO损害作用。