兴奋毒性对海马脑片Ca~(2 )/CaM PK Ⅱ活性的影响

用离体孵育的大鼠海马脑片模型，研究兴奋毒性与Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫＩＩ活性的关系。结果表明，外源性谷氨酸或ＮＭＤＡ均可抑制Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫＩＩ的活性，此活性的抑制可被ＭＫ８０１完全拮抗，而ＤＮＱＸ却无明显拮抗作用；无胞外Ｃａ２＋时，谷氨酸导致的酶活性抑制程度不如有胞外Ｃａ２＋时显著；无胞外Ｍｇ２＋时，谷氨酸导致的酶活性抑制程度比有胞外Ｍｇ２＋时显著。结果提示兴奋毒性对Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫＩＩ活性的抑制与ＮＭＤＡ受体介导的兴奋毒性有关     

兴奋毒性对海马脑片Ca2+/CaM PK Ⅱ活性的影响

用离体孵育的大鼠海马脑片模型,研究兴奋毒性与Ca²⁺/CaMPKII活性的关系。结果表明,外源性谷氨酸或NMDA均可抑制Ca²⁺/CaMPKII的活性,此活性的抑制可被MK801完全拮抗,而DNQX却无明显拮抗作用;无胞外Ca²⁺时,谷氨酸导致的酶活性抑制程度不如有胞外Ca²⁺时显著;无胞外Mg²⁺时,谷氨酸导致的酶活性抑制程度比有胞外Mg²⁺时显著。结果提示兴奋毒性对Ca²⁺/CaMPKII活性的抑制与NMDA受体介导的兴奋毒性有关。     

慢性染铅对小鼠海马Ca~(2+)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的通过检测海马Ca2+钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)基因表达来探讨慢性铅中毒影响学习记忆的分子机制。方法小鼠交配后,通过饮水饲以2.4,4.8和9.6mmol·L-1醋酸铅。小鼠子代自胚胎期始即暴露于醋酸铅。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。6周后用逆转录聚合酶链反应法观察各组小鼠海马CaMKⅡmRNA的表达。结果3个染铅组小鼠CaMKⅡmRNA水平均明显降低,并具有浓度效应关系。结论铅致CaMKⅡ基因表达水平下降。     

钙调蛋白在钙通道钙依赖性易化与失活机制中的作用

电压门控钙通道受钙依赖性易化和失活两种相互对立的反馈机制的调节。研究表明此调节机制的失衡与心律失常等的发病机制密切相关。目前认为不同浓度的钙离子,通过作为钙感受器的钙调蛋白（calmodulin,CaM）的介导,分别引发钙依赖性易化和失活。然而,同一分子CaM如何介导易化和失活两个相对立的过程,其具体机制尚不明确。本研究采用膜片钳单通道的膜内向外记录技术观察了豚鼠心室肌L型钙通道的钙依赖性易化与失活过程,并观察了不同浓度的CaM和[Ca2＋]对此过程的影响。结果表明：在100nM[Ca2＋]下,CaM（0．1-14μM）对钙通道活性的影响呈先增高后降低的过程,浓度依赖性曲线为钟型,而不是S型。随着钙离子浓度的增加,此钟型曲线向左侧（即低CaM浓度侧）移动。然而,如果钙通道活性发生“run-down”现象而消失后,CaM对钙通道活性的“钟型”调节作用及钙依赖性易化与失活也同时消失。钙调蛋白激酶Ⅱ的存在可以使钙通道恢复对钙离子和CaM调节的感受性。上述结果提示钙通道钙依赖性易化与失活是一个复杂的过程,钙通道同时存在钙依赖性和CaM依赖性易化和失活过程,而这些过程是在钙通道磷酸化的基础上进行的。     

三七总皂甙对吗啡戒断大鼠海马组织CaMK Ⅱ活性及CaMK Ⅱ α亚基蛋白表达的影响

目的:研究三七总皂甙(Panax notoginseng,PNS)对吗啡戒断大鼠海马组织CaMK Ⅱ活性及CaMK Ⅱα亚基蛋白表达的影响,探讨PNS抑制吗啡戒断症状的作用机制。方法:应用剂量递增法建立大鼠吗啡躯体依赖模型(MOR组),采用腹腔注射(ip)纳洛酮建立催促戒断模型(NAL组),大鼠在给予吗啡的同时,采用3种不同剂量PNS(100、200、400mg·kg-1)进行灌胃(ig)。应用放射酶法测定CaMK Ⅱ活性,Western blot方法检测CaMK Ⅱα亚基蛋白表达。结果:(1)MOR组CaMK Ⅱ活性降低,CaMK Ⅱα亚基蛋白表达升高;(2)NAL组CaMK Ⅱ活性和CaMK Ⅱα亚基蛋白表达均显著升高;(3)PNS可以剂量依赖性地抑制纳洛酮催促戒断所引起CaMK Ⅱ活性和CaMK Ⅱα亚基蛋白的升高。结论:PNS可能通过抑制纳洛酮催促戒断所引起的CaMKⅡ活性和CaMK Ⅱα亚基蛋白表达的升高来缓解大鼠吗啡戒断症状。     

Ca~(2+)/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路在DPDPE长时程作用的NG108-15细胞中的作用

目的　观察阿片类依赖时Ca2 + /钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ )信息通路的变化 ,以及Ca2 + /CaMKⅡ信息通路与cAMP水平之间的关系。方法　以NG10 8 15细胞作为体外的细胞模型 ,分别采用竞争性蛋白结合法及放射免疫法、PDE法、γ 3 2 P参入法以及RT PCR测定cAMP水平、钙调蛋白 (CaM)活性、CaMKⅡ活性和mDOR的mRNA表达水平的变化。结果　DPDPE长时程作用NG10 8 15细胞 ,cAMP水平升高 ,形成阿片依赖 ;细胞CaM活性和CaMKⅡ活性也升高 ,该升高可被CaM拮抗剂W 7所抑制 ,而CaMKⅡ活性的升高可被CaMKⅡ特异性抑制剂KN 6 2所抑制。W 7或KN 6 2可抑制阿片依赖导致的细胞cAMP水平的升高。阿片依赖时 ,加入纳洛酮诱发戒断 ,CaM活性、CaMKⅡ活性进一步增高。而在阿片依赖时 ,δ阿片受体的mRNA表达水平无明显变化。结论　Ca2 + /钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路可通过调节cAMP水平参与阿片依赖的机制。     

鞘内注射硫酸镁和吗啡对切口痛大鼠脊髓背角p-αCaMK Ⅱ表达的影响

目的观察鞘内注射(it)硫酸镁(MgSO4)和吗啡对切口痛大鼠脊髓背角磷酸化钙—钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(p-αCaMKⅡ)表达的影响。方法所有大鼠术前8d鞘内置管,用机械缩足反射阈值、热缩足潜伏期和累计疼痛评分来评价大鼠疼痛行为学变化;用免疫组织化学和Western blot法来测定吗啡和硫酸镁对大鼠脊髓背角p-αCaMKⅡ表达的影响。结果术前或术后30minit吗啡5μg或MgSO4188μg和吗啡2.5μg使术后2h的机械性缩爪阈值(MWT)和热刺激缩爪阈值(TWL)明显延长(P<0.01),累积疼痛评分明显降低(P<0.01);术前30minitMgSO4375μg或吗啡5μg或MgSO4188μg和吗啡2.5μg使大鼠术后2h脊髓背角p-αCaMKⅡ表达明显减少(P<0.05)。结论在大鼠切口痛模型中,it吗啡5μg或MgSO4188μg和吗啡2.5μg具有确切的抗伤害作用,其抗伤害作用可能与抑制脊髓背角p-αCaMKⅡ表达有关。     

Ca~(2+)/CaMKⅡ信号通路在肿瘤坏死因子-α诱导心肌肥大中的作用

目的研究钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导心肌细胞肥大中的作用。方法Lowry法测心肌细胞蛋白含量;计算机图像分析系统测心肌细胞体积;[3H]-亮氨酸参入法测心肌细胞蛋白合成;Till阳离子测定系统观察胞内[Ca2+]i瞬变;Westernblot法测定CaMKⅡδB的表达。结果①TNF-α(100μg.L-1)明显诱导心肌细胞蛋白含量、蛋白合成及体积的增加,CaMKⅡ特异性抑制剂KN93(0.2μmol.L-1)明显抑制TNF-α诱导的心肌肥大,但对正常心肌细胞生长无影响。②TNF-α引起心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)瞬间变化幅度增高,KN93明显降低TNF-α诱导的上述改变。③TNF-α明显增强心肌细胞内CaMKⅡδB的表达。结论TNF-α可能通过引起心肌细胞[Ca2+]i升高,促进CaMKⅡδB表达诱导心肌细胞肥大的。     

右美托咪定对心肌肥厚模型家兔心律失常及心肌组织CaMKⅡ表达的影响

目的:研究右美托咪定对心肌肥厚模型家兔心律失常及心肌组织中钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响.方法:将家兔随机分为假手术组,模型组,右美托咪定低、中、高剂量组(10、25、50μg/kg),CaMKⅡ抑制剂KN-93组(10 mg/kg)和右美托咪定高剂量+KN-93组(50μg/kg+10 mg...     

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93加重大鼠离体心脏钙超载损伤

目的观察钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制剂KN-93对大鼠离体心脏钙超载损伤的影响。方法采用Langendorff装置进行离体心脏灌流,利用钙反常现象诱发胞内钙超载。32只SD♂大鼠随机分为正常对照组、药物KN-93对照组、钙反常组和KN-93处理组。实验全程记录左心室内压的变化,以左心室舒张末压(LVEDP)和发展压(LVDP)评价心功能,于不同时间点收集冠脉流出液,并测定乳酸脱氢酶(LDH)的含量。实验结束后,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色检测心肌梗死面积的变化。结果与正常对照组相比,KN-93(2.5μmol·L~(-1))对正常心脏的左室功能、冠脉流量和心肌梗死面积没有明显影响(P>0.05);与正常对照组相比,钙反常组在复钙灌注结束时LVEDP抬升、LVDP降低,梗死面积达(18±7.2)%,冠脉流量减少,LDH含量增加(P<0.01);KN-93(2.5μmol·L~(-1))处理组与钙反常组相比,心肌梗死面积为(90±4.8)%,LVEDP进一步升高,LVDP消失,冠脉流量明显减少,LDH含量明显增多(P<0.01)。结论 CaMKⅡ抑制剂KN-93加重急性钙超载引起的心肌损伤,这一作用可能与影响CaMKⅡ活性有关。     

环维黄杨星D调控Ca2+/CaMKⅡ信号改善醛固酮诱导心肌细胞损伤的实验研究

目的探讨环维黄杨星D(cyclovirobuxine D,CVB-D)对醛固酮(aldosterone,ALD)诱导原代大鼠心肌细胞(PNRCMs)损伤的保护作用及其机制。方法通过胰酶消化法提取PNRCMs,以ALD(10μmol·L^-1)制备PNRCMs损伤模型,给予不同剂量的CVB-D处理后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Giemsa染色观察细胞形态变化,Flou-4AM荧光探针检测胞内Ca²⁺浓度,Western blot检测钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ、p-CaMKⅡ)和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-9的表达水平。进一步采用钙离子螯合剂(BAPTA-AM),钙离子载体(A23187)及CaMKⅡ抑制剂(KN93)进行干预处理,分析Bcl-2,Bax,Cleaved caspase-9蛋白的表达变化。结果与ALD组比较,CVB-D可显著恢复细胞活力,改善细胞的病理形态变化,上调Bcl-2/Bax的比值,下调Cleaved caspase-9和p-CaMKⅡ的表达并抑制胞内钙离子累积。进一步研究表明,BAPTA-AM和KN93能促进CVB-D上调Bcl-2/Bax的比值,下调Cleaved caspase-9的表达;而A23187可抑制CVB-D上调Bcl-2/Bax的比值,下调Cleaved caspase-9表达。结论CVB-D可改善ALD诱导的原代心肌细胞损伤,其作用机制与Ca²⁺/CaMKⅡ信号通路相关。     

多巴胺诱导大鼠海马脑片Ca~(2 )-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的抑制作用(英文)

目的:研究多巴胺(DA)对大鼠海马脑片Ca~(2 )-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPK Ⅱ)活性的影响。方法:采用大鼠海马脑片体外培养模型,以~(32)P-掺入法测定CCDPK Ⅱ的活性。结果:外源性DA可显著降低大鼠海马脑片CCDPK Ⅱ活性,并有一定的浓度依赖性和时间依赖性。去除胞外的Ca~(2 )对不同浓度DA诱导的CCDPK Ⅱ活性抑制有部分或完全保护作用。阿扑吗啡(非特异性DA受体激动剂)、SKF38393(特异性D_1样DA受体激动剂)和喹吡罗(特异性D_2样DA受体激动剂)均可显著降低CCDPK Ⅱ的活性。Sch-23390(特异性D_1样DA受体拮抗剂)和多潘立酮(特异性D_2样DA受体拮抗剂)均可拮抗DA所诱导的酶活性抑制。结论:DA抑制海马CCDPK Ⅱ的活性,其作用机制与D_1样和D_2样受体以及胞外Ca~(2 )的内流有关。     

左乙拉西坦对癫痫大鼠海马组织中CAMKⅡ及NCX3表达的影响

目的:通过建立氯化锂-匹罗卡品点燃的癫痫大鼠模型,应用左乙拉西坦(LEV)灌胃进行抗癫痫治疗,通过免疫组化方法观察海马区钙调素依赖蛋白激酶(CaMKⅡ)Ⅱ及钠钙交换体(NCX3)蛋白的表达变化,同时通过水迷宫测试观察长期应用对认知功能的影响.方法:3周龄健康Wistar大鼠120只分为生理盐水组、癫痫模型组、正常给药组及治疗组,应用氯化锂-匹罗卡品造模成功后7d、14d及28d断头取脑组织,应用免疫组化方法观察大鼠海马组织中CAMKⅡ及NCX3的表达变化,并且在第四周应用水迷宫评价每组大鼠的空间学习记忆的能力.结果:反复惊厥可导致大鼠海马神经细胞损伤,CaMKⅡ及NCX表达下降,与对照组相比,左乙拉西坦(LEV)可以改善细胞内钙超载,提高CaMKⅡ及NCX3蛋白的表达.同时第4周结果显示长期应用LEV不会出现CaMKⅡ的过量表达.结论:LEV能很好的控制癫痫发作,可能与其能提高CaMKⅡ及NCX3蛋白的表达有关,同时能通过控制癫痫的发作进而改善其反复发作后所造成的学习记忆能力下降.     

埃他卡林对大鼠尾动脉平滑肌细胞［Ca2+］i， PKA和PKC活性的影响埃他卡林对大鼠尾动脉平滑肌细胞［Ca2+］i， PKA和PKC活性的影响

细胞内钙参与了对几乎所有类型细胞的各种生理活动的调节[1],并通过影响PKA和PKC等大分子蛋白,进一步调控细胞的分裂和增殖。以ATP敏感型钾通道(KATP)为靶点的钾通道开放剂(KCO)是一类新型的抗高血压药物[2,3]。KCO激活血管平滑肌KATP,间接抑制钙通道的开放,从而使[Ca2 ]i降低,     

石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经细胞[Ca~(2+)]_i及钙调蛋白、蛋白激酶Ⅱ信使核糖核酸表达的影响

目的 :观察石杉碱甲对血管性痴呆 (VD)小鼠海马神经细胞 [Ca2 + ] i 和钙调蛋白 (CaM) ,Ca2 +钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达的影响。方法 :采用双侧颈总动脉线结法 ,制作小鼠VD模型 ,并设假手术对照组 ,石杉碱甲为治疗组 ;术后d 2 9,30测试学习、记忆成绩。利用激光共焦显微镜检测各组海马神经细胞 [Ca2 + ] i;用RT PCR技术检测CaM ,CaMPKⅡmRNA。结果 :模型组[Ca2 + ] i 荧光强度 (44±s 3)显著高于假手术组(2 6± 4) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (2 8.5± 2 .5) (P<0 .0 1 ) ;模型组CaMmRNA含量 (0 .76± 0 .2 1 )显著低于假手术组 (1 .1 3± 0 .2 3) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (0 .97± 0 .1 9) (P <0 .0 5) ,CaMPKⅡmRNA含量(0 .43± 0 .0 7)显著低于假手术组 (0 .67± 0 .1 0 )(P <0 .0 1 )和石杉碱甲 (0 .61± 0 .0 8) (P <0 .0 1 )。结论 :石杉碱甲可降低VD小鼠海马神经细胞[Ca2 + ] i,提高CaM ,CaMPKⅡmRNA表达水平 ,而改善VD临床症状     

八肽胆囊收缩素及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠脑内CaMK Ⅱ蛋白表达的影响

目的观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)、CCK-1受体拮抗剂L-364,718及CCK-2受体拮抗剂LY-288,513对吗啡戒断大鼠额叶皮质、海马、纹状体细胞内钙/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响。方法建立吗啡依赖及纳洛酮催促戒断大鼠模型,观察CCK-8、L-364,718及LY-288,513对吗啡依赖大鼠戒断症状的影响;采用Western blot方法检测上述脑区CaMKⅡ蛋白表达的变化。结果①CCK-8、L-364,718及LY-288,513能明显改善吗啡依赖大鼠戒断症状的发生;②与盐水对照组相比,吗啡依赖组大鼠额叶皮质、海马、纹状体细胞内CaM KⅡ蛋白表达明显升高;纳洛酮催促戒断后上述脑区CaM KⅡ蛋白表达较吗啡依赖组均明显降低;③CCK-8、L-364,718及LY-288,513均使吗啡戒断大鼠额叶皮质、海马及纹状体内CaMKⅡ蛋白表达升高。结论 CaMKⅡ参与了吗啡依赖及戒断的形成,CCK-8及其受体拮抗剂抑制吗啡依赖大鼠戒断反应的机制可能与其对相关脑区CaMKⅡ蛋白表达的调节有关。     

黄芪甲苷通过CaMkkβ/AMPK通路对急性心力衰竭大鼠心肌细胞线粒体自噬的作用机制研究

目的 探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,AsIV)通过钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶β(CaMkkβ)/腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)通路对急性心力衰竭(心衰)大鼠心肌细胞线粒体自噬的影响及作用机制。方法 50只SD大鼠分为对照组(羧甲基纤维素钠)、急性心衰组(羧甲基纤维素钠)、AsIV低、中、高剂量组(20、40、80 mg/kg AsIV羧甲基纤维素钠溶液),每组10只,1次/d,连续灌胃给药7 d,第8天一次性腹腔注射盐酸阿霉素10 mg/kg建立急性心力衰竭模型,24 h后处死,检测各组血清脑钠肽(BNP)、心肌肌钙蛋白T(cTn-T)、丙二醛(MDA)水平,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,透射电镜观察自噬体数目,Western blot法检测自噬相关蛋白(Beclin1、LC3、p62)及CaMkkβ/AMPK信号通路相关蛋白表达量。结果 与对照组比较,急性心衰组血清BNP、cTn-T、MDA水平、心肌细胞凋亡率、心肌细胞线粒体内自噬体数目及心肌组织Beclin1、LC3蛋白表达量及p-CaMkkβ/CaMkkβ、p-AMPK/AMPK均升高(P<0....     

八肽胆囊收缩素及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠脑内[Ca~(2+)]_i和CaM活性的影响

目的观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠皮质、海马、纹状体神经细胞内[Ca2+]i和CaM活性的影响。方法剂量递增法(10⁵0 mg·kg-1)连续5 d皮下注射吗啡建立吗啡依赖模型,并给予腹腔注射纳洛酮(5 mg·kg-1)催促戒断,采用流式细胞术检测大鼠皮质、海马、纹状体[Ca2+]i和CaM活性的变化。结果 (1)与盐水对照组相比,吗啡依赖组大鼠皮质、海马、纹状体内[Ca2+]i和CaM活性均明显升高;纳洛酮催促戒断后[Ca2+]i和CaM活性较吗啡依赖组均明显降低;(2)CCK-8及CCK-1受体拮抗剂L-364,718、CCK-2受体拮抗剂LY-288,513均使吗啡戒断大鼠海马和纹状体内[Ca2+]i和CaM活性明显升高,但皮质内[Ca2+]i和CaM活性无明显变化。结论 CCK-8及其受体拮抗剂对吗啡依赖大鼠戒断反应的作用可能与其对相关脑区神经细胞内[Ca2+]i和CaM活性的调节有关。     

多巴胺受体拮抗剂对缺氧诱导的大鼠脑Ca~(2 )-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ活性抑制的保护作用(英文)

目的:研究多巴胺受体拮抗剂对缺氧诱导的大鼠海马、纹状体脑片Ca~(2 )-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPK Ⅱ)活性抑制的影响。方法:采用大鼠海马、纹状体脑片体外缺氧模型(置于95％N_2 5％CO_2),以~(32)P-掺入法测定CCDPK Ⅱ的活性。结果:缺氧30min,大鼠海马、纹状体脑片CCDPK Ⅱ活性分别降低为对照的29.2％和27.0％。Sch-23390(特异性D_1-样多巴胺受体拮抗剂)和多潘立酮(特异性D_2-样多巴胺受体拮抗剂)对缺氧所诱导的酶活性抑制均可导致浓度依赖的保护作用。CCDPK Ⅱ活性最大可恢复至对照的60％左右。结论:多巴胺在缺氧诱导的大鼠海马、纹状体CCDPK Ⅱ活性抑制中有重要作用,其作用机制与D_1样和D_2样受体有关。