DNA-PKcs在石英诱导的DNA双链断裂修复中的作用

目的 探讨DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)DNA双链断裂修复中的作用.方法 脂质体转染法建立DNA-PKcs的小干扰RNA(siRNA)及其阴性对照重组质粒稳定转染HELF系(简称HELF-PKcs和HELF-NC).3种方式分组及对细胞的处理:(1)25、50、100、200、300、400μg/ml浓度的石英刺激HELF 12 h;(2)200μg/ml的石英刺激HELF 0、1、2、6、12、24 h;(3)200μg/ml的石英刺激HELF-PKcs和HELF-NC 0、12、24 h.用免疫印迹法检测DNA-PKcs表达、磷酸化H2AX(H2AX)的水平.用Image-Pro plus6.0软件对条带光强度进行半定量分析;用中性彗星实验(彗尾DNA百分含量值)判断石英诱导的DNA舣链断裂损伤强度.结果 不同浓度的石英刺激HELF 12 h,γH2AX水平及彗尾DNA百分含量随着石英浓度的增加逐渐升高.200 μg/ml的石英刺激HELF6 h时,彗尾DNA百分含量[(38.7±6.9)%]与对照组相比明显增加,并且在12h达峰值,24h相对12h时点明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).在抑制DNA-PKcs的表达的细胞,12 h时,石英刺激的HELF-PKcs的石英诱导的γH2AX水平增加受抑制,彗尾DNA百分含量为(43.09±3.68)%,与石英刺激的HELF-NC相比,差异无统计学意义(P>0.05);24 h时,石英刺激的HELF-PKcs的石英诱导的γH2AX水平与石英刺激的HELF-NC相比无明显筹异,差异无统计学意义(P>0.05).石英刺激的HELF-PKcs的彗尾DNA百分含量(35.79±4.26)%]明显高于石英刺激的HELF-NC,差异有统计学意义(P<0.05).结论 石英可诱导DNA双链断裂损伤,DNA-PKcs是石英诱导的DNA双链断裂损伤的感受器,通过磷酸化H2AX,促进石英诱导的DNA双链断裂损伤的修复.     

磷脂酰肌醇-3激酶在石英诱导的DNA双链断裂修复中的作用

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)DNA双链断裂修复中的作用.方法 用200μg/ml的石英刺激HELF和用显性失活突变体抑制P13K功能的HELF(DN-Δp85)不同时间.免疫印迹法检测磷酸化H2AX(γH2AX)的水平以及DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)的组成成分Ku70、Ku8和DNA-PKcs的蛋白水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.中性彗星试验检测DNA双链断裂损伤,用彗尾DNA百分含量值观察DNA双链断裂损伤程度变化,并计算DNA修复能力.结果 γH2AX的水平在石英刺激3 h明显增高,12 h达峰值,24 h下降.与HELF相比,石英诱导的DN-Δp85细胞γH2AX水平增高受到抑制.石英刺激HELF和DN-ΔP85细胞12 h组Ku70、Ku80和DNA-PKcs的蛋白水平(0.58±0.09、0.95±0.21、0.55±0.06,0.37±0.14、0.55±0.17、0.52±0.07)均高于相应的无石英刺激组(0.26±0.10、0.69±0.26、0.43±0.11,0.11±0.07、0.27±0.14、0.39±0.07),差异有统计学意义(P<0.05).与石英刺激HELF 12 h组比较,石英刺激DN-ΔP85 12 h组的Ku70、Ku80蛋白水平增高受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05).石英刺激的HELF12 h组和DN-Δp85 12h组的彗尾DNA百分含量分别为9.78±1.15和11.79±4.90,明显高于同细胞系的无石英刺激组(2.40±0.69,3.31±1.35),差异有统计学意义(P<0.05);与石英刺激HELF 12 h组相比,石英刺激HELF细胞24 h组彗尾DNA百分含量明显降低(4.19±0.47),差异有统计学意义(P<0.05).石英刺激DN-Δp85 24 h组的彗尾DNA百分含量为(7.58±4.32),明显高于无石英刺激DN-Δp85组和石英刺激HELF 24 h组,差异有统计学意义(P<0.05).HELF的DNA修复能力为75.74%,DN-Δp85的DNA修复能力为49.64%.结论 石英可诱导DNA双链断裂损伤,PI3K与DNA损伤修复有关,通过调节Ku70和Ku80的水平,可促进石英诱导的DNA双链断裂损伤的修复.     

单细胞凝胶电泳技术检测DNA损伤与修复在辐射生物剂量学中的应用

目的探索细胞DNA辐射损伤后离体修复与整体修复的关系，拟合修复曲线，在辐射生物剂量估算中结合应用剂量一效应关系曲线，提高剂量估算的准确性。方法用中性单细胞凝胶电泳技术检测1Gyγ射线辐照后不同时间点的小鼠和人淋巴细胞DNA双链断裂，分别拟合DNA修复曲线，并对二者曲线模型进行比较。结果人外周血和小鼠辐照后，随照后时间的推移，DNA损伤的修复增加，残余损伤逐渐减少，呈明显的时相一效应关系。人淋巴细胞辐照后体外修复曲线方程模型与动物体内修复曲线方程模型均以对数方程为最佳，分别为：小鼠：YTM=55．8256—10．792 lnX（R^2=0．629，P〈0．01）和YOTM=25．4173—4．5273 lnX（R^2=0．661，P〈0．01）；人：YTM=30．2427—7．3836 lnX（R^2=0．686，P〈0．01）和YOTM=17．9772—3．9125 lnX（R^2=0．752，P〈0．01）。结论人淋巴细胞离体辐照后的修复过程可基本反映体内DNA双链断裂的修复水平与速度，修复曲线可以作为辐射生物剂量估算时的参考。     

丙烯酰胺对小鼠脏器细胞DNA损伤及修复作用

目的研究丙烯酰胺的遗传毒性,探测其遗传毒性的靶器官。方法应用彗星试验检测50mg/kg丙烯酰胺腹腔注射染毒0、3、6、12和24h后小鼠肺、肝、脾、肾、睾丸、骨髓和外周血淋巴细胞的DNA损伤情况。结果丙烯酰胺染毒后不同时间,可引起小鼠肝、脾、睾丸、骨髓和外周血淋巴细胞彗星尾长、尾部DNA百分含量及尾矩的显著增加,随时间延长有下降趋势;未观察到对肺和肾脏细胞的明显影响。结论丙烯酰胺可以诱导小鼠多种组织细胞的DNA损伤,机体对丙烯酰胺造成的遗传损伤有一定的修复能力。     

Ku80/p53通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用

目的 探讨在石英刺激的人胚肺成纤维细胞(human embryo lung fibroblasts,HELF)中Ku80蛋白表达的变化及Ku80/p53通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用.方法 RNAi技术抑制Ku80蛋白表达,流式细胞技术检测细胞周期,免疫印迹技术检测Ku80、p53、p21蛋白的表达及p53-ser15磷酸化水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.结果 Ku80蛋白表达与石英刺激呈剂量-反应和时间-反应关系;石英刺激阴性对照H-NC细胞,G1期细胞所占比例从89.28%±2.19%下降到68.93%±3.79%;抑制Ku80蛋白表达的HELF细胞(H-Ku80)的G1期细胞所占比例进一步减少,从85.16%±3.73%下降到59.92%±3131%,差异均有统计学意义(P<0.05);抑制Ku80蛋白表达后,石英引起的p53、p21蛋白及p53-ser15磷酸化水平增高受抑制.结论 Ku80对p53、p21蛋白表达及p53-ser15磷酸化水平起调节作用,Ku80/p53通路可能参与了石英诱导的细胞周期改变.

Abstract：

Objective To study the roles of Ku80/p53 pathway in silica-induced cell cycle changes in human embryo lung fibroblasts (HELF). Methods Ku80 siRNA expression vectors were transfected into HELF by lipofectamine. Flow cytometry was used to detect the distributions of cell cycle and western blot assay was used to determine the expression level of Ku80, p53 and p21 proteins or the phosphorylation levels of p53-serl5 after cells were exposed to silica. Results The expression levels of Ku80 protein increased in concentration-dependent and time-dependent manners after cells were exposed to silica. The proportion of G1 phases in H-NC cells (controls) decreased from 89.28%±2.19% to 68.93%±3.79% after exposure to silica, and the proportion of G1 phases in HELF cells (H-Ku80) decreased from 85.16%±3.73% to 59.92%±3.31% after exposure to silica (P<0.05). The expression levels of Ku80, p53 protecns or p21 proteins or phosphorylation level of p53-serl5 were obviously suppressed in H-Ku80, as compared with H-NC. Conclusion Ku80/p53 pathway plays a role in the cell cycle charges induced by silica in human embryo lung fibroblasts.     

氯乙烯致大鼠DNA损伤与DNA损伤修复酶和p53蛋白的表达

目的研究氯乙烯（VC）对大鼠原代肝细胞DNA的损伤作用,及对DNA损伤修复酶（rMSH2和XPD）和抑癌蛋白p53表达的影响;探索VC所致DNA损伤的修复和调控机制。方法大鼠腹腔注射VC,隔日染毒,染毒剂量分别为5,10和20mg／kg。单细胞凝胶电泳测肝细胞DNA损伤,免疫组化法测肝脏DNA损伤修复酶的表达。结果彗星细胞数目随染毒剂量增加而增加,彗星发生率与VC染毒剂量问存在明显的相关关系。rMSH2表达随染毒剂量增加而减少．XPD和p53的表达随染毒剂量增加而增加。VC致DNA损伤与XPD表达具有相关关系。结论VC可导致肝细胞DNA发生损伤,且存在剂量一反应关系;DNA损伤修复酶和p53蛋白参与修复VC所致的DNA损伤。     

亚砷酸钠对DNA损伤修复的抑制实验

[目的]探讨砷化物的毒作用机制. [方法]MTT实验检测亚砷酸钠对A549细胞的细胞毒性,彗星实验观察其单独作用时细胞的DNA损伤效应;然后以3因素析因设计的彗星实验分析亚砷酸钠对苯并(a)芘(BaP)所致的DNA损伤效应的影响. [结果]随着亚砷酸钠浓度的增加,细胞存活率下降;在彗星实验中,当亚砷酸钠单独作用时,各浓度组细胞拖尾率与阴性对照组相比无统计学差异;联合BaP染毒,当BaP浓度一定时,亚砷酸钠浓度越高细胞拖尾率也越高,显著增强了BaP所致的DNA损伤效应.且亚砷酸钠预作用24 h后观察到的DNA损伤较同时染毒和BaP预作用24 h观察到的DNA损伤更为严重. [结论]亚砷酸钠不直接损伤DNA,能降低细胞DNA损伤的修复,从而增强另一种基因毒物所致的DNA损伤作用.     

氯乙烯致大鼠肝细胞DNA损伤与DNA修复基因表达

目的　研究氯乙烯 (VCM)对大鼠肝细胞DNA的损伤作用 ,及对DNA损伤修复酶 [O6 甲基鸟嘌呤 DNA甲基转移酶 (MGMT)、X线修复交叉互补基团 1(XRCC1)和X线修复交叉互补基团 3(XRCC3) ]表达的影响 ;探索VCM所致DNA损伤的修复机制。方法　采用腹腔注射VCM染毒 ,实验组按不同染毒剂量分为 3个剂量组 ,分别为低剂量 5mg kg、中剂量 10mg kg和高剂量 2 0mg kg ,染毒12周 ,以单细胞凝胶电泳 (彗星试验 )测DNA损伤 ,免疫组化法测DNA损伤修复酶的表达。结果　低、中和高剂量组大鼠肝细胞DNA损伤细胞百分率分别为 11.75 %、12 .38%和 17.6 3% ,均高于对照组(5 .6 7% ) ,且中、高剂量与对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。MGMT和XRCC1表达随染毒剂量增加而减少 ,而XRCC3的表达随染毒剂量的增加而增加。VCM致DNA损伤与XRCC3表达有相关关系 (r=0 .4 38,P =0 .0 6 7)。结论　VCM可导致肝细胞DNA发生损伤 ,且存在剂量 -反应关系 ;DNA损伤修复酶参与修复VCM所致的DNA损伤。     

甲醛对大鼠组织细胞DNA的损伤作用

目的探讨甲醛对大鼠肝、肾、肺组织细胞DNA损伤作用。方法将24只健康SD大鼠随机分为6组,用蒸馏水及不同剂量（10、20、30、40mg／kg）的甲醛溶液和环磷酰胺经腹腔染毒阴性对照组、染毒组和阳性对照组大鼠,第2天处理动物后,取肝、肾、肺组织用单细胞凝胶电泳实验观察其细胞DNA损伤水平。结果甲醛对大鼠的肝、肾、肺组织细胞DNA具有损伤作用,染毒剂量和损伤呈现一定的剂量一反应关系。随着甲醛染毒浓度的升高,肾、肺、肝细胞拖尾率增加,头尾比降低。结论甲醛可引起大鼠的肝、肾、肺组织细胞DNA损伤,从而进一步证实甲醛具有遗传毒性。     

氟化钠对大鼠软骨细胞活性的影响及DNA损伤作用

目的探讨氟化钠(NaF)对体外大鼠软骨细胞活性及DNA损伤作用的影响。方法自2月龄SPF级雌性SpragueDawley大鼠制取膝关节软骨细胞悬液。取对数生长期细胞(细胞密度为2×105个/孔),用含NaF终浓度为0(阴性对照)、0.1、1.0、10.0、20.0、40.0mmol/L的培养基分别处理2、4、8、24h,同时设立空白对照(DMEM/F12)组,采用MTT法检测细胞活性。根据MTT检测的结果,取对数生长期细胞(细胞密度为2×105个/孔),用0(阴性对照)、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mmol/LNaF染毒4h,阳性对照组在紫外灯下照射10min。用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测细胞DNA的损伤情况。结果与阴性对照组比较,染毒2h后20.0、40.0mmol/LNaF染毒组和染毒4、8、24h后10.0、20.0、40.0mmol/LNaF染毒组大鼠软骨细胞的细胞活性均下降,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。与阴性对照组相比,各浓度NaF染毒组大鼠软骨细胞DNA损伤率均较高,差异有统计学意义(P0.01)。且随着NaF染毒浓度的升高,大鼠软骨细胞DNA损伤率呈升高趋势。与阴性对照组相比,1.0～10.0mmol/LNaF染毒组大鼠软骨细胞尾长、Olive尾矩和彗星矩较高,差异有统计学意义(P0.01)。且随着NaF染毒浓度的升高,大鼠软骨细胞尾长、Olive尾矩和彗星矩均呈上升趋势。结论在体外培养条件下,NaF能明显抑制大鼠软骨细胞的增殖,其作用机制可能与DNA损伤有关。     

DNA依赖性蛋白激酶在石英诱导的细胞周期蛋白E和细胞周期蛋白依赖激酶2蛋白表达及细胞周期改变中的作用

Objective To study the roles of DNA dependent protein kinase (DNA-PK)in silicainduced cell cycle changes and expressions of CyclinE and CDK2 in human embryo lung fibroblasts (HELF).Methods The expressions of Ku80 and DNA-PKcs proteins were inhibited by siRNA plasmids, respectively.Flow cytometry was used to detect the distributions of cell cycle and western blot assay was used to determine the expression levels of CyclinE and CDK2 after cells were exposed to 200 μg/ml silica for 0,3,6,12,24 h.Results The proportion of G1 phases in negative control cells decreased from 83.53%±2.24% to 69.11%±3.12%after exposure to silica; the proportion of G1 phases in H-Ku80 and H-PKcs cells exposed to silica decreased from 85.16%±3.73% to 59.92%±3.31% and from 75.06%±2.23% to 58.32%±1.35%, respectively (P＜0.05).The exposure to silica resulted in the increasing protein expression levels of CyclinE and CDK2 in negative control cells, and the expression levels of CyclinE were obviously suppressed in H-Ku80 and H-PKcs as compared with control cells. However, the expression level of CDK2 protein did not change significantly.Conclusion DNA-PK might play a role in silica-induced alternations of cell cycle and regulate silica-induced overexpression of CyclinE in human embryo lung fibroblasts.     

DNA依赖性蛋白激酶在石英诱导的细胞周期蛋白E和细胞周期蛋白依赖激酶2蛋白表达及细胞周期改变中的作用

目的 探讨DNA依赖性蛋白激酶(DNA dependent protein kinase,DNA-PK)在石英诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中细胞周期蛋白E(CyclinE)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)蛋白表达及细胞周期改变中的作用.方法 200μg/ml石英处理阴性对照细胞(H-NC)及采用RNAi技术分别抑制DNA-PKcs和Ku80蛋白表达的细胞系(H-PKcs和H-Ku80)0、3、6、12、24 h,采用流式细胞术检测石英刺激24 h不同细胞系的细胞周期变化情况,免疫印迹(Western blot)技术检测不同细胞系各时间点CyclinE、CDK2蛋白的表达水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.结果 石英刺激H-NC,G1期细胞所占比例从83.53%±2.24%下降到69.11%±3.12%;石英刺激H-Ku80,石英诱导的G1期细胞的比例进一步减少,从85.16%±3.73%下降到59.92%±3.31%;石英刺激H-PKcs,G1期细胞比例也显示进一步减少,从75.06%±2.23%下降到58.32%±1.35%,差异均有统计学意义(P＜0.05).石英刺激H-NC,CyclinE和CDK2蛋白表达随时间延长有增高趋势,并在12 h达峰值;石英刺激H-Ku80,H-PKcs和CyclinE蛋白表达水平在各时间点均低于H-NC,差异有统计学意义(P＜0.05),CDK2蛋白的表达水平变化不明显.结论 DNA-PK参与石英诱导的细胞周期改变,对CyclinE的表达呈正性调节作用.

Abstract：

Objective To study the roles of DNA dependent protein kinase (DNA-PK)in silicainduced cell cycle changes and expressions of CyclinE and CDK2 in human embryo lung fibroblasts (HELF).Methods The expressions of Ku80 and DNA-PKcs proteins were inhibited by siRNA plasmids, respectively.Flow cytometry was used to detect the distributions of cell cycle and western blot assay was used to determine the expression levels of CyclinE and CDK2 after cells were exposed to 200 μg/ml silica for 0,3,6,12,24 h.Results The proportion of G1 phases in negative control cells decreased from 83.53%±2.24% to 69.11%±3.12%after exposure to silica; the proportion of G1 phases in H-Ku80 and H-PKcs cells exposed to silica decreased from 85.16%±3.73% to 59.92%±3.31% and from 75.06%±2.23% to 58.32%±1.35%, respectively (P＜0.05).The exposure to silica resulted in the increasing protein expression levels of CyclinE and CDK2 in negative control cells, and the expression levels of CyclinE were obviously suppressed in H-Ku80 and H-PKcs as compared with control cells. However, the expression level of CDK2 protein did not change significantly.Conclusion DNA-PK might play a role in silica-induced alternations of cell cycle and regulate silica-induced overexpression of CyclinE in human embryo lung fibroblasts.     

氟致人胎肝细胞DNA损伤及其对细胞凋亡和p53蛋白表达的影响

目的　研究氟对L 0 2细胞DNA的损伤作用及其对细胞凋亡和p5 3表达的影响 ,并探讨p5 3表达与细胞凋亡之间的关系。方法　体外培养的L 0 2细胞分别接触 0、4 0、80、1 6 0 μg ml氟化钠 (对照组、A、B、C组 ) 2 4h后 ,检测L 0 2细胞DNA损伤率、细胞凋亡百分率和p5 3蛋白表达水平。结果　染氟各组细胞DNA损伤率均明显高于对照组 (P <0 0 5 )。与对照组相比 ,B组和C组细胞凋亡百分率明显升高 (P <0 0 5 )。B组和C组细胞p5 3蛋白表达量均显著高于对照组 (P <0 0 1 )。结论　氟可导致L 0 2细胞DNA损伤率上升 ,诱导细胞凋亡和p5 3表达 ,并且随着氟浓度的升高 ,细胞凋亡率和p5 3蛋白的表达量均随之升高     

Cr（VI）对人胚肺细胞p53及抑癌基因p21（WAF1）表达的影响

目的研究人类致癌物Ｃｒ（ＶＩ）对抑癌基因ｐ５３及其下游的抑癌基因ｐ２１（ＷＡＦ１）在多阶段致癌中的作用。方法采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术，观察不同浓度Ｋ２Ｃｒ２Ｏ７对人胚肺细胞内ｐ５３及ＷＡＦ１表达的影响。结果Ｃｒ（ＶＩ）对ｐ５３表达的影响呈双相作用，０～１．２５０μｍｏｌ／Ｌ范围内Ｋ２Ｃｒ２Ｏ７抑制ｐ５３的表达；１．２５０～５．０００μｍｏｌ／ＬＫ２Ｃｒ２Ｏ７可刺激ｐ５３的表达。ＷＡＦ１的变化趋势与ｐ５３相一致，即１．２５０μｍｏｌ／ＬＫ２Ｃｒ２Ｏ７可明显抑制ＷＡＦ１的表达，而随着Ｋ２Ｃｒ２Ｏ７浓度的增加，ＷＡＦ１的表达也呈升高趋势。结论低剂量Ｋ２Ｃｒ２Ｏ７影响下的ｐ５３及ＷＡＦ１的低表达可能在Ｃｒ（ＶＩ）多阶段致癌中起重要作用。     

Role of DNA double-strand break repair genes in cell proliferation under low dose-rate irradiation conditions

Radiation-induced DNA double-stand breaks (DSBs) lead to numerous biological effects. To elucidate the molecular mechanisms involved in cellular responses to low dose and low dose-rate radiation, it is informative to clarify the roles of DSB repair related genes. In higher vertebrate cells, there are at least two major DSB repair pathways, namely non-homologous end-joining (NHEJ) and homologous recombination (HR). Here, it is shown that in chicken DT40 cells irradiated with gamma-rays at a low dose-rate (2.4 cGy/day), the growth delay in NHEJ-related KU70- and PRKDC (encoding DNA-PKcs)-defective cells were remarkably higher than in cells defective for the HR-related RAD51B and RAD54 genes. DNA-PKcs- defective human M059J cells also showed an obvious growth delay when compared to control M059K cells. RAD54(-/-)KU70(-/-) cells demonstrated their highest degree of growth delay after an X-irradiation with a high dose-rate of 0.9 Gy/min. However they showed a lower degree of growth delay than that seen in KU70(-/-) and PRKDC(-/-/-) cells exposed to low dose-rate irradiation. These findings indicate that cellular responses to low dose-rate radiation are remarkably different from those to high dose-rate radiation. The fact that both DT40 and mammalian NHEJ-defective cells were highly sensitive to low dose-rate radiation, provide a foundation for the concept that NHEJ-related factors may be useful as molecular markers to predict the sensitivity of humans to low dose-rate radiation.     

氡致小鼠肺损伤及对肺上皮细胞凋亡和p53蛋白表达影响

目的 现察氡吸入染毒小鼠肺及支气管组织的病理学改变、肺细胞凋亡及p53蛋白表达的变化.方法 建立氡染毒小鼠模型,观察吸入不同剂量即30和60个工作水平月(WLM)和不同时间段(24 h、30 d、90 d和180 d )氡小鼠肺组织的病理变化;采用TUNEL法检测小鼠肺上皮细胞调亡程度;用Westem-blot技术测定小鼠肺及支气管组织神3蛋白的表达水平.结果 病理学结果显示,染毒后肺组织的病理表现存在多样性和时相性,早期为急性损伤性反应,后期演变为上皮细胞及肺间质成纤维细胞的增生及组织的纤维化;随着染毒剂量的增加和染毒后随着时间的延续,小鼠肺组织中的肺上皮细胞凋亡指数及p53蛋白表达量比对照组明显升高.结论　氡吸入染毒可对小鼠肺造成不同类型的病理损伤,p53在氡吸入导致的肺上皮细胞凋亡过程中可能起到了一定的作用.     

p53-Bax线粒体凋亡通路DNA甲基化与胆管癌病理生物学的关系

目的探讨p53-Bax线粒体凋亡通路抑癌基因启动子区的甲基化状态与胆管癌病理生物学行为的关系。方法采用甲基化PCR检测36例胆管癌患者癌组织和癌旁组织中抑癌基因甲基化诱导静止基因（TMS1／ASC）、死亡相关蛋白激酶（DAPK）和p14启动子区甲基化状态,并对p53基因外显子5～8进行DNA测序,分析以上基因的突变与胆管癌生物学行为的关系。结果24例（66．7％）胆管癌患者癌组织中至少有1个抑癌基因启动子区存在甲基化,p14、DAPK和TMS1／ASC的甲基化率分别为25％、30．6％和36．1％。5例（13．9％）患者的癌旁组织中存在抑癌基因启动子区甲基化,其中TMS1／ASC启动子区甲基化3例（8．3％）,DAPK启动子区甲基化2例（5．6％）。DNA测序显示,22例（61．1％）胆管癌患者癌组织中p53基因外显子5～8存在突变。其中14例（38．9％）p53基因外显子突变伴1个以上抑癌基因启动子区甲基化,与胆管癌的病理类型、浸润深度、分化程度显著相关（P〈0．05）。抑癌基因非甲基化及p53突变阴性组（4例）术后1、2、3年的生存率分别为70％、43％、28％,抑癌基因甲基化及p53突变阳性组（14例）术后1、2、3年的生存率分别为28％、5％、0％,前者的生存率显著高于后者（X^2=9．060,P=0．03）。结论p53-Bax线粒体凋亡通路中抑癌基因启动子过甲基化是胆管癌组织中常见的分子事件,癌旁组织中TMS1／ASC和DAPK基因甲基化程度虽然较低,但可能对胆管癌有早期诊断意义。p53突变伴抑癌基因甲基化与胆管癌的病理生物学行为有关,趋向于较高的恶性程度和较低的生存率。