苦豆子内生放线菌产酶特性分析及活性菌株鉴定

以宁夏干旱荒漠区的126株苦豆子为试材,采用透明圈法对分离自其内生放线菌进行分泌胞外酶活性检测.结果表明:有71株内生放线菌具有酶活性,占总菌株数的56.3％.其中有3株菌株酶活性最为显著,菌株NDZKDS73、NDZKDS7具有的淀粉酶活性最高,透明圈半径达到24.62mm和19.12m m;菌株FJYKDS5具有的蛋白酶活性高,透明圈半径16.94 mm;菌株FJYKDS11、BJGKDS2具有的纤维素酶活性最高,透明圈半径为24.72 mm和22.40 mm;菌株FJJKDS2具有的几丁质酶活性最高,透明圈半径17.76mm;菌株NDZKDS24、NDZKDS20对葡聚糖酶活性最高,透明圈半径为12.06mm和10.50mm.通过形态特征和16S rRNA基因序列同源性分析,有7株活性菌属链霉菌属(Streptomyces),1株属拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis).     

苦豆子内生放线菌的分离鉴定及其拮抗菌筛选

采用3种消毒时间对健康苦豆子植株体内的内生放线菌进行分离。结果表明：消毒3 min消除非内生菌的影响效果较好;同一植株分离内生放线菌的数量,根部比茎、叶部多。经初步鉴定,苦豆子内生放线菌以链霉菌属和诺卡氏菌属为最多,分别占分离总数的35%和27%;其次为小多孢菌属,占12%;而类诺卡氏菌属、小单孢菌属、孢囊放线菌属和分枝杆菌属分离较少。26株纯化菌株对茄子枯萎病菌进行平板对峙培养,筛选出3株抑菌带宽度达到10 mm以上的菌株,其中菌株KDS22发酵液抑菌效果最好。     

奇异根串珠霉菌拮抗放线菌的筛选与鉴定

以奇异根串珠霉菌Thielaviopsis paradoxa为靶标菌,通过平板梯度稀释法从槟榔根际土壤中分离获得放线菌,利用平板对峙法筛选对奇异根串珠霉菌具有抑菌活性的菌株,通过培养特征、形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析鉴定拮抗放线菌。结果表明,槟榔根际土壤分离获得放线菌120株,初筛出22株对奇异根串珠霉菌具有抑菌作用,发酵液复筛出4株抑制效果达90%以上,编号为D2-3、G1-12、D2-9和G9-4。其中,放线菌株D2-3的抑制率显著高于其他放线菌及十三吗啉乳油750 g/L,为99.76%。初步鉴定菌株D2-3为链霉菌,与桑树链霉菌Streptomyces samsunensis 16S rDNA序列相似性为99.41%。     

南方根结线虫拮抗放线菌的分离、鉴定与杀线虫活性分析

采用稀释分离法从连作大豆根际土壤中分离到1株放线菌H-2,对其进行了形态学特征、培养特征、生理生化特征鉴定及16S rDNA分析,初步鉴定H-2菌株为小链霉菌(Streptomyces parvus)。离体生物测定了小链霉菌H-2菌株发酵培养滤液对南方根结线虫和小杆线虫的生物活性。结果表明:H-2菌具有较高的选择性杀线虫活性,对南方根结线虫2龄幼虫及其卵囊的孵化具有较好的抑制作用,对土壤中自由生活的小杆线虫毒性微弱;H-2菌株代谢物5倍液处理24 h后,对南方根结线虫2龄幼虫的致死率达74.35%,卵囊孵化抑制率为78.46%,H-2菌株具有较高应用价值。     

柑桔拮抗内生细菌的抑菌活性试验研究

从南丰蜜桔叶片和洋葱的健康植物组织提取液中筛选出3株对柑桔溃疡病(Xanthomonas campestris pv.Citri(Hasse)Dye)有拮抗作用的内生菌株Bb1、Bb2和YC1,通过拮抗菌株的抑菌活性试验,得出3株菌株对柑桔溃疡病均有较好的抑制效果。     

根结线虫拮抗放线菌NZ-5菌株的鉴定及其发酵条件优化

以根结线虫二龄幼虫为试材,研究1株分离自土壤样本的放线菌菌株NZ-5的杀线虫活性,其发酵培养滤液对根结线虫二龄幼虫有较强的毒杀活性,24 h校正死亡率达到84.36%。为了高拮抗菌株进一步应用于田间生产实践,采用形态特征观察、培养特征观察和理化特性检测方法,结合16S rDNA基因序列分析,对其进行鉴定,同时对菌株发酵液对二龄幼虫的致死率来明确该菌株的最优发酵条件。结果表明:菌株的上述特征与链霉菌属Streptomyces中的微白黄链霉菌S.albidoflavus相似性很高,因此菌株NZ-5被鉴定为链霉菌属Streptomyces微白黄链霉菌S.albidoflavus。进一步的发酵条件优化试验发现,该菌株在以燕麦片为碳源、酵母粉为氮源、培养温度为25℃,摇床转速在210 r·min^-1震荡培养4 d,起始pH为7,装液量为75 mL时菌株发酵培养液对根结线虫的毒杀活性为93.29%,相比优化前提高了8.93个百分点,菌株NZ-5能够有效杀死根结线虫二龄幼虫,可作为优良菌株进行杀线虫生物农药的进一步研发。     

羊耳蒜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性筛选

以兰科野生植物羊耳蒜为试材,采用常规无菌培养技术分离其根部的内生真菌,同时采用平板对峙的方法,研究了所获得的内生真菌菌株对常见植物病原真菌的抑菌活性。结果表明:从羊耳蒜的根中共分离获得43株内生真菌,经形态学鉴定分属于7个属,其中丝核菌属占优势。筛选得到4株具有较强抑菌活性的菌株,占分离菌株总数的9.3%,抑菌活性集中在油菜菌核病菌。结合分子生物学鉴定发现,这4株菌株分别为腐皮镰孢菌Fusarium solani、柱孢霉属菌株Cylindrocarponsp.、轮枝菌属菌株Lecanicilliumsp.和胶膜菌属菌株Tulasnella sp.。     

香蕉枯萎病拮抗放线菌的分离鉴定及抑菌机理分析

为丰富香蕉枯萎病生防菌资源,探究其抑菌机理,从润楠Machilus pingii根系土壤中分离筛选对香蕉枯萎病菌具有拮抗作用的放线菌,基于16S rRNA序列进化分析和生理生化特征,鉴定其种属.利用激光共聚焦显微镜评测盆栽试验的防控效果,并通过扫描电镜、透射电镜分析其对枯萎病菌孢子形态结构及超微结构的影响.结果 表明,...     

草莓灰霉病菌拮抗放线菌的筛选及活性测定

以分离自新疆古尔班通古特沙漠土壤的放线菌为试材,采用琼脂块法和生长速率法,研究了供试放线菌对草莓灰霉病菌的抑菌活性;采用形态学特征、生理生化特性、16SrDNA序列分析等方法对筛选出的高活性拮抗菌株进行种类鉴定。结果表明:从141株放线菌中筛选出1株对草莓灰霉病菌的抑菌圈直径为20.67mm的高活性拮抗菌株XJ93。该菌株无菌发酵滤液对多种植物病原真菌具有明显抑制作用,抑菌率为25.00%~71.67%;80℃处理60min其抑菌率未见明显变化,在pH 5~9范围内其抑菌活性稳定,在可见光和紫外线照射150min内亦保持良好的抑菌活性。拮抗菌株XJ93经鉴定为唐德链霉菌(Streptomyces tendae)。拮抗放线菌XJ93具有广谱抑菌活性,对环境有良好的稳定性,可作为防治果蔬草莓灰霉病的生物农药潜力菌株进行开发应用。     

番茄青枯病菌拮抗放线菌的筛选及鉴定

从贵州省贵阳市、遵义市、关岭县、独山县、麻江县等5个市(县),采集20份土壤样品,分离出72株放线菌,采用平板对峙培养法筛选出3株对番茄青枯病菌拮抗效果较好的放线菌,结合形态学特征与16SrDNA序列分析对拮抗放线菌进行鉴定。结果表明:3株拮抗放线菌分别为鲜黄链霉菌(Streptomyces galbus)、栗褐链霉菌(Streptomyces badius)、酸疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)。其中,鲜黄链霉菌对青枯雷尔氏菌的拮抗效果最好,其平均抑菌圈直径达55.7mm;栗褐链霉菌的拮抗效果次之,其平均抑菌圈直径为43.2mm;酸疮痂链霉菌平均抑菌圈直径为33.6mm。     

一株葡萄白腐病拮抗放线菌的筛选及鉴定

采用梯度稀释法从葡萄园土壤中筛选到9株抑制葡萄白腐病的放线菌,研究了其抑菌情况和离体果防治效果,其中对葡萄白腐病抑菌效果最好的菌株为K5,其抑菌率为62.56%。处理1 (喷发酵原液50倍稀释液24 h后再刺伤接种葡萄白腐病菌)和处理2 (刺伤接种白腐病菌24 h后,再喷拮抗菌50倍稀释发酵液)两个处理中,K5的相对防效分别为63.75%和58.75%。形态学和16S rDNA测序鉴定表明K5菌株为淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)。     

2株抗枯萎病尖镰孢菌内生细菌菌株的分离及鉴定

华南地区因尖镰孢菌引起的枯萎病发生较为严重,特别是近年来发现的香蕉枯萎病,对香蕉产业来说更是毁灭性的病害。分离、筛选有拮抗活性的内生细菌是防治枯萎病的有效措施之一。从海南红树林健康叶片中分离到102株非致病性内生细菌菌株,通过室内抗菌活性的测定,得到了2株对枯萎病尖镰孢菌具有明显抑制作用的拮抗菌株。通过对它进行形态、生理生化特性及16SrDNA序列等方面的研究,确定其中1株为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis,命名为BS-009;另一株确定为新发表种Bacillus Mojavensis的一个相似种,命名为BM-027。     

黄瓜枯萎病拮抗放线菌筛选及其生防作用鉴定

 通过高效筛选法从不同环境采集的土样中分离出44株对黄瓜枯萎病菌有拮抗作用的菌株,通过平板对峙法初筛和复筛得到一株具有较高拮抗活性的放线菌XF-7。研究了菌株XF-7发酵液对黄瓜枯萎病病原菌孢子萌发、菌丝生长及黄瓜种子发芽的影响,以及对苗期枯萎病的生防效果。结果表明：菌株XF-7发酵液对黄瓜枯萎病菌的菌丝生长及孢子萌发均有明显的抑制作用,可促进黄瓜种子发芽,且对黄瓜苗期枯萎病的防治效果显著,防效达79.57%。经16S rDNA序列分析,发现菌株XF-7与毒三素链霉菌（Streptomyces toxytricini）的16S rDNA序列同源性达100%。结合形态特征和生理生化特性,将菌株XF-7鉴定并命名为Streptomyces toxytricini XF-7,在GenBank中该菌株的序列登录号为JN315670。     

苦豆子浸提物对伽师瓜蔗糖合成酶和酸性转化酶活性的影响

以伽师瓜幼苗为研究对象,分别采用苦豆子的不同溶剂萃取物喷施处理,测定伽师瓜叶片中蔗糖合成酶(SS)和酸性转化酶(AI)活性的变化,以期为甜瓜栽培施用苦豆子绿肥提供科学依据。结果表明:除正丁醇萃取物外,其它3种溶剂萃取物处理对伽师瓜叶片中SS和AI活性均有显著影响(P0.05),以伽师瓜叶片中的酶净活性(SS-AI)为指标,不同萃取物处理对伽师瓜叶片蔗糖酶净活性的影响大小为二氯甲烷石油醚正丁醇空白对照乙酸乙酯,其中,二氯甲烷处理对伽师瓜叶片中SS和AI活性影响达到极显著水平(P0.01),1.5g·L~(-1)处理组的SS活性在20d达到4.56 mg·h~(-1)·g~(-1),较空白处理组(2.10 mg·h~(-1)·g~(-1))提高了117.14%,而AI活性仅为0.71mg·h~(-1)·g~(-1),较空白对照组(1.04mg·h~(-1)·g~(-1))降低了31.73%,说明苦豆子浸提物喷施处理能够促进伽师瓜中蔗糖合成与积累。     

双孢线虫草内生和生境土壤细菌的分离鉴定及其抑菌活性

采用8种培养基从来自云南哀牢山的12份双孢线虫草(Ophiocordyceps bispora)的子座、菌核及其生境土壤样品中分离细菌,并对细菌进行形态学分类,进行16S rRNA测序鉴定,同时按所获菌株来源及种类随机挑取供试菌株采用琼脂块扩散法测试对25株病原菌的抑菌活性。结果表明:从双孢线虫草子座、菌核和生境土壤中分离获得302株细菌,对其中275株进行测序,它们属于4门14目18科18属65种,其中链霉菌属(Streptomyces)、芽孢杆菌属(Bacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、诺卡氏菌属(Nocardia)和根瘤菌属(Rhizobium)为优势属;枯草芽孢杆菌(B. subtilis)、N. nova、纳塔尔链霉菌(S. natalensis)、S. angustmyceticus、高原链霉菌(S. platensis)、杀黄孢链霉菌(S. xanthocidicus)、江西诺卡氏菌(N. jiangxiensis)、高山芽孢杆菌(B. altitudinis)为优势种。就所含细菌类群而言,双孢线虫草生境土壤(16科16属57种)明显高于子座(9...     

林下种植灵芝内生细菌和放线菌的分离鉴定

以林下种植灵芝为试材,采用16S rDNA鉴定方法,研究了不同分离方法对灵芝内生细菌和放线菌多样性的影响,以期能够发现产生活性成分的菌种或者新种,从而推动微生物医药的发展进程。结果表明：从健康的灵芝子实体内分离得到放线菌1门1属的4个菌株(LZ-F1、LZ-F2、LZ-F3、LZ-F4)和细菌2门4属的5个菌株(LZ-B1、LZ-B2、LZ-B3、LZ-B4、LZ-B5)。4株放线菌均属于链霉菌属(Streptomyces),5株细菌分别属于周杆菌属(Peribacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、新根瘤菌属(Neorhizobium)和芽孢杆菌属(Bacillus)。该研究为其它食用菌内生菌的分离提供了技术支撑,也为灵芝活性成分的进一步开发利用提供了较好的参考价值。     

果树内生拮抗细菌的筛选鉴定及其生防作用研究

通过组织分离法,在不同健康果树的木质部中分离到235株内生细菌。通过平板对峙法对所得菌株进行了初筛和复筛,得到6株拮抗作用较强的菌株。用过滤和高温灭菌得到的菌株发酵液进行抑菌谱试验,最终获得拮抗作用较强的内生细菌X8。对X8菌株在植物体内定殖、分类鉴定和防治作用的深入研究。结果表明：X8菌株可以在杏、辣椒等植物中定殖。X8菌株发酵液对辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）抑制作用最强,达80.3%,对3种链格孢菌（Alternaria）病原菌的抑制作用达到75%以上,对番茄灰霉病和辣椒疫病的防效达到75.4%和79.3%,显著高于50%腐霉利和25%甲霜灵的防效。经16S rDNA序列分析,X8菌株与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的16S rDNA序列的同源性达99%。综合形态特征、生理生化特性,最终将X8鉴定为B. subtilis,在GenBank中序列登录号为HQ647257。     

南疆枣叶内生细菌鉴定与生防效果测定

为开发南疆果树病害生防资源,选择南疆阿拉尔垦区种植的枣叶为材料,从中分离出5株内生细菌,运用平板对峙法,筛选出具有拮抗功能的内生细菌;用PCR扩增内生细菌的16S rDNA基因,结合菌株菌落形态和生理生化特征,确定其分类地位.结果表明,5株内生细菌对苹果腐烂病抑制率分别为64.84％、63.74％、68.13％、70....     

三七内生菌分离及抗根腐病病原真菌筛选

对三七(Panax notoginseng)内生真菌进行了系统的分离,并以三七根腐病主要病原真菌坏损柱孢菌(Cylindrocarpon destruans)和三七黄腐病菌(Cylindrocarpon did ynum)为对象,对108株三七[Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen]内生真菌及其次生代谢产物进行了抑菌活性检测.结果表明:有29株内生菌至少对1种病原菌有抑制作用,14株内生菌对2种病原菌都有抑制作用;21株内生菌的次生代谢产物至少对1种测试菌有抗菌活性,其中的2株对坏损柱孢菌具有很强的抑制作用.说明从三七内生真菌中可以筛选出对三七根腐病主要原真菌具有良好抑制作用的菌种.     

黄皮果实炭疽病病原菌鉴定及其拮抗内生菌筛选

黄皮Clausena lansium(Lour.)Skeels属芸香科,黄皮属亚热带常绿果树.原产华南,有1 500多年栽培史.果实酸甜可口,风味独特,营养价值高且具有保健及药用价值,是深受人们喜爱的特产果品[1].近年来,我国黄皮栽培面积不断扩大,产量逐年提高,但黄皮果实采后极不耐贮藏,在自然条件下极易变软腐烂.