改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较

目的:常规的脱钙骨切片制作方法在脱钙、组织结构完整性等方面存在一定的缺陷.比较用改良后方法制作的脱钙骨组织切片与常规制作的脱钙骨组织切片质量的差异.方法:①实验材料:实验于2004-12/2007-12在广东医学院组织和胚胎学教研室及药理教研室完成.SPF级雌性SD大鼠10只,鼠龄6个月.②实验方法:取大鼠左右股骨和胫骨标本各20个,分为两组,左股骨和右胫骨为实验组,右股骨和左胫骨为对照组.实验组经过常规同定,而后应用改良脱钙液(甲酸10 mL、浓盐酸(相对密度1.19)8 mL、氯化铝3 g、体积分数为0.4的甲醛20mL、冰乙酸3mL,加生理盐水至总体积200mL)脱钙、脱水、氯仿透明、包埋时间延长、染色、封固和切片;对照组进行常规固定、脱钙、脱水、透明、包埋、染色、封固和切片.③实验评估:比较两组切片的质量和效果.结果:①实验组大鼠的脱钙骨切片与对照组比较,标本脱钙时间缩短,脱水时间变化不大,而透明效果明显改善.②与对照组比较,实验组骨组织切片标本薄均匀、平坦完整,脱蜡完整均匀.染色成功的切片,骨与骨周围的组织形态保持完整.结论:改良的脱钙大鼠股骨和胫骨石蜡切片制作方法能使标本脱钙更彻底、结构更清晰、组织完整性更好.     

介绍一种改良的Plank·Rycho脱钙液

脱钙是制作骨组织切片的重要环节 ,脱钙液的选择与脱钙速度和骨组织切片染色质量密切相关。我们采用Ｐｌａｎｋ·Ｒｙｃｈｏ脱钙液经改良用于骨组织脱钙 ,该液既不损害骨组织结构也不影响染色效果 ,简化了步骤 ,缩短了时间。1　材料与方法1 1　材料　 196例标本来自我院手术切除的骨肿瘤、病变骨、钙化组织和骨髓穿刺组织。改良的Ｐｌａｎｋ·Ｒｙｃｈｏ脱钙液的配制 :氯化铝 7ｇ ,盐酸 8 5ｍｌ,甲酸 5ｍｌ,甲醛 15ｍｌ,ＴｒｉｔｏｎＸ 10 0 0 5ｍｌ,蒸馏水 10 0ｍｌ。1 2　方法　将送检标本直接或取材为 1 0ｃｍ× 1 0ｃｍ×0 3ｃｍ大小…     

大鼠关节组织硝酸、EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较

骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一.它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的.适用组织化学、免疫组化等技术的染色.大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败.现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10%硝酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA)复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色.对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果.     

离子电解脱钙法在100例骨病理切片中的应用与观察

骨病理诊断较难,骨组织病理切片更难,骨组织病理切片最关键的是骨的脱钙软化,否则无法切片及进行病理诊断.骨的成份约含50%水份,其余为钙盐及磷酸盐混合物,骨的硬度系由于钙盐的聚积,必须将其除去,则组织变软,方能切片,一般骨脱钙法常用酸泡法.但此方法缺点甚多,主要脱钙时间长,有的需时间长达十天左右,其浸泡液多使用强酸,而强酸腐蚀组织,破坏骨组织结构,很容易误诊.现对本院2001～2007年收治的100例骨病患者标本用离子电解脱钙法进行病理切片,此方法不使用强酸,对组织损伤极微,而去钙化物极快.……     

大鼠关节组织硝酸、EDTA脱钙对石蜡制片的影响及比较

骨组织脱钙技术是病理实验室常用技术之一。它的应用,使难以切片或不能完整制片的骨或软骨组织达到完整制片的目的。适用组织化学、免疫组化等技术的染色。大鼠关节组织制片的关键步骤是脱钙,其直接影响到制片的成败。现在大鼠关节组织石蜡制片实验中,分别用10％硝酸和乙二胺四乙酸二钠（EDTA）复合液进行脱钙处理后,石蜡包埋、制片、染色。对用两种方法脱钙处理的大鼠关节组织石蜡制片后染色,镜下观察形态及着色效果。     

大鼠骨组织脱钙和染色方法的改进

选择适当的脱钙液是制备优质脱钙骨组织常规切片的关键。常用的脱钙剂有硝酸、盐酸、硫酸等无机酸和蚁酸、醋酸、甲酸等有机酸。在大鼠等小动物骨代谢疾病实验病理学研究时，使用这些试剂对大鼠等骨组织脱钙，常因脱钙过度严重影响染色效果，而脱钙不充分又会影响骨组织切片的完整性。为此，我们试用改进的骨组织脱钙和染色方法制备大鼠骨组织切片，获得了良好效果，现介绍如下。     

骨髓活检标本脱钙及除酸方法的改良

许多单位都采用石蜡切片技术制作骨髓活检组织切片,因骨髓组织富含钙盐,所以制片前一定要先脱钙。过去我们一直用14%硝酸脱钙液脱钙,脱钙后流水冲洗,但此法制作组织切片时常出现组织切片破碎、组织形态和细胞结构严重     

GS环保试剂套液在骨髓穿刺石蜡切片中的应用

我科对骨髓穿刺石蜡切片多采用甲醛固定,经稍脱钙、乙醇脱水及二甲苯透明,骨组织还是较硬(多为二甲苯造成),造血细胞收缩较明显,不易切出薄切片,无法看清胞质及胞核内的颗粒。从2009年10月开始用GS环保型试剂至今,不但骨髓穿刺组织易切出1μm薄片,大块脱钙骨组织也很好切,细胞无明显收缩,染色鲜艳。     

石蜡包埋组织块简单的快速脱钙法

在石蜡切片中,经常碰到骨组织脱钙不好或组织中含有钙化灶,造成切片困难及损伤刀口。为此,介绍一种脱钙新方法。１材料和方法１．ｌ脱钙液：５％盐酸,培养Ｍ。１．２脱钙方法将被脱钙的蜡块,用外科刀或刀片修切,露出组织,然后将蜡块面朝下置于５％盐酸的培养皿内。...     

骨组织脱钙方法探讨

目的比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力和脱钙后HE染色效果,寻找一种最佳的骨组织脱钙方法。方法通过查阅文献资料,把文献报道的3种相对较理想的脱钙液用于临床病理骨组织脱钙中,对比3种脱钙液对骨和骨髓组织常规病理切片质量和HE染色效果。结果 3种脱钙液脱钙时间的比较,甲酸-甲醛脱钙液改良Jenkins脱钙液硝酸-甲醛脱钙液。3种脱钙液脱钙效果的比较,硝酸-甲醛脱钙液改良Jenkins脱钙液甲酸-甲醛脱钙液。3种脱钙液对组织损伤的比较,硝酸-甲醛脱钙液甲酸-甲醛脱钙液改良Jenkins脱钙液。结论改良Jenkins脱钙液对组织损伤较小,脱钙效果充分,适当缩短脱钙时间,切片染色质量上乘,可以作为一种相对理想的骨组织脱钙剂推广应用。     

骨组织工程技术进行犬上颌窦提升的实验研究

目的：观察猪脱钙冻干骨支架和骨髓基质细胞（BMSCs）复合后在犬上颌窦底的成骨情况。方法：将实验犬BMSCs诱导为成骨细胞后与冻干脱钙骨支架相复合，用于实验犬自体上颌窦提升，通过实验组与正常骨组织、阳性对照组和空白对照组之间大体标本、X线影像学观察、组织切片HE染色和免疫组化染色的比较，考察其成骨情况。结果：实验侧上颌窦外形饱满．与周围正常骨组织无明显区别，X线可见骨小梁致密整齐，组织切片HE染色和免疫组化分析均显示实验组成骨与阳性对照组无明显区别。结论：应用冻干脱钙骨支架与BMSCs复合的组织工程复合物在上颌窦提升术时，具有良好的成骨能力，可以形成正常的骨组织。     

甲酸混合酸脱钙液在兔股骨头制片中的应用

目的观察甲酸混合酸脱钙液对股骨头组织的制片效果。方法采用成年新西兰大白兔10只,切断股骨头圆韧带,取股骨上1/3段置于甲酸混合酸脱钙液中脱钙1周,随即常规脱水、透明、石蜡包埋,制备5μm厚纵切片,行HE染色。结果所有组织切片厚薄均匀,未见脱片现象,股骨头完整性较好,各层次分明,骨小梁结构完整,软骨细胞、骨细胞细胞形态清晰,着色鲜艳。结论选用甲酸混合酸脱钙液制片股骨头组织具有脱钙时间相对较短、操作简单、组织结构完整、染色效果较好的特点。     

介绍一种改良的Neutral EDTA脱钙液

脱钙是制作骨组织切片的重要环节,尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织,如何达到骨组织既充分脱钙,又保护骨组织的抗原不受破坏的目的,我们参考有关文献[1,2],配制了一种改良的Neutral脱钙液,用于骨组织脱钙,并进行相应的免疫组化染色。该方法既不损害组织结构也不影响染色效果,简化了步骤,保证了质量。1材料与方法1·1材料24例来自大段同种异体骨愈合实验研究之兔骨。改良的Neutral脱钙液配制方法:将乙烯二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)250 g,溶于1 750 ml蒸溜水中,此时溶液呈灰白色浑浊状,不停摇晃使溶液彻底溶解。加入氢氧化钠25 g,继续摇…     

骨组织脱钙技术应用进展

脱钙是制作骨组织切片的重要环节。骨组织含钙量多,一般不能直接制作切片。除了骨组织之外其他组织也可发生钙化,在组织中形成钙化区,所以需要经过脱钙过程。目前,主要使用单纯酸类、复合酸类、螯合剂类、离子交换树脂、电解、低温-微波等方法进行脱钙处理,特别是近年来微波技术的发展和应用,明显缩短了脱钙的时间,改善了HE、组织化学、免疫组织化学染色和原位杂交的过程。现将临床常用脱钙技术的相关内容综合阐述如下。     

改良骨及钙化组织快速脱钙法在病理诊断中的应用

目的:探讨骨及钙化组织改良快速脱钙法在病理诊断中的应用。方法:回顾性分析31例骨肿瘤患者需脱钙处理的骨组织病理切片资料。结果:改良骨及钙化组织快速脱钙法脱钙时间较常规脱钙法缩短48 h,切片厚薄均匀,平坦完整,结构清晰,着色均匀。结论:对骨及钙化组织脱钙方法进行改良,可缩短骨及钙化组织的制片时间、并制出优良切片。     

骨及钙化组织脱钙过度后的补救

骨及钙化组织的石蜡切片,组织在充分固定后,应进行脱钙处理,一般先经有机酸或无机酸稀溶液浸渍脱钙,再用流水冲洗24h,除去组织内的酸,然后才能按常规脱水、浸蜡、切片、HE染色.     

骨组织制片方法的改进

骨组织是一种坚硬的结缔组织,基质中含有大量无机酸盐,是所有组织中最难制片的组织。而脱钙又是骨组织制片染色技术中的关键步骤。笔者在实践工作中对120例骨组织进行了摸索,选择出一种比较理想的方法,介绍如下:1　材料与方法1.1　材料　系本院及外院送检的骨组织标本。1.2　方法　1.2.1　固定　4%甲醛37℃固定4～6ｈ,固定液体积大于标本块体积20倍。1.2.2　脱钙　将已固定好的骨组织置于脱钙液内,脱钙液的组成:盐酸20ｍｌ,甲酸30ｍｌ,甲醛30ｍｌ,蒸馏水20ｍｌ。脱钙液量要充足,为标本体积的20～30倍。松质骨完全脱钙12～20ｈ,密质骨需24～4…     

常规HE染色中蓝化方法的改进

HE染色是病理技术人员的基本功,是生物学尤其是病理学及细胞学诊断工作中必不可少的染色方法。病理组织学的基本知识,绝大部分都是从观察HE染色标本中得来,其染色是否成功直接影响其他方法的选择与进行。但是在临床工作中我们发现,一些前期处理均好的切片,一旦进入氨水中进行蓝化时会出现个别脱片现象,尤其像脱钙后的骨组织、冷冻切片中的脂肪组织、平滑肌组织及甲状腺等纤维成分或脂肪成分多的组织更甚。为了克服其影响因素,减少或不出现脱片现象,我们对常规应用的1%氨水进行了改进,选用免疫组化染色常用的PBS(即磷酸盐缓冲液)替代氨水…     

骨及钙化组织脱钙过度后的补救

骨及钙化组织的石蜡切片,组织在充分固定后,应进行脱钙处理,一般先经有机酸或无机酸稀溶液浸渍脱钙,再用流水冲洗24h,除去组织内的酸,然后才能按常规脱水、浸蜡、切片、HE染色。但脱钙是否完全不好掌握,如果脱钙过度会对组织和抗原造成破坏,影响染色,造成病理诊断困难,至今尚未见解决办法的报道。我们应用酸碱中和的原理对脱钙过度的组织进行处理,染色效果得到很大改善,现将此法介绍如下。1材料和方法活检骨及钙化组织,锯成1.2cm×1.2cm×0.3cm薄片;10%中性福尔马林固定;10%硝酸脱钙过度,然后水洗流水冲洗30min;梯度乙醇脱水、浸蜡、包埋、…     

墨汁灌注和血管铸型方法检测山羊胫骨血管应用性能的不同

目的:比较血管墨汁灌注和甲基丙烯酸甲酯血管铸型两种方法在山羊胫骨血管检测中的优缺点,为组织工程骨血管化检测寻找一种直观可行的方法。方法:实验于2004-05/2005-07在南方医科大学南方医院创伤骨科骨组织工程实验室完成。①12只正常中国青山羊随机分为墨汁灌注组,甲基丙烯酸甲酯血管铸型灌注组,每组6只。②墨汁灌注组采用中华墨汁、甲醛及生理盐水体积比为3∶1∶6的复合墨汁,行双侧股动脉插管,经血管冲洗后进行灌注,低温放置24h后取下胫骨标本行进一步处理,甲基丙烯酸甲酯血管铸型灌注组,每只山羊均行双侧后肢股动脉插管,血管彻底冲洗后将预聚后的甲基丙烯酸甲酯灌注,低温放置24～28h后取下胫骨标本行下一步处理。③灌注后两组标本分别采用大体解剖,未脱钙骨磨片和脱钙后组织切片等方法观察青山羊胫骨血管的走行与分布。结果:①山羊胫骨经墨汁灌注后大体解剖、未脱钙骨磨片和脱钙骨组织切片观察可清楚显示骨膜、骨皮质和骨髓腔血管;可以观察骨组织的显微结构,但不便于直观地观察胫骨与周围血管的空间立体结构。②血管铸型后的山羊胫骨制作的大体解剖标本,在胫骨中段制作2cm×1cm骨窗,可见髓腔内的铸型血管,骨皮质横、纵切面上可见微细的铸型血管断面;可以直观的观察山羊胫骨与周围血管的空间立体构筑,显示胫骨营养血管的分布、走行,未脱钙磨片能够清楚显示骨皮质血管网,扫描电镜可以观察到哈佛氏管内血管。结论:血管墨汁灌注适合用于微血管检测,便于染色后同时观察骨组织的显微结构;而血管铸型标本则适合大体观察血管的空间立体构筑,较为直观,两者在组织工程骨血管化检测中有不同的应用价值。