以农杆菌为介导花生遗传转化研究

应用花生丛生芽再生体系，以农杆菌为介导将含有几丁质酶和β－1，3－葡聚糖酶抗病基因的植物双价表达载体pCGII转入花生品种泉花10号和金花1012，获得转基因植株，并已通过PCR和Southern blot鉴定，研究表明，侵染时间以5－15min的效果较好，侵染时间过长不利于提高转化率；0－1d预培养对基因转化有利，预培养2d可使转化率下降。     

农杆菌介导的花生遗传转化研究

对影响花生遗传转化效率的PPT筛选压、根癌农杆菌的侵染浓度、侵染及共培养时间等因素进行研究，采用农杆菌转化花生叶片，成功地将抗虫基因豇豆蛋白酶抑制基因(CpTI)和耐除草剂基因(Bar)导入花生。实验结果表明，外植体在MS 3mg／LBA 0．8mg／LNAA 2mg／LAgNO3 6mg／L Gln培养基上预培养3d，于OD600为0．3的农杆菌菌液中浸泡5～7min后培养2d，再转移至含有3mg／LBA 0．8mg／LNAA 2mg／LAgNO3 6mg／L Gln 500mg／LCb 300mg／LCef 0．25mg／LPPT的MS培养基诱导筛选培养，3个月后得到24个再生株系。经PCR初步检测，有7个株系显示了310bp的CpTI基因核酸片段，Southern杂交证实了5个株系有外源基因的整合。     

花生子叶遗传转化再生体系影响因素的研究

本试验选用子叶为外植体研究了影响植株再生和遗传转化的因素。结果表明,细胞分裂素(6-BA)5.00 mg/L (2,4-D)1.50 mg/L的诱导培养基子叶外植体丛生芽诱导率最高,分别达89.67%和83.33%。遗传转化影响因素结果表明,菌液OD600为0.5-0.7、侵染时间10min、共培养时间3d、每50mL菌液添加烟草提取物1.0mL可获得较好的转化效果。抗生素对芽分化率影响的研究结果表明,当头孢唑林钠(Cef)250 mg/L 羧苄青霉素(Carb)250-500 mg/L时效果最好,不但可以完全抑制农杆菌生长,而且有较高的芽诱导率。     

根癌农杆菌介导花生高效遗传转化体系的优化

本文研究表面活性剂(MES,methyl ester sulfonate)、真空渗入法和二次侵染对提高花生转化效率的影响,建立了一种农杆菌介导的花生快速高效遗传转化体系。该体系以带子叶的胚轴为外植体,在OD600为0.7的菌液中,加入150mg/L的MES,40kPa真空处理10min,共培养3d后进行二次侵染。采用该体系可显著提高遗传转化率,GUS基因阳性表达率最高,达73.3%。     

农杆菌介导的花生遗传转化现状与分析

介绍农杆菌介导的花生遗传转化的原理和方法并对影响转化率的因素进行了探讨.     

甘薯离体遗传转化研究进展

对甘薯遗传转化目的基因的来源、受体系统和转化方法,以及采用遗传工程改良甘薯品种等方面的研究进展进行综述,并讨论了今后的研究重点。     

花生遗传转化的研究

介绍了国内外近１０年花生遗传转化的研究现状,着重介绍了花生遗传转化目的的基因的来源和基因导入的常用方法,以及高效的转基因再生系统。     

农杆菌介导抗虫CpTI基因的花生遗传转化及转基因植株的再生

通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)Ti质粒介导途径，将抗虫CpTI基因转入花生，经过诱导分化获得转基因再生植株。PCR检测及Southern杂交鉴定结果表明，外源CpTI基因已整合到大部分再生花组中。通过抗虫性检测试验，转基因花生具有一定的抗虫性。     

农杆菌介导的马铃薯遗传转化影响因素研究进展

从基因型、外植体种类、预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间、选择压、培养基激素含量等方面综述了农杆菌介导的马铃薯遗传转化的影响因素,并对进一步的研究进行了展望,以期该技术在马铃薯的产量提高、品质改善中发挥作用。     

花生基因工程研究进展

９０年代以来,花生基因工程研究重点放在建立花生遗传转化和再生体系上。随着花生遗传转化和再生技术的进步,美国已分别获得抗病和抗虫转基因花生植株,取得突破性进展。目前,农杆菌介导的遗传转化是以花生幼苗嫩叶为外植体,通过卡那霉素筛选,器官发生再生转化植株;基因枪介导的遗传转化是以胚愈伤为转化材料,通过潮霉素筛选转化体胚,再生转化植株。     

以农杆菌为介导花生的遗传转化研究I.质粒载体的分子鉴定及农杆菌菌株的转换

以农杆菌为介导将外源基因转入花生是花生遗传转化的主要途径之一，本研究利用含几丁质酶和β-，3-葡聚糖酶基因的植物双价表达成体pCGⅡ进行花生的遗传转化研究。首先对质粒表达成体进行分子鉴定，对LBA4404菌株进行抗生素抗性试验，并针对原有菌株(HLBA4404)对抗生素的不敏感性将其换为另一菌株(NLBA4404)，为花生的遗传转化奠定物质基础。     

农杆菌介导甘蔗基因转化技术的优化

以甘蔗（Saccharum officinarum L.）品种ROC10为转化受体材料,以GFP基因为报告基因,通过对农杆菌介导遗传转化的一系列条件,包括农杆菌菌株及侵染菌液浓度、侵染时间、受体愈伤组织龄期、AS活化时间及使用浓度、共培养时间等进行优化,同时进行了便于vir基因活化和T-DNA转移的条件组合,如附加果糖和葡萄糖、酸性环境感染,低温共培养等,从而建立了一个可行、有效而又简便的农杆菌介导的甘蔗遗传转化体系。结果表明:农杆菌菌株EHA105优于LBA4404,其适宜侵染浓度D600为1.3752;适宜受体愈伤组织龄期为25℃暗培养25d;适宜侵染时间为30min;适宜AS活化时间为2h,使用浓度为200μmol·L-1;适宜共培养时间为4d。获得2株有荧光信号的植株,对这2株植株进行斑点Southern杂交检测,均有阳性反应,证明GFP基因已整合到甘蔗基因组中并得到了有效表达,表明该转化体系确实是有效的。      

花生遗传转化高效基因型的筛选与研究

选用16个花生栽培品种（系）的胚小叶作外植体,经农杆菌介导途径进行遗传转化,研究基因型差异对花生愈伤组织诱导率、不定芽分化率以及基因转化效率的影响。结果表明,不同基因型花生愈伤组织诱导率、不定芽分化率以及基因转化率差异显著。鲁花12号和02P181的愈伤组织诱导率分别为96.23%和95.59%,显著高于其他品种,P03-4和D165的愈伤组织诱导率分别为67.46%和67.33%,显著低于其他品种。05A110的不定芽分化率最高,为71.69%,其次是花选9号,不定芽分化率为46.51%,莒南2号和临花5号的不定芽分化率分别是43.71%和42.69%,与花选9号差异不显著,不定芽分化率较低的品种是E1、P03-4、远育16-8、抗青19号和潍9816,D165未分化出不定芽。临花5号的基因转化率最高,为3.36%,其次是莒南2号其转化率为1.99%,HY-1转化率为1.57%,05A106、潍9816、DS-1和花选9号四品种的转化率在0.13%-0.18%之间,未获得其他9个品种的转基因植株。     

花生CpTI基因转化——花粉介导法

利用花粉作为外源基因的载体将抗虫基因(CpTI基因)转入花生中。以花生仲恺01号为受体,以PCB302-3质粒外源基因为供体。在花生开花期,收集花粉与质粒DNA混合并附加超声波处理,然后以人工授粉的方法将外源基因导入受体中。利用花粉作为载体介导外源基因转化,避免了传统的基因枪法和农杆菌转化所要求的组织培养技术,转化方法简单、易操作,具有很强的实用性。     

花生细胞工程与遗传转化研究进展

花生细胞工程与遗传转化的研究对于花生品种改良、新品种繁育以及种质资源保存等具有重要意兰。对二十世纪90年代以来花生高效再生技术和遗传转化研究的现状以及发展趋势进行概述和讨论。     

农杆菌介导的β-1, 3-葡聚糖酶基因转化花生的研究

以花育22号成熟胚萌发5-7 d的幼叶为外植体,以农杆菌为介导将含有β-1,3-葡聚糖酶基因的表达载体pATC940转入花生,获得转基因植株。结果表明,外植体经预培养1-2 d,于OD600为0.5-1.0之间的农杆菌菌液中浸泡10-15 min,再共培养3 d,有利于提高转化率。并对再生的抗性植株进行了PCR检测。     

花生品质的影响因素研究Ⅱ. 栽培因素

研究表明,春播与夏播、覆膜与裸栽、轮作与连作、干旱以及不同收获期等对花生籽仁品质均有一定的影响。春播较夏播花生粗脂肪含量提高3.37%;春播覆膜提高了花生油酸和亚油酸的比值(O/L),同时粗蛋白质和氨基酸含量均有提高,天门冬氨酸、谷氨酸和精氨酸含量提高幅度较大;裸栽花生籽仁的总糖和蔗糖含量比覆膜的分别提高0.72%和0.55%。     

花生品质的影响因素研究Ⅰ.花生品种因素

研究证明，花生品种类型间和同一类型不同品种间以及同一品种不同成熟度的籽仁，其品质均存在显著差异。粗脂肪含量，最高58．7％，最低43．66％，粗蛋白质含量，最高34．75％，最低21．06％；油亚比（O／L），最高2．173，最低0．807；人体必需氨基酸含量，最高8.93g/100g.最低6.57g/100g；人体必需脂肪酸含量，最高40.68%,最低29．16％，总糖含量，最高6．78％，最低4．56％，VC含量，最高7.38mg/kg，最低2.42mg/kg；VB1含量，最高14.84mg/kg,最低7.96mg/kg;硒含量，最高0.086mg/kg，最低0.072mg/kg。说明影响花生品质首先是品种本身的遗传因子，通过正确运用育种手段可以选育出优质综合和优质专用型花生新品种。