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一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法(摘要)(英文) 总被引:6,自引:0,他引:6
[目的]介绍一种适于拟南芥PCR检测的DNA快速提取方法。[方法]通过对常规DNA提取方法的改进(省去液氮研磨和苯酚提取的步骤),获得可以快速大批量地提取拟南芥DNA样品的方法。于1.5ml Eppendorf管内加入400μl DNA提取液[内含200 mmol/LTri(pH值7.5),25 mmol/LEDTA(pH值8.0),250 mmol/LNaCl,0.5% SDS(W/V)],剪取拟南芥叶片材料少许(1片以下)加入400μl DNA提取液,用微型研磨棒将叶片捣碎至溶液成绿色,放置3 ~5 min;加入400μl氯仿/异戊醇(体积比24:1),混合均匀,12 000 r/min离心5 min;取上清液至另一1.5 ml Eppendorf管内,加入300μl异丙醇,颠倒混合均匀,室温下放置5 min,12 000 r/min离心5 min;弃去上清液,以70%乙醇漂洗,放置晾干,加入100μl灭菌超纯水溶解,4℃放置备用。以随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系为样品进行验证。[结果]经过琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收检测,DNA样品完整且污染少,PCR扩增目的片段结果良好,适于作为PCR反应的模板。经过对随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系的PCR检测,阳性植株目的基因扩增条带清晰,无假阳性,试验结果理想。[结论]该方法适用于拟南芥DNA样品的快速提取、PCR检测及拟南芥突变体筛选工作。 相似文献
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报道了一种专供PCR分析的快速微量提取拟南芥基因组DNA的方法,该法大大简化了传统提取3-法的步骤,而且用氯仿一异戊醇代替传统的酚,克服了由于酚的残留带来的后续PCR等操作上的困难。用该法提取的DNA样品质量较高,特别适合一些突变体及转基因植株的PCR初步鉴定。 相似文献
3.
报道了一种专供PCR分析的快速微量提取拟南芥基因组DNA的方法。该法大大简化了传统提取方法的步骤,而且用氯仿-异戊醇代替传统的酚,克服了由于酚的残留带来的后续PCR等操作上的困难。用该法提取的DNA样品质量较高,特别适合一些突变体及转基因植株的PCR初步鉴定。 相似文献
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为了简化DNA提取方法的步骤,减少(或避免)有机溶剂的使用,对以前的提取方法进行了改进,报道了一种专供PCR分析的快速微量提取拟南芥基因组DNA的方法.该方法在常温下仅需10 mg左右的拟南芥叶片,以Tris- HCl为提取溶剂,简单研磨后以牛血清蛋白溶液回溶,离心后的上清液即可直接用于PCR检测.该方法大大简化了传统提取方法的步骤,缩短了提取时间,而且完全避免了对一些有机溶剂的使用,克服了传统方法中由于酚的残留带来的后续PCR等操作上的困难,完全可以满足以PCR扩增为基础的试验需要. 相似文献
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一种简易的拟南芥幼苗微量DNA提取方法 总被引:12,自引:2,他引:12
报道了一种简易的拟南芥幼苗微量DNA提取方法。陔方法可在常温下进行DNA提取,而且样品用量少,仅需10mg左右,用100μL重蒸水回溶DNA沉淀所获得的粗提液可直接用于PCR检测。结果表明:应用该法提取的DNA完整性好,PCR效果佳,适用于拟南芥转基因植株鉴定。 相似文献
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[目的]建立一种快速筛选转基因水稻的DNA提取方法。[方法]对试剂盒法和快速法2种DNA提取方法进行比较,并分别用转Ta NADP-ME1和Ta NADP-ME2基因的转基因水稻进行验证。[结果]用快速法提取得到的DNA进行PCR扩增,可分别得到约1 700 bp的Ta NADP-ME2基因和约1 900 bp的Ta NADP-ME1基因,且条带清晰明亮,与试剂盒法相比无显著差异。[结论]该研究中快速提取DNA的方法经济、简便、快捷,适合用于对大量转基因样品进行检测。 相似文献
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[目的]建立一种快速提取玉米基因组DNA的方法。[方法]对改良CTAB法进行进一步简化,不需要进行沉淀、洗涤、溶解和RNA消化等步骤,建立一种快速提取玉米基因组DNA的方法。[结果]该方法获得的DNA完整性及PCR扩增效果与试剂盒提取方法相比无明显差异;经过对样品ELISA检验可知,该方法得到的DNA用于PCR检测结果准确。[结论]该方法能够满足转基因玉米PCR检测中快速、高效、准确、高通量的要求。 相似文献
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用于PCR的大豆DNA快速提取改良方法 总被引:4,自引:3,他引:4
大豆DNA的提取是进行大豆分子生物学研究的基础。为了探索方便快捷的适合大豆分子生物学研究的DNA提取方法,在Aljanabi和Martinez 1997年提出的通用DNA快速盐提法的基础上,调整缓冲液中NaCl、Tris-HCl、EDTA浓度,提出一种适合大豆叶片DNA提取的改良盐提方法。该方法具有快速、简易和环境友好的特点。试验表明,该改良方法所提DNA凝胶条带清晰,无拖尾,浓度在1.5397~2.1039μg/L之间,OD260/OD280检测值在1.6913~1.8025之间,所提DNA适用于PCR,PCR结果理想。 相似文献
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【研究目的】为了寻找一种适用于病毒诱导的基因沉默番茄叶片PCR检测的快速、简单、成本低的DNA提取方法。【方法】笔者根据PCR反应的要求,用改良的CTAB法,实现了微量番茄叶片基因组DNA的快速提取。【结果】提取基因组DNA所用的组织量虽少,所得的DNA经过电泳检测虽有降解,但足以用于PCR检测,以其作模板扩增中国番茄黄化曲叶病毒诱导的硫黄素酶(Su)基因沉默植株中病毒组分中的DNAmβ和1.7A,片段大小分别为500bp、1300bp。测序结果证明是相应基因的部分片段。【结论】该方法的材料不需要使用液氮,可以单人大批量提取,并在基因沉默的番茄植株中能稳定而准确的规模化PCR检测。 相似文献
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[目的]对土壤微生物的DNA进行提取,以建立一种适用于PCR技术分析的土壤微生物DNA的快速提取方法。[方法]采用了2种不同的直接裂解法提取土壤微生物DNA,并用细菌通用引物27F和1492R进行PCR扩增16SrDNA片段。[结果]2种方法提取的土壤微生物总DNA电泳结果显示没有差别,但是只有CTAB、溶菌酶、冻融裂解法提取的总DNA不需要纯化,在增加Mg^2+用量的条件下,只需用第一轮非特异PCR产物作为模板即可扩增出16SrDNA片段。[结论]CTAB、溶菌酶、冻融裂解法提取土壤DNA,方法操作简单、快捷。同时适用于PCR分析。为土壤微生物群落结构的多样性分析奠定了基础。 相似文献