细胞因子诱导HepG2细胞ICAM—1表达的研究

目的 研究IFN-γ、TNF-a和IL-1对HepG2细胞细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 用IFN-γ、TNF-a和IL-1在体外诱导HepG2细胞表达ICAM-1,并用细胞FLISA检测HepG2细胞ICAM-1表达水平。结果 未经刺激的HepG2细胞ICAM-1表达水平很低。TNF-a、IL-1、IFN-γ刺激后,HepG2细胞ICAM-1表达均明显增强,其表达水平与细胞因子浓度呈一定的剂量依赖关系;随着细胞因子刺激时间的延长,HepG2细胞ICAM-1表达也逐渐增多。结论IFN-γ、TNF-a和IL-1等细胞因子能诱导体外培养HepG2细胞ICAM-1增强表达。     

IL—4和IL—10基因启动子区多态性与哮喘

细胞因子在哮喘发病中起到了很重要的作用。近来人们发现某些细胞因子的遗传多态性与哮喘的发病存在着一定的相关性，本文拟就IL-4和IL-10基因启动子区多态性与哮喘的相关性作一综述。     

联合应用IL—2及IL—4基因转染瘤苗对实验性肺转移…

将ＩＬ－２基因转染的高分泌ＩＬ－２的Ｂ１６黑色素瘤细胞株（Ｂ２）及ＩＬ－４基因转染的高分泌ＩＬ－４的Ｂ１６黑色素瘤细胞株（Ｂ４）制备成新型瘤苗，用以治疗实验性肺转移荷瘤小鼠，并辅以低剂量环磷酰胺，结果表明，荷瘤小鼠存活期明显延长；肺部转移结节数明显减少；两种瘤苗联合治疗后的疗效较单独使用明显，当辅以低剂量环磷酰胺时治疗效果更加明显。体内免疫功能检测表明，经两种瘤苗联合治疗的荷瘤小鼠脾细胞ＮＫ及ＣＴ     

bcl-2基因转染PC12细胞及其神经保护作用的研究

目的　研究基因bcl 2对神经元的生物活性作用。　方法　构建真核表达载体pcDNA3 bcl 2 ,采用脂质体介导将重组质粒导入PC12细胞 ,Westernblot和原位免疫组织化学检测外源基因表达 ;10 μmol L、5 0 μmol L和10 0 μmol L顺铂处理转染重组质粒的实验A组细胞 ,同样条件处理转染空质粒的对照B组细胞 ,72h后比较两者存活的细胞数 ;流式细胞仪检测分析两者的细胞周期指数。　结果　成功构建了真核表达载体pcDNA3 bcl 2 ,并用脂质体介导的方法获得了稳定表达Bcl 2的细胞克隆 ;10 μmol L、5 0 μmol L和 10 0 μmol L顺铂处理后 ,实验A组存活的细胞数分别为 2 76± 13、185± 11和 10 8± 10 ,而对照B组中存活的细胞数分别为 10 0± 9、12± 3和 2± 2 ,两者相比有显著性差异 ;流式细胞仪检测显示 ,实验A组S期细胞所占百分比为 8 81% ,比对照B组 2 5 79%明显减少。　结论　bcl 2能够拮抗顺铂对神经元的损害作用 ,促进神经细胞存活 ,其神经保护作用机制可能通过调控细胞周期来完成     

IL—2,IL—4和IL—7体外诱导人外周血淋巴因子激活的杀伤细胞效应…

比较了淋巴因子ＩＬ－２、ＩＬ－４和ＩＬ－７ 在体外诱导健康人外周血淋巴因子激活的杀伤（ＬＡＫ）细胞活性的效应。结果表明，ＩＬ－７可单独，亦可与ＩＬ－２、ＩＬ－４协同诱导ＬＡＫ细胞，而且ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞的效应不被抗ＩＬ－２、抗ＩＬ－４所抑制。ＩＬ－７单独诱导的ＬＡＫ细胞活性高峰迟于ＩＬ－２或ＩＬ－４所诱导的活性高峰，且与增殖反应曲线一致。抗ＣＤ８抗体明显抑制ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞的效应，而ＩＬ     

IL—2基因转染逆转绒癌耐药细胞系多药耐药性

用RT－PCR的方法克隆人的IL－2基因,将IL－2基因插入真核表达载体pcDNA3.1( )中,通过阳离子脂质体将IL－2基因转染用足叶乙甙（VP－16）诱导建立的绒癌耐药细胞系JEG－3／VP16,用G418筛选含IL－2 DNA片段的单个细胞克隆,检测转染前后细胞对5－氟尿嘧啶（5－Fu),氨甲喋呤（MTX）,VP－16,更生霉素（KSM）,紫杉醇（TAXOL）耐药指数的变化,用RT－PCR的方法测定转染前后细胞IL－2和多种耐药基因包括肺耐药蛋白（LRP）,多药耐药相关蛋白（MRP）,谷胱甘肽转移酶（GST－π）,二氢叶酸还原酶（DHFR）和多药耐药基因（MDR－1）的mRNA表达情况。结果表明 转染IL－2的细胞中用RT－PCR的方法检测到IL－2 mRNA表达,转染IL－2基因的细胞耐药指数降低,MDR－1 mRNA表达转阴,而其它耐药基因的表达无明显改变。     

创伤性休克大鼠外周血白细胞表面LFA—1、ICAM—1表达的研究

自 198 1年发现ＣＤ11ａ/ＣＤ18,1986年发现不同于ＬＦＡ 1的细胞间粘附分子 (ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ ,ＩＣＡＭ 1,亦名ＣＤ54,是ＬＦＡ 1的一种可诱导的细胞表面配基 )以来。人们对ＬＦＡ 1、ＩＣＡＭ 1的了解日益增多 ,并发现它们在细胞粘附中作用特别活跃。而有关创伤性休克时白细胞表面ＬＦＡ 1、Ｉ ＣＡＭ 1表达情况少见报道 ,故我们设计此实验以探讨创伤性休克时白细胞表面ＩＦＡ 1、ＩＣＡＭ 1的表达变化。1　材料与方法1 1　材料　取雄性ＳＤ大鼠 8只 ,体重 2 10～ 2 50ｇ ,随机分为 2组 :正…     

侧脑室注射IL—1对IL—1RAcP基因敲除小鼠免疫功能的影响

ＩＬ 1是介导机体免疫应答、免疫防御的重要细胞因子 ,在临床自身免疫病及慢性炎症的发生发展中亦具有重要作用 ,ＩＬ 1的合成和释放失控常引起慢性炎症而导致临床疾病 ,如类风湿性关节炎等。已知ＩＬ 1的生物学作用是由ＩＬ 1受体 (ＩＬ 1Ｒ)介导的 ,ＩＬ 1ＲＡｃＰ(Ａｃｃｅｓｓｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎ)是ＩＬ 1Ｒ重要组成部分。ＩＬ 1Ｒ需与ＩＬ 1ＲＡｃＰ结合后 ,方可成为一稳定的复合体 ,介导细胞信息传递 ,发挥ＩＬ 1的生物学作用[1] 。已有文献报道侧脑室注射ＩＬ 1对正常大鼠外周血淋巴细胞和脾细胞丝裂原反应、ＮＫ细胞活性及ＩＬ 2…     

乙型肝炎、肝硬化患者外周血中IL—1β和IL—4水平的变化

ＩＬ－１是一种单核因子,主要由活化的单核—巨噬细胞产生,ＩＬ－１可作用于机体的各个系统,如参与免疫调节,介导炎症反应和影响组织代谢。ＩＬ－４是一种由ＴＨ２细胞产生的具有多种生物学活性的细胞因子,ＩＬ－４可抑制单核—巨噬细胞分泌ＩＬ－１和ＴＮＦ－α,而且促进ＩＬ－１受体拮抗剂的表达。我们对慢性乙肝、肝硬化患者血清中ＩＬ－１β、ＩＬ－４水平进行了检测,旨在探讨ＩＬ－１β和ＩＬ－４在肝炎发病过程中的作用。１材料与方法１．１病例选择慢性乙型肝炎患者２５例（男２１例,女６例,年龄２２－６０岁）,肝硬化患者…     

联合应用IL-2及IL-4基因转染瘤苗对实验性肺转移肿瘤的治疗作用

将IL—2基因转染的高分泌IL—2的B16黑色素瘤细胞株(B2)及IL—4基因转染的高分泌IL—4的B16黑色素瘤细胞株(B4)制备成新型瘤苗,用以治疗实验性肺转移荷瘤小鼠,并辅以低剂量环磷酰胺,结果表明,荷瘤小鼠存活期明显延长;肺部转移结节数明显减少;两种瘤苗联合治疗后的疗效较单独使用明显,当辅以低剂量环磷酰胺时治疗效果更加明显。体内免疫功能检测表明,经两种瘤苗联合治疗的荷瘤小鼠脾细胞NK及CTL杀伤活性升高得更加明显,但对LAK活性及腹腔巨噬细胞杀伤活性无明显协同增强作用;脾细胞经诱导后产生的细胞因子中,IL—2含量有所升高。     

白细胞介素2基因转移的肿瘤细胞克隆的建立及其体内外生长特性的研究

为了开展ＩＬ－２基因转移后免疫原性增强的新型瘤苗抗肿瘤作用的研究，须首先获得ＩＬ－２基因转移后、能够高分泌ＩＬ－２的肿瘤细胞并确定其生长特性。本室构建了含５６３ｂｐ的小鼠ＩＬ－２全长ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２，采用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法将ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－２转移入Ｂ１６黑色素瘤细胞中，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及活性检测，获得一株高分泌ＩＬ－２（５０６Ｕ／ｍｌ）克隆，并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法证实ＩＬ－２基因已转入该克隆中。结果表明ＩＬ－２基因转移的肿瘤细胞体外生长能力没有明显变化，但体内致瘤原性显著下降，从而为制备新型瘤苗打下了基础。     

B7—1（CD80）基因的克隆及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人Ｂ淋巴瘤细胞系Ｒａｊｉ中克隆到Ｂ７－１（ＣＤ８０）ｃＤＮＡ，并经测序证实，将其插入至真核表达载体ｐＬＸＳＮ中，用脂质体转染小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，Ｇ４１８筛选，并经流式细胞仪检测，得到了细胞表面表达Ｂ７－１的重组克隆。ＰＣＲ从其基因组ＤＮＡ中扩增到Ｂ７－１基因，提示Ｂ７－１ ｃＤＮＡ已整合至宿主细胞的基因组ＤＮＡ中，本文为研究Ｂ７－１在肿瘤免疫中所起的作用奠定了基础。     

IL－3基因转染的肿瘤细胞增强机体免疫功能的实验研究

建立了ＩＬ－３基因转染的Ｂ１６小鼠黑素瘤细胞株（Ｂ１６－ＩＬ－３），发现其体内的致瘤性和肺转移能力明显下降。对其免疫机理作一探讨。结果发现接种Ｂ１６－ＩＬ－３细胞的小鼠脾细胞体外所诱生的ＬＡＫ活性和ＣＴＬ活性显著升高，外周血和脾细胞的ＣＤ４￣＋／ＣＤ８￣＋比值都有所升高；此外，在裸鼠体内，Ｂ１６－ＩＬ－３细胞的致瘤性也有一定程度的降低。结果表明ＩＬ－３基因转染的肿瘤细胞能诱导机体的特异性和非特异性免疫功能，参与机体的抗肿瘤作用。     

白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体外生物学特性及体内致瘤性的研究

观察了白细胞介素４（ＩＬ－４）基因转移的肿瘤细胞体内致瘤性的变化。构建了含５００ｂｐ的小鼠ＩＬ－４ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－４．用该表达载体将ＩＬ－４基因转移至小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及ＩＬ－４活性检测，获得了高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞克隆株并经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹鉴定，将其接种于小鼠皮下后观察到肿瘤生长缓慢、小鼠存活期延长，表明高分泌ＩＬ－４的细胞克隆株体内致瘤性显著下降。该结果为进一步研究肿瘤的ＩＬ－４基因治疗打下了基础。     

IL—6基因转染的瘤苗体内诱导的抗肿瘤免疫功能与效果

经丝裂霉素C体外处理后,将IL-6基因转染的、高分泌的IL-6的B16黑色素瘤细胞制成瘤苗。结果发现,体内注射IL-6基因转染的瘤苗后,小鼠脾脏CTL活性、NK活性及IL-2诱导的LAK活性显著升高。经IL-6基因转染瘤苗体内治疗后,荷瘤小鼠的皮下肿瘤生长显著减慢、肺转移结节数显著降低、存活期显著延长,若同时合用低剂量IL-2,则上述治疗效果更好。可见IL-6基因转染的瘤苗能有效地通过诱导机体抗肿瘤免疫功能而发挥抗肿瘤作用,与低剂量IL-2合用后,IL-6基因转染的瘤苗的抗肿瘤效果更佳。     

IL－2基因转移的瘤苗与IL－1、低剂量环磷酰胺合用后的肿瘤治疗作用及其免疫学机理

经ＩＬ－２基因转移瘤苗治疗后荷瘤小鼠肺转移结节明显减少、存活期明显延长，与ＩＬ－１或低剂量Ｃｙ合用后，可使荷瘤小鼠的肺转移结节更少，存活期更长，特别是当ＩＬ－２基因转移的瘤苗、ＩＬ－１、低剂量Ｃｙ三者合用时抗肿瘤转移效果最强。对瘤苗治疗后荷瘤小鼠体内免疫功能的研究表明，小鼠脾脏ＣＴＬ活性、ＮＫ活性、ＩＬ－２导的ＬＡＫ活性均显著增强，脾脏细胞分泌ＩＬ－２和ＴＮＦ水平也显著升高，当与ＩＬ－１、低剂量Ｃｙ合用时，上述抗肿瘤免疫功能升高得更加明显，可见ＩＬ－２基因转移的瘤苗能通过有效地激活体内抗肿瘤免疫功能而具有显著的抗肿瘤转移效果，将其与ＩＬ－１或低剂量Ｃｙ联合应用时抗肿瘤效果更佳，当三者同时合用时抗肿瘤效果最佳。     

A20基因在血管内皮细胞的表达研究

目的：探讨外源性A20基因在内皮细胞获得稳定表达的可行性。方法：将N－末端标记E－tag的HA20 cDNA重组于pCAGGS真核表达载体，构建了pCAGGSEHA20真核表达重组体，构建了pCAGGSEHA20真核表达重组体。DOTAP脂质体介导的pCAGGSEHA20和pMAMneo基因转染，经G418筛选阳性克隆，再用免疫荧光及分子原位杂交检测A20基因的表达。结果：成功构建了pCAGGSEHA20真核表达重组体，A20基因在经G418筛选后的内皮细胞中得到有效表达。结论：在DOTAP脂质体介导下，A20基因能够导入内皮细胞并在其内获得表达。     

瘤体内注射IL－2基因后肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞的功能分析

将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射至Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤瘤体内，研究肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）的功能变化。１０ｄ后，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定显示瘤体内注射ＩＬ－２基因后肿瘤细胞及ＴＩＬ中ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达阳性；经Ｇ４１８筛选后的肿瘤细胞培养上清中可检测出ＩＬ－２；肿瘤细胞表面表达了较高水平的ＭＨＣⅠ类抗原（Ｈ－２Ｋ￣ｂＤ￣ｂ）；ＴＩＬ表面粘附分子ＬＡＦ－１表达也明显高于对照组，其杀伤Ｂ１６细胞的活性明显增强。结果表明瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，可在肿瘤原位将基因转移至肿瘤细胞及ＴＩＬ中，提高肿瘤细胞的ＭＨＣⅠ类抗原的表达，增强肿瘤细胞的免疫原性，并通过提高ＴＩＬ粘附分子的表达，共同促进ＴＩＬ的肿瘤特异性杀伤功能。     

瘤体内注射脂质体包裹的IL－2基因的抗肿瘤作用及其局部免疫机理分析

脂质体可以介导体内的细胞因子基因治疗。将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射到小鼠黑色素瘤（Ｂ１６－Ｆ１０）瘤体内，结果发现，肿瘤的生长明显受到抑制，部分小鼠的瘤体完全消退，存活期明显延长；从瘤体中分离的肿瘤细胞经Ｇ４１８筛选后产生阳性克隆，其上清中分泌有ＩＬ－２；肿瘤局部浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）具有较高的杀伤活性，揭示瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，可增强肿瘤细胞的免疫原性，激活瘤体局部的抗肿瘤免疫功能。结果表明瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因具有良好的抗肿瘤效果。