急性白血病PTEN mRNA表达和Akt磷酸化水平的相关性研究

目的了解急性白血病（AL）PTENmRNA表达和Akt磷酸化（p-Akt）水平的关系，以期探讨急性白血病发生发展的机制。方法采用逆转录（1it）-PCR法检测白血病细胞系K562、Jurkat、HL-60及21名健康对照者和68例AL患者PTENmRNA表达情况。同时用流式细胞术检测K562、Jurkat、HL-60细胞和AL患者p-Akt水平。结果（1）21名健康对照者PTENmRNA阳性18名，占85．70％。K562细胞PTENmRNA阳性，Jurkat、HL-60细胞阴性。68例AL中PTENmRNA阳性18例，占26．47％，与健康对照者比较差异有统计学意义（Х^2=23．38，P〈0．01）；31例AL缓解患者PTENmRNA阳性21例，与AL初诊组比较差异有统计学意义（Х^2=15．19，P均〈0．01）。AL各亚型PTEN阳性率比较差异无统计学意义。（2）21名健康对照者p-Akt中位数1．57％。K562、Jurkat细胞p-Akt高表达，HL-60细胞低表达。68例AL患者p-Akt中位数25．47％，与健康对照者比较差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）AL患者FYENmRNA表达缺失率与p-Akt阳性率呈显著正相关（Х^2=0．73，P〈0．01）。结论AL患者PTENmRNA表达缺失是导致p-Akt高表达的关键因素之一，可能和急性白血病的发生发展有关。     

白血病干细胞相关抗原在急性白血病细胞中的表达

目的 探讨白血病干细胞(leukemia stem cell,LSC)相关抗原在不同亚型急性白血病细胞中的表达规律.方法 采用流式细胞术检测LSC相关抗原CD96,CD90,CD123,CD71等在50例不同亚型急性白血病细胞中的表达,包括急性粒细胞白血病未分化型(M1)、急性粒细胞白血病部分分化型(M2)、急性早幼粒细胞白血病(Ms)、急性粒-单核细胞白血病(M4)和急性B淋巴细胞白血病.结果 CD96在M.的表达率(90.00％)明显高于M2(18.18％)和急性B淋巴细胞白血病(20.00％)(P＜0.05);各亚型急性白血病均表达CD123,但差异无统计学意义(P＞0.05) ;CD71在急性髓细胞白血病各亚型中(M1、M2、M3和M4)阳性表达率分别为80.00％、72.73％、90.00％和100.00％,明显高于急性B淋巴细胞白血病(P＜0.05);CD90在急性B淋巴细胞白血病中阳性表达率为13.33％,高于急性髓细胞白血病(P＞0.05).结论 CD71与CD96的表达有亚型特异性,CD96可能具有指示系列分化和细胞分化程度的作用,CD71可用于区分急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞白血病.     

磷酸特异化流式细胞术检测骨髓白血病细胞磷酸化信号蛋白的实验研究

本研究通过建立磷酸特异化流式细胞术(phospho-specific flow cytometry,phospho-flow)检测白血病细胞信号通路磷酸化蛋白的实验方法,探讨Phospho-flow在白血病研究中的应用价值。取白血病患儿的骨髓,分别采用Phospho-flow单个核细胞法和Phospho-flow直接固定法进行处理。Phospho-flow单个核细胞法为:骨髓经提取单个核细胞并固定破膜处理后,加入磷酸化抗体(P-AKT,P-ERK1/2)孵育,然后用流式细胞仪分析;Phospho-flow骨髓直接固定法为:骨髓经固定/裂解液和90%甲醇破膜细胞处理,然后加入细胞表面CD抗体及P-AKT,P-ERK1/2孵育,然后上流式细胞仪分析处理。结果表明,26例白血病患儿骨髓经phospho-flow单个核细胞法处理,P-AKT和P-ERK1/2阳性率分别为46.2%和30.8%,经phospho-flow骨髓直接固定法处理,P-AKT和P-ERK1/2阳性率分别为50.0%和38.5%。经统计学分析,两种phospho-flow的骨髓处理方法在检测P-AKT和P-ERK1/2的阳性率方面无统计学差异(p>0.05)。结论:本实验室建立的phospho-flow骨髓直接固定法,能有效检测白血病患儿骨髓细胞的磷酸化蛋白,可用于白血病信号通路的实验研究。     

CD133-2在急性白血病病程中的表达及意义

目的 探讨CD133-2在急性白血病病程中的表达及其临床意义。方法 通过直接免疫荧光流式细胞术对67例不同病程急性白血病(AL)进行CD133-2的检测。结果 AL组CD133-2的阳性率(52.4%)及表达率(23.9%±21.5%)均明显高于对照组(0,2.2%±3.9%); 初治组、完全缓解期(CR)组及复发组CD133-2的阳性率分别为52.4%,0和40.0%,表达率分别为23.9%±21.5%,5.0%±6.0%和28.4%±25.6%,三组间的阳性率及表达率差异有统计学意义(χ2=12.777,F=5.906,P<0.05)。初治组及复发组的CD133-2阳性率及表达率均明显高于CR组。初治患者CD34+组的CD133-2阳性表达率明显高于CD34-组(40.5% vs 7.1%,χ2=8.636,P<0.05),并且CD133-2-/CD34-组的CR率则明显高于CD133-2+/CD34+组(83.3% vs 33.3%,χ2=6.078,P<0.05)。结论 初治AL患者CD133表达与CD34相关; CD133/CD34共同高表达可能是AL的一个不良预后因素; 检测AL患者骨髓中CD133-2的表达可以作为预测复发及监测MRD的指标之一。     

Pim-3蛋白在急性白血病中的表达及意义

目的：探讨pim-3蛋白在急性白血病（AL）中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测30例急性髓细胞白血病（AML）和20例急性淋巴白血病（ALL）患者中pim-3蛋白的表达情况,同时选取15例非恶性血液病的患者作为对照,统计学分析各组间Pim-3蛋白的表达差异。结果Pim-3蛋白在急性白血病患者中的表达阳性率显著低于非恶性血液病患者,但在急性髓细胞白血病患者中和急性淋巴白血病患者中无统计学差异。结论Pim-3蛋白在急性白血病中的异常表达可能与白血病的发生、发展有关。     

CD56在急性白血病细胞中的表达及临床意义

为了探讨CD56在急性白血病中的表达情况及意义。采用多色流式细胞术（FCM）对70例急性白血病患细胞表面CD56及其它白细胞分化抗原表达进行了分析，结果表明，70例中有16例（22．86％）表CD56，急性髓性白血病（AML）的CD56阳性表达率（15／31，48．39％）明显高于急性淋巴细胞白血病（ALL）（1／35，2．86％）（P＜0．01），CD56在AML各亚型中表达也有差异，AML－M0，－M1和－M2中阳性率（11／15）明显高于AML－M3，－M4和－M5（4／16）P＝0．013）。15例CD56^ 的AML病例中表达HLA－DR13例（41．94％），两呈明显正相关（r=0.439,n=31,P=0.014,结论：CD56主要在AML中表达，对AML的诊断，预后判断及微小残留病的检测具有重要意义。     

NGAL在急性白血病患者骨髓中的表达及意义

目的 探讨中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在不同类型急性白血病患者骨髓中的表达,这对深入研究NGAL在急性白血病发生发展过程中所发挥的功能具有重要的科研和实践意义.方法 运用免疫组化技术对132例急性白血病患者骨髓及健康对照组骨髓中的NGAL表达情况进行检测.结果 NGAL在急性白血病患者骨髓中仅有极少数细胞可见阳性表达,健康对照组骨髓在中幼粒细胞及以下各阶段细胞均可见阳性表达,在18例急性粒细胞性白血病细胞(AML-M1)中未见阳性表达;在26例急性粒细胞性白血病(AML-M2)中仅有2%粒细胞可见阳性表达;在17例急性粒细胞性白血病(AML-M3)中仅有4%粒细胞可见阳性表达;在23例急性粒-单细胞性白血病(AML-M4)中仅有2%粒-单细胞可见阳性表达;在19例急性单核细胞性白血病细胞(AML-M5)中来见阳性表达,在25例急性淋巴细胞性白血病细胞(ALL)中来见阳性表达.绪论急性白血病组NGAL表达量明显低于健康对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).NGAL在急性白血病的发生发展过程中起到重要的作用.     

CYP3A5基因多态性及其在急性白血病患者化疗与预后中的意义

为了探讨急性白血病（AL）患者细胞色素P-4503A5（CYP3A5）基因多态性和蛋白表达对患者发病、治疗疗效和预后的影响,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）的方法检测患者骨髓原代细胞的CYP3A5＊3基因型,采用免疫组织化学方法检测CYP3A5在骨髓组织中的表达水平。结果表明：88例样本中野生型纯合子（CYP3A5＊1/＊1）23例（26%）,杂合子（CYP3A5＊1/＊3）44例（50%）,突变型纯合子（CYP3A5＊3/＊3）21例（24%）。CYP3A5＊3基因型频率为74%,符合中国健康人群分布;CYP3A5＊1基因型与耐药显著相关。按基因型分组后,3组的临床资料差异无统计学意义;CYP3A5蛋白表达检测结果分别为：（36.6±19.2）%、（7.8±9.2）%、（0.5±0.9）%;总生存率分别为（11.6±2.1）月、（30.5±12.2）月、（52.3±8.5）月;无病生存期分别为（7.5±1.8）月、（27±15.8）月、（52.3±8.1）月,差异均有统计学意义。结论：CYP3A5基因多态性与急性白血病患者发病无关,与CYP3A5蛋白的表达水平密切相关,而CYP3A5的表达高低与白血病患者的化疗疗效、预后密切相关。对初治AL患者的CYP3A5基因分型检测可以作为预测AL患者疗效和预后的指标。     

CD4在急性髓系白血病细胞上的表达及意义

目的:探讨细胞表面分化抗原CD4在急性髓系白血病细胞(AML)上的表达及意义。方法:收集325例AML患者的骨髓或外周血标本,采用CD45/SSC双参数散点图方法进行三色流式细胞术细胞表面分化抗原分析。结果:CD4在AML-M5患者中表达率为100%(31/31),在AML-M4患者中表达率为65.62%(21/32);明显高于AML-M1(5.88%,1/17)、AML-M2(11.67%,23/197)、AML-M3(2.08%,1/48)(P<0.05)。结论:CD4是诊断AML-M5最敏感而非特异的指标,有助于急性髓细胞白血病各亚型的区分。     

急性淋巴细胞白血病流式细胞术免疫分型中抗原异常表达的意义

目的研究急性淋巴细胞白血病免疫分型中抗原的异常表达。方法用多参数流式细胞仪对76例初诊的急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者进行免疫分型。结果76例ALL中B系ALL70例占92.1%,T-ALL占6例。70例B系ALL中CD45-或CD45±表达占75.5%,显示该白血病细胞具有异质性;CD38弱表达占60%,CD10强表达占40%;B系ALL表达髓系抗原以CD33最高达25.7%,CD13次之达24.2%,CD15和CD11b较少见,分别占5.7%和1.4%。结论急性淋巴细胞白血病流式细胞术免疫分型中抗原异常表达,不但在初诊时有助于白血病克隆的识别、门的设定、白血病细胞数的定量,而且能在形态学缓解后作MRD检测,为白血病复发监测提供重要手段。     

201例成人急性白血病免疫分型特点

目的探讨成人急性白血病(AL)三色流式细胞术免疫分型的特点。方法采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术免疫表型分析。结果156例急性髓细胞系白血病(AML)主要表达CD117(90.38%)、CD13(87.18%)、CD33(71.79%)、CD34(67.74%)、HLA DR(60.90%)。33.98%的AML患者伴有淋系抗原表达,最常见为CD7(24.36%)。B细胞系急性淋巴细胞白血病(ALL)35例(17.4%),主要表达CD19(100.00%)、HLA DR(100.00%)、CD10(74.29%)、CD34(60.00%)、CD20(31.40%)。T细胞系ALL10例(4.98%),主要表达CD7(80.00%)、CD2(60.00%)。24.5%的ALL表达髓系相关抗原,主要是CD13(17.80%)及CD33(11.10%)。结论流式细胞仪三色荧光标记法进行AL免疫分型,对白血病的准确诊断和分型有重要的指导意义。     

急性早幼粒细胞白血病免疫表型分析及临床意义

目的 分析急性早幼粒细胞白血病（APE）免疫表型特点及其临床意义。方法 采用流式细胞术检测31例APL患者的免疫表型。结果 31例患者中，CD33^＋30例（96.8％），CD13^＋27例（87．1％），CD33及CD13阳性共26例（83．9％）。CD34、CD2阳性分别为4例（12．9％）、5（16.1％）例。缓解组与未缓解组之间CD34、CD2表达差异有显著性意义（P〈0．01）。结论 APL免疫表型检测结合FAB分型可以提高诊断准确率，CD34、CD2是判断APL预后的重要免疫指标。     

成人急性白血病患者骨髓中血管生成的病理观察

目的:探讨成人急性白血病(AL)患者骨髓中的血管生成情况与疾病发展的关系。方法:应用EnVision免疫组织化学二步法,检测122例次成人AL患者骨髓中的微血管数,分析治疗前、后骨髓微血管数的差异性及其与患者部分实验室检查指标、临床疗效的相关性。结果:抗CD34和抗血管性血友病因子(vWF)抗体分别标记所得骨髓微血管数差异无显著性(P=0.402)。骨髓微血管数在化疗后获得完全缓解(CR)的患者中为(48.4±18.6)个/mm2,显著低于初发患者(103.1±38.6)个/mm2(P<0.01);化疗后未获CR的患者中为95.0(41.0～159.0),无显著下降(P=0.35);而在缓解后复发的患者中升高至(92.9±32.9)个/mm2,与初发时相比差异无显著性(P=0.44)。化疗后CR患者的骨髓微血管数仍高于对照组(35.7±5.3)个/mm2(P=0.02)。急性髓细胞性白血病(AML)和急性淋巴细胞性白血病(ALL)患者初发时骨髓微血管数与初发时的骨髓原始细胞百分数呈正相关(r=0.399,0.525;P=0.009,0.030)。结论:不同类型成人AL患者骨髓中均存在血管新生现象。血管新生可能参与AL的病理发展过程。     

急性淋巴细胞性白血病DNA含量与细胞增殖活性的临床意义

目的　探讨DNA检测对急性淋巴细胞性白血病 (ALL)诊断和治疗的临床意义。方法　应用流式细胞术检测了 35例急性淋巴细胞性白血病患者骨髓细胞DNA含量 (DI)、倍体和细胞增殖活性 (PI)。结果　ALL异倍体检出率为 5 1 4 % ( 18 35 ) ,其中亚二倍体 8例 ,超二倍体 10例 ;ALL组骨髓细胞G0 G1%高于对照组 (P <0 0 5 ) ,而S %、PI值明显低于对照组 (P <0 0 5 )。结论　DNA含量检测和倍体分析对急性淋巴细胞性白血病的诊断、治疗是很有价值的临床生物学指标 ,有助于白血病的准确、客观诊断和判断预后     

急性白血病免疫表型及阳性细胞比例分析

目的探讨急性白血病(AL)免疫表型特征。方法以CD45/侧向角散射(SSC)设门,对89例AL患者进行多参数流式细胞术免疫分型。结果急性髓细胞白血病(AML)中系列分化抗原总表达率及阳性表达患者的阳性细胞比例为CD13(96.7%,68.6%±22.7%)、CD33(95.0%,72.6%±23.5%)、髓过氧化物酶(cMPO)(90.0%,57.5%±26.9%)、CD117(73.3%,33.7%±14.4%);急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中系列分化抗原总表达率及阳性表达患者的阳性细胞比例为cCD79a(96.2%,69.8%±22.1%)、CD19(96.2%,67.4%±23.2%)、CD10(53.8%,66.7%±15.4%);急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中系列分化抗原总表达率及阳性表达患者的阳性细胞比例为cCD3(100.0%,53.6%±18.9%)、CD7(66.7%,92.0%±0.5%)。结论 AL各亚型间系列分化抗原总表达率及阳性表达患者的阳性细胞比例存在差异,可作为流式细胞术免疫分型诊断的依据。     

91例急性白血病患者骨髓单个核细胞CD96分子的表达研究

本研究旨在检测91例急性白血病患者骨髓单个核细胞(BMMNC)表面分子CD96的表达情况,并结合临床资料进行分析。采用流式细胞术检测91例初治急性白血病患者骨髓单个核细胞表面分子CD96,以15例健康成人作为对照组。结果表明:21例B-ALL患者BMMNC(CD45+CD34+CD19+)中CD96平均表达水平为(17.41±27.97)%,11例T-ALL患者BMMNC(CD45+CD34+CD7+)中CD96平均表达水平为(46.98±45.55)%,59例AML患者BMMNC(CD45+CD34+CD38-)中CD96平均表达水平为(16.69±25.08)%,与健康对照组BMMNC的CD96平均表达水平(0.52±1.84)%相比,差异有统计学意义(p<0.05);正规治疗后,CD96+及CD96-组的未缓解率(分别为52%,10.6%)差异有统计学意义(p<0.05);另外,复查治疗后CD96在BMMNC的平均表达水平显示,达到完全缓解的CD96+组为(1.68±2.31)%,与对照组比较,差异无统计学意义(p>0.05);而未达到完全缓解的CD96+组为(62.39±26.29)%,与对照组比较,...     

CD56在急性髓系白血病细胞上的表达及微小残留病分析

目的探讨CD56在非M3急性髓系白血病(AML)中的表达及在微小残留病(MRD)检测的意义。方法应用流式细胞术分析145例非AML-M3 AML患者免疫表型,以CD56、CD19、CD117、CD34、CD33为标志,CD45设门MRD分析。结果 145例AML患者中CD56阳性37例,占25.52%,CD19阳性17例,占11.72%,分布在M1、M2、M4、M5。CD56或/和CD19阳性的AML患者共49例,其中CD56和CD19同时阳性5例,均为M2亚型。P170蛋白阳性36例,占24.83%,其表达率与CD56呈显著正相关(P<0.01)。48例AML患者在诱导治疗结束和维持治疗第14、32、56周作MRD检测。单纯CD56+组MRD阳性率93.55%,复发率77.41%,与单纯CD19+组(MRD阳性率25.00%,复发率0)比较,差异有统计学意义(P均<0.01)。CD56+CD19+组MRD阳性率100.00%,复发率80.00%,与单纯CD56+组比较,差异无统计学意义(P>0.05),与单纯CD19+组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CD56、CD19在非M3 AML有较高的...     

Monitoring minimal residual disease in acute leukemia: expectations,possibilities and initial clinical results

Summary Therapy of acute leukemia may be improved by a more accurate assessment of the effects of treatment on tumor burden and by anticipating relapse with greater precision. The sensitivity limit of assessing residual disease by morphology is usually 5%. Several alternative approaches are available to study minimal residual disease, defined as the presence of leukemic cells not detectable by morphology. These include studies of chromosomal abnormalities by conventional karyotyping, flow cytometry, in situ hybridization and polymerase chain reaction (PCR), investigation of gene rearrangements by Southern blotting and PCR, and immunological methods. Some of these techniques enable the detection of 1 leukemic cells among 10 000 or more normal cells. In the following, the advantages and limitations of sensitive methods for detecting small numbers of leukemic cells are reviewed. The rationale for monitoring residual disease in acute leukemia and the initial results of studies correlating minimal residual disease and clinical outcome are discussed.