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1.
目的探索用免疫磁珠分选高纯度CD3-CD56+CD16+CD19-CD45+NK细胞并研究体外保持NK细胞活性及体外扩增技术。方法应用免疫磁珠阴性分选法(MACS)分离出高纯度的CD3-CD56+CD16+CD19-CD45+NK细胞,置于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中,分别加入500、1 000、6 000U/mL 3种不同浓度的细胞因子IL-2,组成不同培养体系进行体外扩增。采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析方法,比较3种细胞因子刺激组及对照组培养的NK细胞数量及纯度的变化。结果免疫磁珠阴性分选后所得的高纯度CD3-CD56+CD16+CD19-CD45+NK细胞纯度由分选前的(29.66±2.31)%提高到(95.37±1.93)%,培养7d后,空白对照组NK细胞纯度降低为(61.82±2.58)%,而加入细胞因子IL-2的3组NK细胞纯度均无明显差异(P>0.05)。18d后,空白对照组的NK细胞纯度降低至(4.28±1.56)%,而浓度为6 000U/mL的实验组纯度为(93.72±2.29)%,与加入细胞因子IL-2前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。NK细胞中加入3种不同浓度细胞因子IL-2组500、1 000、6 000U/mL未见明显扩增,差异无统计学意义(P>0.05)。结论经免疫磁珠分选法分选获得的NK细胞,在体外使用10%胎牛血清的RPMI1640培养基培养,添加刺激因子IL-2后,可有效提高NK细胞的存活率,为今后NK细胞的研究与免疫治疗提供了一种简单、有效保持NK细胞纯度的方法。  相似文献   

2.
目的建立人外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)的免疫磁珠分选法(MACS)及体外扩增方法 ,并对扩增前后Treg细胞纯度及表型进行鉴定。方法流式细胞术检测人外周血Treg细胞占CD4~+T细胞的比例;免疫磁珠法分选CD4~+CD25~+Treg细胞,用CD3/CD28单抗包被的Dynalbeads联合IL2共同刺激CD4~+CD25~+Treg细胞进行体外扩增培养,在扩增培养的第0、7、14、21天分别进行细胞计数及检测细胞的活性,取扩增培养第0天及第14天细胞行流式细胞术检测扩增前后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3的表达情况。结果正常人外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg水平占CD4~+T细胞(7.94±1.86)%,MACS能够成功分选出CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞,分选平均纯度达(95.86±0.65)%,细胞活性95%;以CD3/CD28单抗包被的Dynalbeads联合IL2共同刺激CD4~+CD25~+Treg细胞进行外扩增培养后,细胞有明显扩增。经2周扩增后,细胞扩增倍数达到原细胞数量的(21.33±1.53)倍,扩增后细胞Foxp3的表达由(95.86±0.65)%下降至(93.71±1.30)%,但差异无统计学意义(P0.05)。结论免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞,体外成功扩增CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞,扩增前后Treg细胞的纯度及表型无明显变化。  相似文献   

3.
目的:探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞及其相关因子在恶性肿瘤患者胸腔积液及外周血中的表达。方法:选取42例恶性肿瘤胸腔积液患者为研究组,38例健康体检者为对照组,采用流式细胞仪(FCM)和酶联免疫法(ELISA)检测研究组胸腔积液和外周血、对照组外周血中CD4~+CD25~+/CD4~+比例、淋巴细胞亚群以及转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)和干扰素-γ(IFN-γ)水平。结果:研究组胸腔积液及外周血中CD4~+CD25~+/CD4~+比例及TGF-β1、IL-10水平均显著高于对照组(P<0.01),且胸腔积液高于外周血(P<0.01),而IFN-γ水平显著低于对照组,且胸腔积液低于外周血(P<0.01)。结论:对恶性肿瘤患者外周血和胸腔积液中CD4~+ CD25~+调节性T细胞及TGF-β1、IL-10和IFN-γ水平进行检测有利于判断病情预后和转归。  相似文献   

4.
目的 建立免疫磁珠技术高效分选人关节软骨CD166~+/CD105~+间充质干细胞(MSCs)的方法,并鉴定其多向分化特性.方法 酶消化法获取5例手术切除的膝关节软骨组织细胞,并行原代(P~0代)和传代(P~2、P~4、P~6代)培养;流式细胞仪检测其中CD166~+/CD105~+细胞百分比.比较免疫磁珠连续法与间断法分选P~4代培养细胞中CD166~+/CD105~+细胞的所需时间、分选细胞活度及其百分比和收获率.对连续法分选CD166~+/CD105~+细胞进行成骨、成软骨、成脂肪诱导,Gomori钙钴法碱性磷酸酶(Ale)、Ⅱ型胶原免疫组化、油红O染色检测其分化特性.结果 人关节软骨组织分离细胞和原代培养细胞中的CD105~+/CD166~+细胞百分比较低[(1.13±0.68)%、(5.16±3.59)%],传代培养细胞中的CD105~+/CD166~+细胞百分比随传代次数增加而明显增高[P~2、P~4、P~6代培养细胞中CD166~+/CD105~+细胞百分比分别为(12.68±2.59)%、(17.81±3.80)%、(19.36±3.93)%](P<0.05),传代培养至P~4代,其CD105~+/CD166~+细胞百分比与P~6代[(19.36±3.937)%]比较差异不显著(P>0.05).免疫磁珠连续法分选P4代培养细胞中CD105~+/CD166~+细胞的百分比高于间断分选法[(93.8±3.95)%vs(90.1±2.43)%,P<0.05],且分选时间显著缩短[(6.8 ±0.40)h vs (120.0±10.21)h,P<0.01),而细胞收获率[(62.0±7.5)% vs (68.5±7.0)%]和细胞活度[(93.8±1.48)% vs (94.6±1.14)%1差异不显著(P>0.05).连续法分选CD166~+/CD105~+细胞成骨诱导后ALP染色阳性;成软骨诱导前Ⅱ型胶原弱阳性,诱导后Ⅱ型胶原附性;成脂肪诱导后,细胞内可见脂肪滴,油红O染色阳性.结论 人关节软骨P~4、P~6代培养细胞中的MSCs比例较高.免疫磁珠连续法能够高效了分选人关节软骨MSCs,所分选的MSCs具有成骨、成软骨及成脂肪分化功能.  相似文献   

5.
目的 探讨CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg细胞)在结核性及恶性胸腔积液患者外周血及胸腔积液中的表达及其临床意义.方法 收集初诊结核性及恶性胸腔积液患者各20例,采用流式细胞仪检测两组患者外周血及胸腔积液中CD4+CD25+CD127lowTreg细胞的表达;另外选择正常健康体检人员20例记为对照组,测定其外周血CD4+CD25+CD127lowTreg细胞的表达.结果 结核性及恶性胸腔积液患者外周血CD4+CD25+CD127low占CD4+细胞比例分别为:(7.88±2.16)%、(10.46±1.37)%,较对照组(4.74±0.74)%明显升高(P<0.05);结核性和恶性胸腔积液中CD4+CD25+CD127low占CD4+细胞比例分别为:(8.45±1.39)%、(18.98±5.24)%,均高于同组别及对照组外周血水平(P<0.05),并且恶性胸腔积液中CD4+CD25+CD127low占CD4+细胞比例明显高于结核性胸腔积液(P<0.05).结论 CD4+CD25+CD127lowTreg细胞在结核性及恶性胸腔积液患者的外周血及胸腔积液中表达比例的升高,表明其可能通过对机体免疫力的调节而参与疾病的发生发展,且其在胸腔积液中表达的高低变化可能作为结核性及恶性胸腔积液诊断的一项辅助性指标.  相似文献   

6.
目的研究不同刺激物干预对过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞分泌白介素4(IL-4)的影响。方法将源自过敏性哮喘产妇和健康产妇的新生儿脐血分为哮喘组(n=12)和正常对照组(n=16),采用流式细胞术分选提纯嗜碱性粒细胞,锥虫蓝染色鉴定细胞活性。在两组提纯后的嗜碱性粒细胞中分别加入ACM缓冲液(阴性对照)、肽聚糖(PGN)、粉尘螨浸液及甘露醇,采用ELISA法测定细胞培养上清液中IL-4的质量浓度。结果细胞分选结果显示:嗜碱性粒细胞纯度为(95.64±3.15)%,回收率为(60.22±7.18)%;锥虫蓝染色显示细胞活性为(99.4±0.89)%。与阴性对照比较,经PGN、粉尘螨浸液和甘露醇刺激后的哮喘组细胞培养上清液中IL-4质量浓度显著升高(P<0.05或P<0.01);经PGN和甘露醇刺激后,哮喘组细胞培养上清液中IL-4质量浓度显著高于正常对照组(P<0.05和P<0.01)。结论 PGN、粉尘螨及甘露醇可刺激过敏性哮喘产妇新生儿脐血中嗜碱性粒细胞IL-4的分泌增加,通过诱导辅助性T淋巴细胞亚群Th2细胞的分化,参与哮喘的发生和发展。  相似文献   

7.
目的:在体外探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中的作用。方法:首先取C57BL/6小鼠股骨、胫骨骨髓细胞,按培养过程中干预因素不同分为 磷酸盐缓冲液(phosphate buff ered saline,PBS)刺激组(PBS组,n=6)、NGF刺激组(NGF组,n=6)、粒巨噬细胞集落刺激 因子(granulocyte monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)和IL-4共刺激组(GM-CSF+IL-4组,n=6)、NGF加GM-CSF和 IL-4共刺激组(NGF+GM-CSF+IL-4组,n=6),培养第7天采用流式细胞仪比较各组间CD11c+细胞阳性率和CD8a−亚型比 例;然后用GM-CSF+IL-4刺激培养未成熟的DCs,经CD11c免疫磁珠阳性分选得到纯化的未成熟DCs,将其分为PBS组 (n=6)、NGF组(n=6)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(LPS组,n=6)、NGF+LPS组(n=6),分别用PBS,NGF,LPS, NGF+LPS诱导细胞成熟,24 h后酶联免疫吸附分析法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清液中IL-6, IL-10和IL-12的水平。结果:1) NGF组CD11c+DCs百分比高于PBS组,低于GM-CSF+IL-4组(均P<0.05);GM-CSF+IL-4 组与NGF+GM-CS F+IL-4组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),且在4组中均以CD8a−DCs为主;2)NGF可以增强 LPS诱导的DCs分泌IL-6,IL-10和IL-12(均P<0.05),而单独NGF刺激对DCs分泌IL-6,IL-10和IL-12无影响(均P>0.05)。 结论:NGF可以诱导小鼠骨髓细胞向CD11c+DCs的定向分化,并且以CD8a−亚型为主;NGF能增强LPS诱导的DC分泌 IL-6,IL-10和IL-12。  相似文献   

8.
目的 研究白细胞介素21(interleukin 21,IL-21)对SHIV感染CD8+T细胞分泌干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的影响.方法 从SHIV/恒河猴模型外周血中分选出CD8+T细胞,加入IL-21诱导培养,应用ELISA方法检测细胞培养上清液中IFN-γ浓度,RT-PCR方法检测细胞中IFN-γ mRNA的表达水平,流式细胞术检测分泌IFN-γ的CD8+T细胞所占的百分比.结果 10 ng/mL,IL-21明显促进CD8+T细胞分泌IFN-γ(P<0.05),IFN-γ mRNA的表达明显升高,4h为刺激CD8+T细胞胞内IFN-γ合成的最佳时间.结论IL-21对CD8+T细胞分泌IFN-γ有促进作用.  相似文献   

9.
目的研究CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在胃癌组织中的分布数量及意义。方法采用流式细胞术检测胃癌组织及正常组织中Treg数量变化;同时用免疫磁珠细胞分选技术分选出高纯度的CD4+CD25+T细胞,经体外刺激后检测胞内白介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)分泌水平。结果正常组织中Treg数量为(8.40±0.52)%,胃癌组织中Treg数量明显增高〔(11.51±0.64)%〕。经体外刺激后,胃癌组织中Treg分泌的抑制性细胞因子(IL-10、TGF-β)较正常组织明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Treg可能通过分泌IL-10和TGF-β等抑制性细胞因子干扰抗体抗胃癌的免疫反应。  相似文献   

10.
目的探讨CD4~+T细胞是否具有分泌外泌体的能力,以及CD4~+T细胞外泌体参与炎症及肿瘤免疫过程的可能。方法应用断颈处死的方法取出小鼠的脾脏,用磁珠分选的方法从小鼠脾脏细胞中分选出CD4~+T细胞,并尝试从培养基上清液中提取CD4~+T细胞的外泌体,在透射电镜下观察,后用PCR技术分析miR-23a、miR-214的表达情况。结果在透射电镜下能够观察到提取出的CD4~+T细胞外泌体,且用PCR技术能检测到小鼠CD4~+T细胞外泌体中miR-23a、miR-214这两个炎症及肿瘤相关的miRNA的表达。结论小鼠CD4~+T细胞有分泌外泌体的能力,且为CD4~+T细胞外泌体参与炎症及肿瘤相关过程提供了可能。  相似文献   

11.
Li JJ  Wei W  Shi HZ  Li YX  Mo WN 《中华医学杂志(英文版)》2011,124(24):4160-4165
Background  Interleukin 16 (IL-16) can be detected by ELISA in pleural effusion (PE) and its concentration is higher than in serum. This study investigated the cellular sources of IL-16 in PE.
Methods  The samples of PE were collected from 34 patients who were newly diagnosed having PE in the pleural cavity. We performed cell culture to purify the pleural mesothelial cells (PMC), Wright staining to count the purity and immunocytochemical stain to identify the cultured cells. The intracellular IL-16 expression was detected by flow cytometry (FCM). The different cells in PE were first separated by magnetic cell sorting (MCAS) then the separated cells were cultured in RPMI1640 with 10% fetal calf serum (FCS). We extracted the supernatant and detected IL-16 concentration by ELISA. The IL-16 protein was detected by immunohistochemistry and double immunofluorescence staining.
Results  The percentages of cells which secreted IL-16 were: CD3+CD8 cells ((74.27±15.56)%, n=34); CD3+CD8+ cells ((69.86±18.55)%, n=34); CD19+ cells ((45.30±18.77)%, n=15); CD14+ cells ((16.91±16.69)%, n=15); and PMC ((2.05±1.85)%, n=7). The concentrations of IL-16 in the supernatant from cultured cells were: CD4+ cells ((102.50±42.51) ng/L, n=5); CD8+ cells ((92.58±18.34) ng/L, n=5); CD19+ cells ((79.85±5.62) ng/L, n=5); CD14+ cells ((58.51±25.38) ng/L, n=5); and PMC ((18.14±8.37) ng/L, n=5). In lymphocytes, monocytes/macrophages and PMC, we could observe the cells that expressed IL-16 protein. In paraffin-embedded sections, we also could observe by immunohistochemistry the CD4+IL-16+ cells, CD8+IL-16+ cells, CD19+IL-16+ cells, and CD14+IL-16+ cells.
Conclusions  IL-16 in PE is mainly secreted by T lymphocytes, including CD3+CD8 cells and CD3+CD8+ cells. CD19+ cells and CD14+ cells can also secrete IL-16, but the percentage of PMC that can secrete IL-16 is very low.
  相似文献   

12.
目的 了解各类胸腹水中淋巴细胞分布水平及其对胸腹水性质鉴别诊断的意义.方法 采用流式细胞术测定结核性(30例)和癌性患者(31例)外周血及胸腹水中T淋巴细胞亚群分布,ELISA法检测辅助T淋巴细胞(Th)1和Th2类细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、IL-12和IL-4的含量.结果 结核性和癌性胸腹水中CD3+CD4+T淋巴细胞含量[(73±6)%与(67±20)%]均高于外周血[(51±19)%与(48±14)%](均P<0.05).尽管结核性胸腹水中CD3+T淋巴细胞数量高于癌性胸腹水(P<0.05),但两者CD3+CD4^+和CD3+CD8^+T淋巴细胞亚群分布差异无统计学意义(P>0.05).结核性胸腹水中Th1与Th2类细胞因子比值(IFN-γ/IL-4与IL-12/IL-4)为54±24与82±19,明显高于癌性胸腹水的8±6与19±10(t值分别为10.34和16.28,均P<0.01).结论 结核性和癌性胸腹水中均存在CD3^+CD+T淋巴细胞聚集,仅靠CD3^+CD4^+和(或)CD3^+CD8^+淋巴细胞亚群分析不足以鉴别炎性与恶性胸腹水,而Th1、Th2类细胞因子的测定有助于两者的鉴别诊断.  相似文献   

13.
目的:探讨流式细胞技术检测恶性、结核性胸腔积液(PE)和外周血中T淋巴细胞亚型及比例的临床意义.方法:用流式细胞技术检测53例为结核性胸腔积液(PE)、62例为恶性积液患者和17例单纯性漏出液的胸水中的T淋巴细胞亚型及比例.结果:结核性胸腔积液患者胸水中淋巴细胞总数高于恶性胸腔积液或单纯漏出性胸腔积液患者(P=0.032),差异有统计学意义.亚型分析表明主要为T淋巴细胞,其中结核性和单纯漏出性胸腔积液的CD4+T细胞和CD4+/CD8+比值明显高于恶性胸腔积液(均为P<0.05),而恶性胸腔积液患者的CD8+T细胞则明显高于结核性和单纯漏出性胸腔积液的患者(P=0.006).不同细胞亚型在结核性、恶性和单纯漏出性胸腔积液中无明显差别(P>0.05).结论:结核性和单纯漏出性PE中CD4+T细胞和D4+/CD8+比值高于恶性肿瘤的患者,可作为鉴别诊断的参考.  相似文献   

14.
艾迪注射液配合胸腔灌注化疗治疗肺癌胸水的临床研究   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的研究艾迪注射液静脉滴注配合卡铂胸腔灌注化疗治疗肺癌胸水的疗效。方法选取44例恶性胸腔积液住院患者,随机分为艾迪注射液静脉滴注配合卡铂胸腔灌注化疗组(观察组)和单纯卡铂胸腔灌注化疗组(对照组),从胸水缓解情况、生活质量变化、T细胞亚群变化、毒副反应等方面进行临床疗效观察和评价。结果观察组疗效优于对照组(P<0.05);在改善肺癌胸水患者生活质量(卡氏评分)方面,前者优于后者;对照组治疗后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+明显低于观察组(P<0.05);观察组较对照组消化道反应轻、骨髓抑制轻,两组比较有显著性差异(P<0.05)。结论艾迪注射液静脉滴注配合卡铂胸腔灌注治疗肺癌胸水疗效明显,毒副反应轻。  相似文献   

15.
目的:通过体外分离培养人新鲜脐带血(Umbilical cord blood,UCB)造血干细胞(Hematopoietic stem cell,HSC),探讨不同细胞因子组合对HSC的扩增作用.方法:采用Ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离UCBHSC,加入不同组合的细胞因子,检测有核细胞(Nuclear cell,NC)总数和CD34 细胞数.结果:未加细胞因子的对照组培养初期细胞即已破裂溶解,加入不同细胞因子组合的实验组的NC细胞总数和CD34 细胞数随着培养时间的延长均呈现不同程度的增加,于第14天达到高峰,而含有细胞因子FL、TPO的组合,NC细胞数和CD34 细胞数均比较高.结论:体外HSC培养,加入细胞因子对细胞增殖有明显的作用,而细胞因子FL、TPO协同作用能比较好的扩增早期造血干细胞.  相似文献   

16.
17.
目的:通过检测结核性和恶性胸腔积液患者血清和胸腔积液中白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素12(IL-12)的水平,探讨二者对于鉴别结核性和恶性胸腔积液的价值。方法:选取住院未经治疗的渗出性胸腔积液患者48例,根据病因分为结核性胸腔积液组25例和恶性胸腔积液组23例。采用流式微球阵列法(CBA)检测2组患者血清和胸腔积液中IL-10和IL-12的水平,比较2组患者IL-10、IL-12水平和IL-12/IL-10比值的差异;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析上述指标与胸水脱落细胞和腺苷脱氢酶(ADA)在鉴别结核性和恶性胸腔积液中的作用。结果:结核性胸腔积液组和恶性胸腔积液组患者血清中IL-10、IL-12水平和IL-12/IL-10比值比较差异无统计学意义(P> 0.05),恶性胸腔积液组患者胸腔积液中IL-12水平和IL-12/IL-10比值明显低于结核性胸腔积液组(P< 0.01)。利用胸腔积液IL-12水平鉴别结核性和恶性胸腔积液的ROC曲线下面积为0.984,明显高于IL-12/IL-10比值(0.744)、脱落细胞(0.804)和ADA(0.911)。结论:胸腔积液中IL-12水平检测有助于结核性和恶性胸腔积液的鉴别诊断,且标本容易获取,值得临床上推广应用。  相似文献   

18.
目的:探讨恶性胸、腹水中T细胞类别的形态学特征及其对于肿瘤治疗的指导意义.方法:恶性胸、腹水标本60例,其中免疫治疗组25例,化疗组18例,未治疗组17例.另取10例良性胸腹水作为对照.应用免疫酶标EnVisonTM 二步法,对胸腹水中的T细胞进行亚群表达分类,并进行相关形态观察和半定量分析.结果:胸腹水中淋巴细胞分布不均,以几个或数个分布,一般以肿瘤细胞为中心,形成花瓣状,淋巴细胞围绕的肿瘤细胞多数可发生形态改变.恶性胸、腹水组的T细胞亚型CD4、CD8 、CD25、CD3、CD45RO、S-100、CD34表达的阳性相对值免疫治疗组显著高于化疗组和对照组(P<0.05).结论:刺激或诱导T细胞产生,从而调控T细胞亚群,能够有效地诱导肿瘤免疫,为肿瘤的临床治疗提供一种新思路.  相似文献   

19.
目的评价香菇多糖联合顺铂胸腔灌注治疗肺癌胸水的疗效。方法将60例肺癌合并胸水患者随机分为观察组和对照组,每组30例。对照组患者先放尽胸水,再胸腔灌注顺铂;观察组胸腔内联合注入香菇多糖和顺铂。观察两组临床疗效、中医证候疗效、卡氏评分(Karnofsky performance scale,KPS)疗效以及免疫功能变化。结果观察组的临床疗效、中医证候疗效和KPS疗效均优于对照组,差异有统计学意义(P0.05);观察组治疗后CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+比值均较治疗前明显上升(P0.05),而对照组上述指标反有轻微下降(P0.05)。结论香菇多糖与顺铂联合治疗肺癌胸水的疗效优于单用顺铂,安全性较好,可增强患者免疫功能。  相似文献   

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