去甲斑蝥素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制研究

[目的]探讨去甲斑蝥素对人胃癌SGC-7901细胞抑制和诱导凋亡作用.[方法]采用不同浓度的去甲斑蝥素(noncantharidin,NCTD)作用于胃癌SGC-7901细胞,在扫描电镜下观察其形态特点,采用流式细胞术测定经NCTD作用后的细胞生长周期及凋亡率,Western-blot 检测Bcl-2、Mcl-1、Bax的表达.[结果]扫描电镜下可见,SGC-7901细胞出现凋亡形态学改变.经去甲斑蝥素处理SGC-7901细胞后,实验组G2/M细胞明显多于对照组(P＜0.05).10μg//m1和20μg/ml浓度去甲斑蝥素均能诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡(P＜0.05),其抑制率与NCTD浓度及作用时间相关.Western-blot检测Bcl-2、Mcl-1蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,呈明显的剂量关系.[结论]去甲斑蝥素对人胃癌SGC-7901细胞有抑制作用,可能与其阻滞细胞周期诱导细胞凋亡有关.     

去甲斑蝥素对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其机制探讨

目的:探讨去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD) 对人胃癌SGC-7901细胞系增殖的影响及其机制.方法:实验分NCTD 组和对照组,分别应用MTT、流式细胞术、光学显微镜和电子显微镜检测 NCTD 对体外培养的胃癌SGC-7901细胞的杀伤抑制率、细胞周期、凋亡和细胞形态学改变.结果: NCTD对SGC-7901 细胞增殖有抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量- 时间依赖关系.在实验组,流式细胞仪示SGC-7901 细胞的G2 M 期细胞明显增多,S 期细胞减少,凋亡率上升;光镜和电子显微镜下出现细胞固缩,胞膜突出,核碎裂和凋亡小体.结论: NCTD 能抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长;其机制可能与其抑制SGC-7901 细胞增殖、干扰增殖周期、抑制DNA 合成代谢、诱导细胞凋亡有关.     

去甲斑蝥素对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和survivin表达的影响。方法:MTT法检测NCTD对HepG2细胞增殖的影响,Hochest33258染色、AnnexinV/PI染色、DNA琼脂糖电泳检测NCTD对HepG2细胞凋亡的影响,Western blotting检测NCTD对HepG2细胞survivin蛋白表达的影响。结果:NCTD可显著抑制HepG2细胞的增殖,呈质量浓度(5、10、20和40μg/ml)依赖性,40μg/ml NCTD作用48h时HepG2细胞抑制率达(81.27±3.25)%。NCTD作用HepG2细胞24h后,荧光显微镜下可见HepG2细胞出现核固缩和核裂解现象;DNA琼脂糖电泳显示,基因组DNA呈现典型的凋亡梯状图形;流式细胞术结果显示,5、10、20和40μg/ml NCTD作用后,HepG2细胞的凋亡率分别为(7.33±0.25)%、(18.23±1.19)%、(32.5±2.30)%和(48.23±1.17)%。Western blotting结果显示,随着NCTD作用剂量的增加,HepG2细胞中survivin蛋白的表达逐渐减少。结论:NCTD能抑制HepG2细胞增殖并促进其凋亡,其凋亡的发生与下调survivin蛋白的表达有关。     

去甲斑蝥素对乳腺癌细胞系MCF-7adr生长与凋亡的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对耐阿霉素乳腺癌细胞系MCF-7adr生长及凋亡的影响,为其临床应用提供实验依据。方法:采用MTT法测定NCTD抑制效应;利用光镜及荧光显微镜观察处理后的细胞形态变化;利用流式细胞术检测细胞凋亡;利用细胞免疫化学检测增殖、凋亡相关因子bcl-2、p53的表达。结果:NCTD对乳腺癌细胞MCF-7adr的生长有明显的抑制作用,且呈剂量、时间依赖性。NCTD处理48h后,MCF-7adr细胞内ki-67阳性指数由(96.8±1.3)%下降至(18.8±1.9)%;PCNA蛋白阳性指数由(95.4±1.1)%降至(59.2±1.9)%。NCTD处理48h后,在光镜下可见MCF-7adr细胞出现发泡、皱缩,有些细胞出现碎裂,经Hoechst染色证实NCTD处理后出现典型的凋亡表现。流式细胞术显示NCTD处理48h后,出现亚二倍体峰,随剂量的增加(120、240、360、480μmol/L),凋亡率分别增加11.67%、16.51%、18.29%、20.79%。NCTD处理48h后,MCF-7adr细胞突变型p53蛋白表达率为(97.8±1.64)%,经NCTD240μmol/L处理后表达率下降为(47.2±9.8)%;Bcl-2蛋白表达率由(98.87±3.74)%下降为(17.5±1.64)%。结论:NCTD能抑制MCF-7adr细胞生长、增殖,降低ki-67阳性指数率,促进MCF-7adr细胞凋亡与凋亡相关因子bcl-2及突变型p53蛋白的表达。     

去甲斑蝥素微球介入治疗对大鼠肝癌细胞凋亡和细胞增殖相关基因表达影响的研究

目的：探讨去甲斑蝥素微球介入治疗对大鼠肝癌细胞增殖和凋亡相关基因表达的影响。方法：89只肝癌大鼠随机分组后，分别经肝动脉注入生理盐水，去甲斑蝥素，空白微球，去甲斑蝥素加碘油，去甲斑蝥素微球。治疗后每组取8只观察生存时间，治疗后第8天处死余下大鼠，取肿瘤组织采用TUNEL标记法检测细胞凋亡指数，免疫组化SP法检测肝癌组织caspase-3，bcl-2，Ki67的表达。结果：治疗后N-MS（去甲斑蝥微球）组大鼠生存期明显长于其他各组（P〈0．01）。NMS组凋亡指数和caspase-3阳性率均高于其他各组（P〈0．01）；NMS组bcl-2阳性率和Ki67表达率低于其他各组（P〈0．01）。结论：去甲斑蝥素微球介入治疗能够延长肝癌大鼠的生存期；其介入治疗肝癌的机制与抑制Ki-67、bcl-2基因表达，上调caspase-3表达，从而抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡有关。     

去甲斑蝥素对人类胆管癌细胞系QBC939增殖和凋亡作用的实验研究

 【摘要】　目的　研究去甲斑蝥素（NCTD）对人类胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用,初步探讨其作用机制。方法　将NCTD作用于经体外培养的QBC939细胞系,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）,流式细胞术及免疫组织化学SP法进行检测。结果　0.125、0.75、2.5、10、120 μg／ml NCTD作用48 h,对QBC939细胞系均有抑制作用（P＜0.05）,且具有浓度依赖性,绘制浓度效应曲线,得出半数抑制浓度（IC50）为（3.66±1.14）μg／ml;在分别作用12、24、36、48、72 h后,生存率有随时间增加而下降的趋势（P＜0.05）。流式细胞术结果表明,随着NCTD浓度的增加,凋亡率逐渐增高,各浓度组分别为（8.6±0.4）%、（17.6±0.3）%、（22.9±0.4）%、（25.5±0.9）%、（31.1±1.5）%（P＜0.001）;质量浓度为2.5 μg／ml的NCTD作用QBC939细胞48 h后,出现G2／M期阻滞现象,NCTD与对照组分别为（14.1±1.0）%和（5.7±0.3）%（P＜0.05）。不同浓度的NCTD作用于QBC939细胞后,与对照组相比Caspase-3蛋白表达均增加。结论　NCTD具有抑制人类胆管癌细胞系QBC939增殖的作用,这种作用可能与诱导细胞凋亡,干扰细胞生长周期有关。     

姜黄素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用机制

 目的 探讨姜黄素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用及其相关机制。方法 以不同浓度的姜黄素作用于胃癌SGC-7901细胞，利用倒置相差显微镜观察细胞生长形态变化，通过MTT检测细胞生长抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot 检测胃癌细胞中Fas及survivin的表达情况。结果 姜黄素能显著抑制体外培养的SGC-7901细胞的生长并呈量-效和时-效关系，流式细胞术检测到亚二倍体凋亡峰，细胞凋亡率增加，Western blot结果提示经姜黄素作用后Fas表达率上升，survivin表达率下降。结论 姜黄素能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长并促进其凋亡，姜黄素可能通过上调Fas及下调survivin的表达而诱导凋亡。     

去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞生长抑制作用的实验观察

目的探讨去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞系抑制和诱导凋亡作用。方法采用MTT法检测细胞的生长活性,应用流式细胞仪检测、透射电镜下观察去甲斑素处理HepG2细胞后细胞周期阻滞和细胞凋亡的发生情况。结果 5～40μg/ml去甲斑蝥素均能抑制HepG2细胞增殖(P<0.05),其抑制率与作用时间及NCTD浓度相关。流式细胞仪检测发现,去甲斑蝥素处理HepG2细胞后,实验组G2/M细胞明显多于对照组,P<0.05,提示细胞周期停滞于G2/M期。透射电镜下可见,HepG2细胞出现凋亡形态学改变。结论去甲斑蝥素对HepG2细胞有抑制作用,可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

去甲斑蝥素诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡及其作用机制

目的:探讨去甲斑蝥素诱导人食管癌Eca-109细胞的凋亡及其可能的作用机制.方法:去甲斑蝥素作用食管癌Eca-109细胞后,应用MTT法检测其对细胞的生长抑制作用, 透射电子显微镜下观察细胞超微结构的变化,琼脂糖凝胶电泳观察其对细胞凋亡的诱导作用,RT-PCR法检测caspase 8和caspase 3 mRNA的表达,Western 印迹法检测Fas、细胞型含死亡域的Fas结合蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cellular FADD-like interleukin-1β converting enzyme inhibitory protein,c-FLIP) 、caspase 8和caspase 3蛋白的表达.结果:去甲斑蝥素对人食管癌Eca-109细胞具有生长抑制作用,并呈时效和量效依赖关系.电子显微镜下观察发现, 食管癌Eca-109细胞趋于凋亡.DNA琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA梯状条带.RT-PCR检测显示,caspase 8和caspase 3 mRNA的表达水平明显上升 (P<0.01).Western 印迹法检测结果显示,与阴性对照组比较,去甲斑蝥素作用后,食管癌Eca-109细胞中Fas、caspase 3和caspase 8蛋白的表达明显上升(P<0.05),c-FLIP蛋白的表达水平明显下降(P<0.05).结论:去甲斑蝥素能够抑制食管癌Eca-109细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能是通过上调Fas、caspase 8、caspase 3的表达和下调c-FLIP的表达来实现的.     

去甲斑蝥素对人乳腺癌细胞系的凋亡诱导作用及bcl-2基因的表达

目的：探讨去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制。方法：用１０μｇ／ｍｌ去甲斑蝥素处理体外培养的人乳腺癌细胞素ＭＣＦ－７。处理后,在不同时间点,采用普通光镜、电子显微观察去甲斑蝥素对乳腺癌细胞的诱导凋亡现象。利用流式细胞仪分析凋亡细胞百分比,用蛋白印迹杂交方法对凋亡抑制基因ｂｃｌ－２的表达情况进行检测。结果：经１０μｇ／ｍｌ去甲斑蝥素处理１２ｈ后,可观察到ＭＣＦ－７细胞变形、出泡,从培养瓶底脱离。细胞染色和电子显微镜可观察到染色质浓聚、边集,且随着药物作用时间的延长,凋亡细胞百分比逐渐增加。与对照组相比,凋亡抑制基因ｂｃｌ－２的表达降低。结论：诱导肿瘤细胞凋亡可能是去甲斑蝥素抗肿瘤作用的分子机制之一。     

氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

背景与目的：氧化苦参碱（oxymatrine,OM）是中药苦参的主要有效成分,具有抗纤维化、抗病毒等作用,对放疗和化疗后白细胞减少亦有一定提升作用,研究显示氧化苦参碱能一定程度杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞的侵袭,并可作为辅助抗癌药物用于临床。本研究旨在通过观察氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖和血管内皮生长因（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,探讨氧化苦参碱抗肿瘤的作用机制。方法：体外培养人胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法观察不同浓度和作用时间下氧化苦参碱对SGC-7901细胞的抑制情况;采用免疫组织化学法检测肿瘤细胞内VEGF蛋白的表达;RT-PCR法检测氧化苦参碱作用下SGC-7901细胞中VEGF mRNA的转录情况。结果：低质量浓度氧化苦参碱（0.5 mg/mL）对SGC-7901细胞增殖抑制作用不明显（P〉0.05）,但当其质量浓度达到1 mg/mL以上时,则能显著抑制细胞的增殖,抑制效应随着时间和浓度的增加呈逐渐增强,同时伴有癌细胞内VEGF mRNA转录和蛋白表达的降低（P〈0.05）。 结论：氧化苦参碱在体外能显著抑制SGC-7901细胞增殖,并能抑制VEGF基因的转录和表达,提示氧化苦参碱有抑制肿瘤血管生成的潜在作用。     

RNAi抑制ALK1对人胃腺癌SGC-7901细胞增殖的影响

背景与目的:人活化素受体样激酶-1(activin receptor-like kinase-1,ALK1)可促进内皮细胞增殖,与肿瘤内血管生成密切相关.本研究采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制ALK1表达,观察抑制效果以及抑制ALK1表达后对人胃癌细胞增殖的影响.方法:设计3条靶向ALK1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),克隆到真核表达质粒pGenesil-1,转染人胃癌细胞株SGC-7901.分别采用Real-time PCR和Western blot技术检测胃癌细胞ALK1 mRNA及其蛋白表达的变化,并检测细胞周期及生长曲线.结果:与阴性对照相比,第3条ALK1干扰RNA在mRNA及蛋白水平均可明显下调ALK1基因表达,并抑制SGC-7901细胞增殖.结论:RNAi技术导致的ALK1表达下调并抑制胃癌细胞增殖,ALK1可作为胃癌抗肿瘤治疗的理想靶点.     

腺病毒介导p21WAF1/CIP1基因转移及诱导胃癌细胞凋亡

目的：探讨p21^WAF1/CIP1基因（p21基因）过表达对人胃癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响，进一步了解p21基因对肿瘤细胞的治疗作用。方法：通过腺病毒介导外源性p21基因转移到有p53基因突变的人胃癌细胞系SGC－7901，对p21基因的表达、细胞生长的抑制与投机和对肿瘤模型的治疗效果进行分析。结果：外源性p21基因在靶细胞高水平表达显著抑制了胃癌细胞的生长和集落形成，流式细胞仪检测显示G1期阻滞并发生了凋亡。瘤内注射Ad-p21对裸鼠体内移植瘤有一定抑瘤作用。结论；p21基因可能参与肿瘤细胞凋亡的诱导，使p21基因在肿瘤的基因治疗，特别是在与其他凋亡诱导因子联合作用的方案中有更好的应用前景。     

Effect of hexamethylene bisacetamide on human gastric cancer cell line SGC-7901

After the human gastric cancer cells SGC-7901 were cultured with 5 mM hexamethylene bisacetamide (HMBA) for 120 hr, cell growth was inhibited. The doubling time increased from 48 hr in untreated cells to 99.6 hr in HMBA-treated cells. The maximal increase in growth was 2.4-fold as compared to 6.4-fold in the untreated control. 3H-thymidine incorporation was inhibited by HMBA and the colony formation rate was reduced. There was concomitant decrease in carcino-embryonic antigen and beta-2 microglobulin as determined by radioimmuno-assay. Lactic dehydrogenase (LDH) and its isoenzyme assay revealed a marked increase in H-type LDH but the total enzyme activity was reduced. These results indicate that HMBA inhibits proliferation of SGC-7901 cells in vitro.     

Survivin ASODN对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响

目的:观察Survivin基因反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对胃癌细胞增殖的影响。方法:靶向Survivin ASODN经脂质体介导转染胃癌细胞系SGC-7901,倒置显微镜和电镜观察转染后细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况;半定量RT-PCR检测Survivin基因mRNA的表达;免疫组化检测Survivin蛋白的变化情况;FCM检测细胞周期的变化。结果:转染ASODN后,细胞出现了形态学变化;MTT实验检测发现细胞株SGC-7901增殖受到显著抑制,抑制率达(69．2±0．76)％;RT-PCR检测发现Survivin基因mRNA水平表达显著下降,免疫组化试验发现蛋白表达也出现类似的结果;流式细胞仪检测发现G1期细胞比例增高,由对照组的66％和62．5％增至90．7％。结论:Survivin ASODN可以显著抑制Survivin的表达,抑制胃癌细胞增殖。     

转染FRZB基因对人胃癌SGC-7901细胞生长和转移的影响

背景与目的:FRZB(frizzled motif associated with bone development)是sFRP(secreted frizzled related protein)家族的成员,在胚胎发育过程中起重要作用。有文献报道FRZB的表达能抑制基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和MMP-9表达而与前列腺癌的侵袭能力相关。本研究拟探讨FRZB基因对人胃癌SGC-7901细胞成瘤性和侵袭能力的影响,及其可能的机制。方法:构建FRZB真核表达载体并转染SGC-7901细胞,经G418筛选获得稳定表达克隆。用MTT法检测并绘制细胞增殖曲线,软琼脂培养和裸鼠皮下注射的体外和体内实验检测细胞成瘤性变化。用细胞免疫化学检测转染FRZB后细胞中MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达变化,体外侵袭和粘附实验检测细胞侵袭能力变化。结果:筛选稳定表达细胞株经定量PCR检测,FRZB表达显著提高。体内外实验证实,转染FRZB的细胞(SGC-7901/FRZB)生长抑制率约为60%,克隆形成能力和成瘤性减弱。免疫细胞化学显示MMP-2、MMP-7、MMP-9在细胞浆内的阳性表达降低或接近阴性,对细胞外基质成分(CollagenI、IV、Vitronectin、Fibronectin、Laminin)粘附能力均增高,比空载体转染对照组(SGC-7901/vector)增加12.8%、19.8%、59.8%、26.7%、15.2%,差异具有显著性(P<0.05),而空载体转染对照组与亲本细胞间差异无统计学意义(P>0.05)。SGC-7901、SGC-7901/vector和SGC-7901/FRZB细胞侵袭能力分别是每高倍视野55.90±5.68、54.80±6.97、6.60±2.63,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:FRZB高表达在体内体外均可抑制SGC-7901细胞的增殖、成瘤性和侵袭能力,具有肿瘤抑制基因的功能。FRZB抑制肿瘤细胞的生长和抑制MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达为抑癌功能相关机制之一。