中国和日本部分地区TT病毒的检出率及基因亚型 …

目的 比较中国及日本部分地区ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染情况及基因亚型分布特征。方法 采用半巢式－聚合酶链反应（Ｓｅｍｉ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）检测中国和日本部分慢性丙型肝炎患者及正常人血标本中的ＴＴＶ感染情况,并对阳性产物片段直接进行序列分析。结果 发现中国部分正常人群ＴＴＶ感染率为６４％;慢性丙型肝炎患者ＴＴＶ感染率中国国为６８％,日本为４９．１％,基因亚型分布中国ＴＴＶ Ｇ２ａ＋２ｂ亚型占６０％,     

间接ELISA法的改进并用于肾综合征出血热病人血清的初步分型

采用超声、差速离心法制备肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）抗原。通过与免疫荧光法（ＩＦＡ）和捕获ＩｇＭＥＬＩＳＡ法（ＭａｃＥＬＩＳＡ）比较，分析了病人临床四个期血清抗体阳性率，对３组不同地区的正常人群ＨＦＲＳＶ抗体阳性血清作抑制试验，以及比较ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ血清抗体几何平均滴度证实本方法是特异和灵敏的。用这一方法对野鼠型和家鼠型ＨＦＲＳ病人血清，与两型病毒作交叉ＥＬＩＳＡ试验，结果呈单向反应；采用胞膜荧光反应为主的感染细胞制备抗原，可提高其分型效果。     

献血员中TT病毒DNA检测及部分基因序列分析

目的探讨献血员中一种与输血后肝炎有关的病毒—ＴＴＶ的感染情况。方法采用ＴＴＶ基因组ＯＲＦ１区的套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法检测２６２份献血员血清标本。结果在血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）异常、ＨＢｓＡｇ及抗－ＨＣＶ阴性的５８份献血员血清标本中，１８份ＴＴＶＤＮＡ阳性，ＴＴＶＤＮＡ的阳性检出率为３１０％；在２０４份正常献血员血清标本中检出３０份（１４７％）ＴＴＶＤＮＡ阳性，ＴＴＶＤＮＡ的阳性检出率明显低于ＡＬＴ异常献血员人群（χ２＝３８１，Ｐ＜００５）。序列分析结果显示，其序列与日本株和中国株相应位置核苷酸序列的同源性大于９７％，可能属同一基因型。结论提示我国献血员中存在ＴＴＶ感染，ＴＴＶ存在“健康携带状态”，输血可能成为传播ＴＴＶ感染的途径之一     

一种新的可溶活性抗体-7D6检测非角化未分化型鼻咽癌组织中EB病毒的dUTP酶

鼻咽癌（ＮＰＣ）在香港地区是一种与ＥＢ病毒（ＥＢＶ）感染有关的常见上皮细胞肿瘤。ＥＢ病毒在ＮＰＣ中并不与宿主ＤＮＡ整合，而是以游离形式存在。ＥＢＶ阳性的ＮＰＣ组织中常表现有！型的潜伏感染并带有ＥＢ病毒编码的潜伏基因一ＥＢ核抗原１（ＥＢＮＡ；）和潜伏膜蛋白１，２的表达。这些编码基因产物的表达可使细胞获得永生化和维持细胞带毒状态。潜伏感染状态至致溶性感染启动需经ＺＥＢＶ的复制激活所介导（ＺＥＢＲＡ）。ＺＥＢＲＡ是一种４０—ｋＤｆａＪ病毒单体蛋白，其可通过ＢＺ—１单克隆抗体来检测。由ＮＯｔｌ重复序列编…     

硫酸酯化箬叶多糖抗HIV-1机制的初步研究

目的 探讨硫酸脂化箬液多糖（Ｓ－ＩＴＰＳ）抗ＨＩＶ的机制,为进一步开发该药提供理论依据。方法 于病毒接种前,接种同时及接种后分别在培养细胞（ＭＴ－４）中加入硫酸脂化箬叶多糖（Ｓ－ＩＴＰＳ）,在Ｓ－ＩＴＰＳ存在或不存在的条件下培养１￣４周。终点以病毒半数感染量（ＴＣＩＤ５０法）,细胞病变（ＣＰＥ）,ＭＴＴ染色细胞保护率（ＭＴＴ法）及培养上清中的ｐ２４抗原滴度９ＥＬＩＳＡ法）作为评价指标,判断药效,分     

无偿献血人群人类免疫缺陷病毒抗体和核酸检测 …

目的 了解深圳地区无偿献血人群人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染流行情况。方法 采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对无偿献血者进行抗－ＨＩＶ－１／２筛查,对初查阳性标本用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法进一步检测外周血单个核细胞（ＰＭＢＣｓ）中ＨＩＶ ＤＮＡ和血浆中ＨＩＶ ＲＮＡ,并对２例地偿献血者ＰＣＲ扩增阳性片段进行序列测定。结果 在４６０９５例无偿献血者中,发现抗－ＨＩＶＩ阳性７例,阳性率为０．０１５     

Epstein-Barr病毒壳抗原的纯化及其在检查血清抗体中的应用

为了建立纯化Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒壳抗原（ＥＢＶ－ＶＣＡ）的方法，用于酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测人血清中的相关抗体，我们用重组昆虫病毒在感染的ｓｆ９细胞中表达ＥＢＶ－ＶＣＡ。感染的细胞经裂解后，层析纯化表达产物。用纯化的ＶＣＡ作为抗原包被ＥＬＩＳＡ板或硝基纤维膜，检查血清中ＶＣＡ／ＩｇＡ和ＶＣＡ／ＩｇＧ抗体，为ＥＢＶ感染的检测和ＮＰＣ的诊断发展了一个敏感、特异和简便的方法。     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型包膜糖蛋白gp120基因在大肠杆菌中的高效表达

目的提高人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）包膜糖蛋白ｇｐ１２０基因在原核系统中的表达量。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增出５６０ｂｐ的ＨＩＶ－１ＬＡＶ株ｇｐ１２０Ｎ端基因片段，经ＥｃｏＲⅠ及ＳａｌⅠ酶切后插入高效表达载体ｐＥＴ２８ａ，得到重组质粒ｐＥＴ１２０，并转化表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３），经诱导高效表达出ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因片段。结果间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验表明，表达产物具有良好的抗原性及特异性。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析结果表明，ｇｐ１２０表达量占总菌体蛋白的５０％。结论在原核系统中高效表达了ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因     

孕妇和新生儿血清中的巨细胞病毒特异性IgM抗体

应用间接ＥＬＩＳＡ方法检测了兰州地区７５７例孕妇和６２４例新生儿血清中巨细胞病毒特异性ＩｇＭ抗体（ＣＭＶ－ＩｇＭ）。孕妇组阳性者７４例（９．７８％），其中妊娠早期阳性者１９例，妊娠中期阳性者４４例，妊娠晚期阳性者１１例。新生儿组阳性者９例（１．４４％）。实验结果显示：兰州地区孕妇中有一定数量的ＣＭＶ活动性感染病例，以致伴有新生儿ＣＭＶ先天性感染。     

TTV相关病毒的发现

近年来发现一些ＴＴＶ相关病毒 ,如ＴＴＶ样微小病毒 (ＴＬＭＶ)、ＰＭ病毒 (ＰＭＶ)、ＳＡＮＢＡＮ病毒 (ＳＡＮ ＢＡＮ)、ＹＯＮＢＡＮ病毒 (ＹＯＮＢＡＮ)和ＳＥＮ病毒 (ＳＥＮＶ)等 ,并对其致病性进行了一些研究。一、ＳＡＮＢＡＮ病毒ＳＡＮＢＡＮ(日文意“第三”)病毒是从日本一名健康供血员血清中分离的 ,该供血员用原型ＴＴＶＰＣＲ检测为ＴＴＶＤＮＡ阴性 ,但用测定ＴＴＶＤＮＡ覆盖面更广的ＰＣＲ检测为阳性。Ｈｉｊｉｋａｔａ等〔1〕 对该株病毒的全序列分析表明 ,其基因组全长为 380 8个核苷酸 ,较ＴＴＶ原型株ＴＡ2 78(385 2ｂ…     

20例中国人HCVⅡ/1b型高变区1序列变异的动态观察

目的 动态研究中国人群ＨＣＶⅡ／１ｂ型包膜蛋白Ｅ２／ＮＳ１高变区１（ＨＶＲ１）序列变异规律、意义及影响因素。方法 应用逆转录巢式ＰＣＲ技术从２０例ＨＣＶⅡ／１ｂ型感染的中国病人血清中扩增了ＨＣＶ部分包膜区基因片段（ｎｔ１４４９～１５８６，ＨＣＶ－Ｊ），纯化后直接采用双脱氧链末端终止法进行序列分析。结果 中国人群ＨＣＶ ＨＶＲ１位于氨基酸（ＡＡ）３８４～４１０位，有６个较保守的ＡＡ位点；３８５位Ｔｈ     

Epstein—Barr病毒壳抗原的纯化及其在检查血清抗体…

为了建立纯化Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒壳抗原（ＥＢＶ－ＶＣＡ）的方法，用于酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测人因清中的相关抗体，我们用重组昆虫病毒在感染的ｓｆ９细胞中表达ＥＢＶ－ＶＣＡ。感染的细胞经裂解后，层析纯化表达产物。用经的ＶＣＡ作为抗原包虫被ＥＬＩＳＡ板或硝基纤维膜，检查血清中ＶＣＡ／ＩｇＡ和ＶＣＡ／ｇＧ抗体，为ＥＢＶ感染的的检测和ＮＰＣ的诊断发展了一个敏感、特异和简便的方法。     

深圳地区不同人群TTV感染情况的调查

目的了解深圳地区不同人群ＴＴＶ的感染情况。方法在ＴＴＶＯＲＦ１保守区设计两对套式引物，建立了检测ＴＴＶＤＮＡ的巢式聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ），用该法对深圳地区９０例一般人群、８８例职业献血员、７９例静脉毒瘾者及２９例非甲庚型肝炎病人进行ＴＴＶＤＮＡ的检测。结果ＴＴＶＤＮＡ在以上４种人群中的阳性率分别为７８％，９０％，４１７％与４４８％，前者与后两者比较差异均有显著性（Ｐ＜００５）。９０例一般人群与８８例职业献血员中，１４例ＴＴＶＤＮＡ阳性者丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）均正常。结论深圳地区一般人群与职业献血员中ＴＴＶ携带者较常见；静脉毒瘾者是ＴＴＶ感染的高危人群；部分非甲～庚型肝炎可能与ＴＴＶ相关     

聚合酶链反应鉴定丙型肝炎病毒母婴传播的状态及其意义

采用多种方法，动态检测了１１例丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的孕妇所生的婴儿血抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ。发现用合成肽酶联免疫吸附试验（ｓｐＥＬＩＳＡ）检测婴儿抗－ＨＣＶ阳性率（２３．５２％）显著低于第二代重组抗原ＥＬＩＳＡ（２ｎｄＥＬＩＳＡ）（４１．１８％）（Ｐ＜０．０５）；用２ｎｄＥＬＩＳＡ检测，６例婴儿脐血和静脉血抗－ＨＣＶ阳性，５例持续１～５月阴转，１例阳性持续１３个月。经重组免疫印迹试验（ＲＩＢＡ）鉴定，４例阳性，２例可疑阳性。用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ，５例阳性，３例于生后１～６个月自然阴转，２例持续阳性分别达９个月和１３个月。提示检测抗－ＨＣＶ判断ＨＣＶ母婴传播的状态受到婴儿抗－ＨＣＶ产生水平低下、母体抗－ＨＣＶ的被动输入和不同检测方法的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ是判断母婴传播更可靠的指标。     

用抗体捕捉ELISA法检测肾综合征出血热患者唾液中特异性IgM抗体

用抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法检测肾综合征出血热患者唾液中特异性ＩｇＭ抗体孙晓芬，崔桂兰（成都军区后勤部军事医学研究所，成都６１００６１）诊断肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）感染通常依靠测定血清中特异性ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体。本实验采用ＩｇＭ抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法...     

丙型肝炎病毒结构蛋白在痘苗病毒中的表达

为研究中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的抗原性及在细胞内的加工，将丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’非编码区（ＮＴＲ）和结构基因（Ｃｏｒｅ＋Ｅ１＋Ｅ２／ＮＳ１）插入痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５中，转染ＴＫ－１４３细胞，经纯化得到丙型肝炎（ＨＣＶ）重组痘苗病毒ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交表明，ＨＣＶ结构基因存在于痘苗病毒之中。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现，ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ表达蛋白带位于９０ｋＤａ，为一多聚蛋白；此蛋白为分泌型，分泌量与细胞裂解物内量大致相同     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

虎杖金银花联用抗Ⅱ型疱疹病毒的药效分析

Ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓｔｙｐｅ２（ＨＳＶ２）是外阴疱疹及宫颈癌等多种疾病的病因之一。阿昔洛韦（ａｃｙｃｌｏｖｉｒ,ＡＣＶ）治疗ＨＳＶ２感染易产生耐药毒株;ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ肾毒性很大;ＨＳＶ疫苗效果不佳。因此,研制抗病毒新药是相当重要的任务。据报道,１０％虎杖水煎液对ＨＳＶ１、ＨＳＶ２、甲型流感病毒京科６８１株等多种病毒有抑制作用。金银花能延缓呼吸道合胞病毒的ＣＰＥ。为了获得虎杖金银花抗ＨＳＶ制剂的最佳配方比,我们用空斑减数实验,以ＡＣＶ为阳性对照,观察了虎杖金银花单用…     

PCR法检测EB病毒BNLF1基因

目前已建立分子杂交和ＰＣＲ检测ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ的方法。近年来研究发现ＥＢＶ致癌作用与ＬＭＰ１蛋白的表达密切相关〔１〕。为此,我们针对ＥＢＶ表达ＬＭＰ１蛋白的ＢＮＬＦ１基因片段建立ＰＣＲ检测方法。１　材料与方法１１　标准病毒和对照病毒　含有ＥＢＶ的Ｒａｊｉ细胞系和带有ＰＧＥＭＩＢＮＬＦ１的菌种有美国国立卫生研究院（ＮＩＨ）Ｊａｃｋｓｏｎ博士赠送。ＨＣＭＶＡＤ１６９、ＨＳＶⅠ、ＶＺＶ购自于上海第二医科大学。１２　主要试剂与仪器　限制性内切酶ＳｔｙＩ,Ｍａｒｋｅｒ购…     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型包膜糖蛋白gp120基因在大肠杆？…

目的 提高人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ－１）包膜糖蛋白ｇｐ１２０基因在原核中的表达量。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增出５６０ｂｐ的ＨＩＶ－１ＬＡＶ株ｇｐ１２０Ｎ端基因片段，经ＥｃｏＲⅠ及ＳａｌⅠ酶切后插入高效表达载体ＰＥＴ２８ａ得到重组质粒ｐＥＴ／１２０，并转化表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３），经诱导高效表达出ＨＩＶ－１ｇｐ１２０基因片段。结果 间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及Ｗｅｓｔｅｒ