靶向人Ku70 mRNA反义核苷酸的优化设计与筛选

目的:联合应用RNAdraw和Sfold软件设计并筛选低毒且高效抑制Hela细胞Ku70 mRNA表达的反义寡核苷酸。方法:从GenBank获得人Ku70 mRNA全序列,联合应用RNAdraw与Sfold软件,根据最小自由能原理设计多条20 nt的反义寡核苷酸,脂质体转染后MTT法检测其非序列特异性细胞毒性,选择毒性最小者并转染Hela细胞,RT-PCR检测转染前后Ku70 mRNA的表达水平并进行比较。结果:靶向Ku70 mRNA设计6条20 nt的反义寡核苷酸,其中NO.1序列非特异性毒性最低,对Hela细胞的生长抑制率(50、100和200 nmol.L-1浓度组分别为4.8%、9.5%和10.2%)与脂质体组比较差异无显著性(P>0.05),用毒性最低序列转染Hela细胞后使Ku70 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),条带强度和面积与未转染组比较分别下降81.6%和77.6%。结论:联合应用计算机软件RNAdraw和Sfold对设计反义核酸有较大的指导意义,能实现较高的命中率,设计的反义寡核苷酸能有效抑制Hela细胞Ku70mRNA的表达。     

反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞组织蛋白酶L表达的影响

目的　观察合成人组织蛋白酶L(CATL)基因的反义脱氧寡核苷酸转染后对人骨肉瘤MG 63 细胞系中CATL表达的影响。方法　人工合成正义、反义及无意义CATL基因片段,转染人骨肉瘤细胞MG 63,免疫细胞染色观察CATL的表达,RT PCR和Western blot检测CATL的mRNA和蛋白质表达水平的变化。结果　CATL反义寡核苷酸对MG 63 细胞的CATL的表达有明显的抑制作用,与正义链组、无意义链组和空白对照组相比有显著差异(P<0.05)。结论　反义寡核苷酸的转染可阻遏骨肉瘤细胞中CATL的表达。     

靶向HER-2 mRNA反义寡核苷酸抗乳腺癌增殖的体内研究

目的观察以HER-2mRNA为靶点的反义寡核苷酸HA6722体内抗乳腺癌的作用及其与细胞毒药物多西紫杉醇联合应用时抗肿瘤活性的变化。方法以SK-BR-3乳腺癌细胞株为移植实验细胞株,以BALB/C裸鼠为移植动物,建立HER-2过表达乳腺癌动物模型,观察不同剂量反义寡核苷酸HA6722及其对照序列单用或/和细胞毒药物多西紫杉醇联合应用时的抗肿瘤活性,并设空白对照组。结果在5mg·kg-1·d-1的剂量下单药反义寡核苷酸HA6722连续多次注射(1次/d,×12)可对乳腺癌的体内生长具有显著的抑制作用,抑瘤率达76·3%;联合应用多西紫杉醇时抗乳腺癌增殖作用明显加强,中等剂量HA6722(5mg·kg-1·d-1)联合多西紫杉醇(7·5mg·kg-1·d-1)与高剂量多西紫杉醇(15mg·kg-1·d-1)单独注射具有可比拟的抑瘤活性,两组抑瘤率分别为88·3%和88·7%(P>0·05);而中剂量的Scramble6722+多西紫杉醇(7·5mg·kg-1·d-1)则未见抗肿瘤活性有进一步的增强(P>0·05)。结论中等剂量的HA6722与多西紫杉醇联合应用,可以明显增强后者的抗肿瘤活性,其抗瘤活性可与高剂量的多西紫杉醇相比拟。     

反义寡脱氧核苷酸对HBsAg、HBeAg表达的影响

目的 探讨硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸对乙型肝炎病毒HBsAg、HBeAg的影响。方法 应用ELISA方法检测培养Hep G22215细胞的HBsAg、HBeAg的表达。设计合成HBV5个硫代反义寡聚核苷酸（S-as ODN）靶序列，观察不同靶序列及联合使用对HBV基因复制和表达的影响。结果 本细胞株表达HBsAg、HBeAg的S／C．D均〉5，不同靶位点的S-as ODN对HBsAg、HBeAg表达都有显著的抑制作用及序列特异性．联合用药后对HBsAg和HBeAg的抑制效果有显著的提高。结论 S-as ODN对Hep G22215的HBsAg、HBeAg具有一定的抑制作用，表现为序列特异性、剂量相关性、联合协同性。     

硫代反义寡聚脱氧核苷酸体外对乙型肝炎病毒基因表达的抑制作用

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）C基因翻译起始区和C基因区硫代反义寡聚脱氧核苷酸（ASON）对HBV表达的序列性抑制作用。方法 以2．2．15细胞系作为实验对象,设计了一系列互补于HBV mRNA编码核心蛋白基因区（C区）15聚硫代ASON,通过脂质体介导将这些合成的外源基因导入2．2．15细胞中,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测作用细胞培养上清液中乙型肝炎病毒E抗原（HBeAg)和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg)含量。结果 与HBV mRNA C基因起始区互补的硫代ASON序列特异性地抑制乙型肝炎病毒基因表达,而正义硫代寡聚脱氧核苷酸未见有抑制效应,与HBV mRNA C基因内部互补的序列很少或无抗病毒活性。另外,硫代ASON对细胞生长无毒性作用。结论 硫代ASON能够在细胞水平有效地抑制乙型肝炎病毒基因的表达。     

c-myc反义核苷酸对淋巴瘤细胞系CA46凋亡的作用

目的 研究c—myc反义核苷酸对体外培养的淋巴瘤细胞系CA46基因表达及诱导凋亡的作用。方法 c—myc反义核苷酸(ASPO)为人工合成的针对c—myc基因的一段外源性基因片段，以无义的寡核苷酸作为对照，导入CA46细胞后观察其基因表达及诱导凋亡的作用。流式细胞仪检测c—myc基因产物表达，荧光染色观察CA46细胞的凋亡形态，流式细胞仪定量检测凋亡百分率，TUNEL检测加用VP16后的CA46原位凋亡。结果 c—myc反义核苷酸(ASPO)作用CA46细胞后，RT—PCR示c—myc mRNA表达降低。荧光染色ASPO组细胞胞体缩小，胞膜完整，核质浓缩，出现黄绿色不规则或局部致密荧光，凋亡细胞约占23．3％，而SPO组及空白组未见明显凋亡细胞，细胞呈均匀绿色荧光。流式细胞仪检测仅用VP16 10mg／L 3d，ASPO作用2d后加VP16 10mg／L 1d及ASPO作用3d均出现凋亡峰，凋亡率分别为16％，72％及52％，而SPO组及空白但均未见凋亡峰。流式细胞仪检测CA46细胞c—myc蛋白为95．3％，经ASPO作用后降为23．7％，同时SPO组c—myc表达率为90．6％，TUNEL检测ASPO组凋亡细胞为25．5％，加用VP16后的CA46凋亡率为36．7％。结论 体外实验中CA46特异地被c—myc反义核酸抑制生长，细胞出现凋亡表现，c—myc mRNA癌基因表达降低。     

硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸对乙型肝炎病毒细胞的影响

目的探讨硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸对乙型肝炎病毒细胞的影响。方法设计合成HBV5个硫代反义寡聚核苷酸(S-as ODN)靶序列。应用ELISA方法、MTT比色法、观察S-as ODN对HBsAg、HBeAg抗原表达及Hep G22215细胞毒性的影响。结果不同靶位点的S-as ODN对HBsAg、HBeAg表达都有显著的抑制作用,在浓度为20μmol／L时,对细胞无明显杀伤作用。结论S-as ODN对Hep G22215的HBsAg、HBeAg的抑制作用为抗HBV治疗提供了新的途径。     

反义端粒酶不同给予方式抑制裸鼠人肝癌模型生长的研究

目的：研究人类端粒逆转录酶（hTERT）基因关键位点的反义寡核苷酸对人肝癌的抑制效应。方法：合成互补于hTERT关键区段的反义寡核苷酸（as-hTERT），以HBV DNA转染的HepG2.2.15细胞接种裸鼠制备人肝癌模型，通过连续用药，一次性用药，混合用药3种不同给予方式观察as-hTERT抑制瘤细胞生长作用。比较不同用药方法对裸鼠成瘤的影响，FCM分析as-hTERT诱导凋亡作用。结果：药物一次性与混合作用裸鼠表现为成瘤潜伏期延长，成瘤率明显低于瘤细胞未用药对照组（P＜0．05），瘤体生长缓慢；追加用药后无瘤体生长，瘤内用药9d FCM测细胞凋亡峰为26．95％，G2－M期细胞为1．70％，对照瘤体的各细胞周期分布正常。结论：as-hTERT不同给予方式均可抑制荷瘤裸鼠人肝癌的生长，以追加用药效果最佳，具有潜在的临床应用价值。     

放射性核素标记的Ku70 反义寡核苷酸对甲状腺癌荷瘤小鼠疗效研究

目的研究放射性核素标记的Ku70反义寡核苷酸(ASODNs)对甲状腺癌荷瘤小鼠的放疗疗效及其作用机制。方法采用131I标记Ku70 ASODNs,建立甲状腺癌TT细胞荷瘤小鼠模型,通过Ku70 ASODNs和(或)放射处理,观察小鼠成瘤率、死亡率和肿瘤生长情况。利用AnnexinⅤ/PI染色后流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡水平。蛋白质印迹分析检测不同处理后小鼠肿瘤组织Ku70蛋白的表达以及细胞增殖(PCNA)和凋亡指标(Bcl-2)的表达。结果经131I标记Ku70 ASODNs处理后,肿瘤组织Ku70蛋白表达下调;肿瘤细胞生长抑制,与对照组相比肿瘤体积降低,而且小鼠成瘤率下降,死亡率亦降低(P<0.01);并且131I-ASODNs组肿瘤体积与单纯131I-Na处理组相比也有降低(P<0.05)。细胞凋亡检测发现131I-ASODNs组肿瘤细胞的凋亡率(35.6%)高于ASODNs组(10.4%)和生理盐水组(9.2%),与131I-Na组(26.6%)相比也有统计学差异(P<0.05)。进一步检测发现131I-ASODNs组肿瘤组织细胞中的PCNA和Bcl-2表达与对照组和ASODNs组相比都降低。结论 131I标记Ku70 ASODNs能显著抑制甲状腺癌肿瘤细胞的生长,促进肿瘤细胞凋亡,其作用机制与Ku70表达抑制和PCNA及Bcl-2信号通路相关。     

放射性核素标记的Ku70反义寡核苷酸对甲状腺癌荷瘤小鼠疗效研究

目的 研究放射性核素标记的Ku70反义寡核苷酸(ASODNs)对甲状腺癌荷瘤小鼠的放疗疗效及其作用机制.方法 采用131I标记Ku70 ASODNs,建立甲状腺癌TT细胞荷瘤小鼠模型,通过Ku70 ASODNs和(或)放射处理,观察小鼠成瘤率、死亡率和肿瘤生长情况.利用Annexin Ⅴ/PI染色后流式细胞术(FCM)...     

PBL在口腔颌面外科教学中的应用

基于问题的学习（Problem-based learning,PBL）是被广泛接受的以临床病例为先导、问题为基础、学生为主体的自学讨论式教学方法。在现行教学模式和课程体系下,进行PBL教学的探索,并通过教案编写、指导教师培训、学生的组织、教学评价及实施,形成了可行、有效的实施方法和过程,然而这种教学模式在临床医学教学中并未普及。本文介绍PBL教学的组成、特点及其在口腔颌面外科教学中的应用,为各高校开展PBL教学提供参考。     

口腔颌面外科学导论教学探讨

为使学生在现有的医学教育模式下,早期接触口腔颌面外科学,了解基本概念,培养本专业兴趣,四川大学华西口腔医学院在一年级本科学生中开设了口腔颌面外科学导论课程。授课方式为讲授和见习,内容包括口腔颌面外科的发展历史、现状及发展方向。课程受到学生的欢迎,达到预期的教学目的     

静脉给药镇静技术在2 582例口腔外科门诊手术中的临床应用

目的:分析镇静给药镇静技术用于口腔外科门诊手术患者基本资料,了解其流行病学特点,评价该技术用于口腔外科手术的效果及安全性,并总结相关经验。方法:统计北京大学口腔医院口腔颌面外科2010年1月至2018年12月间行静脉镇静下口腔颌面外科手术患者的病例资料,对其性别、年龄、疾病种类、围手术期的生命体征监测数值、镇静、镇痛用药情况、手术和镇静时长、术中镇静效果及术后顺行性遗忘情况进行总结分析。结果:9年间进行静脉镇静下口腔外科手术共2 582人次,患者年龄段集中于3.5岁至10岁及21~40岁。疾病种类最多的为多生牙,占38%(981/2 582), 阻生智牙占30%(775/2 582),其他疾病共占32%。围手术期患者心率(heart rate,HR)、平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)、呼吸频率(respiratory rate,RR)、脑电双频指数(bispectral index,BIS)的数值在患者入室、局部麻醉、手术切开、手术开始10 min及术毕的差异有统计学意义。单独使用咪达唑仑静脉镇静占69%(1 781/2 582);单独使用丙泊酚占7%(181/2 582);咪达唑仑联合丙泊酚复合镇静占24%(620/2 582)。使用的静脉麻醉性镇痛药物主要为芬太尼、氟比洛芬酯、酮咯酸氨丁三醇,分别占33%(852/2 582)、 23%(594/2 582)、 6%(157/2 582), 未使用静脉镇痛药患者占35%(907/2 582)。手术总时长平均(31.2±20.8) min,镇静给药总时长平均(38.4±19.2) min;术中总体镇静效果较好,Ramsay镇静评分多为2~4分;术后患者对局部麻醉注射、手术切开、牙钻声音的顺行性遗忘率分别为94%(2 431/2 582)、 92%(2 375/2 582)、 75%(1 452/1 936)。结论:静脉镇静下口腔颌面外科门诊手术治疗安全有效,提高了手术的舒适性,应进一步推广应用。     

PBL教学法在口腔颌面外科研究生教学中的应用

目的提高临床医学研究生临床思维和综合应用知识的能力。方法以研究生为对象,采用PBL教学法,从临床具体病例出发,以小组讨论形式,在导师的引导下综合运用所学知识解决问题,以探讨口腔颌面外科学教学改革的途径。结果所有参与者都认为PBL教学法是一种高效率的教学模式。这种教学方法增强了学生学习的主动性和分析、解决问题的能力,并培养了良好的团队精神。结论PBL教学法可以提高临床医学研究生临床思维和综合应用知识的能力,为培养合格临床医师奠定基础。     

以问题为基础学习在口腔颌面外科学教学中的应用

探讨以问题为基础学习教学在高等医学专科学校口腔医学专业学生教学中的应用效果.选择丽水学院2009级、2010级三年制口腔医学专业93名学生为实验组,2008级三年级制口腔医学专业81名学生为对照组.实验组采用以问题为基础学习结合教师讲授的教学方法,对照组采用以教师讲授为主的传统教学方法.教学结束后,通过对学生问卷调查、理论考试和实践操作考核,对两种教学方法的教学效果进行评估.问卷调查结果表明,通过以问题为基础学习结合教师讲授的教学方法,实验组学生认为各方面能力均得到了明显提高;实验组学生的理论考试和实践操作考核成绩明显高于对照组学生（P＜0.05）.以问题为基础学习结合教师讲授的教学方法在医学高等专科学校口腔医学专业口腔颌面外科学教学中效果较好。     

血管化前臂皮瓣移植在口腔颌面外科的应用

目的探讨血管化前臂皮瓣移植在口腔颌面外科的应用特点.方法 44例口腔颌面部肿瘤患者,切除肿瘤后所致的缺损, 以血管化前臂皮瓣进行修复,对局部外形及功能重建进行分析.结果 44例患者中43例成功,1例失败,成功率97.7%.结论血管化前臂皮瓣在口腔颌面外科的组织缺损的修复中具有很大的灵活性,其制备简便,安全可靠,明显优于传统的带蒂组织移植,值得推广和应用.     

以问题为基础学习教学方法在口腔颌面外科学门诊实习教学中的应用

目的探讨五年制口腔医学专业学生口腔颌面外科学门诊实习教学中以问题为基础学习教学方法的应用及其效果分析。方法以哈尔滨医科大学附属口腔医院口腔颌面外科实习的五年制口腔医学专业25名学生为研究对象,引入以问题为基础学习教学方法,将学生分成4组,每组5人～7人,在教师的指导下,组织学生结合具体患者和典型病例进行分析讨论,提出诊断及治疗计划,并通过对患者的随访评价学生的能力。结果以问题为基础学习教学方法活跃了课堂气氛,充分发挥了学生的主观能动性,学生在教师的引导下学习正确分析病例、作出正确的诊断和治疗计划,提高了实习教学的效果。结论以问题为基础学习教学方法增强了学生学习的动力,提高了学生学习的兴趣和解决实际问题的能力,通过理论知识与实践的结合培养了学生的临床思维,为医学生成为一名合格的医生奠定了基础。     

以病例为中心的立体化教学法在口腔颌面外科学中的应用

目的：探讨口腔系口腔颌面外科学理论课教学模式。方法：选择两个班级分别为实验及对照组。实验组采用以病例为中心的立体式教学法,对照组采用传统教学模式。结果：经问卷调查和考试分析,结果表明实验组成绩好与对照组,有显著差异性P〈0．05。结论：以病例为中心的立体式教学法可提高学习兴趣,增强理解,强化基础知识与临床的融合,对培养学生系统的临床思维有重要意义。