铜绿假单胞菌基因型与生物被膜形成能力的分析

通过改良的组织平板培养法及ERIC-PCR方法对48株PA生物被膜的形成进行定量分析并绘制其指纹图谱。结果发现48株PA菌株生物被膜形成能力不同,且在17%相似水平上分为A、B、C、D、E五个基因型,其中生物被膜形成能力较弱的菌株大多属于前三个基因型,而D和E基因型则包含了大部分生物被膜形成能力较强的菌株,这表明不同生物被膜形成能力的PA在5个基因型中的分布并非随机的,菌株生物被膜形成能力和基因型之间具有一定的相关性。     

不同环境条件对隆德假单胞菌生物被膜形成能力的影响

为研究环境条件对食品腐败菌隆德假单胞菌（Pseudomonas lundensis,PL）生物被膜形成能力的影响,采用微孔板结晶紫法测定不同的营养条件、接种浓度、pH、NaCl和Mg2+浓度条件下其生物被膜量,用激光共聚焦扫描显微镜观测其在不锈钢材料上的黏附和结构特征。结果表明,PL生物被膜的形成量在营养胁迫下降低,稀释TSB培养基50倍造成的营养胁迫使其生物被膜量从1.75±0.35降低至0.24±0.17。PL接种量从1.3×107 CFU/mL降至2.5×104 CFU/mL时,其生物被膜的形成量无显著差异（P>0.05）,在pH为8.0时PL形成生物被膜量最多,1.25%以上的葡萄糖、4%以上的NaCl和0.5%的Mg2+能够显著（P<0.05）抑制PL生物被膜的形成。激光共聚焦显微镜观测结果表明该菌在一定浓度下具有在不锈钢表面形成典型生物被膜的能力。PL生物被膜形成能力受营养条件、葡萄糖浓度、pH、NaCl浓度、Mg2+等环境因子的影响。     

氯化钙对食品致腐荧光假单胞菌生物被膜形成的影响

研究氯化钙（CaCl2）对食品腐败株荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）生物被膜形成特征的影响。采用结晶紫法、菌体计数、苯酚-硫酸法、共聚焦扫描显微镜和实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测Ca2＋对荧光假单胞菌的生物被膜形成、多糖分泌、被膜结构及相关基因表达的影响。结果表明,0.1 mmol/L Ca2＋刺激荧光假单胞菌生物被膜,随着浓度增加被膜形成增强,其中1 mmol/L促进最明显,而高于10 mmol/L作用减弱,并且Ca2＋不影响浮游细菌生长;同时,0.1 mmol/L和1 mmol/L Ca2＋对胞外多糖、薄膜和泳动性均呈现促进效果,而高浓度下呈现抑制;共聚焦扫描显微镜观察荧光假单胞菌对照组、1 mmol/L和20 mmol/L Ca2＋处理组的成熟生物被膜厚度分别为20.0、40.0 μm和25.0 μm,其中添加1 mmol/L Ca2＋显著增加PF07被膜厚度、菌体和胞外聚合物分泌量,使被膜结构更致密;实时荧光定量PCR检测显示,1 mmol/L Ca2＋刺激菌体黏附素lapA、藻多糖alg、鞭毛flgA基因表达量增加3～4 倍,并且Ca2＋均显著刺激AHLs合成酶luxI基因的表达,提示Ca2＋影响生物被膜与群体感应密切相关。可见,食品介质中CaCl2通过影响菌体黏附行为、胞外分泌物、基因表达导致荧光假单胞菌生物被膜形成特征和结构的改变,该研究为复杂的食品介质中腐败菌生物被膜形成和黏附提供依据。     

植物提取物对浅黄假单胞菌生物被膜的作用

本文研究具有抑菌效果的药食同源植物提取物对冷却肉中关键腐败菌——假单胞菌生物被膜的抑制、清除效果.从市售冷却肉中分离一株具有较强生物被膜形成能力的假单胞菌,经鉴定为浅黄假单胞菌8-4.采用结晶紫染色法观察蒲公英、金银花、丁香、肉桂、薄荷、桑叶等6种提取物对浅黄假单胞菌生物被膜的抑制和清除作用.结果表明:金银花提取物和蒲...     

鱼源荧光假单胞菌生物被膜形成和致腐表型的研究

荧光假单胞菌是养殖鱼类低温贮藏中的优势腐败菌。本研究比较分析5种荧光假单胞菌的生物被膜形成和腐败表型。采用结晶紫法、苯酚硫酸法、珠涡流法和荧光显微镜观察荧光假单胞菌的生物被膜形成和粘附能力,并测定细菌泳动性、蛋白酶活性、嗜铁素等致腐表型。结果表明,5株荧光假单胞菌在28℃LB肉汤中生长良好,经24 h培养后气-液界面上出现较厚的膜,在微孔板中生物被膜形成较快,其中鱼源PF01、PF06、PF07和PF10分离株在12 h含量最高,而标准菌株PFuk4在18 h最高。随着培养时间延长,细菌胞外多糖的含量逐步积累,在18～24 h达到最高,并较快粘附到不锈钢片表面,其中PF07的粘附量最高。5株荧光假单胞菌还具有较强的泳动性和蛋白酶活性,且均产嗜铁素。在PF07和PFuk4中还检测出短链高丝氨酸内酯(AHLs)活性,可能与其较高的被膜、粘附能力、泳动性及蛋白酶活性有关。本研究结果为从AHLs角度探究荧光假单胞菌的致腐机理打下良好的基础。     

桃金娘果实花色苷提取物对两种假单胞菌生物被膜的抑制

为研究桃金娘果实花色苷提取物对隆德假单胞菌(Pseudomonas lundensis)和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)生物被膜的抑制作用,采用肉汤稀释法测定了桃金娘果实花色苷提取物对两种假单胞菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,在亚抑菌浓度下采用结晶紫微孔板染色法测定了桃金娘果实花色苷提取物对两种假单胞菌的抑制作用和粘附情况。结果表明,桃金娘果实花色苷提取物对两种假单胞菌均有一定的抑制作用,对隆德假单胞菌和荧光假单胞菌的最小抑菌浓度分别为1500和1000 mg/mL,在500 mg/mL的亚抑菌浓度下,桃金娘果实花色苷提取物对隆德假单胞菌和荧光假单胞菌生物被膜具有显著抑制效果,能够显著降低两种假单胞菌在接触面上的粘附量(p<0.05)。桃金娘果实花色苷提取物具有开发为隆德假单胞菌和荧光假单胞菌生物被膜抑制剂的潜在价值。     

肉源隆德假单胞菌和致腐菌的混合生物被膜形成特征

为探究肉类优势腐败菌群的混合生物被膜互作规律,采用结晶紫法、苯酚硫酸法、二喹啉甲酸法和激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察等分析在15 ℃和25 ℃肉源分离株隆德假单胞菌(PL)与3种致腐菌的混合生物被膜特性,及对蛋白酶和消毒剂耐受性的影响。结果表明,从腐败牛肉中分离鉴定的23株菌中,假单胞菌属占43.5%,其次为热杀索丝菌、不动杆菌属和类香味菌属。将优势腐败菌隆德假单胞菌与约翰逊不动杆菌、热杀索丝菌及类香味菌共培养,发现低温显著促进双菌混合生物被膜的形成。PL、AJ、BT在15 ℃时的生物被膜形成量均显著高于25 ℃时的,混合生物被膜在15 ℃时的形成量显著高于PL单培养的。PL与AJ共培养时,被膜菌数目比单培养时高0.75~0.78 lg(CFU/cm2),15 ℃共培养时,胞外多糖分泌量增加15.67~22.01 μg/mL,与AJ、BT共培养的胞外蛋白分泌量分别增加7.35,6.70 μg/mL。CLSM观察发现PL与MP或AJ混合生物被膜聚集团聚,形成不均一结构,被膜厚度增至48.99~49.22 μm。此外,混合生物被膜的形成,显著提高假单胞菌的蛋白酶活性和化学耐受性。经0.06%次氯酸钠处理后,15 ℃时PL与AJ、BT混合被膜残留率高达95.61%,96.16%,显著高于PL单培养。结论:肉源致腐菌PL与3种致腐菌形成结构复杂的混合被膜,在低温环境下被膜菌增强对次氯酸钠的抵抗性,为探究肉源腐败微生物混合被膜的污染和控制奠定良好的基础。     

金银花和蒲公英提取物对肉源性假单胞菌生物被膜的清除作用

为明确金银花和蒲公英提取物对假单胞菌生物被膜的清除效果,采用单因素实验确定假单胞菌生物被膜的最佳培养温度、培养时间和固定方法;在此条件下,采用结晶紫法结合扫描电镜研究金银花和蒲公英提取物在不同质量浓度、不同添加时间下对内源性假单胞菌生物被膜的清除作用.结果 表明,30℃培养24 h生物被膜测定值最高.提取物对生物被膜的...     

Nisin与和厚朴酚联用对铜绿假单胞菌生物被膜的协同抑制作用

目的:铜绿假单胞菌生物被膜(BF)难以清除,是引起食品持续性污染的重要原因。Nisin作为一种天然食品防腐剂可抑制多种食源性致病菌,然而其对革兰氏阴性菌效果差。通过Nisin与和厚朴酚联用来增强对铜绿假单胞菌ATCC 9027生物被膜的抑制和清除能力,并探究其作用机制。方法:首先,筛选可抑制铜绿假单胞菌BF的中药成分及最小抑制浓度;然后评估Nisin与和厚朴酚联用对铜绿假单胞菌生物被膜的协同抑制作用及其效果随时间的变化,以及对BF结构、组成成分、相关基因表达的影响。结果:和厚朴酚对铜绿假单胞菌ATCC 9027生物被膜的抑制效果最强,选择其作为与Nisin联用的中药成分。Nisin与和厚朴酚的MBIC50分别为1 mg/mL和12.5 μg/mL。多个组合均有协同抑制作用,其中1.5625 μg/mL和厚朴酚与0.125 mg/mL Nisin对BF的协同抑制效果最佳,在18 h达到最高,并且二者联用显著影响BF结构,降低胞外多糖和eDNA的含量,同时BF相关基因lasR、pelA、algC、pqsA、lasI的表达量降低。结论:Nisin与和厚朴酚联用对铜绿假单胞菌ATCC9027生物被膜具有协同抑制作用,其可降低BF相关基因转录水平以减少EPS和eDNA的分泌,从而抑制和清除BF。本研究旨在为减少由铜绿假单胞菌生物被膜引起的食品安全问题提供解决策略。     

冷却猪肉及托盘表面细菌生物被膜分析和肉源荧光假单胞菌的鉴定与被膜研究

为研究冷却猪肉及其接触面中细菌生物被膜能力并探讨肉类特定腐败菌的生物被膜特征,分析了腐败的冷却肉和销售托盘表面的细菌生物被膜形成能力;利用形态学观察、16S r DNA分析和VITEK2微生物鉴定系统鉴定了冷却肉中一株生物被膜能力较强的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens);测定了该菌在培养基和猪肉浸提液中的生物被膜能力;用激光共聚焦和扫描电子显微镜观测了其生物被膜的结构特征。结果发现:冷却肉中及其销售托盘表面的细菌能够形成生物被膜的比例较高,37%和45%的细菌具有较强生物被膜形成能力。肉源性荧光假单胞菌能够在培养基和肉液中形成大量生物被膜,具有较强的生物被膜能力。显微成像结果表明荧光假单胞菌在培养6 h后有明显黏附,18 h后多糖分泌增多、菌体堆积并形成具有生物功能的立体生物被膜。这些特点可能有利于荧光假单胞菌在冷却肉表面黏附并成为优势腐败菌。     

离子色谱法检测食品添加剂焦碳酸二甲酯中的氯离子

目的:建立离子色谱法检测食品添加剂焦碳酸二甲酯(DMDC)中的杂质氯离子。方法:样品用水溶解超声定容后,采用SH-AC-1阴离子交换柱(25 cm×4.6 mm,7μm)分离,抑制电导法检测。分别选用碳酸钠,四硼酸钠为淋洗液。考察了淋洗液种类,浓度对氯离子与干扰离子的分离度的影响。最佳色谱条件为:采用0.005 mol/L的四硼酸钠水溶液作为淋洗液,流速1.0 mL/min。结果:在此条件下,样品中的氯离子可以和其他的干扰离子分离,而且分离度达3.0以上,峰形对称。在(0.1～ 5.0 mg/L)范围内,可获得良好的线性关系,线性相关系数大于0.999;氯离子检出限(S/N=3)达(0.007 mg/L),加标回收率达97.5%以上,重现性好。结论:该方法简便快速灵敏准确,可以用于食品添加剂DMDC中氯离子测定。     

DMDC发酵前处理对荔枝酒发酵特性的影响

本文以发酵荔枝酒为研究对象,比较了二甲基二碳酸盐(DMDC)、亚硫酸盐以及巴氏杀菌发酵前处理对荔枝汁中微生物菌群、荔枝酒主发酵6 d期间可滴定酸、乙醇、高级醇、色泽、多酚以及主发酵结束后各挥发性风味物质的影响。结果表明:与对照组相比,添加DMDC和亚硫酸盐以及巴氏杀菌处理均能很好的抑制荔枝汁中天然污染菌的生长,减缓荔枝果酒p H的下降和可滴定酸的升高,提高荔枝发酵酒的乙醇得率。其中,DMDC对荔枝汁中酵母菌、乳酸菌和霉菌的杀菌能力显著强于亚硫酸盐(p0.05)。添加亚硫酸盐的实验组多酚保留率显著高于其它三个发酵前处理组(p0.05),△E*变化最小,能起到明显护色效果;巴氏杀菌使得荔枝酒典型风味成分损失较大。综合而言,DMDC是可以代替或部分代替亚硫酸盐和巴氏杀菌在荔枝酒中推广应用。     

DMDC联合Nisin对模拟果汁中肠膜状明串珠菌细胞膜功能的影响

本文研究了二甲基二碳酸盐(DMDC)和Nisin处理对模拟果汁中肠膜状明串珠菌的杀菌效果及其细胞膜功能的影响。结果表明:DMDC联合Nisin作用于该菌时的部分杀菌浓度指数为0.38,小于0.50,两者之间具有很好的协同杀菌作用。扫描电镜分析发现该菌经DMDC和Nisin处理后其细胞形态没有发生明显变化。该菌经DMDC处理后仅有个别菌体细胞的膜通透性出现增加,而该菌经Nisin处理后,约7%菌体细胞的膜通透性增加。Nisin处理虽能改变该菌的细胞膜通透性,增加胞外极性物质的摄入,但并不能明显促进胞内物质的流失,高浓度的DMDC处理能导致该菌溶液的紫外吸收值增加约60%。DMDC和Nisin两者对该菌细胞内物质的流失、细胞膜的通透性的增加和胞内p H的下降没有相互促进作用,但DMDC和Nisin的联合作用能促进该菌细胞内脱氢酶的进一步失活。     

超高压均质联合二甲基二碳酸盐对荔枝汁中污染菌及其微生物货架期的影响

研究超高压均质和二甲基二碳酸盐(DMDC)两者单独或联合处理对新鲜荔枝汁的杀菌效果。结果表明:200MPa高压均质处理对荔枝汁中污染菌具有很好的杀菌效果,且随着均质次数的增加,荔枝中污染菌逐渐减少(p<0.05)。但高压均质3次后,残留的污染菌在荔枝汁低温贮藏期间能很快的恢复生长,其微生物货架期不超过15d。新鲜荔枝汁中添加250mg/L的DMDC后,荔枝汁中污染菌数,特别是酵母菌,均呈线性快速下降(p<0.05)。添加DMDC12h后,各种菌的下降不再明显,并在进一步的低温贮藏期间,残留的明串珠菌属表现出较快的生长,其微生物货架期也未超过27d。向高压均质处理后的荔枝汁中添加DMDC后,荔枝汁中仅酵母菌下降明显(p<0.05),而菌落总数和乳酸菌数下降不明显(p>0.05),但其微生物货架期明显比单独高压均质和单独DMDC处理的货架期长,说明两者还是具有一定的联合相加作用。此外,对DMDC和高压均质处理后荔枝汁中残留的污染菌采用16S rDNA或18S rDNA法进行鉴定后,发现主要是芽孢杆菌属、毛霉属和明串珠菌属菌株。      

二甲基二碳酸盐用于鲜切胡萝卜杀菌的条件优化研究

应用响应面法优化了二甲基二碳酸盐(DMDC)用于鲜切胡萝卜杀菌的条件。运用统计软件Design-Expert8.0.5b中的Box-Behnken响应面设计,以DMDC浓度、料液比、杀菌时间为自变量,以杀灭的细菌总数的死亡数量级(Y1)和杀灭的霉菌和酵母菌总数的死亡数量级(Y2)为响应值,建立了DMDC杀菌的回归模型,并对其进行了实验验证;同时,利用模型的响应面对影响DMDC杀菌的关键环节及其相互作用进行了深入的探讨。实验得到优化后的杀菌条件参数为:DMDC浓度200mg/L、料液比1:3、杀菌时间2min,得到杀灭细菌和杀灭霉菌和酵母的优化实验结果为:Y1=3.515,Y2=2.632。     

中温联合二甲基二碳酸盐对荔枝原汁品质的影响

该研究比较了二甲基二碳酸盐（Dimethyl Dicarbonate,DMDC）、中温及两者联合处理对荔枝原汁微生物及理化指标的影响。结果表明：荔枝原汁经DMDC或中温单独处理灭菌效果较差,联合处理组残留微生物最少,菌落总数、乳酸菌分别为0.41、0.36 lg CFU/mL,酵母菌和霉菌未检出;与新鲜荔枝汁相比,DMDC处理对荔枝原汁品质无影响,中温及联合处理组抗坏血酸和色泽无明显变化,总酚（总黄酮）分别增加了40.16%（7.16%）、38.01%（4.35%）;铁离子还原能力（清除DPPH自由基能力）分别提高了15.55%（11.85%）、7.61%（3.71%）,说明中温能促进酚类物质的释放,提高抗氧化活性。相关性分析显示,荔枝原汁的∆E与Vc呈负相关,抗氧化活性与总酚、总黄酮呈正相关;聚类热图分析与感官评价表明,联合处理能促进风味物质的释放,且不会造成明显的蒸煮味;联合处理组在4 ℃贮藏21 d的菌落总数均小于100 CFU/mL。综上,中温联合DMDC处理对荔枝原汁微生物有较好的灭菌效果,且对品质无不良影响,4 ℃贮藏期可达21 d,该研究为高品质荔枝原汁产业化提供了科学依据。