人胎儿脾胸腺细胞培养上清sIL－2R的分析

应用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法分析了不同胎龄脾、胸腺细胞培养上清和血清ｓＩＬ－２Ｒ的变化。结果显示：（１）胎儿脾、胸腺细胞体外在ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３刺激下，上清中可产生高水平的ｓＩＬ－２Ｒ。并且随培养时间的延长显著增高（Ｐ＜０．０１）；（２）胎儿脾细胞培养上清ＳＩＬ－２Ｒ明显高于胸腺（Ｐ＜０．０１）；（３）胎儿血清ｓＩＬ－２Ｒ显著高于成人，并随胎龄的增大逐步下降．胎龄与ｓＩＬ－２Ｒ水平呈负相关。结果提示：ｓＩＬ－２Ｒ不仅是胎儿淋巴细胞活化的标志，还可能在淋巴细胞分化、成熟过程中发挥免疫调节作用。胎儿血清ｓＩＬ－２Ｒ增高并随胎龄成熟而下降，推测可能参与胚胎期免疫耐受。     

人胎儿脾胸腺细胞培养上清sIL—2R的分析

应用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法分析了不同胎龄脾、胸腺细胞培养上清和血清ｓＩＬ－２Ｒ的变化。结果显示：（１）胎儿脾、胸腺细胞体外在ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３刺激下，上清中可产生高水平的ｓＩＬ－２Ｒ．并且随培养时间的延长显著增高（Ｐ＜０．０１）；（２）胎儿腺细胞培养上清ｓｉｌ－２Ｒ水平呈负相关。结果提示：ｓＩＬ－２Ｒ不仅是胎儿淋巴细胞活化的标志，还可能在淋巴细胞分化，成熟过程中发挥免疫调节作用。胎儿血清ｓＩＬ－     

应用Protein G纯化细胞培养上清中的大鼠单抗

用ｍｉｎｉＰｅｒｍ系统旋转连续培养大鼠杂交瘤细胞株,获得大量含抗鼠ＩＬ－４（ＩｇＧ１）和ＩＬ－５（ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ）抗体的培养上清;经ＰＭ１０膜超滤,５０％饱和硫酸铵沉淀及链球菌Ｃ蛋白－琼脂糖亲和层析纯化ＩｇＧ单抗。结果每升杂交瘤细胞２上清得到大鼠,ＩｇＧ２２－３６ｍｇ;１次可纯化抗体２０ｍｇ;经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及ＥＬＩＳＡ鉴定,所得到的抗体纯度高,活性保持良好。     

环磷酰胺诱发大鼠胸腺细胞凋亡的研究

目的：研究环磷酰胺的免疫抑制作用机制。方法：以大鼠胸腺为对象,采用细胞凋亡的原位特异性染色及ＤＮＡ凝胶电泳的方法,观察没剂量、不财时间环磷酰胺处理后胸腺细胞的凋亡现象。结果：剂量为２０和７０ｍｋ／ｋｇ的环磷酰胺可引起广泛的胸腺细胞凋亡。该作用最早发生在环磷酰胺处理后的８Ｈ,１２～２４最明显,４８Ｈ消失。结论：环磷酰胺的免疫作用可能是通过诱导免疫细胞凋亡而产生的。     

大鼠胸腺的嗜金属性细胞

非淋巴细胞参与二级淋巴器官的免疫学反应。它们存在于脾脏白髓和淋巴结的不同部位,主要与T细胞和B细胞的微环境有关。根据形态学、酶和功能特征可把非淋巴细胞分为树突状网状细胞(DRC)、嵌合细胞(IDC)和金属性细胞。作者用鼠龄2.5月的Wistar大鼠8只研究了正常情况下大鼠胸腺中金属性细胞的分布和形态学特征。方法是:将胸腺用Bouin     

细胞培养用血清的实验研究

目前,细胞培养技术已广泛应用于实验室,培养要求辅加的动物血清较普通的是胎牛血清或新生牛血清。牛血清来源困难,价格昂贵,而且市售的血清质量也不稳定。本室对细胞培养液的辅加成份进行了实验研究,结果证明猪血清、胎浆、稀土等在支持细胞培养和增殖方面是可以起到辅助或替代作用的。 材 料 与 方 法 一、胎浆3～4个月水囊引产的胎儿,生理盐水洗涤,加等体积Hank’s液匀浆,-60℃冻溶后,离心6000r/min,30min,收取上清过滤,56℃30min灭活。 二、氯化释土(RECl_3·6H_2O)MW     

糖皮质激素诱导大鼠胸腺细胞程序性死亡研究

用甲基强的松龙（ＭＰＳ）与大鼠胸腺细胞共同培养４ｈ后胸腺细胞超微结构显示胞浆及核固缩，形成大量空泡，而线粒体等细胞器结构变化不大，ＤＮＡ电泳分析有大量小分子片段，分子量主国１８０ｂｐ的整倍数，呈梯状结构。结果提示ＭＰＳ可诱导胸腺细胞程序性死亡。     

地塞米松诱导大鼠胸腺细胞凋亡

细胞凋亡是细胞受到特异刺激后启动内在“自杀”程序而引起的一种控制性死亡。为观察糖皮质激素对免疫器官──胸腺的调节作用,本文加地塞米松与大鼠胸腺细胞共同孵育,胸腺细胞是现了凋亡的典型形态学改变;提取该培养细胞的ＤＮＡ进行琼脂糖凝胶电泳可见典型“阶梯状”条带,提供了该细胞发生凋亡的生物化学依据。本研究结果表明糖质激素能诱导胸腺细胞凋亡。     

基因芯片筛选抗胸腺细胞血清性肾炎大鼠肾组织基因表达差异的初步研究

目的： 利用基因芯片检查大鼠系膜增生性肾炎，即抗胸腺细胞血清性肾炎(ATSN)模型大鼠发病 40 min 和 5 d 时肾组织相关基因的表达情况，探讨ATSN大鼠不同时相肾组织基因表达的差异并作功能分析。 方法： 用抗胸腺细胞抗血清（ATS）复制大鼠ATSN模型，抽提发病 40 min 和 5 d 时肾组织RNA，分别用逆转录合成荧光分子掺入的cDNA作探针进行基因芯片杂交。用Agilent 扫描仪扫描，Imagene软件读取数据，最后用Genespring进行normalize处理和差异表达基因的筛选。差异基因筛选标准为实验组/对照组比值（ratio）>或=2为上调基因，实验组/对照组ratio<或=0.5为下调基因。然后选取上调和下调基因登录GenBank查找其相关功能。 结果： 在 9 234 个大鼠基因中（去除质控基因），ATSN大鼠 40 min 时肾组织上调基因为341个，其中部分为凋亡相关的调控基因，部分为增生相关基因及一些与信号转导有关的基因；下调基因为392个，其中一些是酶类基因，部分为生长因子和细胞因子受体基因等，其余大多上调和下调基因功能不详。ATSN发病 5 d 时，肾组织上调基因是213个，包括增生相关基因、信号转导相关基因等；下调基因119个，其中部分为酶类和细胞因子相关基因。5 d 时上调和下调基因大多功能不清楚。 结论： 大鼠ATSN发病早期（40 min），致病相关基因已被激活（如凋亡和增生相关基因），其中相关信号转导分子基因也表达上调，而在ATSN大鼠发病 5 d 时，基因表达谱有所改变，其中涉及的基因多为增生相关基因和信号转导相关基因。     

胚胎胸腺的替代治疗

目的 探索小鼠同种异体胚胎胸腺移植可否作为T淋巴细胞缺陷的治疗方法.方法 选择切除C57小鼠的胸腺作为制作细胞免疫缺陷的模型.30只小鼠被分为三组,每组10只.第一组为正常小鼠作为对照组;第二组行胸腺切除术,作为模型对照组;第三组是胚胎胸腺移植为实验组.检测脾脏总T细胞计数及其平均体重所含T细胞数;流式细胞术检测Th(helper T cell)细胞,Tc(cytotoxic T cell)细胞以及调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)的含量,并用简化的RT-PCR方法检测T细胞DNA删除环(TRECs).结果 三组小鼠分别剩余9只、8只,8只.T淋巴细胞总数三组分别为(16.24±2.98)×107、(4.58±1.29)×107、(9.92±2.24)×107.平均体重T淋巴细胞含量分别为(7.53±1.35)×106、(2.38±0.66)×106、(5.23±1.10)×106.两组都有统计学意义(P<0.05).对照组含量最高,胸腺切除组含量最少,胚胎胸腺移植组位于两者之间.T淋巴细胞亚群分析中,三组Th细胞分别为(7.19±0.38)%、(1.51±0.37)%、(3.33±0.40)%;Tc细胞为(7.21±0.41)%、(1.31±0.32)%、(3.41±0.48)%;Tregs为(2.17±0.21)%、(0.48±0.12)%、(1.12±0.12)%.Th,Tc以及Tregs含量在三组间有统计学意义(P<0.05),A组含量最高,B组含量最少,C组位于两者之间.RT-PCR分析中,ΔΔCT值进行统计分析及进行三组ΔΔCT值的总体趋势的比较.ΔΔCT值对照组为17.04±1.69,胸腺切除组为9.53±0.84;胚胎胸腺移植组为12.45±1.51,三组的差异有统计学意义(P<0.05).结论 胚胎胸腺移植可以提高细胞免疫功能的恢复,但无法使其恢复到正常水平.     

出生前后大鼠胸腺的体视学初步分析

<正> SD大鼠第16天的胎鼠(F16)和生后1 天(N_1)和5天(N5)的乳鼠,取其胸腺称重,测比重计算色埋前体积。组织切成小块后用戊二醛和四氧化锇先后固定,树脂包埋,作1μm切片,甲苯胺蓝染色,油镜观     

睾丸切除对小鼠胸腺哺育细胞影响的初步研究

业已证明,睾丸切除(以下简称睾切)动物的胸腺及外周淋巴组织增大,这些解剖学变化与免疫反应尤其与细胞免疫反应加强有关;而给睾切动物雄性激素后则出现相反     

猪苓多糖对S180细胞培养上清免疫抑制作用影响的研究

目的 :研究猪苓多糖对肿瘤细胞系S180培养上清免疫抑制作用的影响。方法 :用MTT比色法检测有或无猪苓多糖作用的肿瘤细胞S180培养上清 (简称肿瘤上清 ) ,对ConA诱导的小鼠脾细胞增殖和IL 2产生 ,对小鼠脾细胞的杀伤活性 ,以及对CTLL 2细胞对IL 2反应性的影响。用流式细胞仪检测该培养上清对小鼠脾细胞表面IL 2Rα表达的影响。结果 :无猪苓多糖作用的肿瘤上清可强烈抑制上述 5项指标 ;而猪苓多糖作用的肿瘤上清则可明显上调上述方法中所测 5项指标。若先用含猪苓多糖培养液培养肿瘤细胞 2 4h或 48h ,而后洗去或不洗去猪苓多糖 ,再培养肿瘤细胞 2 4h ,所获肿瘤上清也可明显上调上述 5项指标。结论 :猪苓多糖可抵消肿瘤上清的免疫抑制作用 ,下调肿瘤细胞S180合成和 /或分泌免疫抑制物质     

MCF-7 乳腺癌细胞培养上清对树突状细胞抑制作用的研究

目的:应用MCF-7乳腺癌细胞分泌的上清液培养正常外周血树突状细胞,探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌因子对正常树突状细胞分化、成熟及功能的影响.方法:应用MCF-7 乳腺癌细胞的培养上清和GM-CSF、IL-4及TNF-α培养正常外周血单个核细胞,检测所诱导的树突状细胞(DC)及其致敏的CTL活性.结果:MCF-7 乳腺癌细胞培养上清能够明显抑制正常树突状细胞的分化成熟及抗原提呈能力,CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达明显降低,与正常对照差异显著(P＜0.01);CTL对MCF-7细胞杀伤活性为17.35%与对照组56.14%比较差异显著(P＜0.01);IL-12分泌和共刺激T淋巴细胞所分泌的IFN-γ明显降低(P＜0.01).结论:MCF-7 乳腺癌细胞上清明显抑制所共培养的树突状细胞的分化、成熟及抗原提呈能力.     

胸腺细胞与胸腺基质细胞的相互作用

胸腺内Ｔ细胞依赖胸腺微环境提供的多种信号完成正常发育过程。然而研究发现无论在自然或实验条件下胸腺细胞的减少均可导致胸腺上皮细胞减少，从而提示胸腺微环境和胸腺细胞之间存在相互依赖关系。即Ｔ细胞的发育依赖于胸腺微环境同时Ｔ细胞的存在对形成和维持正常的胸腺微环境也是必需的。     

重症肌无力患者胸腺细胞基因突变的初步探讨

目的 探讨重症肌无力(MG)胸腺细胞异常增生的原因，揭示其发生机制。方法 利用患者手术摘除的胸腺组织，分离胸腺细胞，进行体外培养并用植物血凝素(PHA)或地塞米松、雌激素诱导48h，培养前后均从胸腺细胞提取RNA，反转录后，用三对引物分段扩增Fas cDNA，用银染法进行单链多态构象性分析(SSCP)。结果 正常人胸腺细胞诱导后均可见Fas mRNA表达，大约有25％的MG患者胸腺细胞体外诱导未见Fas mRNA表达，部分Fas mRNA表达与未诱导时电泳条带存在差异。结论 部分重症肌无力患者胸腺细胞Fas基因存在突变，这种突变可能是胸腺细胞异常增生的原因之一，与疾病的发生发展有关。     

小鼠嗅鞘细胞培养的初步研究

目的:研究小鼠嗅鞘细胞(OECs)体外培养的不同方法,为获取数量多、活性好、形态优的嗅鞘细胞提供一定的实验基础。方法:4只出生2～3个月的BALB/c小鼠,经枕骨大孔取嗅球,剥离嗅球外周两层制成细胞悬液。采取未纯化培养对照组、一次差速贴壁结合阿糖胞苷(Ara-c)纯化与多聚左旋赖氨酸包被培养板培养组(纯化包被组)和一次差速贴壁结合Ara-c纯化与未用多聚左旋赖氨酸包被培养板培养组(纯化未包被组)分别培养小鼠OECs,观察其原代和传代培养的细胞生长状况及形态,并进行免疫细胞化学鉴定。结果:纯化未包被组OECs早中期无论数量还是形态都优于纯化包被组,而未纯化对照组的OECs早中期数量明显优于纯化组。结论:一次差速贴壁结合Ara-c纯化未包被进行小鼠OECs培养是一种简捷有效地方法。     

放线菌酮诱导大鼠胸腺细胞凋亡的电镜观察

利用透射电镜详细观察了放线菌酮体内诱导大鼠腺细胞凋亡的形态学变化。观察显示，腹腔注射放线菌酮４小时后，大鼠胸腺细胞发生凋亡，凋亡胸腺细胞胞核和胞质发生一系列形态学变化，产生凋亡小体。主要表现为染色质断裂、浓缩、边集、大部分细胞核变成花瓣状，其它细胞核变成半月状、黑洞样和空泡状；粗面内质网大量增殖，并包裹细胞成分形成自噬体；线粒体增多，嵴紊乱并空泡化。凋亡细胞及其形成的凋亡小体被其它细胞吞噬清除。结     

肉苁蓉对败血症大鼠胸腺细胞的保护作用

目的：探讨肉苁蓉提取物对败血症休克大鼠胸腺细胞凋亡的影响及其可能机制。方法: 盲肠结扎穿孔术（CLP）造成大鼠败血症休克。防治组术前14 d开始给药（1.25 g/kg），分别于术后12 h、24 h取材。流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位，分光光度法测定细胞线粒体ATP酶活力。结果 预先给予肉苁蓉提取物的大鼠，行CLP术后12、24 h胸腺细胞凋亡率均低于模型组（P<0.01），线粒体膜电位和ATP酶活力则显著上升（P<0.01）。结论： 肉苁蓉提取物对败血症休克时胸腺细胞有保护作用，其机制可能是提高ATP酶活力，维持了细胞线粒体膜电位。