乳糖化-去甲斑蝥素纳米粒的肝靶向抗癌活性研究

目的 研究新型的乳糖化-去甲斑蝥素纳米粒 (Lac-NCTD-NPs) 的体内外抗癌活性。方法 通过 MTT 法考察去甲斑蝥素 (NCTD)、乳糖化-去甲斑蝥素 (Lac-NCTD) 及 Lac-NCTD-NPs 对肿瘤细胞株 HepG2、SMMC-7721 和 SGC-7901 的细胞毒作用和半乳糖化小牛血清 (Gal-FBS) 的竞争性抑制作用;采用 HPLC 法评价肝肿瘤细胞 SMMC-7721 对 Lac-NCTD 的摄取效果;通过 H₂₂ 荷瘤小鼠模型考察药物体内对肝癌的抑制作用。结果 体外细胞毒试验结果显示,对 HepG2 和 SMMC-7721 细胞,培养 48 h 时 Lac-NCTD-NPs 的 IC₅₀ 最低,细胞毒作用最强,其次是 Lac-NCTD,且均能显著地被 Gal-FBS 抑制;对 SGC-7901 细胞,Lac-NCTD-NPs 和 Lac-NCTD 的细胞毒作用并不比 NCTD 强,且不受 Gal-FBS 的影响;培养 12 h 后 SMMC-7721 对 Lac-NCTD 的摄取量为 3.89 μg (7.02×10^-3 μmol,1×10⁶ 个细胞);小鼠体内抑瘤实验结果显示 Lac-NCTD-NPs 中剂量的抑瘤率为 63.9%,显著高于相同浓度的 NCTD 和 Lac-NCTD。结论 Lac-NCTD-NPs 能有效地靶向于肝肿瘤组织,抑制肿瘤的生长,是一种强的具有体内外抗癌活性的新型肝靶向性制剂。     

川芎嗪在Caco-2细胞单层模型的转运特征及对P-糖蛋白表达的影响

目的 研究川芎嗪在Caco-2细胞单层模型的转运特征以及对P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法 MTT法确定川芎嗪对Caco-2细胞单层模型作用的安全浓度范围;以Caco-2细胞单层模型研究川芎嗪的双向转运机制,以表观渗透系数（P_app）为检测指标,考察时间、药物浓度以及P-gp抑制剂维拉帕米对川芎嗪转运的影响;Western blotting法检测川芎嗪对P-gp表达的影响。结果 从顶侧（AP）到底侧（BL）（AP→BL）,川芎嗪的P_app＞10^?6 cm/s,表明其吸收性良好;川芎嗪的转运量与其浓度和时间呈正相关,且川芎嗪AP→BL的转运量明显大于BL→AP的转运量;川芎嗪不仅受到P-gp的外排作用,同时也抑制P-gp表达。结论 川芎嗪在Caco-2细胞模型的转运方式为被动转运,且受到P-gp的外排作用,并对P-gp的表达有抑制作用。     

3-乙酰基-11-羰基-β-乙酰乳香酸在Caco-2和MDCK细胞模型中的吸收研究

目的 研究乳香提取物中3-乙酰基-11-羰基-β-乙酰乳香酸（AKBA）在Caco-2、MDCK-MDR1和MDCK-Wild细胞模型中的吸收转运机制。方法 利用Caco-2、MDCK-MDR1和MDCK-Wild细胞模型,研究AKBA由细胞层顶端（AP）→基底端（BL）和BL→AP的双向转运过程;采用LC-MS/MS法测定AKBA的量,计算表观渗透系数（P_app）。结果 在Caco-2细胞模型中,50 μmol/L AKBA 由AP→BL、BL→AP的P_app分别为7.9×10^?7、1.5×10^?7 cm/s,在MDCK-MDR1细胞模型中,50 μmol/L AKBA由AP→BL、BL→AP的P_app分别为2.6×10^?7、0.8×10^?7 cm/s,在MDCK-Wild细胞模型中,50μmol/L AKBA由AP→BL、BL→AP的P_app分别为2.4×10^?7、0.6×10^?7 cm/s,3种细胞模型中外排率均小于2。结论 AKBA在肠道中吸收不良,不是P-糖蛋白的底物,推测其通过摄入型主动转运和被动扩散两种机制透过小肠上皮细胞。     

阿魏酸在Caco-2 细胞模型的通透性及其在大鼠体内吸收特性研究

目的 研究阿魏酸在大鼠体内的绝对生物利用度（F_abs）及其吸收特点。方法 建立人源结肠腺癌细胞系Caco-2单层细胞模型,LC-MS/MS法分析阿魏酸由绒毛面（AP侧）到基底面（BL侧）和由BL侧到AP侧两个方向的转运过程;用大鼠原位肠肝血管灌流模型研究阿魏酸在肠道的吸收率;通过测定大鼠ig和iv阿魏酸后的血药浓度计算其F_abs。结果 阿魏酸的表观渗透系数（P_app）分别为P_{app AP→BL}：（10.24±1.58）×10^?6 cm/s,P_{app BL→AP}：（11.25±1.45）×10^?6 cm/s;在肠肝血管灌流模型中的吸收率为59.00%;在大鼠体内的F_abs为64.91%。结论 LC-MS/MS定量分析法灵敏、简单、专属性强;阿魏酸在Caco-2细胞具有良好的转运,在肠肝血管灌流模型中吸收速度快,主要吸收部位为小肠,阿魏酸ig给药后在大鼠体内达峰时间短,吸收、分布、消除较快。     

穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制

目的 研究穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制。方法 观察穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中的双向转运,考察时间、药物浓度、温度和抑制剂对穿心莲内酯吸收的影响。用LC/MS/MS检测药物浓度,计算其表观渗透系数（P_app）。结果 穿心莲内酯在Caco-2细胞模型中,随时间和浓度的增加,药物吸收呈饱和趋势,且受温度和碘乙酰胺影响,但不受外排抑制剂维拉帕米和MK-571的影响。结论 穿心莲内酯在Caco-2细胞中的吸收主要是由载体介导的主动转运。     

毛蕊异黄酮的体外转运研究及对多药耐药基因MDR1表达的影响

目的：研究毛蕊异黄酮在体外模型Caco-2细胞单层模型的转运特征及其对多药耐药基因MDR1表达的影响。方法：采用MTT法确定毛蕊异黄酮对Caco-2细胞模型作用的安全浓度范围;考察浓度、pH、温度及P-gp抑制剂(维拉帕米)和能量代谢抑制剂(叠氮化钠)对毛蕊异黄酮转运的影响;抑制多药耐药基因MDR1对毛蕊异黄酮转运的影响。结果：从顶侧(AP)到底侧(BL)(AP→BL),毛蕊异黄酮的P_app＞10_?6cm/s,表明其吸收性良好;毛蕊异黄酮的转运与其浓度和时间呈正相关,4℃下毛蕊异黄酮的P_app与37、25℃下的Papp有显著差异,pH=9时的P_app与pH=5、7.4时的P_app值也有明显差异(p＜0.01)。毛蕊异黄酮的转运不受MDR1基因的影响;叠毛蕊异黄酮的P_appBL→AP/P_appAP→BL＜1.5不受能量代谢异常的影响。结论：毛蕊异黄酮在Caco-2细胞模型的转运方式为被动扩散,且不受P-gp和能量代谢的影响,低温和碱性环境下不利于药物的吸收。     

苦参总生物碱及其单体在Caco-2细胞模型的吸收特征研究

目的 建立同时测定Caco-2细胞模型中苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的HPLC方法,探讨苦参总生物碱在Caco-2细胞模型的吸收机制。方法 利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型,研究苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱由细胞绒毛膜面供给侧（AP）→基底外侧（BL）和BL→AP侧两个方向的转运过程;HPLC-UV法测定上述3个生物碱的量;计算转运参数和表观渗透系数（P_app）。结果 苦参总碱给药后,苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱由AP→BL侧的P_app分别为（1.098±0.092）×10^?5、（1.434±0.098）×10^?5、（3.87±0.64）×10^?6cm/s,由BL→AP侧的P_app分别为（1.104±0.098）×10^?5、（1.034±0.079）×10^?5、（2.75±0.33）×10^?6 cm/s,与文献报道的单体化合物给药相比,氧化槐果碱和氧化苦参碱双向转运的P_app明显增大。苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱的表观渗透率值分别为1.01、0.72、0.71。结论 苦参总生物碱中苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱仍主要以被动吸收方式进入体内,但比各单体给药吸收更好。     

6个线型呋喃香豆素类化合物在人源肠Caco-2细胞模型的吸收转运研究

目的 研究花椒毒酚（1）、花椒毒素（2）、欧前胡素（3）、异欧前胡素（4）、8-甲氧基异欧前胡素（蛇床灵,5）和异茴芹素（6）6个线型呋喃香豆素类化合物在人源肠Caco-2细胞单层模型的吸收特性。方法 应用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型测试6个香豆素类化合物从绒毛面（AP端）到基底面（BL端）、BL端到AP端2个方向的转运过程。应用偶联紫外检测器的高效液相色谱法对上述6个香豆素进行定量分析,计算转运参数和表观渗透系数（P_app）,并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔进行比较。根据1～6、补骨脂素（7）、佛手酚（8）、佛手酚葡萄糖苷（9）、佛手内酯（10）、紫花前胡苷（11）、紫花前胡苷元（12）、前胡苷V（13）、伞形花内酯（14）、甲氧基欧芹素（15）、当归醇-A（16）、当归醇-B（17）在Caco-2细胞单层模型的吸收特性,总结这些香豆素类化合物结构、亲脂性与吸收的规律。结果 6个香豆素类化合物双向转运的P_app值皆在1×10^－5 cm/s数量级,与在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的普萘洛尔的P_app值在同一数量级,且皆通过被动吸收机制通过Caco-2细胞单层。结论 6个香豆素皆属于吸收良好的化合物。香豆素1～17的lg P_{app AP→BL}与lg D（pH 7.35）呈显著S型相关,主要通过被动扩散机制吸收转运。     

脱水穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制

目的 研究脱水穿心莲内酯（DAL）在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制。方法 观察DAL在Caco-2细胞单层模型中的双向转运,考察时间、DAL浓度、温度和P-糖蛋白（P-gp）抑制剂维拉帕米对DAL吸收的影响。采用LC/MS/MS方法检测DAL浓度,计算其表观渗透系数（P_app）。结果 DAL在Caco-2细胞模型中的双向转运,随时间和浓度的增加,DAL的吸收具有时间、浓度依赖性,未出现饱和趋势;不受温度和P-gp抑制剂维拉帕米的影响。结论 DAL在Caco-2细胞模型中的吸收主要是靠浓度扩散的被动转运。     

UPLC法检测染料木黄酮在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征

目的 研究染料木黄酮在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。方法 将染料木黄酮的细胞样品经高速离心后取上清液,以乙腈-醋酸铵水溶液为流动相,以睾丸酮为内标,采用超高效液相色谱（ultra performance liquid chromatography,UPLC）法检测。考察时间、pH值等因素对染料木黄酮吸收的影响,测定透过Caco-2单细胞层的染料木黄酮浓度并计算其表观渗透系数（P_app）。结果 Caco-2细胞对染料木黄酮的吸收在1 h内呈线性,药物摄取时间定为1 h;pH值对染料木黄酮的吸收没有显著影响。染料木黄酮的线性范围为0.625～40 μmol/L,日间、日内精密度均小于15%。P_app从基顶侧（apical,AP）到基底侧（basolateral,BL）为1.51×10^?5 cm/s,从BL侧到AP侧为1.84×10^?5 cm/s,其渗透系数P_app（BL-AP）/P_app（AP-BL）为1.22。结论 染料木黄酮在肠道的吸收主要以被动扩散为主,UPLC检测方法简单、灵敏度高,可用于研究染料木黄酮在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。     

补阳还五汤黄酮类有效成分在Caco-2细胞单层模型的转运特征及对CYP450酶活性的影响

目的研究补阳还五汤3个黄酮类有效成分(羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮、芒柄花素)在Caco-2细胞单层模型中的转运特征及其在大鼠肝微粒体中对CYP450酶亚型活性的影响。方法 MTT法研究药物在Caco-2细胞单层模型的安全浓度范围,以Caco-2细胞单层模型研究黄酮类有效成分的双向转运机制,以表观渗透系数(Papp)为检测指标,考察时间、浓度以及P-gp抑制剂维拉帕米对转运的影响,利用Cocktail探针法研究药物对CYP450亚型的体外抑制作用。结果从顶侧(apical,AP)到底外侧(basolateral,BL)(AP→BL),芒柄花素、毛蕊异黄酮的Papp>10-6 cm/s,表明其吸收性良好,羟基红花黄色素A的Papp为10-6cm/s,表明其吸收性一般;且三者的转运量随浓度升高和时间延长而显著升高,BL→AP的转运量与AP→BL的转运量的比值小于1.5,其中芒柄花素、毛蕊异黄酮的转运都受到P-gp外排蛋白的外排作用;补阳还五汤黄酮类有效成分明显降低了CYP2E1、CYP1A2酶探针底物的代谢量(P<0.05)。结论 3种黄酮类有效成分在Caco-2细胞模型的转运方式均为被动转运,毛蕊异黄酮与芒柄花素明显受到P-gp的外排作用,补阳还五汤黄酮类有效成分可以增加主要通过CYP2E1、CYP1A2酶代谢的药物浓度。     

siRNA干扰Caco-2细胞鞘磷脂合酶2 (SMS2)基因对药物转运体的影响

 目的  研究鞘磷脂合酶2 (sphingomyelin synthase 2,SMS2)缺损对人结肠癌细胞(colon cancer cell,Caco-2)中药物转运体P 糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药相关蛋白2 (multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的表达与功能的影响。方法  SMS2特异性siRNA转染至Caco-2细胞。采用RT-PCR和real-time PCR检测SMS2-特异性siRNA的干扰效率;采用Western blot法检测siRNA转染后P-gp和 MRP2蛋白表达的变化;采用胞内蓄积试验,通过HPLC检测P-gp及MRP2专一性底物罗丹明123及普伐他汀的蓄积含量,分析下调SMS2水平对Caco-2细胞中P-gp及MRP2功能的影响。结果  应用siRNA下调SMS2水平后,P-gp和MRP2的蛋白质水平均显著下调;胞内蓄积实验结果显示罗丹明123及普伐他汀的蓄积量明显增加,说明P-gp和MRP2的外排功能减弱。结论  SMS2基因表达下调对Caco-2细胞中P-gp和MRP2的表达以及功能均有显著影响。     

维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯对Caco-2细胞模型转运宝藿苷I的影响

目的 考察非离子表面活性剂维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯（TPGS）对宝藿苷I在Caco-2细胞模型转运的影响。方法 采用Caco-2细胞模型研究不同浓度的TPGS对宝藿苷I细胞转运行为的影响,以超高压液相色谱（UPLC）法测定细胞样品溶液中宝藿苷I的浓度,计算表观渗透系数（P_app）。结果 在应用TPGS后,宝藿苷I从细胞绒毛面供给侧（AP）→基底面外侧（BL）的跨膜转运量明显增高（P＜0.05）,外排比率显著下降（P＜0.05）。当宝藿苷I与TPGS比例分别为1∶1、1∶3、1∶9时,宝藿苷I的外排比率分别为1.978 8、1.779 8、1.609 0,与仅用宝藿苷I相比分别下降了73%、76%、78%。结论 在Caco-2细胞模型上,TPGS可显著促进宝藿苷I的吸收。     

浸润性乳腺癌组织中P-糖蛋白以及肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白表达的临床意义

目的探讨浸润性乳腺癌组织中P-糖蛋白（P—gp）、肺耐药蛋白（LRP）和多药耐药相关蛋白（MRP）表达的临床意义。方法应用流式细胞术（FCM）定量分析68例原发浸润性乳腺癌患者癌组织、相应癌旁组织中上述蛋白的表达。结果浸润性乳腺癌组织P-gp、LRP和MRP表达的相对荧光强度（RFI）以中位数（M）表示分别为0．58、0．51和0．56,而相应癌旁组织分别为0．26、0．33和0．30,癌组织耐药相关蛋白表达与相应癌旁组织比较差异有统计学意义（P〈0．05）。3种耐药相关蛋白的表达与患者的年龄、肿瘤大小、病理类型、临床分期和雌、孕激素受体均无相关性（P〉0．05）。有淋巴结转移组患者P—gp和MRP的表达分别为0．61和0．69,无淋巴结转移组患者分别为0．54和0．45,两者比较差异无统计学意义（P〉0．05）。但LRP表达在有淋巴结转移组患者（M=1．49）显著高于无淋巴结转移组患者（M=0．50,P〈0．05）。相关分析显示,乳腺癌组织LRP与MRP表达间存在正相关性（P〈0．05）。结论3种耐药相关蛋白在浸润性乳腺癌组织中表达的临床意义存在差别。LRP表达与淋巴结转移状况有关且与MRP表达呈正相关,可作为预测乳腺癌预后的指标。     

药物转运蛋白对灯盏花素小肠吸收的影响

目的:研究药物转运蛋白P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP2)对灯盏花素小肠吸收的影响。方法:HPLC法测定大鼠肠液中灯盏花素的浓度,以大鼠在体单向灌流实验(SPIP)研究药物的小肠吸收,计算不含抑制剂药物组和含抑制剂药物组的小肠表观渗透系数(Papp)。结果:含P-gp抑制剂药物组与原药组相比,Papp没有显著变化;含MRP2抑制剂药物组与原药组相比,Papp显著增加。结论:P-gp对灯盏花素的小肠吸收基本没有影响,而MRP2可将吸收的灯盏花素从肠上皮细胞内又转运回肠腔,从而降低灯盏花素的吸收。     

野黄芩苷和野黄芩素在Caco-2细胞模型中的吸收转运特性

目的:研究黄酮类化合物野黄芩苷(scutellarin)和野黄芩素(scutellarein)在Caco-2单层细胞模型中的吸收和转运特性。考察缓冲液、作用时间、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂、多药耐药蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)抑制剂、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer drug resistance protein,BCRP)抑制剂对野黄芩苷和野黄芩素吸收转运的影响。方法:利用Caco-2单层模型研究从绒毛面(apical,AP)侧到基底面(basolateral,BL)侧以及从BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用高效液相色谱法定量分析,计算转运参数和表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp)。结果:两化合物在磷酸盐缓冲液和Hanks缓冲液中的Papp有差异。在磷酸盐缓冲液中野黄芩苷AP→BL侧无转运,BL→AP侧的Papp为(0.74～1.58)×10-6cm/s;野黄芩素在AP→BL侧与BL→AP侧的Papp分别为(4.33～6.79)×10-6cm/s和(1.3...     

塔斯品碱在Caco－2细胞模型中的吸收机制研究

目的研究塔斯品碱在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法用Caco-2细胞单层模型研究塔斯品碱的双向转运,考察时间、药物质量浓度对塔斯品碱吸收的影响。采用高效液相色谱法检测塔斯品碱的质量浓度,计算其表观渗透系数（Papp）。结果塔斯品碱在Caco-2细胞模型中,从单层细胞层顶端到基底端的转运与基底端到顶端的转运大致相同。结论塔斯品碱在Caco-2细胞模型中的吸收主要是被动转运。     

Reversal effect of bufalin on multidrug resistance in K562/VCR vincristine-resistant leukemia cell line

ObjectiveTo probe insights into the reversal effect of bufalin on vincristine-acquired multidrug resistance (MDR) in human leukemia cell line K562/VCR.MethodsProliferative inhibition rate and the reversal index (RI) of bufalin were determined by Methyl thiazolyl tetrazolium assay. The uptake of Adriamycin (ADM) in K562/VCR cells, cell cycle and apoptosis rate were determined by flow cytometry (FCM). Cell morphologic changes were observed with Wright-Giemsa staining. The expression of P-glycoprotein (P-gp), multidrug-associated protein-1 (MRP1), Bcl-xL and Bax protein were measured by immunocytochemistry.ResultsThe human leukemia multidrug resistant K562/VCR cells showed no cross-resistance to bufalin. The RIs of bufalin at concentrations of 0.0002, 0.001 and 0.005 μmol/L were 4.85, 6.94 and 14.77, respectively. Preincubation of 0.001 μmol/L bufalin for 2 h could increase intracellular ADM fluorescence intensity to 28.07% (P<0.05) and down-regulate MRP1 expression simultaneously, but no remarkable effect was found on P-gp protein. Cell cycle analysis indicated increased apoptosis rate and apparent decreased G2/M phase proportion after treatment with bufalin. When exposed to 0.01 μmol/L bufalin, typical morphological changes of apoptosis could be observed. Down-regulation of Bcl-xL and up-regulation of Bax expression in K562/VCR cells could be detected by immunocytochemistry.ConclusionBufalin could partly reverse the MDR of K562/VCR cells, with a possible mechanism of down-regulating MRP1 expression and activating apoptosis pathway by altering Bcl-xL/Bax ratio.