LncRNA UCA1对肺癌细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 研究长链非编码RNA (LncRNA) UCA1对肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响及其机制。方法 运用qRT-PCR法检测肺癌细胞A549、H1299和人正常肺细胞HBE中UCA1、miR-513a-5p表达。将si-con组(转染si-con)、si-UCA1组(转染si-UCA1)、miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、IR+si-con组(转染si-con+照射)、IR+si-UCA1组(转染miR-NC+照射)、IR+miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics+照射)、IR+miR-NC组(转染miR-NC+照射)、IR+si-UCA1+anti-miR-513a-5p组(共转染si-UCA1和anti-miR-513a-5p+照射)均用脂质体法转染至A549、H1299细胞,然后部分组进行4Gy照射。MTT法检测各组细胞增殖,克隆形成实验检测细胞增敏比,流式细胞术检测各组细胞凋亡,双荧光素没报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果 与HBE细胞相比,A549、H1299细胞中UCA1表达显著升高(P<0.05),miR-513a-5p表达显著降低(P<0.05)。抑制UCA1、过表达miR-513a-5p均可明显抑制A549、H1299细胞增殖、促进凋亡、提高放射敏感性(放射增敏比为1.897、2.146和1.615、1.872)。miR-513a-5p可抑制野生型UCA1细胞的荧光活性,且UCA1可负向调控miR-513a-5p的表达。抑制miR-513a-5p可逆转抑制UCA1对细胞的放射敏感性的增强作用。结论 抑制LncRNA UCA1可增强放射对肺癌细胞敏感性,其机制可能与靶向抑制miR-513a-5p有关。     

miR-129-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制研究

目的 研究微小RNA-129-5p(miR-129-5p)对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭的影响及其可能的作用机制。方法 通过荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常肺组织细胞株BEAS-2B和3种非小细胞肺癌细胞系(A549、NCI-H157、GLC-82)中miR-129-5p相对表达量,选取相对表达量最低的细胞株转染miR-129-5p mimics,另设miR-129-5p NC组和空白对照组,通过MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭能力,采用免疫印迹(Western blot)法检测转染后STAT3通路相关蛋白表达水平。结果 与正常细胞株BEAS-2B相比,非小细胞癌细胞株A549、NCI-H157、GLC-82 miR-129-5p表达均下降(P<0.05),miR-129-5p在A549细胞株中相对表达量最低;与空白组、miR-129-5p NC组相比,miR-129-5p mimics组miR-129-5p相对表达量升高(P<0.05);MTT试验显示,与空白组、miR-129-5p NC组相比,miR-129-5p mimics组...     

沉默LncRNA OIP5-AS1通过上调miR-34c-5p表达增加A549R细胞放射敏感性

目的 探讨LncRNA OIP5-AS1对非小细胞肺癌放射抗拒细胞A549R的放射敏感性影响及作用机制。方法 X射线6Gy照射5次A549细胞建立放射抗拒细胞A549R。qRT-PCR检测A549、A549R细胞OIP5-AS1和miR-34c-5p表达水平。转染OIP5-AS1抑制剂或miR-34c-5p模拟物至A549R细胞,OIP5-AS1过表达质粒至A549细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放射敏感性,蛋白印记检测p-Chk2和p-ATM蛋白表达水平。双荧光素酶实验验证OIP5-AS1与miR-34c-5p之间关系。结果 与A549细胞比,A549R细胞中OIP5-AS1表达上调(1.97±0.11︰1.01±0.05,P<0.05),miR-34c-5p表达下调(0.43±0.02︰1.02±0.06,P<0.05)。沉默OIP5-AS1+6Gy组A549R细胞中p-Chk2和p-ATM蛋白水平低于沉默对照+6Gy组(0.43±0.03︰1.39±0.15和0.51±0.05︰1.21±0.11,P<0.05),但凋亡率增加[(13.29±1.25)%︰(28.47±2.31)%,P<0.05]。过表达OIP5-AS1+6Gy组A549细胞中p-Chk2和p-ATM蛋白水平高于过表达对照+6Gy组(1.23±0.13︰0.75±0.06和1.08±0.11︰0.59±0.04,P<0.05)。抑制miR-34c-5p表达逆转了沉默OIP5-AS1对A549R细胞存活分数影响,增敏比为1.42。OIP5-AS1负调控miR-34c-5p表达。结论 沉默OIP5-AS1通过上调miR-34c-5p表达增强A549R细胞放射敏感性,为放疗提供潜在的靶点。     

高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响。方法:采用实对荧光定量聚合酶链反应检测A549细胞中miR-301b和miR-769-5p的表达;使用 qRT-PCR检测增殖相关基因miRNA表达的变化,并将实验组miR-301b和miR-769-5p表达量上调(与阴性对照组比较);采用MTT法检测并对比A549细胞增殖的改变;采用流式细胞仪检测并对比A549细胞周期以及凋亡的改变。结果:qRT-PCR结果表明,浸染了miR-301b和miR-769-5p过表达载体的A549细胞中miR-301b和miR-769-5p水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01)。miR-301b过表达使G0/G1期的A549细胞增加,S和G2/M期的细胞减少;miR-769-5p过表达使G0/G1和G2/M期细胞增加,S期细胞减少。结论:miR-301b对靶基因FOXF2具有调控作用,miR-769-5p对靶基因ARID1A具有调控作用。miR-301b和miR-769-5p的过表达对肺癌A549细胞的细胞周期产生了明显影响,但没有影响细胞增殖和凋亡,miR-301b和miR-769-5p有可能成为肺癌分子靶向治疗调控效应靶点,可以进一步探索研究。     

miR-125a-5p通过靶向APAF1 增强非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性

目的：探讨miR-125a-5p 在诱导非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）细胞吉非替尼（gefitinib，Gef）耐药中的作用及其机制。方法：选用人NSCLC 耐药细胞株A549/GR 和NSCLC细胞株A549，将miR-125a-5p mimic、miR-125a-5p inhibitor、pcDNA3.1-APAF1、空载体pcDNA3.1 转染至A549/GR细胞。用qPCR检测细胞中miR-125a-5p 的表达水平，用MTT法、Transwell 小室法和流式细胞术检测Gef 对细胞增殖、迁移和凋亡的影响。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-125a-5p 与细胞凋亡蛋白酶活化因子1（apoptotic peptidase activating factor 1，APAF1）的靶向关系，用Western blotting检测A549/GR细胞中APAF1蛋白水平，用比色法测定细胞中caspase-3 及caspase-9 表达水平。结果：A549/GR 细胞中miR-125a-5p 表达水平显著高于A549 细胞（P<0.01）。敲降miR-125a-5p 显著增强Gef 对A549/GR细胞增殖、迁移的抑制作用（均P<0.05），并促进细胞凋亡（P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-125a-5p 靶向APAF1，并负调控其表达。进一步实验显示，miR-125a-5p 通过靶向下调APAF1 缓解Gef 对A549/G 细胞增殖、迁移的抑制作用及凋亡的促进作用（均P<0.05），减弱Gef引起的凋亡相关蛋白caspase-3及caspase-9表达的上调（均P<0.05）。结论：miR-125a-5p 促进NSCLC细胞Gef 耐药，其机制是通过靶向APAF1 而促进细胞的增殖、迁移并抑制凋亡。     

miR-125a-5p靶向RRM2调控A549/DDP细胞的顺铂耐药性

目的:探究微小RNA-125a-5p（microRNA-125a-5p,miR-125a-5p）对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:使用ENCORI在线数据库分析miR-125a-5p在非小细胞肺癌癌组织与癌旁组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）的方法检测人肺上皮正常细胞（BEAS-2B）与非小细胞肺癌细胞系（A549、A549/DDP、SK-MES-1）中miR-125a-5p的表达水平;使用RT-qPCR与蛋白免疫印迹法（Western blot）检测A549、A549/DDP细胞中核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase regulatory subunit M2,RRM2)的表达情况;生物信息学方法分析miR-125a-5p与RRM2的靶向调控序列;双荧光素酶基因报告实验与Western blot测定miR-125a-5p与RRM2在A549/DDP细胞中的调控关系;细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞的存活率与半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在非小细胞肺癌组织与细胞系中miR-125a-5p的表达水平显著降低（P＜0.05）;与A549细胞相比,A549/DDP细胞中RRM2的表达水平显著升高（P＜0.05）;过表达miR-125a-5p部分恢复了顺铂对A549/DDP细胞的抑制作用,使细胞存活率显著降低（P＜0.05）,凋亡率显著增加（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证实miR-125a-5p能够靶向结合RRM2（P＜0.05）;过表达RRM2逆转了miR-125a-5p对A549/DDP的作用,降低了A549/DDP对顺铂的敏感性（P＜0.05）。结论:miR-125a-5p可通过靶向下调RRM2基因的表达,从而部分恢复A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

沉默LncRNA OIP5-AS1通过上调miR-34c-5p表达增加A549R细胞放射敏感性

目的 探讨LncRNA OIP5-AS1对非小细胞肺癌放射抗拒细胞A549R的放射敏感性影响及作用机制。方法 X射线6Gy照射5次A549细胞建立放射抗拒细胞A549R。qRT-PCR检测A549、A549R细胞OIP5-AS1和miR-34c-5p表达水平。转染OIP5-AS1抑制剂或miR-34c-5p模拟物至A549R细胞,OIP5-AS1过表达质粒至A549细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放射敏感性,蛋白印记检测p-Chk2和p-ATM蛋白表达水平。双荧光素酶实验验证OIP5-AS1与miR-34c-5p之间关系。结果 与A549细胞比,A549R细胞中OIP5-AS1表达上调(1.97±0.11︰1.01±0.05,P<0.05),miR-34c-5p表达下调(0.43±0.02︰1.02±0.06,P<0.05)。沉默OIP5-AS1+6Gy组A549R细胞中p-Chk2和p-ATM蛋白水平低于沉默对照+6Gy组(0.43±0.03︰1.39±0.15和0.51±0.05︰1.21±0.11,P<0.05),但凋亡率增加[(13.29±1.25)%︰(28.47±2.31)%,P<0.05]。过表达OIP5-AS1+6Gy组A549细胞中p-Chk2和p-ATM蛋白水平高于过表达对照+6Gy组(1.23±0.13︰0.75±0.06和1.08±0.11︰0.59±0.04,P<0.05)。抑制miR-34c-5p表达逆转了沉默OIP5-AS1对A549R细胞存活分数影响,增敏比为1.42。OIP5-AS1负调控miR-34c-5p表达。结论 沉默OIP5-AS1通过上调miR-34c-5p表达增强A549R细胞放射敏感性,为放疗提供潜在的靶点。     

hsa-miR-125a-5p促进非小细胞肺癌细胞侵袭

背景与目的 microRNAs(miRNAs)是小的非编码RNA,它们通过与靶mRNA不完全互补连接的方式转录后调控靶基因的表达.尽管一些失常的miRNA调节机制在人许多恶性肿瘤中被发现,但是,has-miR-125a-5p在肺癌细胞中的表达及功能还尚不清楚.本研究探讨了has-miR-125a-5p在非小细胞肺癌细胞中的表达及其与肺癌细胞侵袭的关系.方法 应用real-time PCR的方法检测了has-miR-125a-5p在6种肺癌细胞系中的表达情况,并在EAS49细胞中分别转染正义的has-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸24 h、36 h、48 h、60 h和72 h后检测has-miR-125a-5p的表达情况.同时应用transwell小室观察上调has-miR-125a-5p后,A549细胞侵袭能力的变化.结果 has-miR-125a-5p在6种肺癌细胞系中低表达,以LH7、NCI-H460、SPC-A-1和A549细胞最为明显.在A549细胞中,转染正义的has-miR-125a-5p 2'O-甲基寡核苷酸36h后,has-miR-125a-5p表达最高,并进一步发现.上调has-miR-125a-5p后A549和NCI,H460细胞侵袭能力增强.结论 has-miR-125a-5p在肺癌细胞中低表达,但上调has-mig-125a-5p能够促进A549和NCI-H460细胞侵袭.     

miR-520a-3p 通过靶向FZD8 增强非小细胞肺癌A549/TAX细胞对紫杉醇的敏感性

[摘要] 目的：探讨miR-520a-3p 通过靶向卷曲受体8(FZD8)调控非小细胞肺癌（NSCLC）A549/TAX细胞对紫杉醇（TAX）的敏感性。方法：选用NSCLC A549 细胞、TAX抗性细胞株A549/TAX及人肺上皮细胞HLF-α,用qPCR检测A549 和A549/TAX细胞中miR-520a-3p 的表达水平。依据转染质粒的不同分为对照组、miR-520a-3p mimics 组、si-FZD8 组和si-FZD8+miR-520a-3p inhibitor组,用6 μmol/L的TAX处理各组A549/TAX细胞后,用CCK-8 检测A549/TAX细胞的增殖能力,用Annexin V-FITC/PI 染色流式细胞术检测A549/TAX细胞的凋亡水平,用WB检测A549/TAX细胞中FZD8 的表达水平。双荧光素酶报告基因系统检测miR-520a-3p 与FZD8 的靶向关系。结果：miR-520a-3p 在A549/TAX细胞中低表达（P<0.01）,且TAX能够上调A549/TAX细胞中miR-520a-3p 的表达水平（P<0.01）。6 μmol/L TAX处理后,过表达miR-520a-3p 可显著抑制A549/TAX细胞的增殖并促进其凋亡（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因证明miR-520a-3p 可靶向下调FZD8 的表达水平（P<0.01）。si-FZD8 可显著抑制A549/TAX细胞增殖、促进细胞凋亡,从而增强细胞对TAX的敏感性;同时敲降miR-520a-3p 和FZD8 可逆转敲降FZD8 对A549/TAX细胞TAX敏感性的增强作用（P<0.01）。结论：miR-520a-3p 可通过靶向下调FZD8 表达水平增强A549/TAX细胞TAX敏感性。     

miR-203a-3p靶向AKT2增强骨肉瘤细胞的放射敏感性

目的:研究miR-203a-3p对骨肉瘤MG-63细胞凋亡和放射敏感性的影响及潜在作用机制。方法:qRT-PCR检测AKT2 mRNA的表达水平及不同放射剂量（0、2、4、6、8 Gy)照射后MG-63细胞中miR-203a-3p的表达水平,克隆形成实验检测不同放射剂量处理后细胞存活分数,流式细胞术测定MG-63细胞凋亡率,Western blot检测AKT2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-203a-3p和AKT2的调控关系。结果:随着放射剂量的增加,骨肉瘤细胞MG-63中miR-203a-3p的表达量被显著抑制（P＜0.05）;过表达miR-203a-3p可增加MG-63细胞的放射敏感性,促进MG-63细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-203a-3p靶向负调控AKT2的表达;抑制AKT2表达可增强骨肉瘤MG-63细胞的放射敏感性;过表达AKT2逆转了上调miR-203a-3p对MG-63细胞的放射增敏作用,抑制MG-63细胞凋亡。结论:miR-203a-3p通过靶向抑制AKT2表达增强骨肉瘤MG-63 细胞的放射敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。miR-203a-3p有望成为骨肉瘤临床放射增敏靶点。     

miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的  探讨miR-21通过靶向作用自噬相关靶基因5（Atg5）调控非小细胞肺癌（NSCLC）自噬的作用机制及其在A549细胞增殖、迁移及侵袭中的作用。方法  无义核酸序列NC（NC组）、miR-21 模拟物（miR-21 mimics组）、miR-21抑制物（miR-21 抑制组）分别转染A549细胞, CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力; Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-21和Atg5之间的靶向关系。Western blotting检测LC3B-II、p62和Atg5蛋白的表达。结果  与NC组比较,miR-21 mimics组细胞增殖、迁移、侵袭能力均上调,miR-21 抑制组细胞增殖、迁移、侵袭能力均下调（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-21显著抑制野生型Atg5 3’-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性（P＜0.05）,但对突变型Atg5 3’-UTR的基因报告质粒与miR-21 mimics共转染之后,并未对荧光素酶活性产生影响。NC组LC3B-II蛋白表达量为1.24±0.059,低于miR-21 mimics组的1.98±0.077,高于miR-21抑制组的0.52±0.021（P＜0.05）;NC组p62蛋白表达量为0.62±0.021,高于miR-21 mimics组的0.45±0.020,低于miR-21抑制组的0.79±0.031（P＜0.05）;NC组Atg5蛋白表达量为1.17±0.025,高于miR-21 mimics组的0.38±0.014,低于miR-21抑制组的1.40±0.039（P＜0.05）。与NC组比较, 3-MA处理降低miR-21 mimics转染诱导的A549细胞增殖能力（P＜0.05）;划痕实验和Transwell实验表明,3-MA处理抑制了miR-21mimics转染诱导的A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论  miR-21靶向Atg5调控NSCLC自噬促进细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-582-5p靶向抑制Rab27a对肺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨microRNA-582-5p（miR-582-5p）在非小细胞肺癌（NSCLC）中表达及其对A549细胞增殖、侵袭的影响，以及对Rab27a基因的靶向调控作用。方法 采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测33例行手术治疗的NSCLC患者的癌组织、对应癌旁组织以及A549细胞株、人正常支气管肺上皮细胞株BEAS-2B中miR-582-5p的表达水平。采用miR-582-5p inhibitor（anti-miR-582-5p）和miR-582-5p mimics（mim-miR-582-5p）转染A549细胞，另分别转染miRNA inhibitor无关系列（anti-NC）和miRNA mimics无关系列（mim-NC）作阴性对照。采用双荧光素酶报告实验验证Rab27a与miR-582-5p的关系。采用MTT法和Transwell小室法检测各组细胞增殖、侵袭能力；采用QPCR和Western blotting检测各组A549细胞中Rab27a mRNA和蛋白水平。结果 NSCLC组织和癌旁组织中miR-582-5p表达水平分别为0.26±0.09和0.83±0.10；A549细胞株和BEAS-2B细胞株中miR-582-5p表达水平分别为0.63±0.08和1.17±0.09，差异均有统计学意义（P＜0.05）。anti-miR-582-5p组A549细胞24、48、72、96 h后的增殖率分别为（115.68±4.34）％、（130.48±5.48）％、（138.95±5.55）％、（147.03±5.69）％，明显高于anti-NC组；mim-miR-582-5p组A549细胞24、48、72、96 h后的增殖率分别为（91.31±4.18）％、（86.74±3.23）％、（79.45±3.20）％、（75.22±4.09）％，明显低于mim-NC组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。Transwell小室结果显示，anti-miR-582-5p组A549细胞侵袭数为189±19，明显高于anti-NC组；mim-miR-582-5p组A549细胞侵袭数为55±8，明显低于mim-NC组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。miR-582-5p可抑制野生型Rab27a 3’-UTR报告基因载体的荧光素酶活性，而对突变型Rab27a 3’-UTR的荧光素酶活性无影响。anti-miR-582-5p组A549细胞Rab27a mRNA和蛋白表达水平分别为2.01±0.29和0.85±0.12，高于anti-NC组；mimi-miR-582-5p组A549细胞Rab27a mRNA和蛋白表达水平分别为0.35±0.08和0.21±0.05，明显低于mim-NC组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 上调miR-582-5p表达可抑制Rab27a表达，从而抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭活性，miR-582-5p有望成为肺癌新的治疗靶点。     

华蟾素介导miR-497-5p/VEGFA通路调控肺癌细胞的增殖、凋亡及血管生成

目的:探讨华蟾素介导miR-497-5p/VEGFA通路对肺癌细胞增殖、凋亡及血管生成的影响。方法:选取肺癌细胞株A549、H460为研究对象,以不同浓度华蟾素（0、25、50、75、100、125、150 μg/mL）作用细胞株,采用MTT检测细胞活力。随后,设置组别为空白组、华蟾素组（100 μg/mL华蟾素）、华蟾素+inhibitor NC组、华蟾素+miR-497-5p inhibitor组,通过MTT检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中VEGF、VEGFA蛋白表达;RT-qPCR检测细胞中miR-497-5p表达;并采用荧光素酶报告实验确定miR-497-5p靶向VEGFA。结果:随着华蟾素浓度的升高,A549、H460细胞增殖活力明显下降（P＜0.01）;与空白组相比,华蟾素组A549、H460细胞克隆形成能力明显降低、细胞凋亡明显增加、VEGF和VEGFA蛋白表达明显降低、miR-497-5p mRNA表达明显升高（P＜0.01）;荧光素酶报告实验显示miR-497-5p靶向VEGFA;与华蟾素+inhibitor NC组相比,华蟾素+miR-497-5p inhibitor组A549、H460细胞中miR-497-5p mRNA表达明显降低、VEGF和VEGFA蛋白表达明显升高、细胞克隆形成能力明显增加、细胞凋亡明显被抑制、细胞增殖活力明显增加（P＜0.05）。结论:华蟾素可能通过调控miR-497-5p/VEGFA通路从而抑制肺癌细胞增殖和血管生成,并诱导细胞凋亡。     

miR-140-5p靶向HDAC7抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制探讨

目的:探讨miR-140-5p靶向组蛋白去乙酰化酶7(histone deacetylase 7,HDAC7)调控非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:采用qRT-PCR检测人NSCLC组织及癌旁组织中miR-140-5p的表达水平。用miR-140-5p mimic（模拟物）及miR-140-5p NC（阴性对照）转染A549细胞,CCK8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-5p与HDAC7的靶向关系,Western blot检测各组细胞HDAC7及PI3K、p-PI3K、AKT、和p-AKT表达水平。结果:与癌旁组织相比,miR-140-5p在NSCLC组织中的表达水平明显减低,差异有统计学意义（P＜0.01）。与miR-140-5p NC组相比,过表达miR-140-5p后A549细胞在48和72 h的增殖能力明显降低（P＜0.05）;且细胞克隆形成、细胞迁移和侵袭能力均降低（均P＜0.05）,PI3K/AKT信号通路中关键分子p-PI3K和p-AKT蛋白水平明显降低（均P＜0.05)。生物信息学预测HDAC7可能是miR-140-5p的一个靶基因,且双荧光素酶报告结果证实miR-140-5p直接靶向调节HDAC7表达。结论:miR-140-5p通过靶向HDAC7表达进而抑制NSCLC A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

miR-125a-3p靶向负调控PLK4抑制神经母细胞瘤细胞增殖及其机制探讨

目的:研究miR-125a-3p对神经母细胞瘤细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:运用qRT-PCR法检测Hela、SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达;将miR-125a-3p组（转染miR-125a-3p mimics）、miR-NC组（未转染细胞）、inhibitor-NC组（转染空inhibitor）、miR-125a-3p inhibitor组（转染miR-125a-3p inhibitor）、siPLK4组（转染siPLK4）、miR-125a-3p+Vector组（miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1共转染）、miR-125a-3p+PLK4组（miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1-PLK4共转染）以脂质体法转染至SH-SY-5Y细胞;MTT法检测各组细胞的增殖情况;Western blot检测各组细胞中PLK4、PIK3CA、Akt、p-Akt蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与Hela细胞相比,SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达均显著降低（P<0.05）;与Control组相比,miR-125a-3p组细胞的增殖显著降低,PLK4、PIK3CA、p-Akt蛋白的表达量均显著降低（P<0.05）;PLK4为miR-125a-3p的靶基因。过表达PLK4可逆转miR-125a-3p对SH-SY-5Y细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的抑制作用。结论:miR-125a-3p可抑制神经母细胞瘤细胞增殖,其作用机制与靶向负调控PLK4有关,将可为神经母细胞瘤的治疗提供新靶点。     

微小RNA-223-3p靶向调控TGFBR3影响肺癌细胞上皮间质转化及Wnt/β-catenin通路

目的:探讨微小RNA-223-3p（miR-223-3p）对转化生长因子Ⅲ型受体（TGFBR3）的靶向调控及对肺癌上皮间质转化（EMT）及Wnt/β-catenin通路相关指标的影响。方法:采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测肺癌细胞（95D、LTEP-α-2、A549及NCI-H460）以及人肺上皮细胞BEAS-2B的miR-223-3p和TGFBR3水平,经双荧光素酶报告基因实验验证miR-223-3p和TGFBR3的靶向关系。将A549细胞分成3组:对照组、miR-223-3p NC组（转染miR-223-3p NC）、miR-223-3p mimic组（转染miR-223-3p mimic）,MTT法、划痕实验及Transwell小室实验分别检测3组细胞的增殖及迁移能力。接着收集3组转染后的细胞,分别制备裸鼠移植瘤,处死裸鼠并剥离肿瘤组织,测量肿瘤体积及重量,免疫组化法对比各组镜下TGFBR3蛋白的表达情况,Western blotting实验检测EMT相关指标上皮钙黏蛋白（E-Cadherin）、神经型钙黏蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及Wnt/β-catenin通路相关因子（Wnt1和β-catenin）的表达。结果:与BEAS-2B细胞对比,肺癌细胞miR-223-3p及TGFBR3的表达水平均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-223-3p能靶向调控TGFBR3的表达。miR-223-3p mimic组A549细胞的增殖活力、划痕愈合率及穿膜细胞数均较miR-223-3p NC组明显降低（P＜0.05）;此外,miR-223-3p mimic组裸鼠瘤体体积及重量均明显低于miR-223-3p NC组。免疫组化结果显示,miR-223-3p mimic组TGFBR3阳性表达率上升,与miR-223-3p NC组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）;Western blotting结果提示,与miR-223-3p NC组相比,miR-223-3p mimic组肿瘤组织中TGFBR3、E-Cadherin表达水平升高,而N-Cadherin、Vimentin、Wnt1和β-catenin表达水平均下降（P＜0.05）。对照组与miR-223-3p NC组的增殖活力、划痕愈合能力以及EMT和Wnt/β-catenin通路相关因子水平的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-223-3p在肺癌中异常低表达,miR-223-3p通过靶向调控TGFBR3来抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移侵袭、EMT过程并阻断Wnt/β-catenin通路,在肺癌进展中发挥抑癌作用。     

miR-429对食管鳞癌细胞EC9706的影响及其分子机制探讨

目的:探讨miR-429对食管鳞癌细胞的影响及其靶向潜在的分子机制。方法:将miR-429 mimics、miR-429 mimics NC、miR-429 inhibitor和miR-429 inhibitor NC分别转染至食管鳞癌细胞EC9706,分别设为miR-429 mimics组、miR-429 mimics NC组、miR-429 inhibitor组和miR-429 inhibitor NC组。利用实时荧光定量检测各组miR-429的表达情况,MTT法检测细胞增殖率,通过TargerScans Human7.1预测miR-429靶基因并利用荧光素酶活性检测对其进行验证,蛋白免疫印迹检测各组细胞中E盒锌指结合蛋白1（ZEB1）蛋白的表达情况。结果:空白对照组、miR-429 mimics NC组、miR-429 inhibitor NC组之间miR-429相对表达量差异不明显（P＞0.05）。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组食管鳞癌EC9706细胞中miR-429表达量显著上调（P＜0.05）;与miR-429 inhibitor NC组相比,miR-429 inhibitor组食管鳞癌EC9706细胞中miR-429表达量显著下调（P＜0.05）。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组中EC9706细胞增殖率显著下降（P＜0.05）,miR-429 inhibitor NC组中EC9706细胞增殖率无显著差异（P＞0.05）,miR-429 inhibitor组中EC9706细胞增殖率显著增加（P＜0.05）。预测miR-429靶基因为ZEB1,荧光素酶活性检测证实ZEB1为miR-429靶基因。与miR-429 mimics NC组相比,miR-429 mimics组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量显著下调（P＜0.05）,miR-429 inhibitor NC组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量无显著差异（P＞0.05）,miR-429 inhibitor组EC9706细胞中ZEB1蛋白表达量显著上调（P＜0.05）。结论:miR-429可通过靶向ZEB1抑制食管鳞癌细胞增殖。