Hippo信号通路调节牙周膜干细胞生物学行为的研究进展

牙周膜干细胞（PDLSCs）因其多功能性与高增殖性,已成为目前广受关注的牙周组织工程应用的种子细胞,有望在牙周组织改建和再生的临床应用方面发挥实际作用。Hippo信号通路是一条进化上高度保守的激酶链,大量研究证实其在调控器官发育、组织再生、细胞稳态中发挥重要作用。同时,越来越多的证据在分子水平及细胞层面上证实,Hippo信号通路影响PDLSCs的分化及增殖-凋亡平衡。笔者总结了目前报道的Hippo信号通路相关组分对PDLSCs增殖、凋亡、衰老及成骨分化等生物学行为的调控作用,并着重探讨关键效应因子YAP在其中的调控机制,为牙周再生的基础研究与临床应用提供新思路。     

Kindlin-2 RNA干扰经Wnt信号通路抑制血管平滑肌细胞增殖

目的:观察Kindlin-2 RNA干扰(RNA interference,RNAi)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响并探讨相关的作用机制。方法:构建并制备Kindlin-2 siRNA慢病毒载体并感染大鼠VSMC,CCK-8和BrdU技术检测重组Wnt3a蛋白诱导的VSMC增殖情况,实时定量PCR测定VSMC中Kindlin-2、c-Myc和cyclin D1 mRNA的表达水平,免疫共沉淀了解Kindlin-2和β-catenin的关系,Western blot检测VSMC中Kindlin-2、β-catenin、磷酸化β-catenin(Ser675)、GSK-3β和磷酸化GSK-3β(Ser9)蛋白的表达。结果:Kindlin-2 siRNA慢病毒载体能有效感染大鼠VSMC。CCK-8和BrdU结果表明Kindlin-2 RNAi能够显著抑制Wnt3a诱导的VSMC增殖(1.12±0.14 vs. 2.25±0.15,P=0.000;0.162±0.017 vs. 0.288±0.019,P=0.000)。与阴性...     

定坤丹对子宫内膜异位症大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

目的 探索定坤丹对子宫内膜异位症(EMs)大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。方法 通过异位移植子宫内膜组织,构建EMs大鼠模型,随机分为5组：模型组(M组)、定坤丹低(1.13 g/kg)剂量组(DKP-L组)、定坤丹中(2.26 g/kg)剂量组(DKP-M组)、定坤丹高(4.52 g/kg)剂量组(DKP-H组)、孕三烯酮(60 mg/kg)组(GES组),每组12只,另取12只正常SD大鼠只开腹不异位移植子宫内膜组织,设为假手术组(Sham组),以药物分组干预后处死大鼠,测定各组大鼠异位子宫内膜质量与体积,免疫组织化学染色检测大鼠异位子宫内膜微血管密度(CD31阳性率)与VEGF、MMP-9表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清VEGF、MMP-9、iNOS、TNF-α水平;蛋白免疫印迹实验检测大鼠异位子宫内膜PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达。结果 与Sham组相比,M组大鼠异位子宫内膜微血管密度、VEGF与MMP-9表达、血清VEGF、MMP-9、iNOS及TNF-α水平、异位子宫内膜织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/...     

加味四君子汤通过mTOR信号通路延缓小鼠脾脏组织衰老

目的 研究加味四君子汤通过mTOR信号通路延缓小鼠脾脏组织衰老作用及其可能机制。方法 将40只8周龄小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,除对照组外,其余三组小鼠分别予以腹腔注射D-半乳糖形成衰老模型,对照组和模型组予以生理盐水灌胃,同时低剂量组和高剂量组予以加味四君子汤灌胃给药,喂养42天称重后处死小鼠,计算小鼠的脾脏指数;观察血清免疫球蛋白(IgG)水平;观察脾脏组织病理变化;同时采取分子生物学方法检测mTOR信号通路负反馈因子PI3K和下游效应蛋白p70S6K和4E-BP1表达水平,并对其进行统计学分析。结果 与模型组相比,高剂量组脾脏的组织形态衰老程度较模型组低,且脾脏指数、血清IgG显著升高(P<0.05),低剂量组无明显差别（P＞0.05）,且高、低剂量组脾脏组织中PI3K、p70S6K表达水平均下降(P<0.05),而4E-BP1的表达水平无差别（P＞0.05）。结论 加味四君子汤能改善衰老小鼠脾脏组织形态,提高IgG水平,通过增强机体的免疫力来延缓衰老,其机制可能为减少PI3K的活化抑制mTOR 信号通路,减少p70S6K的表达水平。     

mTOR信号通路与胰腺癌研究进展

雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在胰腺癌中过度激活,可作为胰腺癌的靶向治疗的靶点。近年来研究显示,雷帕霉素及衍生物无论是单药使用还是和其他细胞毒性药物联合使用,都能明显抑制胰腺癌生长,mTOR抑制剂在胰腺癌的治疗中显示出良好的应用前景。本文就mTOR信号转导通路及mTOR抑制剂在胰腺癌治疗中的临床应用前景进行综述。 更多还原     

Hippo信号通路在乳腺癌干细胞中的研究进展

肿瘤干细胞(CSCs)被认为是肿瘤发生、复发、转移和耐药的主要原因。越来越多的研究发现,Hippo通路的失调与肿瘤的发生、发展密切相关。本文主要总结Hippo通路在调节乳腺癌干细胞增殖、分化、转移、耐药以及免疫微环境等方面的作用,希望为Hippo通路的相关研究提供参考。     

褪黑素对小鼠子宫内膜发育的影响

目的探讨褪黑素对小鼠子宫内膜发育的影响,为临床用药提供实验依据。方法随机将80只雌性昆明小鼠分为非受孕组和受孕组,每组又分为非喂药组和喂药组,每组20只。喂药组给予褪黑素,非喂药组给予生理盐水。于用药10 d后24 h内处死非受孕组小鼠,取子宫做成石蜡切片,苏木素-伊红(HE)染色,光镜观察并进行图像分析。在非受孕组雌鼠处死取材的当天,受孕组雌鼠与雄鼠合笼,于受孕后6 d处死受孕组小鼠,观察孕鼠着床情况,取子宫做成石蜡切片,HE染色,光镜观察并进行图像分析。结果非受孕组:喂药组子宫内膜厚度(157.21±0.09)μm明显薄于非喂药组(290.32±0.12)μm(P<0.05);2组子宫腺体的直径、周长比较无统计学意义(P>0.05)。受孕组:喂药组子宫内膜厚度(269.73±0.13)μm明显薄于非喂药组(368.35±0.19)μm(P<0.05),喂药组子宫腺体的直径、周长明显小于非喂药组(P<0.05)。结论褪黑素能够抑制小鼠子宫内膜的发育。     

mTOR信号通路与恶性肿瘤的研究进展

<正>哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是近年来发现的一种进化上保守的蛋白激酶,被认为是细胞生长的中心调控因子。mTOR信号通路在细胞生存、生长与增殖中起着关键调控作用,该信号通路的异常与多种恶性肿瘤有关,已逐渐成为肿瘤治疗的新靶点。本文就mTOR的分子结构、相关信号途径及其与恶性肿瘤的关系等做一综述。     

Akt/mTOR信号通路与恶性肿瘤

目前,信号传导系统的缺陷和异常活化与肿瘤发生、发展及预后的关系已成为肿瘤分子生物学的研究热点,同时通过千预信号传导途径治疗肿瘤也成为生物治疗的新兴领域。Akt/mTOR信号通路是关键的细胞增殖相关信号通道之一,其活性的明显增强与许多恶性肿瘤的发生、发展密切相关,因此抑制该信号通路成为肿瘤靶向治疗的热点。     

Hippo信号通路及其在消化系统肿瘤中的作用研究进展

Hippo信号通路在进化上高度保守,哺乳动物细胞中该信号通路的核心成员包括MST1/2激酶、LATS1/2激酶和效应蛋白YAP/TAZ。虽然YAP/TAZ及其下游相关研究相对较多,但Hippo信号通路的上游调控因子并不明确,是目前该通路研究的热点方向之一。另外,Hippo信号通路可与Wnt和Notch等其他信号通路发生交叉对话,并在控制器官大小、维持组织稳态、促进组织修复再生等过程中扮演重要角色。Hippo信号通路异常可能会导致多种肿瘤的发生,尤其是肝癌、结直肠癌和胃癌等消化系统肿瘤,其成员在消化系统肿瘤中的异常表达与肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移等过程密切相关。Hippo信号通路对肝脏的修复再生至关重要,其失活会导致原发性肝癌的发生,YAP在肝癌中的促肿瘤作用机制主要依赖于TEAD介导的基因转录。Hippo信号通路对于维持肠道稳态也很重要,其失调会导致结直肠癌的发生及复发。在原发性和转移性胃癌中,YAP/TAZ的表达显著上调,但具体分子调控机制并不清楚。本文总结了近年来Hippo信号通路的发现、上游调控因子及其在消化系统肿瘤发生发展过程中的作用和分子调控机制,并对未来的研究方向进行初步探讨。     

Kindlin-2介导足细胞损伤在局灶节段肾小球硬化症小鼠中的作用研究

目的：探讨Kindlin-2介导足细胞损伤在局灶节段肾小球硬化症小鼠中的作用研究。方法：8周龄雄性BALB/C小鼠分为正常对照组（n=18）、模型组（n=18）。模型组注射阿霉素造模,正常对照组给予等量的生理盐水,于第4、8、12周每组各处死6只小鼠,检测24h尿蛋白定量、ALB、TC,光镜观察肾脏组织病理学改变。WT1免疫组织化学技术检测足细胞数量。RT-qPCR技术检测肾脏组织Kindlin-2、nephrin及podocin mRNA水平。结果：与正常对照组比较,第4周开始模型组24h尿蛋白定量（5.66±1.06）mg/24h、（4.63±1.16）mg/24h、（4.78±0.87）mg/24h;TC（6.67±0.96） mmol/L、（4.68±0.70） mmol/L、（2.49±0.60）mmol/L均增加（P均<0.05), 而ALB（11.98±1.33）g/L、（12.78±1.47）g/L、（12.99±1.38）g/L下降(P均<0.05);模型组第4周可见部分肾小球出现局灶、节段硬化,伴有足细胞肿胀;第8周部分肾小球出现球性硬化,伴有明显的足细胞增生和肥大;第12周弥漫性肾小球出现球形硬化。模型组足细胞数量[（77.40±7.56）个/肾小球]、[（63.27±8.51）个/肾小球]、[（53.15±8.23）个/肾小球]随着时间的进展逐渐减少。模型组第4周开始Kindlin-2 mRNA水平（1.114±0.057）、（1.129±0.078）、（1.452±0.104）明显上调（均P<0.05）,Podocin mRNA水平（1.793±0.080）、（1.636±0.059）、（1.454±0.067）明显下调（P均<0.05）,第8周开始Nephrin mRNA（1.421±0.130）、（1.168±0.113）水平明显下调（均P<0.05）。Kindlin-2 mRNA水平与足细胞数量(r=-0.02, P <0.001) 、Nephrin mRNA水平(r=-0.8, P <0.01) 、Podocin mRNA水平(r=-0.9, P <0.01) 呈显著负相关。结论：Kindlin-2可能通过介导足细胞损伤参与了局灶节段肾小球硬化症小鼠的发病过程。     

活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜中Hippo信号通路的影响

目的观察活血解毒方对糖尿病大鼠视网膜中Hippo信号通路的影响。方法选用健康SD大鼠24只,禁食12 h,一次性腹腔注射链脲佐菌素(65 mg/kg),诱导糖尿病模型。将造模20周后的大鼠随机分为模型组和活血解毒方组。另选取10只大鼠作为正常对照组,给予等体积蒸馏水灌胃。每组每天干预1次,共12周。分别采用免疫组织化学方法、蛋白质印迹(Western blot)方法检测各组视网膜中磷酸化哺乳动物不育系20样激酶(P-MST)、大肿瘤抑制基因1(Lats1)、磷酸化Yes-相关蛋白(P-YAP)、转录相关因子(TAZ)、TEA结构域转录因子(TEAD)蛋白表达水平的变化。结果免疫组织化学方法的结果显示:与正常组比较,模型组大鼠视网膜中P-MST及P-YAP蛋白表达水平降低;与模型组比较,活血解毒方组大鼠视网膜中P-MST及P-YAP蛋白表达水平升高。Western blot的结果显示:与正常组比较,模型组大鼠视网膜中Lats1、TAZ及TEAD蛋白表达水平升高;与模型组比较,活血解毒方组大鼠视网膜中Lats1、TAZ及TEAD蛋白表达水平降低。结论活血解毒方可能通过Hippo信号通路改善糖尿病视网膜病变。     

三七总皂苷抑制K562细胞mTOR信号通路活性的实验研究

目的 探讨三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对体外培养K562细胞mTOR信号通路相关分子表达及活性的影响.方法 不同浓度的PNS(50～800 μ,g/mL)干预体外培养K562细胞24 ～ 72 h后,MTT比色法检测PNS对K562细胞增殖的抑制作用;AO/EB双荧光染色法观察细胞死亡及凋亡状况;RT-PCR检测mTOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA表达变化;Western blot检测mTOR、p70S6K、4E-BP1及p-mTOR、p-p70S6K、p-4E-BP1蛋白表达量的变化.结果 与对照组相比,浓度为100～ 800 μg/mL的PNS能够抑制K562细胞增殖(P＜0.05),促进K562细胞凋亡及死亡(P＜0.05),PNS对K562细胞72 h的IC50为(229.07±2.36) μg/mL;100、200、400 μg/mL PNS作用于K562细胞72 h后mTOR蛋白表达量及mRNA表达量降低(P＜0.05),且磷酸化蛋白p-mTOR (Ser2448)、p-p70S6K (Thr229/389)及p-4E-BP1(Thr37/46)表达水平也随着药物浓度的增加而降低(P＜0.05).结论 PNS能够抑制K562细胞mTOR信号通路的活性,这可能是PNS抑制K562细胞增殖的机制之一.     

PI3K/Akt/mTOR信号通路及mTOR抑制剂在泌尿系统肿瘤中的研究进展

PI3 K/Akt/mTOR信号通路在血管生成、蛋白合成以及细胞生长代谢中发挥着关键作用,在多种实体性恶性肿瘤中已发现该信号通路调节异常.随着P13K/Akt/mTOR信号通路相关抑制药物的相继问世,尤其是在治疗晚期肾癌中显示出一定的临床疗效,对该通路以及相应抑制药物的深入研究,特别是在泌尿系统肿瘤的应用,成为热点之一.该文总结了PI3K/Akt/mTOR信号通路的发生机制及其在肿瘤形成过程中的作用,并就mTOR抑制剂在泌尿系统肿瘤中的研究进展进行综述.     

Fkbp38基因缺失导致小鼠早发性卵巢功能不全：基于激活mTOR通路并诱导细胞凋亡

目的 探讨他克莫司结合蛋白38（Fkbp38）在卵泡发育中的作用及其缺失导致早发性卵巢功能不全（POI）的机制。方法 采用Cre-loxp系统构建卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠,并应用PCR鉴定小鼠基因型,然后在蛋白水平上验证Fkbp38在卵母细胞中的敲除效果。通过HE染色在显微镜下计数敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量分析卵母细胞缺失Fkbp38基因对小鼠卵泡发育的影响。通过繁殖实验及ELISA实验检测小鼠繁殖能力及血清性激素水平,明确卵母细胞敲除Fkbp38基因对卵巢功能的影响。TUNEL法检测敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况。检测雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路下游靶蛋白磷酸化核糖体S6（PS6）活性验证Fkbp38基因对mTOR信号通路的影响。IF检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）及Bcl2-Associated X（BAX）表达明确Fkbp38基因敲除对卵母细胞发育的影响。结果 卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠模型构建成功。敲除小鼠较对照小鼠表现出生育力下降,性激素水平紊乱,卵巢内原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡数均显著减少（P<0.05）,引起POI样改变。卵母细胞特异性敲除Fkbp38基因后,mTOR信号通路激活,颗粒细胞凋亡增加,卵母细胞内BAX蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,BAX/Bcl-2蛋白比值显著升高（P<0.05）。结论 Fkbp38在卵泡发育中发挥重要作用,其缺失致POI发生的机制可能是通过激活mTOR信号通路诱导细胞凋亡而引起的。     

FSH诱导Hippo信号通路激素代谢相关基因表达的研究

目的探讨卵巢颗粒细胞中Hippo信号通路激素代谢相关基因的表达,为研究女性生殖内分泌异常疾病的发病机制提供理论基础。方法通过体外分离培养原代人卵巢颗粒细胞,检测人卵巢颗粒细中FSH诱导的Hippo信号通路Yes相关蛋白(Yes associated protein, YAP)、及其上下游相关基因,以及激素代谢相关基因的表达调控情况,明确FSH是否诱导Hippo信号通路激素代谢相关基因的调控表达。结果Hippo信号通路下游靶基因CTGF在不同FSH诱导剂量的诱导下表达均明显下调（P<0.001）,而激素代谢相关基因Cyp19（P<0.001）、Ptgs2（P<0.001）、RUNX2（P<0.001）和Errb4（P<0.05）的表达明显上调,差异均有统计学意义。FSH诱导前后YAP基因及其下游TEAD家族相关转录因子表达差异无统计学意义。结论FSH可能诱导Hippo信号通路下游靶基因及相关激素代谢基因参与卵巢局部代谢调节。     

红景天苷对糖尿病大鼠心肌炎症因子和Hippo信号通路相关蛋白的影响

目的 探讨红景天苷(SAL)对糖尿病(DM)大鼠心肌炎症因子和Hippo信号通路相关蛋白的影响。方法 将4周龄雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,正常组(对照组)、DM链脲佐菌素组(STZ组)、SAL治疗组(SAL组),每组5只。DM大鼠模型使用STZ诱导方案。SAL作为DM模型大鼠的治疗措施。HE染色和Masson染色观察心肌病理学改变,Tunel染色观察CM凋亡率。ELISA分别检测心脏组织匀浆和外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平。免疫印迹法分析Hippo信号通路相关蛋白表达水平。RT-PCR法定量检测Yap mRNA含量。结果 与对照组相比,STZ组大鼠CM排列明显紊乱,纤维化增加,CM凋亡增加; TNF-α、IL-1β和IL-6表达显著升高(P＜0.05);Mst1/2、Lats1/2和Yap表达上调,p-Mst1/2、p-Lats1/2和p-Yap表达下调,Yap/p-Yap比值增高(P＜0.05),Yap mRNA表达水平显著增高(P＜0.05)。SAL干预后CM纤维化和凋亡率降低,TNF-α和IL-6表达水平下调,Yap/p-Yap比值降低,Yap mRNA表达水平降低(P＜0.05)。结论 本研究的结果表明,SAL能改善DM大鼠CM功能,其机制与抑制炎症反应,减少细胞凋亡,以及调节Yap/p-Yap有关。SAL对心脏的长期保护作用值得进一步研究。     

蝙蝠葛苏林碱调控Akt/mTOR信号通路对胶质瘤细胞增殖及自噬的影响

目的 探讨蝙蝠葛苏林碱（DAS）对胶质瘤U251和U87细胞生长与增殖的影响及其分子机制。方法用2.5、5.0和10.0μmol/L DAS(DAS组)、10.0μmol/L替莫唑胺（TMZ组）和空白对照（对照组）处理U251和U87细胞。采用CCK-8法检测DAS对细胞活力的影响,细胞集落形成和Edu实验检测DAS对细胞增殖的影响,流式细胞术检测DAS对细胞凋亡的影响,透射电镜观察自噬小体的形成,Western blotting检测DAS对胶质瘤细胞凋亡、自噬和Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,不同浓度DAS组胶质瘤细胞活力逐渐降低（P <0.05）,DAS组细胞活力低于TMZ组（P <0.05）。胶质瘤U251和U87细胞IC50分别为5.11μmol/L和6.35μmol/L。Edu和克隆结果显示,DAS能抑制胶质瘤细胞增殖,且随着药物浓度升高细胞增殖逐渐减少（P <0.05）。流式细胞术结果显示,DAS能诱导胶质瘤细胞凋亡,且随着药物浓度升高细胞凋亡增加（P <0.05）。DAS能增加胶质瘤细胞Bax、L...     

益气活血方对心肌缺血大鼠Akt/mTOR信号通路的影响

目的依托大鼠心肌缺血模型,探讨蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(Akt/m TOR)信号通路在心肌中的表达及益气活血方对其的作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠随机分为模型组、培哚普利组、芪参益气滴丸组、益气活血方组和假手术组,结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死模型,术后第2天灌胃给药。以第7、28天为观测时间点。超声检测各组大鼠心脏功能和结构的变化,HE染色观察心肌病理形态改变,Western blot、RT-PCR法和免疫组化法检测大鼠心肌梗死区边缘Akt、m TOR及磷酸化表达水平。结果第7、28天,与假手术组相比,模型组大鼠心脏左室射血分数(LVEF)、左室短轴率(LVFS)显著降低(P0.01),第7天模型组大鼠左室收缩末期容积(LVESV)显著升高(P0.01),第28天模型组大鼠LVESV和左室舒张末期容积(LVEDV)显著增大(P0.01);与模型组相比,各给药组第28天LVEF、LVFS升高,LVEDV和LVESV显著降低(P0.01)。模型组梗死区边缘室壁变薄,心肌细胞数量减少,心肌细胞排列紊乱,炎性细胞浸润;各给药组梗死区边缘心肌细胞排列紊乱,心肌细胞数量减少。模型组磷酸化Akt(p-Akt)/Akt、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-m TOR)/m TOR值增高(P0.05),Akt、m TOR mRNA表达显著增高(P0.01),p-Akt、p-m TOR阳性细胞率明显增高(P0.01);各给药组p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR比值增高(P0.05),Akt、m TOR m-RNA表达增强(P0.05或P0.01),各给药组均可明显提高pAkt、p-m TOR阳性细胞率水平(P0.05)。结论益气活血方能够改善心肌缺血大鼠心脏功能,可能通过激活心脏自我保护机制Akt/m TOR信号通路产生保护心肌细胞的作用。