大肠杆菌分泌表达裂解性多糖单加氧酶发酵条件的优化

裂解性多糖单加氧酶(Lytic polysaccharide monooxygenases,LPMOs)是一种铜离子依赖型的氧化酶,可以降解生物质中的顽固多糖。因此,LPMOs在木质纤维素转化为生物燃料或其他有价值的寡糖方面得到了广泛的研究。该研究对来源嗜热毁丝霉的MtC1 LPMO在大肠杆菌中进行了异源表达,首先研究了不同信号肽对重组蛋白表达的影响,结果表明PelB信号肽可以成功将MtC1 LPMO分泌至细胞外,提高了MtC1 LPMO的总可溶性蛋白含量。为进一步提高MtC1 LPMO胞外表达量,对诱导时期、诱导剂浓度、诱导温度、发酵时间和乙醇浓度进行了优化。实验结果表明,在培养基OD 600值达到0.9时,添加终浓度为0.5 mmol/L的IPTG和终体积分数为2%的乙醇,然后于30℃发酵16 h后重组MtC1 LPMO的表达量最高,可溶性蛋白总含量为12.65 mg/L,为优化前的2.05倍。其中细胞外蛋白含量也达到了最高,为8.51 mg/L,细胞外比率为67.30%,以2,6-二甲氧基苯酚为底物在标准条件下测定的比活力为10.3 U/g。     

稻瘟病菌单加氧酶lpmo M1基因的克隆及生物信息学分析

多糖裂解单加氧酶（LPMO）是一类新型的可以与水解酶系协同降解纤维素、几丁质和淀粉等难溶多糖的酶。以稻瘟病菌（Magnaporthe grisea 70-15）为研究对象,采用逆转录-聚合酶链反应克隆得到多糖裂解单加氧酶基因lpmo M1,成功构建了真核表达载体pPICZαA-lpmo M1。生物信息学分析表明该基因编码区长819 bp,编码272个氨基酸,预测该基因的理论分子质量为28.85 ku,等电点为7.66;结构预测显示存在7个O-糖基化位点和16个磷酸化位点,没有N-糖基化位点。通过生物软件Vector NTI对不同来源的LPMO的同源性进行分析,结果显示稻瘟病菌LPMO M1与其他LPMO同源性最高仅为41%;系统进化分析发现稻瘟病菌（Magnaporthe grisea 70-15）的多糖裂解单加氧酶LPMO M1与黄孢原毛平革菌（Phanerochaete chrysosporium）的同类酶Gh61D亲缘关系最近。     

褐藻胶裂解酶的基因克隆及表达条件优化

采用大肠杆菌（Escherichia coli）表达海洋弧菌（Vibrio sp.）X511的褐藻胶裂解酶基因,以实现对该酶的大量制备及酶学性质研究。通过序列分析,预测该酶的前20个氨基酸为信号肽,去除信号肽后的蛋白质分子质量约为30 254.28 Da,等电点8.75,分子式为C1368H2100N364O401S6 ,对应的基因序列命名为alg1987。按如下方案构建重组菌：设计特异性核酸引物,PCR扩增得到alg1987;将重组质粒pET-30(a)-alg1987导入大肠杆菌Trans5α进行测序;提取阳性pET-30(a)-alg1987质粒导入大肠杆菌BL21,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测诱导后的重组菌胞液上清,发现异源表达的褐藻胶裂解酶分子质量大小与预测值相近。对重组菌中的褐藻胶裂解酶进行表达条件优化,结果显示,最适参数为诱导温度16 ℃,诱导时间16 h,诱导剂IPTG浓度0.8 mmol/L。     

香料烟烟叶多糖的热裂解产物研究

为了研究香料烟叶纯化多糖的热裂解产物,采用Sepharose CL-6B凝胶排阻层析对香料烟叶粗多糖进行分离纯化得到2个多糖组分。通过气相色谱和气质联用分析得出,组分1的单糖组成为甘露糖∶半乳糖∶核糖∶鼠李糖∶阿拉伯糖(2.5∶2∶1.5∶1∶1),组分2的单糖组成为葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖(1.7∶1.5∶1)。并利用裂解-气相色谱-质谱联用(Py-GC/MS0),定性定量测定分析热裂解产物,比较不同多糖组分分别在600℃,900℃下的裂解产物差异,对裂解产物进行归类分析,研究纯化后香料烟叶多糖在无氧条件下的热裂解情况。并分析主要裂解产物致香成分的致香效果,以期为烟草多糖成分在卷烟中的作用提供一些理论基础。     

维氏气单胞菌来源几丁质酶的克隆表达及应用

丰年虾是一种小型甲壳类动物,孵化后的幼虫是水产动物的优质饵料,残留的卵壳则作为废弃物处理.然而丰年虾卵壳含有丰富的蛋白质和几丁质,具有极大的应用潜力.为了从丰年虾卵壳中制备几丁寡糖,选择了水解产物分布宽泛和含有几丁质结合域的维氏气单胞菌来源的几丁质酶ChiB565,将其在毕赤酵母Pichia pastoris中进行重组...     

微生物几丁质酶的研究进展及应用现状

几丁质酶（chitinase）是一类可催化几丁质水解为N-乙酰氨基葡萄糖寡聚体或单体的糖苷水解酶,广泛存在于微生物（真菌、细菌、放线菌与病毒）及动植物中,因其特殊的生理功能而被广泛应用于生物防治、医学应用、废弃物处理及环境保护等领域。文章综述了微生物几丁质酶的来源与分类、发酵条件、酶学性质及应用领域,以期为几丁质酶的进一步开发应用提供理论指导。     

高产几丁质酶菌株的诱变选育及发酵条件的优化

以粘质沙雷氏菌G3-1为出发菌株,通过紫外-LiCl和微波-LiCl两轮复合诱变,得到一株产酶能力高且遗传稳定的突变株GF-21,通过单因素实验和正交实验对突变株GF-21的发酵培养基和发酵条件进行优化。结果表明,最优发酵培养基成分为:乳糖6 g/L,尿素10 g/L,KCl 1.0 mmol/L,NaCl 5 g/L,胶体几丁质10 g/L,此时,几丁质酶活力为4.73 U/mL,比优化前提高了109.3%,较出发菌株提高了470%;最优发酵条件为:培养基初始pH9.0,温度30 ℃,摇床转速220 r/min,接种龄5 h,接种量10%。本文为几丁质酶的生产应用奠定了良好的基础。     

枸杞多糖的热裂解及其在卷烟中的应用

为研究枸杞多糖的热裂解行为及其对卷烟感官质量的影响,利用水提醇沉法对枸杞多糖进行了提取分离,应用热裂解-气相色谱-质谱联用仪分析了枸杞多糖在不同裂解氛围,即无氧条件(N2)和有氧条件(10%O2和90%N2),以及不同温度(300℃,600℃,750℃和900℃)下的热裂解产物,利用归一化法进行定量分析.结果表明:枸杞多糖在卷烟中起到了掩盖杂气、去除刺激、改善余味的作用,使香气细腻程度有所提升,烟气状态、圆润感及香气的谐调性较好;枸杞多糖在卷烟中的适宜添加量为(5~10)×10-6g;枸杞多糖在热裂解过程中可以释放出小分子的醛类、酮类物质等具有特殊香味的化合物,可产生花香、烘烤香、甜香、奶香、果香等香韵.     

哈密瓜中几丁质酶基因的克隆及表达分析

几丁质酶是一种重要的病程相关蛋白,在植物抗病中发挥积极作用。为研究哈密瓜中几丁质酶对青霉菌侵染的抗性作用,本研究采用RT-PCR的方法,克隆一段哈密瓜中几丁质酶基因的cDNA,并采用相对荧光定量法(SYBR Green)分析其表达量。克隆得到的几丁质酶基因片段HmCHI长1153 bp,最大开放阅读框为445个核苷酸,编码145个氨基酸,属于18家族Class Ⅲ几丁质酶基因;推测其所编码蛋白分子量为15.04 ku,理论等电点8.82,为疏水性蛋白;预测其有一个信号肽,为非跨膜蛋白,定位于细胞间隙;HmCHI氨基酸序列与黄瓜的亲缘关系最近。荧光定量分析显示,实验组的表达高峰出现时间较晚,维持高表达量的时间相对较长,上调幅度明显大于对照组。研究结果表明HmCHI可能在哈密瓜果实真菌胁迫响应中发挥重要作用。     

几丁质酶菌株L012的产酶条件研究

在前期实验的基础上,进一步对优良菌株L012的产酶条件进行了研究.结合单因素实验和正交实验结果,确定了该菌株的最佳产酶培养基组成(g/L):细粉几丁质10,淀粉3,玉米浆3,NaNO3 1.0,K2HPO4 1.05,KH2PO4 0.45,NaCl 0.1,MgSO4·7H2O 0.3,FeSO4·7 H2O 0.03,pH 7.0;最佳培养条件:起始pH 7.0,培养温度30 ℃,摇瓶装液量30 mL,摇床转速180 r/min,接种菌龄24h,接种量10％,发酵时程48 h.条件优化后,菌株L012产酶水平从原来的0.75 IU/mL提高到2.31 IU/mL.     

粪产碱杆菌AF01产可溶性胞外多糖发酵条件的优化

粪产碱杆菌（Alcaligenes Faecalis）AF 01产可溶性胞外多糖（EPS）,本文采用单因素和正交实验设计,对其进行发酵优化研究。实验结果表明,最优发酵培养基:蔗糖50 g/L,KNO₃ 1.1 g/L,酵母膏0.5 g/L,Ca CO₃ 15 g/L;最优发酵条件为:发酵时间4 d,初始pH7.0,接种量为2.5%,转速200 r/min,温度30℃。在此条件下,该菌株可溶性胞外多糖的产量有了极大的提高,达到10.8 g/L,为该胞外多糖的规模化生产提供了重要的参考。      

单核细胞增多性李斯特菌p60蛋白表达条件的优化

在成功构建重组表达载体pET-28a-p60 和获得重组宿主菌E.coli BL21(DE3)的基础上,对重组宿主菌E.coliBL21(DE3)进行表达p60 蛋白条件的优化研究。结果表明：将重组大肠杆菌培养至OD600nm 达0.7～0.8 左右时,加入浓度为1mmol/L 的异丙基-β-D- 硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),在摇床温度为25℃,转速为150r/min 条件下诱导表达6h,可得到重组表达的p60 蛋白占总蛋白的比例为42.32%,其中可溶性蛋白占总p60 蛋白的比例为85.36% 左右,为p60 蛋白诱导表达的最优条件。     

石斛多糖超高压提取工艺条件的优化

采用超高压方法提取铁皮石斛中的多糖成分.在单因素实验的基础上,选取压力、时间、粉碎度和固液比(g∶mL)4个影响因素,以石斛多糖为指标,通过正交试验优化超高压方法提取石斛多糖的工艺条件.结果表明,将石斛粉碎到80目后,按固液比1∶20,采用300 MPa的压力提取6 min后,石斛多糖的得率达到19.27%.这表明超高压方法是一有效的提取石斛多糖的方法.     

天然多糖类/蛋白质复合材料的研究进展

在参考了 31篇文献的基础上 ,详述了天然多糖类与蛋白质复合材料的研究进展     

大枣多糖的提取工艺及抗氧化作用研究

通过设计正交试验优化水浸、超声和微波等方法提取大枣多糖的工艺,在优化条件下,3种方法大枣多糖提取率分别达到11.33%、12.40%、10.98%。体外抗氧化研究结果表明,0.075～0.135mg/mL大枣多糖对.OH自由基最大清除率分别为48.5%(微波法),47.1%(水浸法),28.2%(超声法)。3种方法获得的大枣多糖提取液均具有体外清除.OH的作用,并呈明显的量效关系,但不同提取方法获得的大枣多糖在抗氧化方面表现出较大的差异,说明提取工艺与其生物学效能密切相关。综合提取工艺、多糖提取率以及抗氧化作用效率,微波法提取大枣多糖效果最佳。     

甲烷氧化菌及甲烷单加氧酶的研究进展

甲烷氧化菌在全球大气甲烷平衡中起着重要的角色,同时甲烷氧化菌中所含特征酶甲烷单加氧酶又具有将由于甲烷氧化菌能氧化一系列的烷烃类、烯烃类以及取代型脂肪族类化合物,因而在生物修复、生物催化和温室气体甲烷的吸收中具有的应用前景和潜力.该文对甲烷氧化菌的分类,甲烷单加氧酶的特性以及在工业应用方面的研究作了简单的概述,分析目前将甲烷氧化菌或甲烷单加氧酶应用于工业化生产存在的问题,并指出今后应加强研究的方面.     

山药多糖提取优化及对家兔血小板数的影响

对山药中多糖的提取工艺进行研究,通过单因素实验和L9(34)正交实验对山药多糖提取条件进行了优化,单因素考察了料液比、提取时间、提取温度、乙醇浓度等对山药多糖提取率的影响。试验研究山药多糖对家兔血小板数的影响,山药多糖给药量分大、中、小剂量组(100、75、50 mg/kg),正常对照组给等体积生理盐水,每天1次,连续给药1个月,每周对家兔抽血观察血小板数量的变化。结果表明,山药多糖的最佳提取条件为:温度80℃、提取时间2 h、料液比1:40、乙醇浓度90%,多糖提取率为2.12%;山药多糖能够增加家兔血小板数,而且多糖量越大家兔血小板数增加越多。     

蛋白质、多糖和多酚混合体系稳定性研究

该文研究蛋白质、多糖和多酚混合体系的稳定性,在单因素实验基础上,采用Box–Behnken中心组合设计的方法,研究各自变量及其交互作用对蛋白质,多糖和多酚混合体系稳定性的影响。确定其最佳条件:温度为37.75℃,p H为5.25,离子浓度为0.15 mol/L,在此条件下,稳定性最好。     

假蜜环菌胞内多糖的发酵研究

对假蜜环菌进行发酵条件的优化,确定其最适培养基为葡萄糖3g/L,蔗糖7g/L,蛋白胨5g/L,酵母膏3g/L,K2HPO40.1g/L,KH2PO4 0.5g/L,MgSO4 0.5g/L,pH6.4。最适培养条件为27℃培养5d,通气量为(200mL培养基/500mL三角瓶),160r/min。在最适培养基及培养条件下,假蜜环菌胞内多糖的产量可达298.35mg/L,菌体生物量可达314.3g/L。