呼吸型IBV-M41血凝抗原的研制与应用

利用A型魏氏梭菌滤液处理100倍浓缩的IBV-M41株病毒液,成功研制出IBV血凝抗原,HA效价为1∶256～1∶1024,且仅与IBV阳性血清发生反应,而不与其它标准阳性血清反应。建立了IBV的血凝抑制(HI)反应条件,以梅里亚公司和荷兰GD公司生产的IBV商品血凝抗原作为对照,对免疫鸡和SPF鸡血清进行了抗体测定,检测结果无明显差异,且HI检测结果与IDEXX诊断试剂盒的结果符合率为94.2%。研究表明:本实验所建立的方法敏感性高、特异性强,适合于SPF鸡监测和IB疫苗免疫效果检测。     

猪乙型脑炎间接ELISA与血凝抑制试验方法的比较

用血凝抑制试验和间接ELISA两种方法检测乙脑阳性血清均呈阳性反应,检测乙脑阴性血清均呈阴性反应。用间接ELISA对来自9个猪场74份送检血清进行了猪乙脑病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）抗体检测,并与血凝抑制试验（HI）进行对比,两种方法检测总符合率为85.1%(63/74),经统计分析,检测结果差异不显著(P＞0.05)。对来自无猪乙脑病猪场24头健康猪的血清进行检测,两种方法结果均为阴性,符合率为100%。对10份阳性血清进行检测,ELISA检测效价较HI效价高,表明ELISA比HI敏感。结果表明,ELISA与HI检测结果相符,前者更适用于猪血清中乙脑IgG抗体的大规模检测。     

单抗竞争EILSA试验及其在鸡白痢病检疫中的应用

应用针对沙门氏菌 O_9抗原的单抗3-47-26酶结合物和鸡白痢沙门氏菌脂多糖抗原建立了一种单抗竞争 ELISA试验,以检测鸡白痢抗体.试验结果表明,79份鸡白痢阳性血清具有显著抑制作用,而130份鸡白痢阴性血清以及48份 SPF 鸡血清抑制不明显.对94份种鸡血清的检疫结果表明,单抗竞争 ELISA 比 PAT、AGPD、PHA 特异性好、敏感性高,文中进一步讨论了该法的应用前景.     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

建立了一种检测鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)抗体终点滴度(end-point titer, ET)的间接ELISA方法，以应用于监测鸡免疫疫苗或者感染野毒后的抗体。以大肠杆菌表达的IBV核衣壳(N)蛋白作为包被抗原，以SPF鸡血清和感染IBV的SPF鸡血清分别作为阴性血清和阳性血清对照，优化确定出ELISA的各项技术参数。对66份SPF鸡血清进行测试，确定了阴、阳性S/P临界值为0.385。特异性试验表明包被抗原与其他常见病原的阳性血清均不发生交叉反应，批内和批间重复性试验的变异系数均小于10.00%。选取了50份临床血清样品，通过阳性-阴性阈值(positive negative threshold, PNT)基线确定ET值，建立了固定血清稀释倍数(1∶500)处S/P值与ET的线性回归方程，相关系数(R²)为0.959 3(P<0.000 1)。通过检测2个商品鸡群在1～49日龄不同时间点采集的461份血清样本，比较了建立的IBVN-ELISA方法与IDEXX公司提供的商品化试剂盒。本研究建立的I...     

鸡产蛋下降综合征血凝抑制试验抗原符合率比较

用哈尔滨维科生物技术开发公司生产的批号为200901的鸡减蛋综合征京911株油乳剂灭活疫苗,以0.5mL/只剂量接种120日龄SPF鸡10只,7d后采血分离血清,以后每隔一定时间进行采血、分离血清。同时又采集了发病鸡场的15份发病鸡血清。分别用血凝抑制试验和琼脂扩散(AGP)试验对自制的阳性血清和发病鸡血清样品进行血清学检查。结果表明:当血清HI效价等于或大于28时,两种方法的符合率可达100%;当血清的HI效价为26~27时,AGP与HI的符合率为73.33%~86.67%;当血清的HI效价为24~25时AGP的检出率很低或完全呈阴性。从两种方法的符合率比较还可得出HI试验检测的灵敏度要高于AGP,而且HI法简单、特异、快速、实用、方便,不但能定性还可以定量。     

鸡传染性支气管炎HA和HI试验方法的研究

用传染性支气管炎(IB)红细胞凝集抑制(HI)试验对SPF鸡血清、健康鸡血清、用SPF鸡制备的IBV标准阳性血清、感染鸡血清和自然发病鸡血清及野外样品测定结果证明,本法操作简便、特异性强、敏感性高、需时短、结果易判定。IBV HI抗体于感染后3周开始出现,然后持续上升,二个月后仍呈上升趋势.本法可定性或定量检测鸡IBV抗体,特别适用于现地诊断和免疫监测。     

传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为了快速检测针对传染性支气管炎病毒(IBV)抗体,本研究建立相应的间接ELISA(iELISA)检测方法。以本实验室分离的临床毒株DS10为检测抗原,经过差速离心纯化获得DS10病毒作为包被抗原,利用方阵试验,优化一系列条件,最终确定了最佳的ELISA反应条件。抗原最佳包被浓度为0.11mg/mL,血清最适稀释度为1:100,封闭液为含1%BSA的PBST,封闭时间为60min,一抗作用时间90min,HRP标记的兔抗鸡IgG稀释倍数为1:3500,作用时间为60min,显色时间为10min。用iELISA方法和血凝抑制试验(HI)同时检测145份血清样品的结果表明,建立的iELISA方法与常规的HI检测的符合率为92.41%,iELISA和HI的阳性检出率分别为92.41%和90.34%,iELISA的敏感性略优于HI。     

用HI和ELISA方法检测SPF鸡血清和蛋黄中ND抗体的比较

分别用血凝抑制试验（HI）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测42周和48周SPF鸡血清、以及同期SPF鸡蛋蛋黄中新城疫（ND）抗体。结果表明,两种方法检测的120份血清中均无ND抗体,呈阴性;120枚SPF鸡蛋蛋黄检测,ELISA方法检测结果全为阴性;HI方法检测结果25份阳性,差异较为明显。     

新城疫病毒HN特异性多肽抗体间接ELISA方法的建立

为建立快速检测新城疫病毒抗体的血清学方法,通过合成NDV主要保护性抗原HN蛋白和F蛋白上的特异性表位多肽,将其与BSA载体蛋白偶联,作为包被抗原,建立检测NDV抗体的间接ELISA方法。并对其进行敏感性、特异性、与HI方法阴阳性符合率检测。结果显示:基于"PDEQDYQIRMAKSSYKPGRFGGKRIQQAILS"多肽的该ELISA方法与其他鸡主要传染病阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性。通过对112份临床鸡血清样品进行检测,该方法的敏感性为94.0%、特异性为100%,与HI方法检测的阴阳性符合率为96.4%。研究表明,建立的ELISA方法对血清中NDV的抗体水平检测具有较高的灵敏度和很好的特异性,可为ND疫苗免疫后抗体水平的检测和监测提供可靠工具。     

ELISA 检测新城疫病毒抗体

用鸡红细胞凝集解脱法提纯的新城疫病毒(NDV)抗原包被酶标板,最适抗原浓度为0.1μg～8μg/孔;鸡血清的最适稀释倍数为1:400.该抗原与马立克氏病等七种禽病抗血清不发生交叉反应.与血凝抑制试验(HI)比较.在检测的233份血清样本中,ELISA 阳性124份(占53%);HI 效价1:8以上者为84份(占36%);84份 HI 阳性样品,ELISA 亦为阳性;40份 HI 阴性样品,ELISA却为阳性;没有 ELISA 阴性而 HI 阳性的样本.两法可追求检测结果一致的为193/233(占83%).     

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。     

鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒的研制

采用加蔗糖垫离心纯化鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制备抗原，用提纯的IBV抗原包被微量板，建立了检测鸡传染性支气管炎(IB)抗体的ELISA试剂盒。抗原、被检血清和酶标结合物的最佳工作浓度分别为10ug／ml、1：200和1：3200。与IDEXX试剂盒相比，其敏感性、重复性、特异性均接近国外同类产品水平。对SPF鸡血清、实验免疫与攻毒的SPF鸡血清进行检测，结果表明所建立的ELISA特异性为95．6％，与IDEXX试剂盒符合率为95．6％。用于检测抗IBV特异性IgG抗体发现在免疫接种IB弱毒苗后，第4天即可检测到IgG抗体，峰值在第3周。试验鸡在通过滴鼻、点眼途径人工感染IBV强毒后，第5天抗体滴度明显上升。我们认为，该法是目前我国SPF鸡质量监测、养鸡生产中进行IB监测较好的方法。     

鸡传染性支气管炎微量血凝抑制试验方法的研究

用胰酶处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制成血凝(HA)抗原,HA＝1:16384,用此抗原建立了微量血凝抑制试验(HI)方法检测IBV阳性血清。IBV阳性血清鸡胚病毒中和试验(NT)结果与HI效价呈正相关,相关系数r＝0.29,HI效价达1:8以上可保护鸡胚抵抗200个MLD的IBV攻击,表明HI抗体是保护性抗体,该方法具有较大的实用价值。     

不同厂家鸡白痢抗原检测效果比较

通过血清或全血平板凝集方法淘汰阳性鸡,是目前鸡白痢净化使用的主要检测方法。本研究采用3个不同厂家鸡白痢抗原分别检测人工感染SPF鸡制备的试验血清和对照血清,比较不同抗原的敏感性和稳定性。结果显示,3种抗原对试验组血清样品的总检出率抗原BAC,不同抗原之间阳性符合率较低。3种抗原稳定性均较差,同批次阳性符合率均低于85%,抗原A和B批次间阳性符合率低于60%。本研究将为鸡白痢凝集抗原的选择提供参考依据。     

不同样本对禽白血病ELISA检测结果的影响

为了分析不同样本对应用ELISA法检测禽白血病阳性检出率的影响,试验将20只10日龄SPF鸡随机均分为试验组和对照组,试验组接种禽白血病病毒,对照组接种生理盐水,7 d后采集各组SPF鸡的肝脏组织、血清、泄殖腔拭子和骨髓进行ELISA检测,统计禽白血病的阳性检出率。结果表明:试验组SPF鸡的肝脏组织、血清和骨髓的禽白血病检测结果相对一致,阳性检出率为100%;而泄殖腔拭子的阳性检出率为70%,相对其他样本结果偏低。说明以泄殖腔拭子为样本时,其ELISA检测结果可能具有假阴性现象,综合考虑,以血清为样本进行禽白血病ELISA检测的阳性检出率更为可靠。     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的血清学方法,本试验以IBV为检测抗原,建立了一种检测IBV抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化.研究结果显示,抗原的最佳包被浓度为19.2 μg/mL,最佳包被条件为37 ℃ 1 h后4 ℃过夜;血清的最佳稀释度为1:800,37 ℃孵育60 min;酶标二抗稀释度为1:7 000,37 ℃孵育60 min;底物显色为37 ℃避光作用10 min.经特异性、重复性、敏感性试验证明,该方法与鸡常见病原的阳性血清均无交叉反应,重复性较好及血清稀释至1:12 800时仍可检测到IBV抗体.结果表明,本试验所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性.     

鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

参照IBV S1基因序列,RT-PCR扩增长约867bp的S1基因主要抗原区域,将目的片段定向克隆到pET30α原核表达载体,转化Rossetta表达菌,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组S1蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的免疫活性。以该蛋白作为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗体的间接ELISA检测方法。该方法与其他6种常见禽病病毒(H5亚型禽流感病毒(H5-AIV)、H9亚型禽流感病毒(H9-AIV)、新城疫病毒(NDV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、鸡法氏囊病毒(IBDV))阳性血清不发生交叉反应;批内和批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;相对于HI试验的符合率、敏感性、特异性分别为91.58%、91.24%和92.31%;相对于IDEXX ELISA的符合率、敏感性、特异性分别为94.55%、95.42%和92.96%;应用该方法检测山东及周边地区2 685份免疫鸡和168份未免疫鸡血清样品,免疫合格率和阳性感染率分别为85.25%和17.26%。本试验截短表达的S1蛋白具有良好的免疫活性,建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的敏感性、特异性、重复性和临床适用性,将为IBV的免疫抗体监测、临床野毒感染快速诊断和流行病学调查提供了一种新的血清学诊断技术,具有良好的推广应用前景。     

鸡传染性支气管炎病毒(M41株)血凝抑制试验抗原的制备及检验

用传染性支气管炎病毒(IBV)M41株毒种接种11日龄鸡胚,收获感染鸡胚病毒液,将新鲜的病毒液用小型盒式超滤浓缩系统浓缩,然后用高速离心机离心,去上清,沉淀用原病毒液体积1/100的HA缓冲液悬浮,制备出100倍浓缩的IBV病毒液;将100倍浓缩的IBV病毒液中加入15%^20%的A型魏氏梭菌滤液,充分混匀,放37℃恒温振荡器感作2h,取出置2-8℃条件下48 h.制备出了5批IBV M41株HI杭原.检验结果显示:5批HI抗原的性状均为白色混浊液体,底部有少量沉淀;无菌检验为阴性,HA效价为1:128～1:512,5批杭原与IB阳性血清呈阳性反应,HI效价为81og2,而与阴性血清、新城疫阳性血清、H9亚型禽流感阳性血清、H5亚型禽流感阳性血清及产蛋下降综合征阳性血清呈阴性反应,HI效价低于21og2.各项检验结果均符合要求.     

单抗间接Dot-ELISA检测禽脑脊髓炎病毒抗原的研究

利用制备的禽脑脊髓炎病毒 (AEV)单抗建立了检测AEV抗原的间接Dot ELISA方法 ,对AEV最低检出量为 1 6 0 8μg/mL。人工感染 1日龄SPF鸡 ,取发病鸡 (6～1 3日龄 )相应病料 ,各病料样本阳性检出率分别为 :脑 1 0 0 % ,胰 96 % ,十二指肠 98% ,腺胃 98%。对 40份临床自然发病鸡病料检测 ,阳性检出率为 92 %。对 1 0份AEV病原分离阳性样品 ,检测阳性率为 1 0 0 % ,而SPF鸡对照均为阴性     

鸡传染性喉气管炎兔源高免血清有效酶标免疫组化试验

用辣根过氧化物酶HRP标记ILT兔源高免血清抗体，进行免疫组化试验检测15份人工感染ILT患鸡，5份(ND)患鸡和10份健康鸡气管分泌物，并进行了特异性和敏感性测定．结果人工感染ILT患鸡阳性检出率高达100％，ND患鸡和健康鸡阳性检出率为0．表明ILT兔源高免血清酶联免疫组化试验是一种特异性强、敏感性高的检测诊断方法．