SOX9在青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间质干细胞的表达及意义

目的：探讨SOX9在青少年特发性脊柱侧凸（AIS）发病机制中的作用。方法：30例12～18岁志愿者分为两组，AIS组20例，同年龄对照组10例。分别从髂前上棘处穿刺抽取10ml骨髓，肝素抗凝。采用密度梯度离心法分离骨髓间质干细胞（MSCs），体外培养并传至P2代行表型鉴定，分别采用RT—PCR法、Western blotting法及免疫荧光法检测两组MSCs中SOX9的表达情况。结果：不论是核酸水平还是蛋白水平，AIS组患者的SOX9表达均高于对照组（P〈0．01）。结论：转录因子SOX9在MSCs水平表达强度的异常可能与AIS发病相关。     

Runx2在青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间质干细胞中的表达及意义

目的：从骨髓间质干细胞（MSCs）水平探讨青少年特发性脊柱侧凸（AIS）发病的机制。方法：40例12～18岁志愿者，AIS患者20例，先天性脊柱侧凸（CS）患者10例，正常对照组10例。分别从髂前上棘处穿刺抽取10ml骨髓，肝素抗凝。采用密度梯度离心法分离MSCs，体外培养并传至P3代时行表型鉴定，采用RT-PCR法检测3组MSCs中核心结合因子α1（Runx2）mRNA的表达强度。结果：分离所得单个核细胞传至P3代经流式细胞仪鉴定表型与MSCs表面标记相符。AIS组Runx2的mRNA表达强度与CS组及正常对照组相比有显著统计学差异（P〈0．01），CS组与正常对照组相比无统计学差异（P〉0．05）。结论：转录因子Runx2在MSCs水平表达强度的异常可能与AIS发病有关。     

M-CSF在青少年特发性脊柱侧凸患者成骨细胞中的表达及意义

目的从成骨细胞（osteoblast,OB）水平探讨巨噬细胞集落因子（macrophage colony stimulating factor,MCSF）与青少年特发性脊柱侧凸（adolescent idiopathic scoliosis,AIS）患者骨量降低的关系。方法AIS患者27例,其中男25例,女2例;年龄12～18岁,平均14.9岁;Cobb角40°～94°,平均57.3°。将所有AIS患者分为两组：A组14例,为骨量正常患者;B组13例,为骨量减低患者。正常对照组8例（定为C组）,年龄12～18岁,平均15.3岁。3组均采用双能X线吸收测量仪（dual-energy X-ray absorptiometry,DEXA）测量骨密度（bone mineral density,BMD）,测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。所有受试者术中取适量髂前上嵴的松质骨,运用植块法培养成骨细胞。培养至P3代后行表型鉴定,用RT-PCR检测AIS组和正常对照组中M-CSF mRNA的表达水平。结果B组中M-CSFmRNA的表达量均较A组（P〈0.05）和C组高（P〈0.05）,A组与C组M-CSFmRNA的表达量无显著统计学差异（P〉0.05）。结论M-CSF在OB水平mRNA表达强度的异常可能与AIS骨量降低的分子机制相关。     

青少年特发性脊柱侧凸患者软骨细胞中Sox9的表达及意义

目的:检测转录因子Sox9在青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者软骨细胞中的表达,探讨其在AIS患者生长发育异常中的可能作用.方法:14例(男1例,女13例)年龄10～16岁(平均13.1岁)的AIS患者(AIS组),Cobb角41°～88°,平均51.4°;8例(男1例,女7例)非AIS患者(对照组),年龄10～15岁,平均12.9岁;腰椎骨折1例,脊髓室管膜瘤1例,腰椎间盘突出症1例,脊柱骨样骨瘤1例,先天性髋关节脱位4例.在行手术治疗时获取髂骨生长板软骨,采用酶消化法体外分离、培养、传代,并观察细胞形态;采用Ⅱ型胶原细胞免疫组织化学法对传至P2代的细胞行表型鉴定;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测两组软骨细胞中Sox9 mRNA及蛋白表达情况.结果:酶消化法体外单层培养软骨细胞成功;细胞传至P2代时具有软骨细胞的典型形态特征,呈多角状;Ⅱ型胶原细胞免疫组化染色呈阳性,细胞胞浆内可见棕褐色颗粒,很好地保持了软骨细胞的表型特征;AIS组患者软骨细胞中Sox9核酸表达强度为1.08±0.14,蛋白表达强度为0.38±0.14,均较对照组高(P<0.05).结论:转录因子SOx9在软骨细胞水平表达强度的异常可能与AIS患者生长发育异常有关.     

青少年特发性脊柱侧凸患者骨髓间充质干细胞褪黑素信号通路初步研究

目的 研究青少年特发性脊柱侧凸(Ms)患者骨髓间充质干细胞(BMSCs)褪黑素信号通路是否存在异常.方法 24例12～18岁志愿者,AIS患者15例,正常对照组9例.分别从患者髂前上棘处穿刺抽取10 ml骨髓,肝素抗凝.采用密度梯度离心法分离BMSCs,体外培养并传至P3代,进行表型鉴定.取P3代BMSCs,先采用福斯可林刺激BMSCs内环磷酸腺苷(cAMP)升高,然后用不同浓度褪黑素刺激细胞,检测细胞内cAMP的水平.结果 分离的单个核细胞经培养至P3代,使用流式细胞仪进行细胞表型鉴定,体外培养细胞的表型与BMSCs的表面标志相符.AIS组和正常对照组BMSCs的cAMP的基础水平都很低,在给予福斯可林刺激以后,cAMP的水平明显升高,此后再给予生理剂量的褪黑素刺激后,两组cAMP水平的抑制程度差异无统计学意义(P>0.05);给予药理剂量的褪黑素刺激后,两组cAMP水平的抑制程度差异同样无统计学意义(P>0.05).结论 MS患者BMSCs褪黑素信号通路可能不存在异常.     

青少年特发性脊柱侧凸患者骨密度变化的分析

目的 :探 讨青 少年 特 发性 脊柱 侧 凸患 者的 骨 密度 变化 规 律。方 法:应用 双 能 X 线骨 密 度吸 收仪 测 定 101例特 发 性 脊 柱侧 凸 患 者 腰椎 (L2￣L4)和 股 骨 近 端 (股 骨 颈 、大 转 子 、W ard's 三 角 )的 骨 密 度 ,结 合 脊 柱 侧 凸 严 重程度 进行 分 析,并 与 62名 同 年龄 段正 常 青少 年骨 密 度进 行比 较 。结 果:特发 性脊 柱 侧凸 患者 所 测各 部位 的 骨密度均 明显 低 于正 常对 照 组(P<0.05),腰 椎 骨 密 度的 降 低 比 股骨 明 显 ,股 骨 近 端 的三 个 部 位 ,以 W ard's 三 角的 骨密度 降低 尤 为显 著。有 75.2% 的 特发 性脊 柱 侧凸 患者 发生 骨 密度 降低 ,其 中 26.7% 发 生骨 量 减少 , 48.5% 符 合骨质疏 松症 的 诊断 标准 ;但 其骨 密 度的 降低 程 度与 侧凸 严 重程 度无 明 显相 关性 。 结论 :青 少年 特 发性 脊 柱 侧凸 患者存 在着 骨 密度 的降 低 ,其与 侧 凸的 严重 程 度无 关,可能 与 特发 性脊 柱 侧凸 的发 病 机理 有关 。     

RANKL/QPG在青少年特发性脊柱侧凸患者低骨量发生机制中的作用

目的从骨髓间质干细胞（MSCs）水平探讨RANKL及OPG与青少年特发性脊柱侧凸（AIS）患者骨量降低的关系。方法46例12-17岁志愿者分为2组,其中AIS组30例,年龄12-17岁,平均14.1岁。正常对照组16例,年龄12-17岁,平均14.7岁。AIS组Lenke1型14例,2型2例,3型6例,5型8例。2组均采用双能X线吸收测量仪测量BMD,测量部位包括非优势侧股骨近端及腰椎。分别从2组志愿者髂前上棘处骨穿刺抽取10ml骨髓,肝素抗凝。体外密度梯度离心法分离培养MSCs,扩增至P3代行表型鉴定,RT-PCR法检测2组MSCs中RANKL及OPG的 mRNA表达强度。结果AIS组腰椎（L2-L4）及股骨近端的BMD值明显低于正常对照组。AIS组RANKL的 mRNA表达显著强于对照组（P〈0.01）,而OPG的 mRNA表达显著低于对照组（P〈0.01）。结论RANKL及OPG在MSCs水平表达强度的异常可能与AIS骨量降低的分子机制相关。     

青少年特发性脊柱侧凸患者的中枢神经异常

目的 :检查青少年特发性脊柱侧凸 (AIS)患者的后脑及脊髓的结构和功能异常 ,探讨两者间的相关性及与Cobb角的关系。方法 :用MRI探查AIS患者的后脑及脊髓的解剖结构 ,用体感诱发电位 (SEP)检查体感传导通路功能 ,并对两者结果作相关性检验。结果 :MRI见小脑扁桃体脱垂或脊髓空洞和SEP显示体感传导通路功能异常病例在Cobb角 >45°患者中依次占 31%和 2 7 6 % ,而 <45°患者中分别只占 3 7%和 11 9% ,结构异常和功能异常有显著相关性。结论 :对严重脊柱侧凸或合并SEP异常患者应常规行全脊髓MRI检查 ,以便及早发现后脑及脊髓病变     

青少年特发性脊柱侧凸治疗研究进展

青少年特发性脊柱侧凸(adolescent idiopathic scoliosis,AIS)是指脊柱的一个或数个节段在冠状面上偏离身体中线向侧方弯曲形成一个弧度(国际脊柱侧凸研究学会,Scoliosis Research Society,SRS,认为Cobb角＞10°),通常还伴有脊柱的旋转和矢状面上后凸或前凸的增加或减少的一种脊柱结构性三维畸形.     

青少年特发性脊柱侧凸脊柱形态的评价及研究进展

青少年特发性脊柱侧凸(Adolescent idiopathic scoliosis,AIS)是脊柱侧凸类疾患中最常见的一个类型,随着对AIS脊柱复杂结构认识的深入及现代影像学技术的进步,脊柱形态的评价也趋于直观和精确.本文主要综述了不同体位处理下的脊柱X线摄片的优劣,以及CT、磁共振检查在评价脊柱形态方面的研究及进展...     

Smad1、Smad5在肾阳虚不育大鼠睾丸中表达的研究

目的: 观察Smad1、Smad5在腺嘌呤诱导的肾阳虚不育大鼠睾丸中的表达,探讨肾阳虚不育的病理机制,为防治男性不育提供可靠的实验依据。　方法: 60d雄性SD大鼠 48只,随机分为 6组(肾阳虚 7、14、21d组;正常对照7、14、21d组),每组 8只。以腺嘌呤 300mg/kg给大鼠灌胃,诱导肾阳虚不育大鼠模型,于灌胃第 7、14、21d,用免疫组化SABC法测定Smad1、Smad5在其睾丸中的表达。　结果: Smad1表达见于所有正常对照组及模型组大鼠睾丸各级生精细胞的胞质内,支持细胞及间质细胞未见表达;灌胃第 7、14d与正常对照组相比差异无显著性(P>0. 05),第 21d的表达较正常对照组及第 7、14d明显减弱(P<0. 05)。Smad5表达见于正常对照组及腺嘌呤灌胃第 7d大鼠睾丸的初级精母细胞及精原细胞的胞核内,两组比较差异无显著性(P>0. 05),其余各级生精细胞、支持细胞及间质细胞均未见表达;灌胃第 14、21d大鼠睾丸中未见Smad5表达。　结论: 肾阳虚大鼠睾丸中Smad1表达的减弱及Smad5的无表达,可能是导致其不育的病理机制之一。     

转化生长因子β1及其信号转导分子Smad4,Smad7在人脑胶质瘤中的表达及其意义

目的　探讨转化生长因子 β1及其超家族肽类的细胞内转导分子Smad4和Smad7在人脑胶质瘤中的表达及其意义。方法　采用免疫组织化学方法 ,对经过石蜡包埋的 3 0例胶质瘤和8例正常脑组织标本进行定位和定性检测。结果　TGF β1,Smad4和Smad7蛋白在胶质瘤中均有不同程度的表达 ,Smad4的表达水平随着胶质瘤恶性程度的增高而降低 ,且在正常脑组织、低、高级别胶质瘤组中的表达差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;TGF β1,Smad7在正常脑组织中几乎不表达 ,在低级别胶质瘤 (Ⅰ Ⅱ级 )中表达较少 ,在高级别胶质瘤 (Ⅲ Ⅳ级 )中表达较多 ,两者在正常脑组织及高、低级别胶质瘤中的表达两两比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。且TGF β1与Smad7的表达水平呈正相关 (r =0 .78,P <0 .0 1) ;TGF β1与Smad4的表达水平呈负相关(r =-0 .67,P <0 .0 1)。结论　TGF β1,Smad7蛋白的阳性表达与组织学分级密切相关 ,它们参与了在人脑胶质瘤细胞的恶性转化 ,而Smad4对胶质瘤的进展有抑制作用。     

成年大鼠睾丸Smad1和Smad5的免疫组织化学研究

目的 :探讨骨形态形成蛋白的细胞内信号传导分子Smad1和Smad5蛋白在成年大鼠睾丸内的表达。　方法 :应用免疫组织化学ABC法结合葡萄糖氧化酶 DAB 硫酸镍铵增强技术 ,检测成年大鼠睾丸Smad1和Smad5蛋白的表达和定位。　结果 :Smad1蛋白表达于大鼠睾丸精曲小管的各级生精细胞的胞质内 ,呈淡染的紫蓝色颗粒 ,胞核为阴性 ,免疫染色阳性细胞主要包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞 ;而Smad5蛋白阳性染色不明显 ,只有睾丸间质细胞呈弱阳性反应 ,免疫反应阳性物质主要定位于细胞质。　结论 :Smad1蛋白主要表达于睾丸精曲小管各级生精细胞 ,Smad5蛋白表达于间质细胞 ,为揭示TGF β超家族在精子发生中的分子机理提供了直接证据。     

Thrsp蛋白在青少年特发性脊柱侧弯患者MSCs成脂分化过程中的差异性表达和作用

[目的]比较青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者与正常人骨髓间充质干细胞的成脂分化过程中基因表达的差异。[方法]收集本院脊柱侧弯中心2011年12月~2012年12月收治的AIS患者20例的骨髓血,同时采集10例年龄段性别接近的志愿者骨髓血作为对照组。采用密度梯度离心法提取MSC细胞,培养至P3流式细胞仪定性。诱导成脂分化14 d后提取全RNA进行Affymetrix 3'IVT表达谱芯片检测。对主要检查结果进行RT-PCR验证,并且对结果中特异性高表达的Thrsp蛋白的表达情况进行Western blot检验。[结果]受试者骨髓血均成功采集分离,密度梯度离心分离MSCs并培养至P3,流式细胞仪验证其性质,成脂分化培养14 d后苏木红染色定性为脂肪细胞,提取全RNA电泳条带清晰,表达谱芯片检测结果显示AIS患者MSC在成脂分化过程中有111条基因表达上调,189条基因表达下调。Western blot检验结果显示Thrsp蛋白在脂肪细胞中高度表达。[结论]AIS来源MSCs成脂分化相关差异表达的300条基因可能参与了AIS的发生和发展,Thrsp基因可能是导致MSCs分化差异性的关键因素。     

Decreased osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells and reduced bone mineral density in patients with adolescent idiopathic scoliosis

Generalized low bone mass and osteopenia in both axial and peripheral skeletons have been reported in adolescent idiopathic scoliosis (AIS). However, the mechanism and causes of bone loss in AIS have not been identified. Therefore, this study examined the relationship between the osteogenic and adipogenic differentiation abilities of mesenchymal stem cells (MSCs) and bone mass in 19 patients with AIS and compared these with those of 16 age- and gender-matched patients with lower leg fracture. Mean lumbar spinal bone mineral density (LSBMD) in AIS patients was found to be lower than in controls (P = 0.037) and the osteogenic differentiation abilities and alkaline phosphatase activities of MSCs from patients were also found to be lower than those of controls (P = 0.0073 and P = 0.001, respectively), but the abilities of the MSCs of patients and controls to undergo adipogenic differentiation were similar. The osteogenic differentiation ability was found to be positively correlated with alkaline phosphatase activity in the AIS group. However, the osteogenic and adipogenic abilities were not found to be correlated with LSBMD in either patients or controls. These findings suggest that the decreased osteogenic differentiation ability of MSCs might be one of the possible mechanisms leading to low bone mass in AIS. However, we did not determine definite mechanisms of low bone mass in AIS. Therefore, further study with large scale will be needed to identify the mechanism involved.     

Smad3和Smad7在梗阻性黄疸大鼠肝纤维化形成过程中的表达及意义

目的:研究梗阻性黄疸大鼠肝纤维化形成进程中Smad3与Smad7表达的变化及其对肝纤维化的意义。方法:Wistar大鼠60只,随机分成模型组和对照组。于术后第1天及术后7 d、14 d、28 d及35d 5个时间点模型组和对照组处死大鼠各6只。进行肝组织病理学观察,免疫组织化学法测定肝组织中Smad3、Smad7的表达情况并行半定量分析。结果:与对照组相比,模型组大鼠7、14、28、35 d肝纤维化程度逐渐增强,Smad3明显升高并有统计学意义(P0.001),Smad7明显降低并有统计学意义(P0.001);而且模型组5个时间点比较均有统计学意义(P0.001)。同时,Smad3与Smad7呈负的直线相关(r=-0.951,P001)。结论:随着胆道梗阻时间延长,肝纤维化程度逐渐加重,肝组织中Smad3表达水平显著增加,Smad7表达水平下降,Smad3与Smad7呈负的直线相关。抑制Smad3或增强Smad7的表达可能是防治肝纤维化的新途径。     

Smad4、7在增生前列腺组织中的表达及意义

目的 探讨增生前列腺组织中Smad4和Smad7的表达及意义.方法 采用免疫组化SABC法检测30例增生前列腺组织及10例正常前列腺组织中Smad4和Smad7的表达.结果 在正常前列腺组织中,Smad4和Smad7的平均面密度值分别为0.1013±0.0326,0.0997±0.0467;在BPH组织中,Smad4和Smad7的平均面密度值分别为0.0601±0.0485,0.0354±0.0267,表达水平均下调,不论Smad4还是Smad7,其在BPH组织中.的平均面密度值与正常前列腺组织中的平均面密度值比较,差别有显著意义(P＜O.05).但不具有显著的相关性,r=0.138,P＞O.05.结论 Smad4和Smad7在前列腺增生组织中的表达下调,提示其参与了前列腺增生的病理过程.