Dicer表达与肾透明细胞癌发生及转移的关系

目的：探讨Dicer在肾透明细胞癌发生及转移中的作用。方法：选取正常肾小管上皮细胞株HKC、非转移性肾透明细胞癌细胞株769P、转移性肾透明细胞癌细胞株Caki-1以及36例肾透明细胞癌手术标本（其中11例已发生远处转移）和相应癌旁正常肾组织,应用实时定量PCR和Western blot方法检测Dicer在肾透明细胞癌细胞株和组织中mRNA和蛋白的表达情况,并分析Dicer的mRNA水平与临床病理资料的关系。结果：和正常肾小管上皮细胞株HKC相比;Dicer的mRNA水平在肾透明细胞癌细胞株769-P和Caki-1中均降低（P〈0．001）,而转移性肾透明细胞癌细胞株Caki-1比非转移性肾透明细胞癌细胞株769-P表达水平更低（P〈0．001）;和癌旁正常肾组织相比,Dicer的mRNA水平在‘肾透明细胞癌手术标本中明显降低（P〈0．001）,且已发生远处转移的。肾癌标本比未发生远处转移的肾癌标本表达水平更低（P=0．04）;Dicer在细胞株和组织中的蛋白水平的变化与mRNA水平的变化一致（P〈0．001）;Dicer的mRNA水平在不同年龄、性别、组织学分级、肿瘤大小及T分期组间无统计学差异（P〉0．05）。结论：Dicer表达降低可能在。肾透明细胞癌的肿瘤发生中发挥作用,且其表达的进一步下降可能与肾透明细胞癌的远处转移有关。     

NORE1基因在肾透明细胞癌细胞迁移侵袭和血管生成中的作用及相关机制的研究

目的探讨NORE1基因过表达对肾透明细胞癌细胞迁移侵袭及血管生成的影响及其分子作用机制。方法利用NORE1过表达质粒和对照组质粒,分别转染人肾透明细胞癌786-O和ACHN细胞,Western blot检测细胞转染效率,Transwell细胞迁移实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭的能力,体外血管生成实验观察其血管生成能力,Western blot检测NORE1基因过表达后肾癌细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的蛋白表达水平。结果转染NORE1过表达质粒后,肾透明细胞癌786-O、ACHN细胞中NORE1表达量增加。NORE1基因过表达后肾透明细胞癌细胞迁移及侵袭能力减弱,血管生成能力减弱,差异均具有统计学意义(P0.001)。NORE1过表达组肾透明细胞癌细胞中MMP-9表达较对照组显著下降,而两组间MMP-2表达水平无显著性差异。结论肾透明细胞癌细胞中NORE1基因可以通过调节MMP-9的表达影响细胞的迁移侵袭及血管生成。     

透明质酸合成酶2在肾癌中的表达及临床意义

目的：研究透明质酸合成酶2在肾癌中的表达,并探讨其潜在的临床意义。方法：运用实时定量聚合酶链反应（qPCR）方法检测五种肾癌细胞（ACHN、Caki-1、OS-RC-2、786-O、SN12PM6）透明质酸合成酶三种亚型（HAs1、HAS2、HAs3）mRNA的表达,运用Westernblot方法进一步检测mRNA表达含量高的HAS亚型在五种肾癌细胞系及肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的蛋白表达。结果：在五种肾癌细胞系中HAS2mRNA表达水平均明显高于正常肾小管上皮细胞（HK-2）,其中在。肾癌SN12PM6细胞系中表达水平最高（均P〈0．05）,HAS1mRNA的表达水平均明显低于正常肾小管上皮细胞（均P〉0．05）,而HAS3mRNA表达水平除肾癌Caki-1细胞系外均低于正常肾小管上皮细胞（P〉0．05）。在五种肾癌细胞系中HAS2蛋白均明显表达,而正常‘肾小管上皮细胞无明显表达。在肾透明细胞癌组织中HAs2蛋白表达也明显高于相应癌旁组织。结论：透明质酸合成酶2在多种肾癌细胞系和肾透明细胞癌组织中均明显表达,提示透明质酸合成酶2可能在肾癌尤其在肾透明细胞癌发生发展过程中起着至关重要的某种作用,并可能成为新的肾透明细胞癌分子标志物。     

白藜芦醇对肾癌细胞体外增殖与侵袭能力的影响

目的探讨白藜芦醇对肾癌786-O与ACHN细胞体外迁增殖与侵袭能力的影响及可能的机制。方法 MTT检测白藜芦醇对肾癌细胞增殖能力的影响,划痕实验检测白藜芦醇对786-O与ACHN细胞体外迁移能力的影响,Transwell实验检测白藜芦醇对786-O与ACHN细胞体外侵袭能力的影响,RT-PCR与Western bolt检测白藜芦醇对MMP-2与MMP-9蛋白表达水平的影响。结果白藜芦醇可抑制膀胱癌细胞体外生长能力,且呈剂量依赖性。30μmol/L白藜芦醇处理786-O与ACHN细胞24h后,划痕实验发现白藜芦醇可抑制786-O与ACHN细胞体外迁移能力,Transwell实验证实白藜芦醇可抑制肾癌细胞786-O与ACHN的体外侵袭能力。RT-PCR与Western bolt结果表明,白藜芦醇可从mRNA与蛋白水平抑制MMP-2与MMP-9的表达。结论白藜芦醇能抑制肾癌细胞体外增殖能力,可能通过下调MMP-2与MMP-9的表达而抑制肾癌细胞786-O与ACHN体外迁移与侵袭能力,有望成为治疗肾癌的新策略。     

FUBP1在肾透明细胞癌中的表达水平及其临床意义

目的:探索人远端上游元件结合蛋白(FUBP1)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达水平及其临床意义。方法:通过实时荧光定量PCR(real-time PCR)、蛋白免疫印迹实验(Western blot)和免疫组织化学检测FUBP1在ccRCC肿瘤组织、对应的瘤旁组织的表达情况。Western blot检测不同细胞系(786-O、Caki-1和HKC)之间FUPB1的表达情况。结果:在ccRCC肿瘤组织中,FUBP1的mRNA表达水平明显高于其对应的瘤旁组织(P0.05),蛋白表达情况一致。且在ccRCC肿瘤细胞中FUBP1表达水平较高。FUBP1的mRNA表达水平增高,肿瘤分期较高、体积较大。结论:FUBP1可能在ccRCC肿瘤形成中发挥作用,FUBP1的高表达促进ccRCC肿瘤形成。     

姜黄素通过上调miR-637抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨姜黄素对肾癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法体外培养人正常肾小管上皮细胞HK-2和肾癌786-O细胞, 将786-O细胞分为对照组、低剂量姜黄素组、中剂量姜黄素组、高剂量姜黄素组、miR-NC组、miR-637组、高剂量姜黄素+anti-miR-NC组、高剂量姜黄素+anti-miR-637组。分别进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、MTT、Transwell和蛋白质印迹(Western blot)实验来检测各组的miR-637表达量、细胞活力、迁移侵袭能力和相关蛋白表达水平。结果与人正常肾小管上皮细胞HK-2比较, 肾癌786-O细胞中miR-637的表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较, 中、高剂量姜黄素组786-O细胞的活力、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2及MMP-9表达水平均显著降低, p21表达显著升高, miR-637的表达水平均显著升高(均P<0.05)。与miR-NC组比较, miR-637组的miR-637表达水平提高, miR-637组的细胞活力、迁移和侵袭细胞数、CyclinD1、MMP...     

Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯对肾正常及肿瘤细胞c-myc的影响

目的 观察Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)对肾小管上皮细胞HKC及肾肿瘤细胞786-O中c-myc表达及对细胞增殖的影响.方法 通过实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)及Western blot方法连续3次检测HKC及786-O 中c-myc的表达及DAPT处理后HKC及786-O细胞中c-myc的表达变化,并检测DAPT对细胞增殖及周期的影响.结果 786-O中c-myc表达比HKC高(2.54±0.24)倍(P＜0.01).DAPT处理后,HKC及786-O细胞中c-myc表达分别下调(1.41±0.13)和(2.93±0.26)倍(P均＜0.05);两株细胞的增殖均受到抑制,HKC及786-O G0/G1期细胞比例分别增加9.75％和16.54％(P均＜0.01).结论 Notch信号抑制剂DAPT可能通过抑制c-myc的表达而抑制肾正常及肿瘤细胞的增殖.     

shRNA靶向抑制CD74基因对人肾透明细胞癌细胞786-O生物学行为的影响

目的探讨抑制人CD74基因后对肾透明细胞癌786-O细胞生长和侵袭能力的影响。方法通过慢病毒lentivirus-CD74转染肾透明细胞癌786-O细胞后,MTT法检测786-O细胞活力的变化,利用流式细胞学检测肿瘤细胞的凋亡变化情况,Transwell小室实验检测786-O细胞侵袭能力改变情况,采用Westernblot方法检测转染前后786-O细胞CD74及相关蛋白的变化情况。结果慢病毒转染786-O细胞后细胞中CD74蛋白水平表达明显低于对照组(P0.05),抑制CD74蛋白表达水平后786-O细胞生长明显受到抑制,细胞活力降低,凋亡增加,细胞侵袭能力降低,且Survivin、MMP-2、MM-9蛋白也随之下降,其与对照组结果对比差异具有统计学差异(P0.05)。结论利用慢病毒转染技术抑制CD74的表达可以抑制肾透明细胞癌786-O细胞的增值和侵袭能力,CD74基因可能作为癌基因在肾透明细胞癌中起作用。     

肾透明细胞癌细胞系中NOTCH1调控PTEN／PI3K／AKT信号通路促进肿瘤进展

目的：研究NOTCH1在肾透明细胞癌细胞系中的生物功能及其对PTEN／P13K／AKT信号通路的调控。方法：在肾透明细胞癌细胞系Caki-2及人肾小管上皮细胞系HKC中沉默NOTCH1,检测其对细胞增殖,细胞周期,凋亡以及肿瘤细胞侵袭和迁徙能力的影响。Western—blot和qrtPCR检测HESl,PTEN,AKT、（p-S473）蛋白及mRNA的变化。结果：在两株细胞中,沉默NOTCH1均能抑制细胞生长,促进细胞周期阻滞,抑制肿瘤细胞的侵袭和迁徙。沉默NOTCHl引起HESl与AKT（p-s473）蛋白下降,PTEN的蛋白及mRNA水平明显升高。沉默HES1引起PTEN蛋白及mRNA升高。结论：在肾透明细胞癌细胞系中,过度活化的NOTCHl通过调节PTEN/PI3K/AKT信号通路起促癌作用,这为肾透明细胞癌的治疗提供了新的治疗策略。     

MiR-134通过靶向调节KRAS抑制786-0肾透明细胞癌细胞上皮间质转化过程

目的探索miR-134在肾癌组织中的表达并研究其对肾透明细胞癌细胞786-0上皮间质转化的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中的表达情况;miR-134模拟物转染786-0后,划痕实验和Transwell实验分别检测肾癌细胞迁移和侵袭能力的改变情况,Western blot检测细胞中靶蛋白KRAS及其相关信号通路蛋白表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-134与KRAS 3′-UTR结合情况。结果 MiR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中明显低表达(P0.01);miR-134模拟物转染后能够抑制肿瘤细胞侵袭(P0.01)和迁移的能力(P0.05),显著降低肿瘤细胞中KRAS蛋白的水平(P0.05)并抑制RAS/MAPK/ERK通路中关键蛋白p-ERK的表达(P0.05);双荧光素酶报告基因显示miR-134能与KRAS 3′-UTR结合,显著降低荧光值(P0.05)。结论 MiR-134在肾透明细胞癌中显著低表达,能通过靶向抑制KRAS表达调控下游RAS/MAPK/ERK通路活性,阻滞786-0细胞上皮间质转化过程,抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。     

E2F1在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的：探讨E2F1在肾透明细胞癌中的表达及意义。方法：通过实时定量PCR和Western blot方法检测E2F1在肾透明细胞癌及对应瘤旁组织中mRNA和蛋白的表达情况,并分析E2F1的mRNA水平与临床病理资料的关系及表达相关性。结果：与对应瘤旁组织相比,E2FJ的mRNA水平在肾透明细胞癌手术标本中表达明显升高（P=0．0002）,相应的蛋白水平对比与mRNA变化一致;E2F1的mRNA水平在不同年龄、性别组间差异无统计学意义（P〉0．05）,而在组织学分级、肿瘤直径大小、T分期、临床分期和大血管浸润与否差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：E2F1表达上调可能在肾透明细胞癌的肿瘤形成中发挥作用,且E2F1表达升高可能促进肾透明细胞癌的恶性进展。     

Dicer is down-regulated in clear cell renal cell carcinoma and in vitro Dicer knockdown enhances malignant phenotype transformation

ObjectivesAlthough emerging evidence has shown that the deregulation of micro-ribonucleic acid (RNA) biogenesis machinery is involved in various human malignancies, this role has not been investigated in clear cell renal cell carcinoma (ccRCC). This study aims to determine whether Dicer, a key enzyme responsible for biogenesis of microRNA, is deregulated in ccRCC. The biological roles of Dicer in vitro are also determined.Materials and methodsThe expression of Dicer at messenger RNA and protein levels was detected by real-time quantitative polymerase chain reaction and western blot, respectively, in human kidney tubule epithelial cell line, nonmetastatic 786-O ccRCC cell line, and metastatic ACHN ccRCC cell line, as well as in 42 cases of ccRCC surgical specimens including 14 cases with distant metastasis and their corresponding adjacent normal renal tissues. Dicer expression levels in specimens were also measured by immunohistochemical staining. Knockdown of Dicer expression in 786-O and ACHN ccRCC cell lines was achieved by transfecting short interfering RNA against Dicer. The effects of Dicer on cell proliferation, migration, and invasion were detected by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt (MTS) assay, flow cytometric analyses, and Boyden chamber Transwell assay, respectively.ResultsCompared with human kidney tubule epithelial cell line, Dicer expression levels were significantly down-regulated in 786-O and ACHN ccRCC cell lines, with the metastatic ACHN ccRCC cell line having even lower levels. Meanwhile, Dicer expression levels were significantly down-regulated in ccRCC surgical specimens compared with adjacent normal renal tissues, with the metastatic ones further reduced, and Dicer messenger RNA levels were significantly correlated with overall tumor-node-metastasis stage of ccRCC. In vitro, the knockdown of Dicer significantly promoted cell proliferation, migration, and invasion.ConclusionsReduced expression of Dicer may play a role in the tumorigenesis of ccRCC and further decline may be associated with distant metastasis of ccRCC.     

Survivin和Vimentin在肾透明细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨凋亡蛋白抑制因子生存素（Survivin）和波形蛋白（Vimentin）在肾透明细胞癌（clearcellrenalcellcarcinoma,ccRCC）中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测56例ccRCC、25例癌旁组织及13例正常肾组织中Survivin和Vimentin的表达及定位情况。结果Survivin在肾透明细胞癌中高表达,而在癌旁及正常组织中未见表达;其表达与ccRCC临床分期及病理分级呈正相关,差异有统计学意义（P〈0．01）。Vimentin在正常肾组织及癌旁组织中亦未见表达,而在肾透明细胞癌中高表达,且与临床分期及病理分级呈正相关,差异有统计学意义（P〈0．01）。并且两个因子的表达呈显著正相关（r=0．566,P〈0．01）。结论Survivin和Vimentin在ccRCC组织中高表达,共同促进了ccRCC的发生、发展、侵袭与转移,联合两因子检测可为ccRCC的预后评估提供重要的信息。     

5t4在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的探讨滋养层糖蛋白5t4在肾透明细胞癌中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学技术检测72例肾透明细胞癌组织标本、17例癌旁肾组织以及14例非癌因素的肾脏组织标本中5t4的表达,并对5t4在肾透明细胞癌的表达与组织学分级的关系进行分析。结果 5t4在肾细胞癌组织中的阳性率为70.8%,癌旁肾组织中的阳性率为41.2%,两者具有差异性(P0.05)。5t4在肾癌组织学分级中低分级与高分级的表达存在显著差异(P0.01)。结论 5t4可作为判断肾透明细胞癌分化程度的标志物。     

circZBTB44通过调控AKT通路促进肾透明细胞癌增殖和迁移的研究

目的 探究circZBTB44在肾透明细胞癌中的表达情况及探讨circZBTB44在肾透明细胞癌中的生物学功能及促进肾透明细胞癌细胞进展的可能机制.方法 通过qRT-PCR法检测circZBTB44在我院21对肾透明细胞癌组织及细胞系786-O、ACHN中的表达水平;通过放线菌素D实验、RNase R实验、核浆分离实验...     

肾脏特异性高表达基因SLC12A1在肾透明细胞癌中低表达的研究

目的验证肾脏特异性高表达基因SLC12A1在肾透明细胞癌中的低表达,初步研究该基因的表达与肾透明细胞癌发生发展的相关性并探讨其临床意义。方法临床收集23例肾透明细胞癌患者癌组织和癌旁正常组织样本,采用荧光定量PCR、免疫组织化学和Western blot的方法分别检测肾透明细胞癌组织和癌旁正常组织中的SLC12A1基因mRNA和蛋白质的表达水平差异。结果肾透明细胞癌组织中SLC12A1的mRNA和蛋白质表达水平明显低于癌旁正常组织(P0.01)。结论肾透明细胞癌组织中SLC12A1表达量明显降低。该结果对进一步阐明肾透明细胞癌发生、发展的分子机理具有一定的学术意义,可能为肾透明细胞癌的诊断和治疗提供一种新的思路。     

MMP-2和CXCR4mRNA在人肾透明细胞癌中的表达及意义

目的研究人肾透明细胞癌(ccRCC)组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和CXC趋化因子受体4(CXCR4)的表达情况及相关性,探讨二者与临床病理因素的关系。方法应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测68例ccRCC组织和36例癌旁正常肾组织中MMP-2与CXCR4mRNA的表达水平。结果在ccRCC组织中MMP-2和CXCR4mRNA的半定量值分别为0.848±0.367和0.939±0.336,高于在正常肾组织中的半定量值0.379±0.138和0.418±0.146,差异有统计学意义(t=7.375、8.860,P0.05);在ccRCC中MMP-2和CXCR4mRNA的表达与肿瘤的临床分期、分化程度和淋巴结转移情况有关(t=2.169~3.852,P0.05),而与患者的年龄、性别及肿瘤大小无关(t=0.201~0.630,P0.05);在ccRCC组织中MMP-2和CXCR4mRNA的表达呈正相关(r=0.832,P0.05)。结论 MMP-2和CXCR4可能共同参与了人ccRCC的发生、发展、侵袭和转移,并且在发挥作用时具有协同作用,联合检测MMP-2和CXCR4可能有助于协助ccRCC的早期诊断和病情评估。