β-淀粉样肽对人SH-SY5Y细胞突触素、发动蛋白I及衔接蛋白180表达的影响

[摘要]目的：探讨β-淀粉样肽（Aβ）对人SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞突触素（syn）、发动蛋白I（DynI）及衔接蛋白180（AP180）表达的影响。     

神经母细胞瘤细胞摄取Beta淀粉样蛋白形态学观察

目的 观察人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)对细胞外β-淀粉样蛋白(Aβ)摄取作用和在亚细胞结构定位.方法 接种培养SH-SY5Y细胞,采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)直接观察SH-SY5Y对细胞外Aβ1-42-fluo摄取的时程变化;用图像分析技术比较24 h时SH-SY5Y对细胞外三种不同浓度Aβ1-42-fluo摄取的差异,同时采用免疫荧光多重染色分析SH-SY5Y摄入Aβ1-42-fluo的哑细胞结构定位.结果 SH-SY5Y与200 nmol/L Aβ1-42-fluo共孵育1 h后就开始摄取Aβ,Aβ被摄入的量随着时间的增加而增加:细胞外Aβ1-42-fluo浓度愈高,被摄入到细胞内Aβ1-42-fluo量也愈多,不同浓度各组间相比具有统计学差异(P<0.01或P<0.05);免疫荧光染色显示部分被内吞Aβ荧光颗粒与溶酶体标记物Lamp-1共定位.结论 SH-SY5Y通过摄人Aβ机制以清除Aβ,呈时间和浓度依赖关系;被摄入的Aβ部分定位于溶酶体.     

二十二碳六烯酸对甲基苯丙胺诱导的人神经母细胞瘤细胞神经毒性的影响

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对甲基苯丙胺(METH)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞神经毒性的作用及其作用机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为Control组、METH组以及METH+DHA组。显微镜下观察SH-SY5Y细胞形态,测量并计算细胞长轴和短轴的比值,通过流式细胞术检测各组SH-SY5Y细胞凋亡水平。采用蛋白质组学分析METH引起的SH-SY5Y蛋白组改变,并筛选加入DHA后表达回调的蛋白。结果与Control组比较,METH组SH-SY5Y细胞神经突明显短缩,长轴与短轴比值减小(均P <0.05);与METH组比较,METH+DHA组神经突伸长,细胞长轴与短轴比值增大(均P <0.05)。与Control组比较,METH组早期细胞凋亡和晚期细胞凋亡比例升高,且总凋亡细胞比例也明显升高(均P <0.05);与METH组比较,METH+DHA组晚期细胞凋亡和总凋亡细胞比例降低(均P <0.05)。蛋白组学分析显示,加入DHA可以将22个METH诱导下表达变化的蛋白反向调节,涉及了核糖体、细胞骨架和谷胱甘肽代谢等生物学功能。结论 DHA可减...     

牛磺酸对Aβ1-40诱导人神经母细胞瘤细胞毒性保护作用

目的探讨牛磺酸对Aβ1-40诱导人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞毒性的保护作用及其机制。方法用不同浓度(0.8、8.0、20.0mmol.L-1)牛磺酸预处理SH-SY5Y细胞(牛磺酸组)及不用其处理SH-SY5Y细胞(A1-40模型组),同时加入终浓度为20.0μmol.L-1的Aβ1-40,继续培养24h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率,Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞技术检测细胞线粒体膜电位的变化。结果与A1-40模型组比较,3个浓度牛磺酸处理组细胞存活率明显增高(F=4.16,q=3.05～9.68,P<0.05、0.01);与0.8mmol.L-1牛磺酸组相比,8.0、20.0mmol.L-1牛磺酸组细胞存活率增高(q=4.97～6.63,P<0.01)。Ho-echst33258荧光染色显示,3个浓度牛磺酸组细胞的细胞核呈现均匀的淡蓝色荧光。流式细胞技术检测显示,与A1-40模型组比较,3个浓度牛磺酸组线粒体膜电位均升高(F=17.64,q=4.04～8.72,P<0.05、0.01);与0.8mmol.L-1牛磺酸组相比,8.0、20.0mmol.L-1牛磺酸组线粒体膜电位升高(q=3.48～4.69,P<0.05)。结论牛磺酸对Aβ1-40诱导的SH-SY5Y细胞毒性有明显的保护作用,其机制可能与稳定线粒体膜电位而拮抗细胞凋亡有关。     

丁苯酞通过调节海马突触相关蛋白表达和线粒体结构改善db/db小鼠认知功能障碍

目的 观察不同剂量丁苯酞(N-butylphthalide,NBP)对db/db小鼠认知功能及海马区突触素(synaptophysin,SYN)、突触后致密物95(postsynaptic density-95 protein,PSD-95)的表达以及线粒体结构的影响.方法 实验共分5组,将20只db/db小鼠随机分4...     

异丙酚对大鼠海马PSD-95表达和突触结构的影响

目的：探讨异丙酚对大鼠海马突触后致密物-95（PSD-95）表达和突触结构的影响。方法：雄性Wistar大鼠24只,日龄18～21d,体重40～60g,随机分为对照组和异丙酚组,每组12只。两组分别腹腔注射生理盐水10mL/kg或异丙酚100mg/kg,连续用药5d。每组随机取6只应用免疫组织化学法检测海马PSD-95的表达,剩余6只应用透射电镜及图像分析方法观察并测定海马CA1区突触结构的形态参数。结果：与对照组比较,异丙酚组大鼠海马PSD-95阳性细胞数和光密度值明显减少（P〈0.05）,而且异丙酚组海马CA1区突触结构的突触界面曲率下降、突触后致密物质变薄、突触活性区长度缩短、突触间隙变窄（P〈0.05）。结论：异丙酚降低了大鼠海马PSD-95的表达,破坏了突触结构。     

自噬对血管性痴呆大鼠海马CA1区突触素及突触后膜致密物质95表达的影响

目的 探讨自噬对血管性痴呆大鼠海马CA1区突触素(synaptophysin,Syn)及突触后膜致密物质95(postsynaptic density material 95,PSD-95)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠96只,随机分为假手术组(Sham 组)、血管性痴呆模型组(VD组)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤预处理组(3-MA组)和自噬激动剂雷帕霉素预处理组(Rap组).每组又分为模型制备成功后1、2、4、8周4个亚组,每个亚组6只大鼠.应用改良的Pulsinelli四血管阻断法制备血管性痴呆模型,采用蛋白质印迹法检测大鼠海马CA1区微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Syn、PSD-95蛋白表达.结果 (1)与Sham组比较,VD组各时间点LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,Syn、PSD-95蛋白表达均减少,差异有统计学意义(P均＜0.01);与VD组比较,3-MA组各时间点LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值减少,Syn、PSD-95蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01),Rap组各时间点LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,Syn、PSD-95蛋白表达降低(P均＜0.01).(2)自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Syn、PSD-95蛋白表达呈负相关(P均＜0.01).结论 自噬对血管性痴呆大鼠海马CA1区突触可塑性相关蛋白Syn、PSD-95表达具有抑制作用,抑制自噬有利于血管性痴呆大鼠海马CA1区神经突触重塑.     

慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损及海马神经元突触素和突触后致密物95表达的变化

目的　了解慢性捆绑应激对大鼠学习记忆能力的影响及可能的神经解剖学机制。方法　将大鼠分为应激组和正常对照组 ,应激组大鼠每天捆绑 6h共 2 1d ,然后用Y迷宫对 2组大鼠进行行为检测 ,运用免疫组织化学方法 ,观察 2组大鼠海马突触素和突触后致密物 95 (PSD 95 )的表达 ,并用计算机图像分析仪对免疫反应结果进行处理。结果　应激组大鼠学习记忆能力明显受损 (P <0 0 5 ) ;其海马CA3 区突触素和PSD 95免疫阳性产物较对照组明显减少 (P <0 0 1)。结论　慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损可能与其海马神经元突触素和PSD 95的表达减少有关。     

汉防己甲素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖和凋亡的影响

目的 探讨汉防己甲素对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法 通过CCK-8实验检测汉防己甲素对于细胞生长的抑制率,流式细胞术检测Tet作用于细胞后,对细胞活性氧、线粒体膜电位、凋亡和周期的影响。结果 汉防己甲素能显著抑制SH-SY5Y细胞生长,基本呈时间－剂量依赖性。流式细胞术检测显示不同浓度汉防己甲素处理后,活性氧明显升高,线粒体膜电位明显下降,细胞凋亡比例明显升高,G₀/G₁期细胞占比明显增高。结论 汉防己甲素能够抑制SH-SY5Y细胞增殖并且诱导其发生凋亡。     

慢性强迫游泳对大鼠行为及其脑内突触后致密蛋白95含量的影响

目的探讨慢性应激对大鼠行为及其脑内各部位PSD-95蛋白含量的影响。方法以慢性强迫游泳法制作单纯应激(慢性强迫游泳应激)和药物干预慢性应激(每次强迫游泳应激前皮下注射MK801)大鼠模型;用Western blotting蛋白质定量方法分别检测对照(无应激)组、单纯应激组和药物干预组大鼠的海马、前额叶皮质、基底节的PSD-95含量。结果在强迫游泳第14天时,单纯应激组大鼠的体质量增加明显慢于对照组和药物干预组;与对照组和药物干预组相比,单纯应激组大鼠的糖水消耗量明显减少,强迫游泳期间的不动时间显著延长;单纯应激组大鼠的海马、前额叶皮质的PSD-95含量均显著高于对照组和药物干预组,而基底节的PSD-95含量在3组之间差异无统计学意义。结论慢性强迫游泳大鼠是有价值的慢性应激模型;脑细胞内NMDA受体介导的信息传递功能亢进可能是这个动物模型的神经机制之一。     

去卵巢去松果体对大鼠齿状回β淀粉样蛋白损伤区突触泡膜素表达的影响

目的探讨去卵巢(ovariectomy,OVX)、去松果体(pinealectomy,PX)对大鼠齿状回(Dentate gyrus,DG)β淀粉样蛋白(β-amyloid protem,Aβ)损伤区突触泡膜素(synaptophysin,SYN)表达的影响.方法将大鼠随机分为假手术、生理盐水(NS)对照、正常+Aβ、假OVX+Aβ、OVX+Aβ、假PX+Aβ、PX+Aβ、假OVX+假PX+Aβ、OVX+PX+Aβ9组.术后60d,将Aβ注入DG背侧带分子层,7d后以SYN作标记,用SABC法检测Aβ损伤区DG背侧带分子层的SYN Pu值.结果假手术组与NS对照组无DG神经元损害、DG背侧带各分子层SYN Pu值无显著差别,合并为B1组,假手术+Aβ各组与正常+Aβ组的DG神经元损害、DG背侧带各分子层SYN Pu值无显著差别,合并为B2组.各组Aβ直接接触的DG分子层SYN Pu值均明显减低,组间无明显区别.Aβ注射点以外,各组间DG背侧带内外分子层SYN PU值有明显区别:OVX+PX+Aβ组＜PX+Aβ组＜OVX+Aβ组＜B1组＜B2组;各组间DG背侧带中分子层无显著区别.结论Aβ-40对DG分子层突触有直接的损害作用.在Aβ注射点以外区域,OVX、PX使Aβ的DG颗粒细胞损害诱导的其背侧带内外分子层的代偿性神经生长消失,PX比OVX危害大,联合影响更大.     

淫羊藿黄酮对转基因痴呆小鼠脑内突触相关蛋白的影响

目的 观察10月龄APP转基因模型小鼠脑内突触相关蛋白--突触素(SYP)及突触后致密物质-95(PSD-95)蛋白表达的改变,以及中药有效部位淫羊藿黄酮对转基因小鼠脑内SYP和PSD-95表达的影响.方法 用药组小鼠自4月龄开始灌胃给予淫羊藿黄酮小剂量(0.03g·kg-1·d-1)、大剂量(0.1 g·kg-1·d-1)6个月至10月龄,正常对照组、转基因阴性对照组及模型组以同样方式灌胃给予蒸馏水.应用免疫组化及Western印迹方法分别检测海马CA1区、CA3区、齿状回及皮质中SYP的表达以及海马CA1区及皮质中PSD-95的表达.结果 与转基因阴性对照组相比,10月龄APP转基因模型小鼠皮质SYP蛋白表达明显较低(降低率为51.3%,P＜0.01);海马CA1区、CA3区及齿状回SYP阳性细胞的IOD值明显较低(降低率分别为59.1%、57.7%及56.5%,均P＜0.01).皮质PSD-95蛋白表达明显降低(降低率为36.4%,P＜0.01);海马CA1区PSD-95阳性细胞数少于对照组(减少率为18.5%,P＜0.05).灌胃给药6个月后,淫羊藿黄酮小、大剂量组小鼠皮质SYP蛋白表达明显高于模型组(增加率分别为40.0%,P＜0.05和106.4%,P＜0.01);海马CA1、CA3区及齿状回SYP阳性细胞IOD值均明显增加(均P＜0.01).淫羊藿黄酮小、大剂量组小鼠皮质PSD-95蛋白表达明显增加(增加率分别为57.3%,P＜0.05和84.3%,P＜0.01).淫羊藿黄酮大剂量组小鼠海马CA1区PSD-95阳性细胞数明显增加(增加率为22.5%,P＜0.05).结论 淫羊藿黄酮能通过促进突触相关蛋白表达而发挥维护神经元突触正常结构的作用,提示淫羊藿黄酮对改善AD神经元突触损伤状况具有潜在应用价值.     

永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型大鼠脑内突触相关蛋白表达的免疫组织化学观察

目的观察永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型大鼠脑缺血发作后2 d、7 d脑内突触相关蛋白表达的变化。方法制作大鼠永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型。缺血动物术后随机分为缺血2 d组、缺血7 d组,另设假手术组。在术后2 d、7 d 2个时间点采用HE染色观察动物神经病理学改变,同时采用免疫组织化学法观察动物的缺血侧脑组织突触素-I(synapsin-I)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、α-突触核蛋白(α-synuclein)表达情况。结果与假手术组相比,缺血后,模型动物神经元大量变性坏死,数目减少,排列散乱。缺血后2 d,synapsin-I在CA1区、CA3区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),PSD-95在CA1区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),α-synuclein在CA1区神经元产生显著积聚(P<0.01);缺血后7 d,synapsin-I在CA1区、皮层表达仍显著降低(P<0.01),PSD-95在CA1区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),α-synuclein在CA1、CA3、皮层表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论 pMCAO模型大鼠在脑缺血发生后,神经突触有关蛋白的表达显著改变,并随缺血后不同时间点表达情况不同,这可能与神经元突触重塑有关。突触相关蛋白的表达与缺血损伤程度密切相关。     

异丙酚对新生大鼠海马突触后致密物-95和突触素表达的影响

目的 观察异丙酚对新生大鼠海马突触后致密物-95（PSD-95）和突触素mRNA表达的影响。方法 雄性SD大鼠30只,日龄7 d,体重10～15 g,随机分为对照组和异丙酚组,每组15只。异丙酚组腹腔注射异丙酚总量为200 mg/kg,对照组不注射任何药物。透射电镜下观察海马CA1区突触结构的变化,并应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测海马组织中PSD-95和突触素mRNA的表达情况。结果 对照组海马CA1区突触结构正常;异丙酚组突触结构明显改变：突触数目减少、突触间隙变窄甚至融合、PSD减少;RT-PCR结果显示,与对照组比较,异丙酚组海马组织PSD-95和突触素mRNA表达降低（P<0.05）。结论 异丙酚降低了新生大鼠海马PSD-95和突触素mRNA的表达,破坏了海马突触结构。     

Aβ1～40诱导大鼠海马突触体素和突触数量的变化

目的研究淀粉样β蛋白（β-amyloid vprotein，AB1-40）诱导大鼠海马突触体素和突触数量的变化，以探讨其与阿尔茨海默病发病机制及病理变化的关联性。方法于雄性SD大鼠双侧海马注射Aβ1-40，模拟AD脑内AB对神经系统的损害。判定AD模型成功后，取脑行冻切片，采用小鼠抗人重组突触体素单克隆抗体免疫组织化学染色结合积分吸光度分析法检测突触体素免疫阳性产物表达的变化，并应用透射电镜对海马突触进行观察计数。结果假手术组突触体素免疫组化染色海马呈层状结构，突触体素免疫阳性产物密度较高。与假手术组比较。AD模型组突触体素免疫阳性产物密度明显下降，海马CA2突触体素免疫阳性产物的积分吸光度值显著降低（P〈0．05）。溶酶体组突触体素免疫组化染色与假手术组相似；电镜观察，假手术组海马神经元树突、轴突较密集，突触小泡多，突触结构清晰、数量多；AD模型组海马神经元突触小泡体积变小、变少，突触结构不完整、数量明显减少（P〈0．05），溶酶体组神经元和突触结构与假手术组相似。结论淀粉样β蛋白可诱导大鼠海马突触体素和突触数量表达减少，是阿尔茨海默病发病机制及病理改变之一，是引起学习记忆减退和认知障碍的途径之一。其作用机制尚需进一步探讨。     

电针“百会”“神庭”对血管性痴呆大鼠学习记忆能力和海马突触结构与相关蛋白表达水平的影响

目的 观察电针“百会”“神庭”对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠学习和记忆功能的影响,并从突触结构及突触相关蛋白表达水平的角度揭示其作用机制。方法 将35只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针穴位组、电针非穴位组和奥拉西坦组,每组7只。采用改良双侧颈动脉结扎模型,电针穴位组大鼠选择“百会”“神庭”两穴治疗,电针非穴位组大鼠选择固定非穴位刺激,每次电针30 min,每日1次,连续干预14 d;奥拉西坦组大鼠选择腹腔注射奥拉西坦,50 mg/kg,每日1次,连续14 d。采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习和空间记忆能力;透射电子显微镜观察各组大鼠海马CA1区突触结构;Western blot检测各组大鼠海马突触后致密蛋白95（postsynaptic density protein 95, PSD95）、GluA1、GluN2B和磷酸化GluN2B蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠学习期逃避潜伏时间延长,测试期跨越平台次数减少,目标象限停留时间显著缩短,大脑质量显著增加,海马CA1区突触结构数明显减少,海马PSD95、GluA1、GluN2B和磷酸化GluN2B蛋白表达水平均显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,电针穴位组大鼠的学习期逃避潜伏时间缩短,测试期跨越平台次数增加,目标象限停留时间延长,大脑质量降低,CA1区突触结构数增多,海马PSD95、GluA1、GluN2B和磷酸化GluN2B蛋白表达水平增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 电针“百会”“神庭”能改善VD大鼠的学习记忆功能,改变海马突触结构,分子机制可能和增加突触蛋白PSD95、GluA1和GluN2B的蛋白表达水平相关。     

川芎素对大鼠脑缺血再灌注时突触后致密物质-95活性的影响

应用神经行为学评估、脑梗死容积测量和Western blot分析,探讨研究阿魏酸钠(SF)的神经保护作用及其对局灶性脑缺血损伤时突轴后致密物质-95(PSD-95)活性的影响,证实SF明显改善再灌注24 h神经功能缺陷和减少脑梗死容积,显著增强再灌注后PSD-95表达,表明SF可能通过加强PSD-95活性来改善缺血性损伤.     

氯化钾对神经母细胞瘤细胞系谷氨酸释放的影响

利用高效液相方法观察了氯化钾对培养人神经母细胞瘤细胞系（ＳＨ ＳＹ５Ｙ）细胞谷氨酸释放的影响。发现：当培养液中存在钙离子时，一定浓度的氯化钾（１０～３０ｍｍｏｌ／Ｌ）可使ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞谷氨酸释放增加，但氯化钾浓度超过４０ｍｍｏｌ／Ｌ时，谷氨酸释放增加不明显；当培养液中没有钙离子时，氯化钾不能使ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞谷氨酸释放明显增加。结果表明氯化钾对ＳＨ ＳＹ５Ｙ细胞释放谷氨酸的作用与钙离子相关     

星形胶质细胞对PC12细胞的分化及突触素和生长相关蛋白43表达的影响

目的：体外观察星形胶质细胞对PC12细胞向神经元分化的作用，以及对PC12细胞突触素和生长相关蛋白43（GAP-43）表达的影响，探讨星形胶质细胞促进非神经元细胞形成神经突触的可能性。方法：采用PC12细胞与新生大鼠皮层组织来源的星形胶质细胞共同孵育，分为共育组和对照组，应用免疫荧光技术检测星形胶质细胞对PC12细胞分化、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、突触素和GAP-43表达的影响。结果：共育组培养4d，大部分PC12细胞已具备神经元形态，PC12有突细胞／总细胞数目比率、突起长度和突触数目明显高于对照组（P〈0．01）；NSE、突触素和GAP-43免疫荧光染色强阳性的PC12细胞明显增多，与对照组比较具有统计学意义（P〈0．01）。结论：提示星形胶质细胞有助于促进非神经元细胞形成神经突触。     

舍曲林对抑郁症大鼠认知功能和海马突触后致密蛋白-95 mRNA表达的影响

目的 探讨舍曲林对抑郁症大鼠认知功能和海马突触后致密蛋白-95(PSD-95)mRNA表达的影响,分析PSD-95 mRNA表达与抑郁症大鼠认知功能之间的关系。方法 在64只成年健康雄性Sprague-Dawle大鼠中随机选择16只作为对照组,余48只大鼠作为模型组,对照组大鼠正常饲养,模型组大鼠给予慢性不可预见应激制备抑郁症模型。造模成功后,将模型组大鼠随机分为抑郁组、抑郁+生理盐水组和抑郁+舍曲林组,每组16只。抑郁+舍曲林组大鼠每日灌胃舍曲林5.8 mg·kg^-1,抑郁+生理盐水组大鼠每日灌胃生理盐水5.8 mg·kg^-1,均干预4周;抑郁组大鼠不给予任何干预措施。记录并比较对照组和模型组大鼠体质量、蔗糖水摄入量及运动总距离。采用Y迷宫实验和巴恩斯迷宫实验检测对照组、抑郁组、抑郁+生理盐水组和抑郁+舍曲林组大鼠的认知功能,然后处死大鼠,采用反转录聚合酶链反应法检测4组大鼠海马组织中PSD-95 mRNA相对表达量,并分析大鼠海马组织中PSD-95 mRNA相对表达量与认知功能的关系。结果 模型组大鼠体质量、蔗糖水摄入量、运动总距离均少于...