狼疮方对体外扩增小鼠CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

目的:狼疮方对体外扩增小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的影响。方法:免疫磁珠法分离狼疮方治疗组与未治疗组小鼠CD4+CD2+5T细胞;通过流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞Foxp3表达情况;用抗CD3和抗CD28包被的微珠来进行刺激,体外扩增小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞;用CFSE法检测CD4+CD25+调节性T细胞体外抑制CD4+CD2-5T细胞的增殖情况。结果:经抗CD3和抗CD28包被的微珠刺激后,在TGF-β1和IL-2存在的环境中CD4+CD25+T细胞数量明显升高,扩增后的CD4+CD25+T细胞高表达Foxp3。与此同时,经狼疮方处理后的小鼠CD4+CD25+T细胞扩增后数量增加133.3±18.9倍,未经狼疮方处理的对照细胞数量增加104.7±10.8倍,两者比较有显著性差异(P0.05)。狼疮方治疗组与未治疗组中分离的CD4+CD2+5T细胞和扩增的CD4+CD25+T细胞对CD4+CD2-5T细胞的增殖皆有明显抑制作用,荧光强度分别为32.1±4.8,33.1±4.9,30.1±3.8,32.9±4.2。结论:狼疮方有助于提高小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的扩增效率,扩增的CD4+CD25+调节性T细胞表达Foxp3,具有体外免疫抑制功能。     

益髓生血颗粒对AA大鼠CD4 + CD25 + Foxp3调节性T细胞的影响

目的：观察益髓生血颗粒对再生障碍性贫血（Aplastic Anemia,AA）大鼠CD4 + CD25 + 调节性T细胞（Regulatory T Cell,Treg细胞）的影响及其治疗AA的作用机制。方法：取雄性SD大鼠按体重随机分组。其中模型组连续7周隔天皮下注射苯（1 mL ? kg -1 ）、取材10天前开始腹腔注射环磷酰胺（25 mL ? kg -1 ）,连续3天,第4周将模型组大鼠按体重随机分为模型组、司坦唑醇组、益髓生血颗粒组,灌胃给药。正常组及模型对照组给予等体积生理盐水。实验结束时,检测外周血WBC、RBC、HGB、PLT;制备血涂片、骨髓涂片;免疫组织化学法检测脾组织Treg细胞Foxp3蛋白表达;RT-PCR法检测骨髓组织Foxp3 mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组WBC、RBC、HGB、PLT均显著减少（P<0.01）,血涂片示血细胞通透性差、白细胞减少、退化细胞增多,骨髓涂片示脂肪滴明显增加、造血细胞均明显降低、非造血细胞增多;经益髓生血颗粒组治疗后WBC、RBC、HGB、PLT均显著增加（P<0.01）,血涂片及骨髓涂片显示细胞通透性好转、形态趋于正常、脂肪滴明显减少,造血细胞均明显增加,脾组织Foxp3蛋白及骨髓组织Foxp3 mRNA表达明显升高（P<0.01）。结论：益髓生血颗粒可上调Foxp3的因及蛋白表达,调控AA免疫功能,进而改善AA免疫环境,促进骨髓造血功能的恢复,发挥治疗AA的重要作用。     

2型糖尿病及大血管病变患者 CD4＋CD28-T细胞、CD4＋CD25＋T细胞亚群的变化及意义

目的：观察外周血CD4＋CD28-T细胞、CD4＋CD25＋T细胞亚群在2型糖尿病患者及大血管病变患者的变化,探讨其在2型糖尿病及大血管病变发病中的作用。方法：应用免疫荧光标记技术和流式细胞仪,检测36例初诊2型糖尿病（单纯DM组）患者和28例糖尿病并大血管病变患者、20例健康对照者的外周血T细胞亚群变化。结果：DM并大血管病变组、单纯DM 组 CD4＋CD28-T 细胞明显高于健康对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;而 CD4＋CD25＋T 细胞明显低于健康对照组（P〈0.05）;DM并大血管病变组CD4＋CD28-T细胞高于单纯DM组（P〈0.05）,CD4＋CD25＋T细胞低于单纯DM组。结论：机体细胞免疫异常在2型糖尿病及大血管病变的发生、发展中发挥着一定的作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞对糖尿病小鼠细胞活化的影响

目的:探讨CD4+CD2+5调节性T细胞对糖尿病小鼠细胞活化的影响。方法:选取BALB/c小鼠,每日腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40mg/kg,连续5天,建立1型糖尿病模型;从小鼠内眦静脉采血,检测血糖;取小鼠尿液,检测尿糖;流式细胞术检测BALB/c小鼠脾细胞悬液CD4+T细胞中CD28分子的表达水平及凋亡细胞的数量。结果:在注射STZ第2周和4周,BALB/c小鼠CD4+T细胞中的CD28水平未见明显变化;凋亡细胞的数量在注射STZ第2周明显升高(P<0.05),第4周进一步明显升高(P<0.01)。结论:CD4+CD25+调节性T细胞可能通过抑制CD28共刺激抑制BALB/c小鼠CD4+T细胞活化,从而影响细胞免疫功能。诱导免疫细胞凋亡可能是CD4+CD2+5调节性T细胞发挥抑制作用的又一表现形式。     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞在儿童特发性血小板减少性紫癜患者中的表达及意义

目的探讨儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者CD4+CD25+调节性T细胞的表达及意义。方法用流式细胞术检测27例ITP患儿和21例健康儿童外周血T淋巴细胞亚群的比例,以及CD4+T淋巴细胞表面CD25、FasL和Fas的表达率。结果ITP患儿CD3、CD4、CD4/CD8比值与对照组比较显著降低,CD4+CD25+调节性T细胞明显减少,CD4+CD25-细胞无明显改变,CD4+FasL+增多,CD4+Fas+减少。结论儿童ITP患者CD4+CD25+调节性T细胞显著减少,破坏自身免疫耐受,在ITP的发病中起重要作用。     

针灸及其血清对荷瘤小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖的影响

目的:观察针灸治疗对H_(22)荷瘤小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞(CD4~+CD25~+regulatory T cells)体外增殖的影响和针灸血清刺激下的CD4~+CD25~+Treg细胞的体外增殖变化,探讨针灸及其血清对荷瘤小鼠免疫调节细胞的干预作用。方法:48只小鼠随机分为电针治疗组、艾灸治疗组、肿瘤对照组、正常对照组。采用H_(22)肿瘤细胞移植性实体瘤模型,电针和艾灸"大椎"治疗后,磁珠分离CD4~+CD25~+Treg细胞,氚标记胸腺嘧啶核苷掺入法观察不同组小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖能力和针灸血清对CD4~+CD25~+ Treg细胞体外增殖的影响。结果:肿瘤对照组CD4~+CD25~+Treg细胞增殖水平比正常对照组明显增高(P<0.05);电针治疗组和艾灸治疗组CD4~+CD25~+Treg细胞增殖水平与肿瘤对照组比较均明显降低(P<0.01)。电针治疗组和艾灸治疗组1:1、1:8稀释度血清刺激正常小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖,较正常对照、肿瘤对照组血清显著增高(P<0.05),各组1:16、1:32稀释度血清对Treg细胞作用的差别无统计学意义(P>0.05)。结论:针灸治疗能下调荷瘤小鼠CD4~+CD25~+Treg细胞体外增殖能力。不同浓度针灸血清体外刺激CD4~+CD25~+Treg细胞增殖表现出不一致的效应。     

益气温阳法联合顺铂对荷瘤小鼠调节性T细胞的影响

目的:研究益气温阳法联合顺铂对Lewis肺癌小鼠调节性T(T Regulatory,Treg)细胞的影响.方法:建立40只近交系C57BL/6纯系雄性小鼠Lewis肺癌细胞皮下移植瘤模型后,将40只造模后的小鼠随机分为模型组、中药组、顺铂组及联合用药组,每组10只,单笼饲养.模型组以0.4 mL生理盐水连续灌胃12 d...     

3种不同中医证型艾滋病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的表达

目的:观察不同中医证型艾滋病患者CD4+CD2+5调节性T细胞(以下简称CD4+CD2+5 T细胞)的表达水平,探讨不同证型艾滋病免疫负调节能力。方法:根据艾滋病患者的症状、体征、舌象、脉象,按照中医辨证论治思路,分为肺肾不足、气虚血瘀、脾肾亏虚3种证型,设正常对照组30名,收集病例97例,观察不同证型艾滋病患者及正常对照组外周血CD4+CD2+5 T细胞的表达水平。结果:正常对照组、脾肾亏虚、肺肾不足、气虚血瘀各组患者CD4+CD2+5 T细胞的表达水平有统计学差异(P<0.001),脾肾亏虚型CD4+CD2+5 T细胞的表达水平最高,依次分别为肺肾不足型、气虚血瘀型。结论:不同证型艾滋病患者从病变初期的脾肾亏虚组,中期肺肾不足组,到疾病后期气虚血瘀组,CD4+CD2+5 T细胞的表达水平逐渐降低。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞与妊娠期高血压病子痫前期发生关系的探讨

目的:观察具有免疫抑制作用的CD4+CD25+T细胞的数量以及相关因素雌激素与妊娠期高血压病子痫前期发生的关系。方法:流式细胞技术分析,测定CD4+CD25+T细胞的数量,放射免疫测定血清雌激素。结果:妊娠期高血压病子痫前期患者,其CD4+CD25+T细胞的数量减少,且血雌三醇水平有不同程度的降低。结论:①CD4+CD25+T细胞数量的改变在妊娠期高血压病的发病机制中起重要的作用。②雌激素能帮助维持免疫耐受。     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞与肿瘤免疫治疗的新进展

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞(CD_4~+CD_(25)~+ regulatory T cells, CD_4~+CD_(25)~+ Tregs)可抑制机体对肿瘤的免疫应答,导致不利于肿瘤患者的对肿瘤的免疫耐受.以降低CD_4~+CD_(25)~+Tregs作用,增强对肿瘤的免疫应答为新策略的肿瘤免疫治疗探索已有初步进展.方法 包括去除CD_4~+CD_(25)~+Tregs、单克隆抗体、蛋白分子转移、阻断Tregs的迁移和分化、逆转Tregs的分化、阻断Tregs的功能、疫/瘤苗、将Tregs调控与其他治疗模式相组合、提升抑制效应细胞的阈值.     

苏木、苏木+黄芪对荷瘤小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞及相关调控分子的干预作用

目的:观察苏木、苏木+黄芪对荷瘤小鼠脾CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达及相关调控分子的干预作用。方法:复制C57BL/6小鼠Lewis肺癌动物模型,动态观察苏木、苏木+黄芪抑瘤率、肺转移抑制率,流式细胞术检测小鼠脾CD4+CD25+Treg表达,免疫磁珠分选小鼠脾CD4+CD25+细胞,RT-PCR检测小鼠脾CD4+CD25+细胞和瘤组织Foxp3、CTLA-4mRNA表达。结果:苏木组6d、苏木+黄芪组10d瘤重低于荷瘤对照组(P0.05);苏木+黄芪组20d肺转移抑制率为77.75%;15d苏木+黄芪组小鼠脾CD4+CD25+细胞表达低于荷瘤对照组(P0.05);苏木+黄芪组荷瘤小鼠瘤组织CTLA-4、Foxp3mRNA表达及脾CD4+CD25+分选后细胞Foxp3 mRNA表达低于荷瘤对照组(P0.05)。结论:益气活血中药组方苏木+黄芪可调节荷瘤小鼠脾Treg及相关调控分子表达,并且在淋巴组织和肿瘤微环境中都表现出作用。     

Beneficial therapeutic effect of Chinese herbal Bushen formula on CHB patients with mildly elevated alanine aminotransferase by down-regulating CD4+CD25+T cells

Ethnopharmacological relevance

To investigate the clinical effects of the Bushen formula on chronic hepatitis B (CHB) patients with mildly elevated alanine aminotransferase (ALT) (1–2 times ULN) and its relevant immune mechanism.

Materials and methods

Fifty CHB patients were enrolled, and they were categorized into two groups according to infection state, including CHB carrier group(24 patients) and mildly elevated ALT (1–2 times ULN) group (26 patients), and 12 healthy volunteers were collected as normal control group. In addition, patients with mildly elevated ALT were taking the Bushen formula for 6 months. Biochemical assessment, viral load quantitation and HBV markers were examined at the Department of Clinical Laboratory, Shanghai Shuguang Hospital. Peripheral blood mononuclear cells were separated from patients and healthy volunteers. T cells were separated from healthy blood, and Hepatitis B core antigen (HBcAg) was added to the culture media. The percentage of CD4+CD25+T cells and the expression levels of IFN-γ and IL-4 were examined by flow cytometry and the expression level of FoxP3 was examined by real-time PCR and flow cytometry. The Chinese medicine symptom complex score was calculated.

Results

The percentage of CD4+CD25+T cells and the expression level of Foxp3 in two CHB patient groups were higher than that in the normal control group, and the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression level of Foxp3 in the CHB carrier group were highest. The experiment in vitro showed that both the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression of Foxp3 were elevated by HBcAg in CD4+T cells separated from normal peripheral blood. In patients with mildly elevated ALT, the serum ALT level was significantly decreased from 81.77±18.24 U/L to 64.92±20.60 U/L and the serum HBV DNA level was significantly decreased from 6.54±0.95 (log) to 5.15±2.22 (log), and symptom scores were significantly decreased from 6.19±3.99 to 2.77±1.66 after administration of the Bushen formula. In addition, we found that the frequency of CD4+CD25+T cells correlated negatively with the expression level of IFN-γ in CD4+T cells from CHB patients with mildly elevated ALT, and the percentage of CD4+CD25+T cells was decreased from 11.07±4.30% to 8.70±3.49% and the expression level of IFN-γ in CD4+T cells was increased from 13.98±3.25% to 15.85±3.43% after administration of the Bushen formula.

Conclusion

In CHB patients, the percentage of CD4+CD25+T cells and the expression of Foxp3 in peripheral blood were increased, which can be repeated in HBcAg-stimulated healthy CD4+T cells. The Bushen formula has positive effects on CHB patients with mildly elevated ALT (1–2 times ULN) by reducing serum ALT and HBV DNA levels, which is relevant with the decreasing of the percentage of CD4+CD25+T cells and the increasing of the expression level of IFN-γ in CD4+T cells.     

雷公藤甲素对体外培养的变应性接触性皮炎小鼠Th细胞Fas表达的影响

目的 为了探讨雷公藤甲素对体外培养的变应性接触性皮炎(ACD)小鼠Th细胞Fas表达的影响.方法 以二硝基氯苯(DNCB)制作小鼠ACD模型,分离ACD小鼠淋巴细胞,不同浓度雷公藤甲素体外作用48 h后,利用流式细胞仪检测Th细胞Fas表达率.结果 雷公藤甲素3个浓度组体外培养的ACD小鼠淋巴细胞Fas表达均高于对照组(P＜0.01),高浓度组与中浓度和低浓度比较Fas表达水平显著升高(P＜0.01),中浓度与低浓度比较表达水平差异具有显著性(P＜0.05).结论 雷公藤甲素可以促进体外培养的ACD小鼠淋巴细胞Fas的表达,可能是治疗ACD的机理之一.     

rhG-CSF对化疗后骨髓抑制患者T淋巴细胞组成的影响

目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对化疗后骨髓抑制患者T淋巴细胞组成的影响。方法:化疗后出现Ⅱ°骨髓抑制的患者,给予皮下注射rhG-CSF150g,连续3d,用药前及用药后第3天用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞组成的变化。结果:流式细胞术分析发现,用药前CD4+T淋巴细胞占外周血CD3+T淋巴细胞比例为(52.96±8.45)%,用药后为(54.15±7.55)%,差异无统计学意义(P>0.05);用药前CD8+T淋巴细胞占外周血CD3+T淋巴细胞比例为(36.96±9.62)%,用药后为(34.56±8.32)%,差异无统计学意义(P>0.05);用药前CD4+CD25+T淋巴细胞占外周血CD4+T淋巴细胞比例为(4.56±1.32)%,用药后为(6.94±1.72)%,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:rhG-CSF对化疗后骨髓抑制患者CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞在CD3+T淋巴细胞中的百分比无明显影响;但增加了CD4+CD25+T淋巴细胞在CD4+T淋巴细胞中的百分比。     

异基因脐血干细胞穴位移植对类风湿关节炎大鼠外周血CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

目的:观察异基因脐血干细胞(h UCBSCs)穴位移植对类风湿关节炎大鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的干预作用及相关机制。方法:先进行脐血CD34+细胞分选,将100只大鼠随机分为正常对照组、模型组对照组、h UCBSC尾静脉注射治疗组、h UCBSCs外关穴注射治疗组、甲氨喋呤(MTX)灌胃治疗组,每组20只。采用邓安梅法建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型。于大鼠免疫后第31天(除正常组及模型组用等体积蒸馏水)向外关穴、尾静脉注射0.5 m L氯化钠注射液和0.5m L h UCBSCs悬液(含干细胞2×107/m L),4周后采用流式细胞仪,对外周血CD4+CD25+细胞的百分含量及其在CD4+T淋巴细胞中所占的比例进行检测。结果:h UCBSCs外关穴注射治疗组外周血CD4+CD25+细胞的百分含量及其在CD4+T淋巴细胞中所占的比例与甲氨喋呤组比较明显增高,差异有统计学意义(P<0.01),h UCBSC尾静脉注射治疗组与甲氨喋呤组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论:h UCBSCs外关穴穴位注射治疗可能通过上调CD4+CD25+调节性T细胞水平,抑制关节炎症和关节骨破坏吸收,有助于类风湿关节炎的治疗。     

淫羊霍苷对哮喘患者IFN-γ表达的影响

目的研究淫羊霍苷对哮喘患者IFN-γ表达的影响。方法分离25例哮喘患者的外周静脉血CD4+CD25+T调节细胞,采用RT-PCR和Westerblot法研究不同浓度(3.13,6.25,12.5,25μg/L)的淫羊霍苷对CD4+CD25+T细胞IFN-γ表达的影响。结果随着淫羊霍苷浓度的增加,CD4+CD25+T调节细胞IFN-γ表达增加。结论淫羊霍苷对哮喘患者IFN-γ表达呈现明显的量效关系,提示淫羊霍苷可能通过影响IFN-γ表达来影响哮喘的发生。     

艾滋病中医脏腑气虚证候与CD4~+及CD8~+ T淋巴细胞相关性研究

目的观察艾滋病中医脏腑气虚证候与CD4+、CD8+T淋巴细胞相关性。方法通过对艾滋病中医脏腑气虚证候患者免疫学指标的观察,初步探讨艾滋病肺气亏虚证、脾气亏虚证、肾气亏虚证与CD4+、CD8+T淋巴细胞的内在相关。结果 153例患者中,肺气虚证患者48例,脾气虚证患者70例,肾气虚证患者35例;CD4+和CD8+T淋巴细胞计数、CD4+/CD8+T比值比较:肺气虚证与脾气虚证、肾气虚证比较有统计学意义(P0.05),脾气虚证与肾气虚证比较则无统计学意义(P0.05)。结论艾滋病肺气虚证患者较脾气虚证、肾气虚证患者CD4+、CD8+T淋巴细胞下降更明显,CD4+/CD8+比例失调更显著,其免疫损伤和破坏更严重,更易发生机会性感染,病情亦相对较重。     

CD_4~+CD_(29)~+T细胞在湿热型溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的:探讨CD4+CD2+9T细胞在湿热型溃疡性结肠炎中的表达及意义。方法:按照年龄及性别构成无统计学差异的原则,将临床观察对象入选分为正常组(n=32)、单纯湿热组(n=18)、非湿热型UC组(n=29)及湿热型UC组(n=16)共4组;将40只SD大鼠随机分为健康组(n=10)、单纯湿热组(n=10)、非湿热型UC组(n=10)及湿热型UC组(n=10)共4组,采用高脂、高糖饲料联合人工气候箱法造出大鼠湿热型模型,再结合三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法制作湿热型UC模型,非湿热型UC组单独用TNBS法。使用流式细胞分析仪检测以上各组患者和大鼠外周血CD4+CD2+9T细胞所占的百分比。结果:单纯湿热组、非湿热型UC组和湿热型UC组患者和大鼠外周血中CD4+CD2+9T细胞的表达均显著升高(P<0.05),其中以湿热型UC组表达最高。结论:CD4+CD2+9T细胞在湿热型UC患者和大鼠中表达显著升高,可能参与了湿热型UC的发病。     

从调节性T细胞和Th17细胞变化探讨抗敏平喘方治疗哮喘机制

目的从调节性T细胞(Tregs)和Th17细胞亚群平衡方面来探讨抗敏平喘方治疗哮喘的机制。方法将6~8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为5组:对照组、模型组、泼尼松(5.5 mg/kg)组、抗敏平喘方低和高剂量(4.95、9.90 g/kg)组;用卵清蛋白诱导小鼠哮喘模型,每天雾化后ig给药,连续15 d,末次给药后处死小鼠,通过病理切片HE染色观察肺组织的损伤情况,用流式细胞术测定血液中Th17和Tregs细胞亚群的变化比例;ELISA法检测小鼠血清中白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子-β(TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达水平。结果病理切片HE染色显示抗敏平喘方能够改善哮喘小鼠肺组织损伤,降低淋巴细胞对肺组织的浸润水平;抗敏平喘方能够下调血液中Th17细胞比例和上调Tregs细胞比例,并且存在剂量依赖效应;抗敏平喘方同时能够显著提高血液中IL-4和TGF-β水平并降低TNF-α水平。结论抗敏平喘方能够通过影响Th17细胞和Tregs在血液中的比例以及相关炎症因子的水平而达到治疗哮喘的作用。