MMP-9 过表达对骨肉瘤143B 细胞 侵袭与迁移能力的影响

目的 研究MMP-9 过表达对成骨肉瘤143B 细胞侵袭与迁移能力的影响。方法 通过慢病毒介导 MMP-9 过表达载体转染骨肉瘤143B 细胞,实验分为3 组：实验组（转染pLV-Puro MMP-9 过表达序列）、 对照组（转染pLV-Puro MMP-9-NC 序列）、空白组（PBS）;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检 测MMP-9 和VEGF mRNA 的表达;Western blot 法检测MMP-9 和VEGF 蛋白的表达;Transwell 小室侵袭 实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 实验组MMP-9 和VEGF 的mRNA 和蛋 白表达量较对照组和空白组上调（P < 0.05）;实验组穿过人工基底膜细胞数高于对照组和空白组（P < 0.05）; 实验组划痕愈合率高于对照组和空白组（P <0.05）。结论 慢病毒介导MMP-9 过表达通过作用于VEGF 靶 基因,抑制成骨肉瘤143B 细胞侵袭及迁移能力。     

OPN、MMP-9在胰腺癌及其侵袭转移中的表达

目的探讨骨桥蛋白（osteopontin,OPN）和基质金属蛋白酶-9（Matrix Metalloproteinase-9,MMP-9）在人胰腺癌组织中的表达情况,分析其与临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学SP方法检测OPN和MMP-9在50例胰腺癌、30例癌旁组织中的表达。结果50例胰腺癌标本中OPN和MMP-9的阳性表达率分别为64.0%（32/50）、62.0%（31/50）,30例胰腺癌癌旁组织中OPN和MMP-9的阳性表达率分别为20.0%（6/30）、26.6%（8/30）,胰腺癌组织中OPN和MMP-9表达明显高于胰腺癌癌旁组织（P〈0.01）。OPN和MMP-9的表达均与肿瘤的分化程度,TNM分期及淋巴结转移有关（P〈0.05）,与肿瘤直径、性别和年龄无明显关系。OPN和MMP-9的表达有显著相关性（r=0.53,P〈0.01）。结论OPN和MMP-9在胰腺癌组织中均呈高表达且二者表达有协同作用,与胰腺癌侵袭转移密切相关,能够作为判断肿瘤的恶性程度及预后的重要参考指标。     

过表达NPM1对胰腺癌细胞增殖、凋亡影响的研究*

目的：探讨NPM1过表达对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法：对人胰腺癌细胞株AsPc-1,BxPc-3,PANC-1,CFPAC-1及人正常胰腺细胞株HPDE6CT作传代培养,检测其中NPM1表达。选择表达较低的细胞行NPM1过表达质粒转染,并设立空白质粒转染对照组。48小时后,采用RT-PCR及Western检测NPM1表达水平变化,并行MTT及流式细胞技术检测细胞增殖、凋亡情况。结果：（1）NPM1在BxPc-3细胞系中表达最低;（2）NPM1过表达组与空白质粒组相比,NPM1的mRNA表达量及蛋白表达量明显增多,差异显著（P<0.05）;（3）NPM1过表达组相比空白质粒组,细胞增殖增加,早期凋亡细胞明显减少（P<0.05）。结论：NPM1的过表达可促进胰腺癌细胞增殖,减少凋亡。     

CTGF基因转染对宫颈癌细胞MMP-2、MMP-9表达及细胞增殖的影响

目的:研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因对人宫颈癌Hela细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及细胞增殖的影响,探讨CTGF在宫颈癌侵袭和转移中的作用机制。方法:经脂质体介导将含有CTGF重组表达质粒转染人宫颈癌Hela细胞株,用G418筛选阳性细胞克隆及实时荧光定量PCR、蛋白质印迹鉴定;采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测阳性克隆细胞MMP-2及MMP-9的表达;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果:成功建立稳定高表达CTGF的阳性Hela细胞克隆,证实其MMP-2、MMP-9表达及细胞增殖活性均显著增高。结论:CTGF转染可显著增加宫颈癌细胞MMP-2及MMP-9的表达并促进其细胞增殖,CTGF可能是宫颈癌基因治疗的潜在靶点。     

siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白表达的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人舌癌Tca8113细胞血管内皮生长因子(vascular endo-thelial growth factor,VEGF)表达对移植瘤基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白表达的影响。方法:以稳定转染携带针对VEGF的siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞(VEGF-siRNA1、VEGF-siRNA2)为实验组,以转染空载体的人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tca8113细胞为实验对照组和空白对照组,将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,用明胶酶谱实验及蛋白免疫印迹法分别测定各组移植瘤TIMP-2、TIMP-9及TIMP-1的蛋白表达。结果:各组明胶酶谱实验结果均有较明显MMP-9蛋白表达,活性MMP-9蛋白含量较少,MMP-2蛋白表达量明显少于MMP-9蛋白表达,而活性MMP-2几乎完全没有可见条带出现。各组中MMP-2、MMP-9及活性-MMP-9条带酶量差异均尚不具统计学意义(P>0.05)。以scion图像分析系统分别读取各样本TIMP-1条带灰度值及β-actin条带灰度值,各组中TIMP-1蛋白相对含量差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论:以siRNA干扰人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制肿瘤内VEGF的蛋白表达,但是对MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白的表达无明显影响。     

磷脂酶D1对胰腺癌细胞增殖的影响

目的 探究磷脂酶D1（PLD1）对于胰腺癌细胞增殖的影响。方法 通过CCK-8法、EdU荧光染色和流式细胞术检测PLD、PLD1及PLD2抑制剂对胰腺癌细胞系Capan-2细胞活力、增殖、周期的影响;采用同样方法检测抑制/过表达PLD1对Capan-2细胞活力、增殖、周期的影响。结果 PLD、PLD1抑制剂均抑制了Capan-2增殖（P=0.004、0.044）,而PLD2抑制剂对Capan-2增殖无明显影响（P=0.945）。下调PLD1的表达使Capan-2细胞活力降低（P=0.000）、增殖能力减弱（P=0.002）,阻碍了细胞周期进展（P=0.004、0.002）;上调PLD1的表达使Capan-2细胞活力提高（P=0.004）、增殖能力增强（P=0.002）,促进细胞周期进展（P=0.0004、0.035）。结论 PLD1能够促进胰腺癌细胞的增殖,在胰腺癌的发展中发挥着重要的作用。     

穿心莲有效成分对巨噬细胞MMP-2、MMP-9表达和活性的影响

目的 探讨穿心莲有效成分(API0134)是否具有抑制小鼠腹腔巨噬细胞基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9(MMP-2,MMP-9)活性及其mRNA表达的作用.方法 用腹腔冲洗的方法收集小鼠腹腔巨噬细胞,使用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激巨噬细胞,同时分别以不同浓度的API0134对巨噬细胞进行干预.采用免疫荧光方法、明胶酶谱法和RT-PCR的方法检测ox-LDL和API0134对巨噬细胞MMP-2、MMP-9活性和表达的影响.结果 与对照组相比,ox-LDL组MMP-2及MMP-9活性和mRNA表达显著升高(均P＜0.01).与ox-LDL组相比,加入50 μg/mL API0134组MMP-2及MMP-9的活性和mRNA表达变化不明显(均P＞0.05),而加入100、200 μg/mL API0134组的MMP-2及MMP-9的活性和mRNA表达均有不同程度的下降(均P＜0.05).结论 穿心莲有效成分能够抑制ox-LDL对巨噬细胞MMP-2及MMP-9活性和mRNA表达的上调作用,因此可能具有维护粥样斑块稳定,减少斑块破裂危险的作用.     

TGFα对胃癌细胞cyclin E和cyclin D1表达的影响

目的 探讨TGFα对胃癌细胞cyclinE和D1表达的促进作用，为研究TGFα促胃癌发生发展机制提供重要信息。方法 ①细胞体外培养，用无血清RPMI-1640阻断法进行G0／G1期同步化，用碘化丙啶染色和流式细胞术，检测其同步化率；②细胞经G0／G1期同步化后，给予2.5％低浓度血清＋RPMI-1640培养处理，以及在此基础上分别加入10、30、50μg／L TGFα处理，均作用5h；用免疫荧光染色及流式细胞术，检测细胞cyclinE和D1的表达情况。结果 细胞经无血清RPMI-1640阻断法处理，其G0／G1期的百分率由常规培养的54％上升到72％；加入TGFα处理后，细胞cyclinE和D1表达均显著高于单用低血清培养（均P〈0.001），并随TGFα剂量的增加而增加；当TGFα浓度为50μg／L时，两者的表达与单用低血清培养比，分别增加了25.18％和27.52％（均P〈0．001）。结论 TGFα可显著促进胃癌细胞cyclinE和D1的表达，从而发挥其促细胞周期进程的作用。     

FGF21过表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭并促进细胞凋亡

目的 探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)基因过表达对人胰腺癌细胞株PANC-1凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将含FGF21基因序列的重组慢病毒载体FGF21-3xflag-ZsGreen-PURO和空载体HBLV-ZsGreen-PURO感染人胰腺癌PANC-1细胞,采用Western blot和RT-qPCR检测过表达FGF21的PANC-1细胞中FGF21、Caspase3、Cleaved-caspase3、Caspase9蛋白和FGF21、肿癌坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达,流式细胞仪检测过表达FGF21的PANC-1细胞的凋亡,CCK-8法检测其增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测其迁移和侵袭能力。结果 HBLV-h-FGF21-3xflag-ZsGreen-PURO转染人胰腺癌细胞株PANC-1后,FGF21蛋白表达水平较空载体感染组升高,凋亡蛋白Caspase3、Cleavedcaspase3、Caspase9蛋白的表达水平均升高（P均<0.01）;FGF21的mRNA表达水平较空载体感染组升高,且TNF...     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的：研究血管肾张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。方法：将35只SPF级SD雄性成年大鼠随机分为正常对照组（C组12只）、糖尿病组（DM组,11只）和糖尿病氯沙坦治疗组（DL组,12只）。应用链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病模型后,对DL组应用氯沙坦灌胃治疗,其余2组灌等量蒸馏水。8周后,将35只大鼠一次性处死,取其肾脏,应用免疫组化法检测MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表达情况。同时测定各组大鼠的血糖、糖化血红蛋白（HbAlc）、血肌酐、尿素氮、肌酐清除率及尿白蛋白排泄率。结果：DM组大鼠肾组织MMP-2、MMP-9的表达较C组明显下调（P〈0．01）,经氯沙坦治疗后的DL组表达明显上调（P〈0．01）。但仍低于C组（P〈0.01）;DM组大鼠肾组织TIMP-1的表达较C组明显上调（P〈0．01）,经氯沙坦治疗后的DL组表达明显下调（P〈0．01）,但仍高于C组（P〈0．01）。DM和DL两组间血糖、HbAlc无显著性差异（P〉0．05）,其余DL组指标值较DM组有所下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论：MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达变化与肾小球细胞外基质（ECM）降解减少相关,可能促进了糖尿病肾病的发生,氟沙坦可能通过干预这种表达变化减缓糖尿病肾病的发生和发展。     

利凡诺对B16黑色素瘤细胞生长及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:观察利凡诺对体外培养的B16黑色素瘤细胞生长状态及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,研究利凡诺的抗肿瘤转移作用。方法:用噻唑蓝(MTT)法检测利凡诺对B16黑色素瘤细胞的生长抑制率;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清的MMP-2蛋白相对含量;免疫细胞化学染色检测MMP-2、MMP-9蛋白表达情况。结果:MTT法检测结果显示,不同浓度的利凡诺对细胞都有明显抑制并伴有时间及浓度依赖性;6.25、12.5μg.ml-1的利凡诺组在72 h与同时段对照组比有显著差异(P<0.05);利凡诺各药物组的MMP-2、MMP-9蛋白阳性表达随药物浓度的增加而减弱。结论:利凡诺可以抑制B16细胞的生长,并且具有潜在的抑制肿瘤侵袭和转移的作用。     

基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达同舌癌侵袭和转移相关性研究

目的:观察基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)的表达与舌癌侵袭和转移的相关性。方法:应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测舌癌患者血清中MMP-2、MMP-9的表达含量,并与正常组对比分析。结果:舌癌病人的血清中MMP-2、MMP-9含量总体水平升高,与对照组相比统计学分析差异非常显著,且与舌癌的病理分级及临床分期成正相关。结论:基质金属蛋白酶含量动态检测可作为评估舌癌预后的客观指标。     

β-cat和cyclin D1表达与胰腺癌临床病理学的关系

①目的　探讨 β 连环蛋白 (β cat)的异常表达和细胞周期素D1 (cyclinD1 )高表达与胰腺癌发生、浸润、转移和预后的关系。②方法　应用免疫组织化学PicTureTM 二步法 ,检测 47例胰腺癌组织、1 2例胰腺导管上皮内肿瘤 (上皮中度不典型增生 )和 1 0例正常胰腺组织中 β cat和cyclinD1的表达。 ③结果　β cat在 1 0例正常胰腺组织均呈正常表达 ,而cyclinD1均呈阴性。β cat在胰腺导管上皮内肿瘤和胰腺癌中的表达率分别为 50 .0 %和 68.1 % ,两者比较差异无显著性 (χ2 =0 .689,P >0 .0 5) ;cyclinD1在胰腺导管上皮内肿瘤和胰腺癌中的表达率分别为 50 .0 %和 74.5 % ,两者比较差异无显著性 (χ2 =0 .2 1 3 ,P >0 .0 5)。β cat异常表达率与胰腺癌的转移和 1年生存率显著相关 (χ2 =6 .2 30 ,5 .495 ,P均 <0 .0 5)。cyclinD1的表达率与胰腺癌的增殖和分化程度有关 (P =0 .0 0 6 ,χ2 =6 .1 90 ,P <0 .0 5)。β cat异常表达与cyclinD1高表达在胰腺导管上皮内肿瘤和胰腺癌中均呈显著的正相关 (P =0 .0 0 2 ,χ2=6 .937,P <0 .0 1 ;r=1 .0 0 0 ,0 .845 ,P <0 .0 1 )。④结论　β cat异常表达导致cyclinD1的激活而引起细胞增殖和分化失控 ,在胰腺癌的发生机制中可能发挥重要作用。β cat异常表达可作为判断胰腺     

口服普萘洛尔对婴幼儿血管瘤MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达水平的影响

目的 研究口服普萘洛尔前后婴幼儿血管瘤病灶内MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达水平的影响.方法 选择2010年5月至2011年12月来我院就诊、年龄≤3个月、血管瘤病灶位于肢体或隐蔽部位、家属要求手术治疗却具备单独口服普萘洛尔治疗条件、排除口服普萘洛尔禁忌证、先前未接受过其他任何相关治疗的病例作为研究对象,共39例.经过与家属沟通并征得其书面同意,先按口服普萘洛尔诊疗常规,口服用药前在局麻下夹取血管瘤体组织活检,后口服8周普萘洛尔[剂量:2 mg/(kg·d),分2次,每12小时用药],继而手术切除瘤体.采用免疫组化、实时荧光定量RT-PCR的方法,检测口服用药前后病灶组织内MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达水平的变化,计算口服用药前后病灶微血管密度(MVD).结果 免疫组化与实时荧光定量RT-PCR结果均提示,口服普萘洛尔后血管瘤病灶内MVD值明显减低且具有统计学意义(t =18.458,P＜0.01),MMP-2、MMP-9表达水平较用药前明显减少(P＜0.01),TIMP-1、TIMP-2表达水平明显增高(P＜0.01).且口服用药后上述4个因子免疫组化平均积分光密度、mRNA相对表达量变化与MVD值变化密切相关.结论 普萘洛尔可下调血管瘤病灶内MMP-2、MMP-9的表达,上调TIMP-1、TIMP-2的表达,从而抑制新生血管的形成.     

PKIB表达对胰腺癌细胞增殖与侵袭影响的实验研究

目的:人cAMP依赖型蛋白激酶B抑制剂(cAMP-dependent protein kinase inhibitor-β,PKIB)表达对胰腺癌细胞增殖与侵袭的影响。方法:利用Lipofectamine~(TM)2000转染PKIB过表达和沉默基因至PANC-1胰腺癌细胞,应用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法与蛋白质印迹法(Western blot)检测转染细胞中PKIB mRNA与蛋白的表达。应用噻唑蓝(MTT)比色法和结晶紫实验检测胰腺癌细胞活力和增殖能力,应用Transwell实验测定胰腺癌细胞的侵袭能力。结果:胰腺癌细胞的PKIB表达高于正常胰腺导管上皮细胞(P<0.05)。PKIB过表达增强细胞活力(P<0.05),促进细胞增殖,使胰腺癌细胞侵袭能力增强(P<0.05),而沉默PKIB表达对胰腺癌细胞的生物学效应恰好相反(P<0.05)。结论:PKIB的表达程度可影响胰腺癌细胞的增殖和侵袭,为进一步探讨胰腺癌发病机制及治疗提供有力证据。     

过表达Hsa-miR-133a-2对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

目的 探究hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞表型的影响及其在宫颈癌细胞增殖与侵袭中的潜在分子机制。方法 通过癌症基因组图谱-宫颈鳞癌和腺癌(The Cancer Genome Atlas-Cervical squamous cell carcinoma and endocervical adenocarcinoma, TCGA-CESC)验证宫颈癌组织和癌旁组织中hsa-mir-133a-2的表达情况;对TCGA-CESC中提取的307例高表达和低表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者的临床信息进行K-M生存分析以评估其预后价值;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术对正常宫颈细胞和宫颈癌细胞中hsa-mir-133a-2的表达进一步检测;采用细胞计数试剂盒-8(CKK8)和transwell法检测hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。结果 与宫颈癌癌旁组织细胞和正常宫颈细胞相比,hsa-mir-133a-2在宫颈癌细胞中表达水平均显著下调(P<0.05);K-M生存分析结果表明,高表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者具有相对较...     

甲基化结合蛋白2对人胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移的影响

目的: 探讨甲基化结合蛋白2 (methyl-CpG-binding protein 2, MeCP2)对人胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移能力的影响。方法: 采用qRT-PCR和免疫印迹法检测MeCP2在PANC1、PaTu8988、SW1990 3种胰腺癌细胞株中的表达水平;将干扰质粒shMeCP2(实验组)与对照质粒shEGFP(对照组)分别转入PANC1细胞中,CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移能力。结果： MeCP2在3种胰腺癌细胞中差异性表达。与对照组相比,实验组PANC1细胞中MeCP2 mRNA和蛋白表达明显降低(t分别为6.58,8.42,P均<0.05);细胞相对增殖率、细胞克隆形成数及迁移能力明显降低(P均<0.05)。结论： 下调MeCP2表达可降低胰腺癌PANC1细胞的增殖和迁移能力。