药物难治性癫痫患者脑内多药耐药相关蛋白1表达的研究

目的 研究药物难治性癫痫患者脑内皮层多药耐药相关蛋白1（multidrug resistant-associated protein 1，MRP1）表达的情况。方法 选择12例药物难治性癫痫患者癫痫切除灶与12例正常对照脑组织标本．用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫组化及免疫蛋白印记（Western blot）方法，分析比较MRP1基因在各组的表达。结果 药物难治性癫痫患者组脑内MRP1的表达显著高于正常对照组（P〈0．01）。在癫痫病灶内广泛分布的MRP1免疫阳性细胞主要为毛细血管内皮细胞和星形胶质细胞。结论 脑内高表达的MRP1参与了难治性癫痫的耐药机制。     

难治性癫痫大鼠脑内多药耐药相关蛋白1表达的研究

目的 研究杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠脑内多药耐药相关蛋白1（multidrug resistant-associated protein 1 MRP1）表达的情况.方法 建立杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠模型,用免疫组织化学及免疫蛋白印记（western blot）的方法,分析比较MRP1蛋白在癫痫模型组与正常对照组的表达.结果 药物难治性癫痫大鼠组脑内多药耐药相关蛋白的表达显著高于正常对照组（P〈0.01）.在癫痫大鼠脑内广泛分布的MRP1免疫阳性细胞主要为毛细血管内皮细胞和星形胶质细胞.结论 癫痫大鼠脑内高表达的MRP1参与了难治性癫痫的耐药机制.     

多药耐药相关蛋白-1在难治性颞叶癫痫患者脑组织中的表达及丙磺舒的干预作用

目的 观察难治性颞叶癫痫患者脑组织中多药耐药相关蛋白1( MRPl)及应用MRP1拮抗剂丙磺舒干预后的表达,探讨MRP1与难治性颞叶癫痫多药耐药的关系.方法 应用免疫组化检测难治性颞叶癫痫患者脑组织实验组和对照组MRP1的表达情况,同时应用免疫蛋白印记(Western blot)方法检测实验组、丙磺舒干预组和对照组MRP1的表达.结果 免疫组化结果显示MRP1在难治性颞叶癫痫患者脑组织中表达增强,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).Western blot结果显示丙磺舒干预组MRP1蛋白水平较实验组明显较少,差异有显著性(P＜0.05).结论 脑内高表达的MRP1参与难治性颞叶癫痫的耐药机制,丙磺舒可以降低脑组织内MRP1的表达.     

药物难治性癫痫大鼠脑内Bax和Bcl-2表达的研究

目的研究杏仁核电刺激点燃的药物难治性癫痫大鼠脑内凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的情况。方法建立杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠模型,通过药物筛选用出耐药大鼠和药物敏感大鼠,采用免疫组织化学及免疫蛋白印记（western blot）的方法,分析比较Bax和Bcl-2在耐药组与药物敏感组的表达。结果药物难治性癫痫大鼠组脑内Bax蛋白的表达显著高于药物敏感组（P〈0.01）,而Bcl-2蛋白的表达显著低于药物敏感组（P〈0.01）。结论癫痫大鼠脑内凋亡相关蛋白可能参与了难治性癫痫的耐药机制。     

凋亡抑制蛋白XIAP在难治性癫痫大鼠脑内的表达

目的研究杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠脑内凋亡抑制蛋白XIAP表达的情况。方法建立杏仁核电刺激点燃的难治性癫痫大鼠模型,通过药物筛选用出耐药大鼠和药物敏感大鼠,采用免疫组织化学及western blot的方法,分析比较凋亡抑制蛋白XIAP在耐药组与药物敏感组的表达。结果难治性癫痫大鼠脑内XIAP的表达明显高于药物敏感组。结论癫痫大鼠脑内凋亡抑制蛋白XIAP可能参与了难治性癫痫的耐药机制。     

MDR1基因SNPs与难治性癫痫的相关性研究进展

研究癫痫耐药机制及克服的办法已成为重要的课题,近年来研究发现多耐药基因(multidrug resistance,MDR1,ABCB1)及其表达产物P-gp蛋白在动物模型及人类难治性癫痫脑组织中表达明显增多,P-gp蛋白与耐药机制的形成有关,应用P-gp蛋白抑制剂能够增加细胞内抗癫痫药物(antiepileptic drugs,AEDs)浓度,减少其应用。国外大多数研究发现MDR1基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)影响MDR1功能和P-gp蛋白表达,与难治性癫痫的耐药性相关,但是有的学者持相反观点,可能与研究的单倍体局限性有关。标签单核苷酸多态性SNP(tag SNPs)能够特异识别某一单倍型,将来通过对MDR1基因tag SNPs研究,对难治性癫痫的的遗传学研究、发现其遗传标志、早期诊断、个体化治疗有重要的意义。     

P糖蛋白与难治性癫痫

难治性癫痫(intractable epilepsy)即一般意义上的药物性难治性癫痫(medically intractable epilepsy),在癫痫中约占20％～30％。长期以来,如何阐明难治性癫痫的产生机制,提高对难治性癫痫的控制率一直是癫痫研究的热点。近年,由于受到肿瘤多药耐药(multiple drug resistance,MDR)研究的启示,MDR在难治性癫痫中所扮演的角色逐渐被认识,其中P糖蛋白(P-glycopmtein,PgP)与难治性癫痫的关系研究相对较为深入,本文就此作一综述。 1 Pgp的特性与MDR的关系 Pgp是一分子量为170 kD的膜结合蛋白,转运蛋白ATP结合物(ATP-binding cassette transporters,ABCT)超家族的成员之一,由MDR1基因编码。人类MDR基因分为MDR1和MDR2两种,其中MDR1基因产物Pgp与多药耐药的产生关系非常密切。正常情况下,哺乳动物各种组织均     

癫痫耐药的分子机制

约1/3的癫痫患者对抗癫痫药物(AEDs)耐药。癫痫耐药是一个复杂的过程,可能涉及多药转运体P-糖蛋白(Pgp)和多药耐药相关蛋白(MRP),这些蛋白质及其mRNA在脑内皮的表达增加,主动从中枢神经系统清除AEDs,降低AEDs在致痫组织的有效浓度;此外,某些药物作用的分子靶点(如电压依赖性Na~+通道)也可能发生改变。     

耐药性癫痫患者血清和脑脊液P-糖蛋白的表达水平变化及其临床意义

目的 观察耐药性癫痫患者血清和脑脊液中多药耐药基因-1、P-糖蛋白的表达水平变化及其临床意义。方法 选取2014年1月-2016年4月本院收治的耐药性癫痫患者以及同期在本院接受抗癫痫药物治疗控制良好的癫痫患者各85例,分别作为耐药性癫痫组和治疗有效组。另选取健康人群85例作为健康对照组。采用酶联免疫吸附测定法及荧光定量聚合酶链反应技术检测所有受试人员的外周血清及脑脊液中多药耐药基因-1及P-糖蛋白表达水平,比较不同类型癫痫患者以上两项指标的表达水平变化。结果 与治疗有效组、健康对照组比较,难治性癫痫组患者血清P-糖蛋白及MDR1-mRNA表达水平较其他2组均明显增高(P<0.05,P<0.01); 治疗有效组与健康对照组比较,血清P-糖蛋白及MDR1-mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。与治疗有效组比较,耐药性癫痫组脑脊液P-糖蛋白及MDR1-mRNA表达水平明显增高(P<0.05)。耐药性癫痫组中不同发作类型患者血清MDR1-mRNA、P-糖蛋白表达水平比较,均无明显差异(P均>0.05)。结论 外周血及脑脊液中多药耐药基因-1、P-糖蛋白的表达水平可以作为癫痫耐药的一项重要指标。     

P糖蛋白与难治性癫痫多药耐药

目前,大约有20%～30%的癫痫患者通过一线的抗癫痫药物(antiepileptic drugs,AEDs)无法达到有效的治疗效果,成为难治性癫痫(refractory epilepsy,RE)。本病的形成是个多因素过程。近年来,对难治性癫痫研究重点集中在其多药耐药(multidrug resistant,MDR)机制上,与肿瘤患者对     

丙磺舒逆转多药耐药相关蛋白的表达在难治性癫痫治疗中的作用

耐药基因表达成为难治性癫痫重要原因的发现为难治性癫痫的治疗开辟了一条新途径,寻找耐药基因的逆转剂就成为实现这个目标的主要手段。近年来,数10种耐药基因的逆转剂在临床上作过探索,其中最为成熟的药物就是丙磺舒。本文就目前有关丙磺舒在癫痫中的研究进展作一文献复习。 1难治性癫痫中多药耐药相关蛋白的表达及对抗癫痫药物的影响上世纪70年代有学者提出多药耐药的概念。随后在动物和难治性癫痫患者中的研究发现多药耐药基因及其产物P-     

药物难治性癫痫患者脑内水通道蛋白-4的表达上调

目的研究水通道蛋白4(AQP4)在药物难治性癫痫脑组织中的表达。方法研究时间自2004年5月至2005年3月。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组织化学和免疫蛋白印迹(WESTERN BLOT)技术,分析比较18例药物难治性癫痫患者癫痫灶脑组织与20例正常对照脑组织标本AQP4的MRNA和蛋白的表达水平。结果药物难治性癫痫患者脑组织AQP4的MRNA和蛋白的表达均显著高于正常对照组(P<0．01)。结论 AQP4可能参与了药物难治性癫痫患者癫痫发作后的脑水肿的发生,是癫痫继发脑水肿的重要分子基础。     

多药耐药相关蛋白与难治性癫痫

难治性癫痫的发病机制尚不完全清楚,近年来发现在难治性癫痫患者病灶脑组织可检测出多药耐药相关蛋白(MRP)的过度表达,表明MRP与难治性癫痫耐药关系密切。MRP的过度表达受多种因素影响,其可能通过降低抗癫痫药物在血脑屏障的通透性,减少药物的有效浓度,从而引起抗癫痫药物耐药发生。鉴于MRP在难治性癫痫多药耐药中可能的重要作用,筛选非MRP底物的抗癫痫药物和选用适合长期服用的特异性强﹑安全性高﹑毒副作用性小的MRP抑制剂,可能会为今后临床治疗难治性癫痫翻开新的一页。     

药物难治性癫痫患者脑内多种耐药基因表达的初步研究

目的研究药物难治性癫痫患者与正常对照组脑内多种药物耐药基因（ＭＤＲ１）表达的情况。方法　选择１５例药物难治性癫痫患者和５例对照组患者的脑组织标本,用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,以Ｂ－ａｃｔｉｎ为内参照对ＭＤＲ１基因进行扩增,经琼脂糖凝胶电泳分别得到２２６ｂｐ和５４８ｂｐ的条带,通过照相、扫描、计算ＭＤＲ１／ｂ－ａｃｔｉｎ比值进行半定量分析。结果统计学处理提示,药物难治性癫痫患者脑内ＭＤＲ１的表达明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。结论　Ｐ－糖蛋白为ＭＤＲ１的产物,能将药物从脑内排入血循环而降低脑内药物浓度。药物难治性癫痫患者因脑内ＭＤＲ１的高表达,导致脑内抗癫痫药物（ＡＥＤ）浓度较低而耐药。故应用ＭＤＲ１抑制剂也许可以提高ＡＥＤ在脑内的药物浓度,使癫痫的药物治疗效果更令人满意。     

耐药癫痫患者和难治性癫痫大鼠脑组织与外周血GST-π蛋白表达

目的考察耐药癫痫患者和难治性癫痫大鼠脑组织与外周血谷胱甘肽S-转移酶π(glutathione S-transferaseπ,GST-π)的表达。方法临床收集2010年1月至2014年3月在我院神经外科行手术治疗的耐药性癫痫患者32例,选择同期因脑血管畸形手术切除的10例正常脑组织为对照;动物试验:收集15只对照组和20只难治性癫痫大鼠组,难治性癫痫依据锂-匹罗卡品癫痫模型制备。检测人与大鼠外周血和脑的GST-π水平表达,并进行组间比较。结果耐药癫痫患者脑组织的颞叶20例,额叶6例,枕叶6例。GST-π在耐药癫痫患者和难治性癫痫大鼠脑的颞叶、额叶、枕叶中均有表达,存在于细胞胞浆,染成浅黄色至棕黄色颗粒,与对照组比,耐药癫痫患者和难治性癫痫大鼠脑和外周血GST-π表达明显增加(P0.05)。结论 GST-π可能参与耐药癫痫的发病,检测外周血GST-π为耐药性癫痫的治疗提供参考。     

癫痫耐药机制的分子生物学研究进展

癫痫是神经科常见病，难治性癫痫约占癫痫的30％。其耐药机制包括许多方面．目前认为早期发病、症状性癫痫、特殊的临床发作类型等是难治性癫痫的重要相关因素。近年来，对肿瘤耐药机制的研究使人们逐渐认识到多药耐药基因（muhiple drugs resistance．MDR）及其表达产物与难治性癫痫的相关关系。     

多药耐药蛋白及其在难治性癫痈中作用的研究进展

难治性癫痫的耐药性研究已取得了许多突破性进展。近年发现,难治性癫痫与多药物耐药蛋白存在着密切联系。文中介绍3种主要多药耐药蛋白（P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1、主穹窿蛋白）的结构和功能,并对其近年在难治性癫痫耐药中作用的研究进展作一综述。     

多药耐药蛋白对大鼠皮层细胞外液卡马西平和苯妥英钠影响的研究

目的观察多药耐药蛋白(multidrugresistance-associatedprotein,MRP)拮抗剂丙磺舒对大鼠大脑皮层细胞外液卡马西平和苯妥英钠含量的影响,证明MRP能够减少皮层内抗癫痫药物的浓度,探讨脑内表达MRP和难治性癫痫多药耐药的关系。方法在健康大鼠大脑皮层内安置微透析探针,腹腔注射卡马西平(20mg/kg)和苯妥英钠(50mg/kg),在给药后不同时间点收集透析液,并用高效液相检测其中的药物浓度,通过微透析探针局部给于丙磺舒,观察后者能否提高大鼠大脑皮层细胞外液卡马西平和苯妥英钠的浓度。结果丙磺舒升高了皮层细胞外液中卡马西平和苯妥英钠的药物浓度,前者在给药后45min～120min显著增高(P<0.05),后者在给药后30min～150min显著增高(P<0.05)。结论MRP具有限制卡马西平和苯妥英钠通过血脑屏障的作用,引起抗癫痫药物在大鼠大脑皮层细胞外液中分布减低,MRP表达增加可能参与了难治性癫痫多药耐药机制的形成。     

难治性癫患者外周血中MDR1基因的表达及临床意义

目的研究难治性癫患者外周血中多药耐药1(MDR1)基因的表达以及抗癫药物和性发作在难治性癫多药耐药发生中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测120例研究对象外周血中MDR1基因mRNA的表达。根据析因设计分性发作和抗癫药物两个因素,共分为A组(难治性癫组)、B组(癫治疗有效组)、C组(性发作未用药组)和D组(健康正常对照组),各30例。结果4组的外周血中MDR1基因的表达水平明显不同(F=4.456,P=0.005),其中性发作引起MDR1mRNA的表达明显增高(F=10.005,P=0.002),抗癫药物的作用则不明显(F=0.919,P=0.340),抗癫药物与性发作两者之间没有交互作用(F=2.445,P=0.121)。结论难治性癫患者外周血中MDR1基因mRNA的表达上调是性发作而非使用抗癫药物的结果,外周血中MDR1基因mRNA表达水平的监测可以作为评价癫耐药的一项指标。     

难治性癫痫患者脑组织中耐药蛋白表达与卡马西平浓度的相关性

目的 通过对难治性癫痫患者脑组织中P-糖蛋白、肺耐药相关蛋白表达与卡马西平浓度的比较及相关性研究,探讨难治性癫痫耐药的机制.方法 选取2007年至2009年间于宣武医院功能神经外科行癫痫致痫灶切除术治疗且术前服用卡马西平半年以上的26例药物难治性癫痫患者的脑组织标本(其中局灶性皮质发育不良ⅠblO例、Ⅱa4例、Ⅱb2例,神经节细胞胶质瘤6例,胚胎发育不良性神经上皮瘤4例).应用Envision二步法进行免疫组织化学标记,观察两种耐药蛋白在脑组织中的表达部位和表达强度.应用Western blot法进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对两种耐药蛋白在脑组织病灶区域和病灶周围区域的表达分别进行定量分析.应用荧光偏振免疫分析法对病灶区域和病灶周围区域的卡马西平浓度进行测定.结果 P-糖蛋白在局灶性皮质发育不良Ⅱ型和难治性癫痫相关脑肿瘤病例的病灶区域表达(μg/ml)均高于病灶周围区域(分别是2.593±0.829和1.711±0.292,t=-2.201,P=0.028;1.352±0.445和1.179±0.593,t=2.698,P=0.028).肺耐药相关蛋白在局灶性皮质发育不良Ⅱ型和难治性癫痫相关脑肿瘤病例的病灶区域表达(μg/ml)亦均高于病灶周围区域(分别是1.567±0.092和0.775±0.101,t=-2.516,P=0.024;1.091±0.239和0.825±0.297,t =3.997,P=0.003).卡马西平在难治性癫痫相关脑肿瘤病灶区域平均浓度(μg/ml)低于病灶周围区域(0.848±0.726和0.948±0.785,t=-3.056,P=0.014),在病灶区域卡马西平浓度低于病灶周围区域的8例中,病灶区域P-糖蛋白和肺耐药相关蛋白同时升高.但是P-糖蛋白、肺耐药相关蛋白表达量与难治性癫痫患者脑组织卡马西平浓度无显著的等级相关性.结论 耐药蛋白参与了难治性癫痫耐药的过程,同时提示癫痫的耐药是一个复杂的过程,不同病变可能有不同的机制参与了耐药过程.