清热解毒、凉血化瘀中药联合干细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝脏细胞凋亡的影响

目的:探讨清热解毒、凉血化瘀中药联合大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对急性肝衰竭大鼠(ALF)肝脏细胞凋亡的影响。方法:40只清洁级雄性SD大鼠,随机分为空白组5只,造模组35只,造模组采用D-氨基半乳糖(D-Gal N,1.2 g·kg~(-1))联合脂多糖(LPS,5μg·kg~(-1))建立急性肝衰竭大鼠模型,造模后12 h取存活大鼠随机分为模型组、复方甘草酸苷组、茵陈四苓颗粒组、干细胞移植组及茵陈四苓颗粒联合干细胞移植组(联合组),联合组给予干细胞门静脉移植及茵陈四苓颗粒灌胃(每次1.5 g·kg~(-1)),干细胞组给予单纯干细胞门静脉移植(1.0×106个/m L),余各组给予等体积生理盐水门静脉注射,茵陈四苓颗粒组给予茵陈四苓颗粒灌胃,复方甘草酸苷组给予复方甘草酸苷灌胃(每次7.5 mg·kg~(-1)),余各组给予等体积生理盐水灌胃,干预后120 h处死大鼠。检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TIBL)变化,苏木-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变,计算肝脏炎症活动度,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝脏细胞凋亡指数(AI),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定肝组织中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达。结果:急性肝衰竭大鼠造模后肝功能异常,联合组与模型组、复方甘草酸苷组、茵陈四苓颗粒组及干细胞移植组比较,大鼠血清AST,ALT,TBIL降低,肝炎活动度及凋亡指数明显降低(P0.05);联合组大鼠肝组织内Caspase-3蛋白的表达明显降低,Bax mRNA的表达降低,Bcl-2 mRNA表达明显升高,与模型组及各干预组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:清热解毒凉血化瘀中药联合干细胞移植能够改善肝功能,通过下调Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2 mRNA,下调Bax mRNA的表达来抑制肝脏细胞凋亡,效果优于单纯干预,两者对肝细胞凋亡的抑制具有协同作用。     

茵陈四苓颗粒联合骨髓间充质干细胞移植对急性肝衰竭大鼠NF-κB、iNOS及TNF-α的影响研究

目的探讨茵陈四苓颗粒联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对急性肝衰竭大鼠炎症介质谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、内毒素(ET)及相关通路核因子-κB(NF-κB)、i NOS及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法 1)全骨髓贴壁法制备大鼠BMSCs并体外培养;2)取清洁级雄性大鼠60只,随机分为正常组、模型组、阳性对照组、中药组、干细胞组、中药及干细胞联合组。除正常组外其余各组予以硫代乙酰胺灌胃造模;3)造模后中药组及联合组每日予以茵陈四苓颗粒灌胃;干细胞组及联合组予以尾静脉注射干细胞悬液。72 h后处死大鼠,收集血标本,检测肝脏ALT、AST及血浆ET水平,制作病理切片,免疫组化检测NF-κB表达,RT-PCR检测TNF-α、i NOS的基因转录。结果造模后各治疗组肝脏生化、TNF-α、i NOS的基因转录水平、NF-κB的细胞数目较模型组明显降低(P 0.05),肝脏组织坏死程度减轻,可见部分增生肝细胞,炎性浸润减轻。其中以联合组效果最佳(P 0.05)。结论茵陈四苓颗粒联合BMSCs治疗,可减轻急性肝衰竭大鼠肝损伤,有效抑制肝脏炎症反应,对急性肝衰竭有一定治疗作用。     

一贯煎及骨髓间充质干细胞对肝纤维化大鼠阴虚证表征影响的实验研究

目的观察骨髓间充质干细胞在一贯煎的作用下对肝纤维化大鼠阴虚证的影响并探讨该过程的发生机制。方法将54只SD大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型组、阳性对照组、骨髓干细胞组、骨髓干细胞一贯煎组及一贯煎治疗组。除正常对照组外,其他5组建立CCl_4诱导的肝纤维化模型。造模停止第三天,骨髓干细胞组及骨髓干细胞一贯煎组经尾静脉注射骨髓间充质干细胞。一贯煎组及骨髓干细胞一贯煎组给予一贯煎浓缩液灌胃,模型组、正常组灌服生理盐水,阳性组给予秋水仙碱灌胃,每天一次,一共给药4周,给药期间每周测量大鼠体质量、体温、血流速度、饮水量。4周后取材,将pH试纸置于大鼠舌面20秒,测量前后重量变化,判定大鼠舌面干湿度;通过HE染色和马松染色评价肝脏炎症活动度和纤维化程度;通过苦味酸—天狼星红染色评判造模大鼠肝组织细胞胶原面积比;通过荧光示踪评判骨髓间充质干细胞在肝纤维化大鼠肝组织中的表达。结果 (1)一贯煎加骨髓间充质干细胞组的炎症活动度和纤维化程度明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);(2)肝纤维化大鼠有阴虚证的表征,一贯煎和骨髓间充质干细胞可以改善大鼠阴虚证的症状。(3)中药组、骨髓间充质干细胞组、中药加骨髓间充质干细胞组和阳性组体重增长均明显高于模型组(P0.05);一贯煎加骨髓间充质干细胞组大鼠舌重较骨髓间充质干细胞组较模型组增高(P0.05);模型组舌面温度为较正常组明显增高(P0.05);一贯煎加骨髓间充质干细胞组与模型组相比较明显降低(P0.05);一贯煎加骨髓间充质干细胞组舌血流速度与模型组相比较降低更为明显(P0.05);一贯煎加骨髓间充质干细胞组大鼠饮水量与模型组相比较明显降低(P0.05)。(4)一贯煎组、阳性对照组、骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组的胶原面积比明显低于模型组(P0.05)。(5)一贯煎加骨髓间充质干细胞组的骨髓间充质干细胞荧光面积与骨髓间充质干细胞组相比较明显增高(P0.05)。结论骨髓间充质干细胞可以改善肝纤维化大鼠的阴虚证表征,而一贯煎通过促进骨髓间充质干细胞向肝组织转移而增强骨髓间充质干细胞对肝纤维化大鼠阴虚证表征的改善作用。     

茵陈四苓颗粒对急性肝衰竭大鼠肠屏障功能的影响

目的研究茵陈四苓颗粒对急性肝衰竭大鼠模型肠屏障功能的影响。方法将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(双歧杆菌乳杆菌三联活菌片干预)、中药组(茵陈四苓颗粒干预),予以腹腔注射硫代乙酰胺建立急性肝衰竭大鼠模型,并予以相应药物干预。造模成功48 h后收集腹主动脉血检测大鼠血清AST、ALT、TBIL,HE染色观察大鼠肝肠组织病理,ELISA法测血清DAO、D-LA及炎症因子(IL-6、IL-1β、TNF-α)水平,Western blot检测Occludin及ZO-1蛋白的表达。结果茵陈四苓颗粒可以减缓大鼠体质量下降,抑制AST、ALT、TBIL的升高(P0.05),降低血清DAO、D-LA及炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α的表达(P0.05),促进肠组织中Occludin蛋白、ZO-1蛋白的表达(P0.05)。结论茵陈四苓颗粒可以通过保护急性肝衰竭大鼠肠屏障功能障碍,减轻肠源性内毒素血症,促进肝脏修复。     

骨髓间充质干细胞对损伤心肌的修复作用

目的:探讨骨髓间充质干细胞用于修复损伤心肌的作用。方法:在2018年1月至2019年1月期间,选择35只Lewis雄性大鼠进行研究,其中8周龄30只,4周龄5只,构建大鼠急性心肌梗死模型,开展大鼠骨髓间充质干细胞培养,将8周龄大鼠分为三组,每组10只,假手术组仅开胸但不结扎,对照组结扎之后注入不含血清DF12的培养液,观察组结扎后注入骨髓间充质干细胞,在构建模型和细胞移植之后8周开展心脏超声检查及免疫组化CD31染色处理,观察三组心电图检查指标及新生血管个数。结果:观察组大鼠左心室收缩末期内径值、左心室舒张末期内径值低于对照组,高于假手术组,差异具有统计学意义(P 0.05);观察组短轴缩短率、左室射血分数、新生血管个数高于对照组,低于假手术组,差异具有统计学意义(P 0.05)。结论:骨髓间充质干细胞对损伤心肌存在一定修复作用。     

左归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞ATF4、BGP、BMP蛋白表达的影响

目的:通过观察左归丸含药血清对大鼠成骨细胞ATF4、BGP、BMP蛋白变化的实验研究,探究以左归丸为代表的补肾药剂治疗大鼠骨质疏松症可能的机制。方法:将32只SPF级大鼠随机分入正常组、诱导液组、左归丸组、福善美组,分别用生理盐水、诱导液、左归丸汤药、福善美对大鼠灌胃5 d,制备相应含药血清,然后用含有含药血清的培养基体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,采用ELISA法检测含药血清处理过的骨髓间充质干细胞ATF4、BGP、BMP蛋白表达的变化。结果:与正常组比较,诱导液(骨髓间充质干细胞成骨分化)组、左归丸组、福善美组大鼠骨髓间充质干细胞ATF4、BGP、BMP的蛋白表达水平明显上升(P0.01),差异具有统计学意义,左归丸组与诱导液组和福善美组比较(P0.01),差异无统计学意义。结论:①正常大鼠骨组织中存在ATF4、BGP、BMP蛋白表达;②左归丸组大鼠骨髓间充质干细胞ATF4、BGP、BMP的蛋白表达与正常组比较明显上调,说明左归丸含药血清能够上调ATF4、BGP、BMP的蛋白浓度,并且能够诱导骨髓间充质干细胞向骨细胞分化,从而能够起到防治骨质疏松症的作用。     

一贯煎促进骨髓间充质干细胞逆转肝纤维化的实验研究

目的：该研究观察骨髓间充质干细胞对肝纤维化的逆转作用,了解一贯煎对该过程的作用,阐释一贯煎逆转肝纤维化的机制。方法60只雄性Sprague-Dawlay大鼠随机分为5组,即正常对照组、模型组、阳性对照组、骨髓间充质干细胞组、一贯煎加骨髓间充质干细胞组,每组12只。除正常对照组外,均建立肝纤维化恢复模型,分离、培养和标记骨髓间充质干细胞,在CCl4停止注射后3天,骨髓间充质干细胞组每只动物经尾静脉注射5×10^6 mmol/L浓度1 mol骨髓间充质干细胞;一贯煎加骨髓间充质干细胞组每只大鼠尾静脉注射等量的骨髓间充质干细胞外,给予一贯煎浓缩液2 ml/200 g灌胃,每天1次。阳性对照组给予秋水仙碱灌胃,0．25 mg/kg,每天1次。正常对照组和模型组按相同方法灌服等量生理盐水。阳性对照组、正常对照组和模型组经尾静脉注射等量生理盐水。4周后,检测各组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶等肝功能指标;通过HE染色评价肝脏炎症活动度（G）和纤维化程度（S）;荧光显微镜下示踪肝组织中骨髓间充质干细胞。结果（1）骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组较模型组和阳性组在改善肝功能、减轻炎症、逆转肝纤维化的作用较好,P〈0．05。一贯煎加骨髓间充质干细胞组较骨髓间充质干细胞组在改善肝功能、逆转纤维化的作用更明显,P〈0．05。（2）骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组骨髓间充质干细胞在肝脏分布面积较模型组增大,P〈0．05;一贯煎加骨髓间充质干细胞组较其他组差异显著,P〈0．05。结论骨髓间充质干细胞具有逆转肝纤维化的作用,一贯煎对该过程具有促进作用;一贯煎能够促进骨髓间充质干细胞募集到肝脏,从而发挥逆转肝纤维化的作用。     

柔肝化纤颗粒联合骨髓干细胞移植对肝纤维化大鼠的影响

目的:探讨柔肝化纤颗粒联合骨髓干细胞移植对肝纤维化的疗效。方法:采用四氯化碳复合因素肝纤维化模型,造模成功后灌服柔肝化纤颗粒,同时于第4周行骨髓间充质干细胞尾静脉途径移植,观察各组大鼠肝脏病理及肝功能指标ALT、AST、ALB、TBIL变化。结果:联合组能明显改善肝功能(P<0.05),降低肝纤维化程度(P<0.05)。结论:联合治疗有抗肝纤维化作用,有效促进肝再生。     

骨髓间充质干细胞的成骨性诱导

目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化的效果。方法:采用全骨髓贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,把生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞,分为两组,对照组用DMEM-LG培养基培养;实验组用含有成骨诱导剂的DMEM-LG培养基培养。结果:全骨髓贴壁法培养的原代骨髓间充质干细胞贴壁且呈梭形;经成骨诱导剂诱导后骨髓间充质干细胞呈卵圆形贴壁生长,碱性磷酸酶活性明显强于对照组(P<0.01),茜素红染色出现阳性的钙化结节。结论:全骨髓贴壁法培养骨髓间充质干细胞方法简单、实用,所培养的骨髓间充质干细胞在成骨诱导后表现了成骨细胞的形态学和生物学特性。     

补骨脂素介导Hedgehog信号通路促进骨髓MSC成骨分化作用研究

目的:观察补骨脂素不同剂量含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞Shh、Ptch1、Gli1 mRNA及蛋白表达的影响,探讨补肾中药防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法:采用SPF级SD雌性大鼠灌服高、中、低剂量补骨脂素配制对应用药组的含药血清5 d,取血清后,用各含药血清(补骨脂素高剂量组、补骨脂素中剂量组、补骨脂素低剂量组)对大鼠骨髓间充质干细胞进行干预6、9、12 d,以大鼠血清组为正常对照组,小牛血清组为空白对照组,成骨转化诱导液组作为阳性对照组。ELISA法检测第6、9、12天大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白含量; ELISA法及qRT-PCR法检测第9天大鼠骨髓间充质干细胞Shh、Ptch1、Gli1 mRNA及蛋白表达。结果:各用药组均能提高大鼠间充质干细胞ALP蛋白表达,第9天达到峰值。补骨脂素能够上调Shh、Gli1,下调Ptch1 mRNA及蛋白表达,其中补骨脂素中剂量组最显著。结论:补骨脂素含药血清能够促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,其作用机制可能与Hedgehog信号通路的活性有关。     

针刺配合推拿治疗痛经33例

痛经是指妇人在行经前后或月经期,出现周期性小腹疼痛或痛引腰骶、甚则剧痛难忍,或伴有手足厥冷、面色苍白、身冷汗出等证.在临床上笔者采用针刺配合推拿治疗本病33例,取得了较好的疗效,现总结如下:     

针药并用治疗痛风28例

痛风是一组嘌呤代谢紊乱所引起的疾病，因为嘌呤代谢的终末产物是尿酸，若尿酸生成增多或排泄减少，导致血液中尿酸浓度增加，引起高尿酸血症伴痛风性急性关节炎反复发作，过多的尿酸沉积可形成痛风石，并引起关节软骨的退行性病变，发展成为足母趾、跖趾关节僵肿畸形。近年来，由于人们生活水准不断提高，痛风的发病率逐年增多，笔者采用针药并用治疗痛风获得满意疗效，现报告如下。     

针药结合治疗冠心病心绞痛35例

冠心病心绞痛是心内科的常见病、多发病,临床多以心前区闷痛为主。笔者采用针药并用治疗冠心病心绞痛取得满意疗效,现报道如下。1临床资料1·1一般资料69例患者均为住院患者,其中男性36例,女性33例;年龄最小39岁,最大75岁;平均年龄61岁。将患者随机分为针刺加药物组35例,其中男     

针刺配合牵引治疗颈椎病120例

目的：寻找治疗颈椎病的有效方法。方法：将240例颈椎病患者按就诊时间随机分为2组，即针牵组采用针刺加牵引治疗；针刺组采用单纯的针刺治疗。结果：两组的总有效率分别为100％和77．6％，经统计学处理，针牵组疗效明显优于针刺组（P〈0．01）。结论：针刺配合牵引治疗颈椎病具有协同作用。     

针药结合治疗偏头痛临床疗效观察

偏头痛是临床常见的自觉症状，是一类有家族发病倾向的周期性发作疾病，发病率高，易于反复。临床主要表现为发作性偏侧搏动性头痛，伴恶心、呕吐、出汗等症状。近年来笔者依据裘昌林主任医师的临床经验采用针刺与中药结合治疗偏头痛6l例，取得颇好疗效，现报告如下。     

针刺中药并用治疗贫血45例

目的:观察针刺配合中药治疗贫血的疗效.方法:随机抽取单纯中药组,张针刺中药并用组各45例,进行疗效分析.结果:针药并用组临床显效率37.8%,总有效率93.4%,单用中药组显效率22.2%,总有效率68.9%,针药并用组总有效率明显优于单纯中药组(P＜0.05).结论:针刺中药并用治疗贫血,优于单纯中药治疗.     

针刺火罐综合疗法治疗少儿咳嗽100例

咳嗽是少儿肺部疾患中的一种常见证候，好发于春秋两季，由于少儿年龄小、体质弱，抵抗力比较低，易患外感咳嗽。笔者采用针刺火罐综合疗法治疗本病，取得了满意的治疗效果。现汇报如下。     

针刺配合推拿治疗乳癖42例

乳癖是指妇女乳房部常见的慢性良性肿块,以乳房肿块和胀痛为主症,常见于青壮年妇女,相当于现代医学"乳腺小叶增生".在临床上笔者采用针刺配合推拿疗法治疗本病42例,取得较好疗效,现报道如下.     

针刺联合牵引治疗颈椎病39例

目的:观察针刺穴位联合颈椎牵引治疗神经根型颈椎病的临床疗效。方法:选取2012年5月—2014年6月本院78例颈椎病患者为研究对象,随机分为对照组和观察组各39例。观察组患者采用针刺穴位联合颈椎牵引治疗,对照组患者采用常规针刺穴位治疗,10 d为1个疗程,两组患者均治疗3个疗程,观察治疗后两组患者临床疗效,治疗前后症状积分、血清TNF-α水平。结果:观察组有效率为94.87%,对照组有效率为82.05%,两组有效率比较有统计学差异(χ2=6.2158,P0.05);两组患者治疗后SF-MPQ评分、TNF-α水平均显著降低(P0.05),但组间比较无统计学意义(P0.05)。结论:针刺结合牵引治疗神经根型颈椎病疗效显著。     

脑神经生长素穴位注射治疗小儿智力低下46例

笔者于 1 994年开始采用脑神经生长素穴位注射治疗小儿智力低下 46例 ,取得了一定效果 ,现报道如下。1　一般资料　　本组收治的患儿均符合郭迪主编的《儿科基础与临床》中智力低下的诊断标准。 46例中男性2 7例 ,女性 1 9例 ,年龄最小 1岁 ,最大 1 3岁 ,其中 3岁以下者 1 0例 ,3～ 7岁 2 3例 ,7岁以上 1 3例。　　 1 0例检查脑电图 ,其中正常 4例 ,异常 6例 ,2例合并有痫性放电 ;5例检查ＣＹ ,正常 2例 ,异常 3例 ,均表现为脑容量不足 ;脑干听觉诱发电位检查 2 0例 ,正常 2例 ,可疑异常 3例 ,异常 1 5例。2　治疗方法　　主穴取哑门、风池…