喉癌组织中CHFR基因mRNA表达水平及启动子区甲基化的研究

目的:探讨CHFR基因表达水平及启动子区CpG岛过甲基化与喉癌发生发展的关系.方法:采用荧光定量PCR技术和甲基化特异性PCR技术检测50例喉癌组织(喉癌组)和15例正常喉组织(对照组)CHFR基因mRNA表达情况及启动子区CpG岛过甲基化情况.结果:①CHFR基因在对照组mRNA全部表达,在喉癌组mRNA有2例(4%)表达缺失,48例表达量明显下调(相对表达量为0.50±0.12),其中Ⅰ和Ⅱ期相对表达量(0.30±0.04),Ⅲ期和Ⅳ期相对表达量(0.70±0.21),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).②在对照组中未发现CHFR基因启动子区甲基化,在喉癌组中CHFR基因启动子区甲基化率为22%(11/50),其中Ⅰ期和Ⅱ期患者共10例,Ⅲ期1例,Ⅳ期未发现甲基化,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).③甲基化的喉癌标本mRNA相对表达量为0.11±0.05,2例mRNA表达缺失.未甲基化的喉癌标本mRNA相对表达量为0.75±0.13.甲基化和mRNA表达相关,γ=0.387(P<0.05).结论:喉癌组织中CHFR基因mRNA表达缺失或下调,CHFR基因启动子区CpG岛过甲基化在喉癌组织中是频发事件,二者密切相关,可能与喉癌的发生发展有关,有望能成为喉癌的早期诊断及治疗靶点基因之一.     

抑癌基因Runx3启动子甲基化与喉癌发生和转移的关系

目的:探讨 Runx3基因启动子甲基化与喉癌发生发展过程的关系.方法:采用RT-PCR检测40例喉癌组织及肿瘤周围黏膜组织中Runx3 mRNA 的表达,同时采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Runx3基因启动子甲基化情况.结果:40例喉癌组织标本中Runx3基因的表达(1.62±1.01)较肿瘤周围组织中表达(5.66±2.07)明显下调, 差异有统计学意义(P<0.01).正常黏膜组织中未发现有Runx3基因启动子的甲基化,40例喉癌组织中有38例检测到Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织Runx3基因启动子甲基化率显著增高(P<0.01).喉癌标本中Runx3 mRNA 的表达与其病理临床特征密切相关,在低分化和有淋巴结转移喉癌组织标本中Runx3 mRNA 的表达显著下调(P<0.01).结论:Runx3 基因启动子甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一并且与喉癌的发生、发展密切相关.     

CHFR基因在鼻咽癌中异常甲基化的研究

目的:检测鼻咽癌中CHFR基因的转录表达及其启动子区甲基化状态,探讨其在鼻咽癌中的转录失活机制及其意义;评价鼻咽拭子检测CHFR基因甲基化状态在鼻咽癌诊断和治疗中的意义。方法:RT-PCR检测鼻咽癌细胞株中CHFR基因的转录表达水平。甲基化特异性PCR检测鼻咽癌细胞株、鼻咽癌活检组织、正常鼻咽组织及配套的鼻咽拭子样本中CHFR基因的甲基化状态。亚硫酸氢盐测序分析鼻咽癌细胞株和鼻咽癌组织、正常鼻咽组织中CHFR基因启动子区的具体甲基化状态。5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)处理鼻咽癌细胞株后观察CHFR基因转录表达水平的改变情况。结果:CHFR基因在鼻咽癌细胞株中转录表达下调或沉默;CHFR基因在鼻咽癌细胞株和鼻咽癌组织中均呈高频率、肿瘤特异性的甲基化。鼻咽癌患者鼻咽癌组织和配套鼻咽拭子样本中CHFR基因的甲基化频率分别为65.5%和63.8%,两者符合率达86.2%。鼻咽癌组织和细胞株中CHFR基因启动子区大部分的CpG位点为甲基化,而正常组织全为非甲基化;5-aza-dC可显著恢复鼻咽癌细胞株中CHFR基因的转录表达。结论:鼻咽癌中CHFR基因由于启动子区CpG岛的DNA甲基化而转录表达下调。鼻咽...     

鼻咽上皮细胞癌变与DNA甲基化特征的相关性研究

目的探讨鼻咽上皮细胞癌变前后DNA甲基化特征。方法 6例鼻咽癌患者作为研究对象(包括鼻咽癌变前后自身对照标本3例),5例鼻咽炎患者作为对照,获取鼻咽组织标本,常规抽提DNA,染色质免疫共沉淀联合芯片技术检测全基因组DNA甲基化状况。结果鼻咽上皮细胞癌变后,CpG岛及启动子区基因发生明显甲基化。癌变组织CpG岛甲基化峰为3258±358个,鼻咽炎组织CpG岛甲基化峰为1974±710个,t=22.32,P<0.001;癌变组织启动子区甲基化基因为1307±484个,鼻咽炎组织启动子区甲基化基因为758±363个,t=6.6,P<0.01。这些甲基化基因涉及抑癌基因、细胞信号传导通路、细胞代谢活性等多个途径。结论 DNA甲基化参与了鼻咽上皮细胞癌变过程。     

喉癌组织RKIP基因甲基化表达调控研究

摘要：目的检测喉癌组织中Raf 1激酶抑制蛋白（ Raf 1 kinase inhibitor protein, RKIP ）基因启动子区域的甲基化状态及其蛋白表达情况,并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP ）技术及免疫组化方法检测53例喉癌组织及34例癌旁组织中RKIP基因启动子区域的甲基化状态及蛋白表达情况。结果喉癌及癌旁组织中RKIP基因启动子甲基化发生率分别为17%、3%,两者比较差异具有统计学意义（P=0.045）。结论RKIP基因启动子区高甲基化状态可能是造成喉癌组织中RKIP表达缺失的分子机制之一,RKIP蛋白表达缺失与喉癌的发生发展及转移有关。     

声门上型喉癌组织中的BRMS1蛋白表达及甲基化的研究

目的:探讨声门上型喉鳞状细胞癌组织中乳腺癌转移抑制基因(BRMS1)的蛋白表达以及BRMS1基因启动子区域甲基化情况及其临床意义。方法:采用Western blotting法检测70例声门上型喉癌组织原发灶、60例癌旁正常喉黏膜组织和44例颈部淋巴结转移灶中BRMS1蛋白的表达情况;甲基化特异聚合酶链反应(MSP)法检测上述组织中的BRMS1基因启动子区域甲基化情况,探讨BRMS1基因启动子甲基化与其基因表达的相关性;分析BRMS1蛋白表达及BRMS1基因启动子甲基化情况与患者的临床分期、病理分级、颈部淋巴结转移等方面的相关分析。结果:Western blotting检测发现声门上型喉癌原发灶、癌旁正常喉黏膜组织和颈部淋巴结转移灶均有BRMS1蛋白表达,在癌组织及转移淋巴结中BRMS1蛋白表达下调(P<0.05)。MSP法检测发现BRMS1基因启动子区甲基化,在BRMS1蛋白低表达患者的原发灶中检测到34例BRMS1基因启动子区甲基化,44例BRMS1蛋白低表达的颈部淋巴结转移灶中检测到32例BRMS1基因启动子区甲基化,60例癌旁正常喉黏膜组织中均未检测到BRMS1基因启动子区甲基化,统计学分析结果表明在声门上型喉癌中BRMS1基因启动子甲基化与其基因表达下调密切相关(rs=0.66,P<0.05)。结论:声门上型喉癌组织中BRMS1蛋白表达下调。BRMS1蛋白表达下调与声门上型喉癌的P-TNM分期、病理分化程度和颈部淋巴结转移密切相关。BRMS1基因启动子甲基化与声门上型喉癌组织中BRMS1基因表达下调相关,也可能是声门上型喉癌组织中BRMS1基因表达下调的原因之一。     

喉癌组织中IGFBP-rP1基因的甲基化及表达

目的：探讨喉癌中胰岛素样生长因子结合蛋白一相关蛋白1（IGFBP—rP1）基因启动子区甲基化与蛋白表达之间的关系。方法：采用甲基化特异性PCR方法和免疫组织化学的方法分别检测45例喉癌组织及18例癌旁组织中IGFBP-rP1基因的甲基化状态和蛋白表达情况。结果：喉癌组织IGFBP—rP1启动子区甲基化率为33．3％（15／45）,相应癌旁组织甲基化率为5．6％（1／18）,喉癌组织中IGFBP—rP1基因甲基化率明显高于癌旁组织（P〈0．05）。喉癌组织中IGFBP—rP1蛋白表达显著低于癌旁正常组织（P％0．05）,且与其启动子区甲基化状态呈负相关。结论：IGFBP—rP1基因启动子区甲基化导致基因沉默可能是喉癌发生的机制之一。     

蛋白酪氨酸磷酸酶基因启动子过甲基化与喉癌的关系

目的：探讨蛋白酪氨酸磷酸酶（PTEN）基因启动子过甲基化与喉癌的关系。方法：采用过甲基化特异性PCR和RT-PCR法分析喉癌（喉癌组）及正常喉组织（对照组）PTEN基因启动子过甲基化及其mRNA表达情况。结果：喉癌组有16例（40．0％）PTEN基因启动子过甲基化;对照组未发现过甲基化。对照组PTEN基因mRNA的高、中、低表达率及阴性率分别为77．8％（7／9）、22．2％（2／9）、0和0,淋巴结转移组分别为26．7％（4／15）、33．3％（5／15）、26．7％（4／15）和13．3％（2／15）,两组比较,PTEN mRNA表达差异有统计学意义（P〈0．05）。病理高分化PTEN基因mRNA高、中、低表达率及阴性率分别为60．0％（6／10）、30．0％（3／10）、10．0％（1／10）和0,病理低分化mRNA分别为16．7％（2／12）、25．0％（3／12）、41．7％（5／12）和16．7％（2／12）,两者比较,其mRNA表达差异有统计学意义（P〈O．05）。PTEN基因在喉癌组织中,mRNA呈现低表达的10例中有7例（70．0％）出现启动子过甲基化,mRNA呈现高表达的17例中仅有4例（23．5％）出现启动子过甲基化;PTEN基因mRNA高表达与低表达在启动子过甲基化率的差异有统计学意义（P〈O．05）。结论：PTEN基因启动子过甲基化是该基因在喉癌中失活的原因之一,PTEN基因表达下降与喉癌淋巴结转移及病理低分化有关。     

5-Aza-dC和TSA对人喉癌细胞系中CHFR基因启动子甲基化及mRNA表达水平的影响

目的:探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和制霉菌素A(TSA)对人喉癌细胞系中CHFR基因启动子区甲基化与mRNA表达水平的影响。方法:采用荧光定量PCR技术和甲基化特异性PCR技术检测5-Aza-dC和TSA处理前后的Hep-2人喉癌细胞系基因CHFR启动子区甲基化与mRNA表达水平的变化。结果:在对照组Hep-2人喉癌细胞系中CHFR基因启动子区显示DNA甲基化,用5-Aza-dC作用后DNA甲基化程度明显减弱,mRNA表达量上调(1.75±0.21);用TSA作用后DNA甲基化程度和mRNA表达量(1.05±0.13)无明显变化。联合使用5-Aza-dC和TSA后DNA甲基化程度明显减弱,mRNA表达量明显上调(2.15±0.18)。结论:CHFR基因启动子区DNA甲基化在喉癌的发生、发展中是一个频发事件,是导致其mRNA表达下调的主要原因,5-Aza-dC单独应用和联合TSA能够逆转DNA甲基化状态,从而调控其基因表达,为临床使用药物治疗喉癌提供了新思路。     

RASSF2A基因甲基化在喉癌组织中的表达及意义

目的 探讨抑癌基因RASSF2A表达水平及其基因异常甲基化与喉癌的关系及意义。 方法 采用RT-PCR及甲基化特异性PCR(MSP)检测50例喉癌组织(实验组)和10例癌旁正常黏膜组织(对照组)中RASSF2A基因mRNA的表达水平及其启动子甲基化状态。 结果 喉癌组织中有54%(27/50)存在RASSF2A基因启动子,而对照组正常黏膜组织中未发现RASSF2A基因甲基化现象,差异有统计学意义(χ2=9.818, P=0.002)。RASSF2A甲基化水平程度与喉癌患者临床病理特征无明显相关性。喉癌组织中RASSF2A基因mRNA的表达水平明显低于正常黏膜组织(χ2=9.818, P=0.002)。RASSF2A基因甲基化的喉癌组织中其mRNA的表达减少,反之亦然。 结论 喉癌组织中RASSF2A基因CpG岛甲基化与其基因表达缺失有关,可能参与了喉癌的发生发展过程。     

颗粒物PM10和CD4+T淋巴细胞IL-4 DNA甲基化在儿童变应性鼻炎发病机制中的研究

目的　探讨大气污染PM10对变应性鼻炎儿童CD4+T淋巴细胞IL-4基因启动子区域甲基化的表观遗传调控及相关转录水平表达的影响。方法　选择2012年上海儿童医学中心耳鼻咽喉科就诊的35例6～12岁变应性鼻炎患儿随访1年,收集血样及设立匹配对照组（30例）,进行IL-4基因启动子区域甲基化克隆测序及mRNA表达水平检测。评估PM2.5和PM10的个人综合暴露。结果　变应性鼻炎组CD4+T淋巴细胞中IL-4基因启动子区域平均甲基化程度低于对照组（P =0.038）;其中-48、+54甲基化程度有差异（P =0.041、0.032）;变应性鼻炎组IL-4转录水平升高（P =0.039）,与其平均DNA甲基化水平呈负相关（r =-0.452,P =0.032）。转录水平与对照组无显著性差异。校正后,变应性鼻炎儿童PM10暴露与其IL-4基因启动子区域甲基化程度呈负相关（r 2=0.419,β=-0.470,SD =0.781,P =0.045）。结论　变应性鼻炎儿童IL-4基因启动子区域低甲基化水平可能受到PM10影响。     

Overexpression of cyclooxygenase-2 in nasopharyngeal carcinoma and association with epidermal growth factor receptor expression

OBJECTIVES: To examine the association between cyclooxygenase-2 (COX-2) expression with epidermal growth factor receptor (EGFR), vascular endothelial growth factor (VEGF), inducible nitric oxide synthase (iNOS), and latent membrane protein 1 (LMP-1) expression and with COX-2 promoter methylation status in primary nasopharyngeal cancer (NPC) tumors and to determine COX-2 promoter methylation status in NPC cell lines. DESIGN: Retrospective study. SETTING: Patients with NPC were referred to the Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery for treatment. PATIENTS: Formalin-fixed, paraffin-embedded NPC specimens from 42 patients were obtained. INTERVENTIONS: Immunohistochemical expression of COX-2, EGFR, VEGF, iNOS, and LMP-1 was performed in 42 NPC samples. COX-2 promoter methylation status was studied in 20 separate specimens and in 4 NPC cell lines. MAIN OUTCOME MEASURES: (1) COX-2, EGFR, VEGF, iNOS, and LMP-1 expression; and (2) COX-2 promotor methylation status. RESULTS: COX-2 was overexpressed in 79% of NPC specimens and was associated with EGFR status (P = .03) but not with LMP-1 or iNOS. In primary NPC tissue, methylation of the COX-2 promoter was seen in 4 of 7 COX-2-negative and 1 of 13 COX-2-positive immunohistochemical cases. COX-2 promoter methylation was found in the CNE-1 cell line. CONCLUSIONS: Nasopharyngeal cancer may be a useful target for selective COX-2 inhibition. The absence of promoter methylation may be a necessary component of COX-2 overexpression, and promoter methylation may be one of the mechanisms that regulate COX-2 expression.     

EGFL7在人脑胶质瘤中的表达及其与微血管密度的关系

目的探讨EGFL7基因在人脑胶质瘤组织中的表达及与肿瘤微血管密度（MVD）的关系。方法收集4 5例人脑胶质瘤石蜡标本,其中低度恶性（Ⅰ～Ⅱ级）2 4例,高度恶性（Ⅲ～Ⅳ级）2 1例,应用免疫组织化学检测EGFL7蛋白的表达情况,应用八因子免疫组化标记肿瘤微血管。分析EGFL7蛋白表达与胶质瘤病理分级及MVD的关系。结果EGFL7在人脑胶质瘤中存在表达,EGFL7蛋白表达主要位于肿瘤细胞及血管内皮细胞的胞浆。其表达与肿瘤的恶性程度（t=4.3 9 9,P＆lt;0.0 1）及MVD（r=0.6 8 4,P＆lt;0.0 1）有明显的相关性;EGFL7在正常人脑组织中无表达。结论人脑胶质瘤存在EGFL7基因的表达,并且与肿瘤恶性程度及MVD具有明显相关性,提示EGFL7在人脑胶质瘤的血管生成中可能发挥重要作用。     

喉鳞状细胞癌中脆性组氨酸三联体基因启动子甲基化及其蛋白的表达

目的：探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因启动子甲基化状态及与FHIT蛋白表达的关系。方法：采用PCR-based酶切甲基化及免疫组织化学SP技术,检测41例LSCC及其相对应的喉正常粘膜(NSE)中FHIT基因启动子甲基化状态及其蛋白表达。结果：在NSE组中,无一例出现FHIT基因启动子甲基化,而在LSCC组中,有24．4％(10／41)出现甲基化,且甲基化状态与病理分级及淋巴结转移有关(P＜O．01);NSE组及LSCC组FHIT蛋白阳性率分别为100．0％(41／41)和46．3％(19／41),且与肿瘤TNM分期及淋巴结转移有关(P＜O．05);FHIT基因启动子甲基化与蛋白阳性表达有明显的相关性(P＜O．01)。结论：FHIT基因启动子甲基化是其基因失活的重要机制之一,在LSCC的发生、发展中起重要作用。     

基质金属蛋白酶11在喉癌中的表达

目的:检测喉癌中基质金属蛋白酶11(MMP11)的表达,探讨MMP11的表达与喉癌浸润和转移的关系.方法:采用免疫组织化学法检测63例喉癌组织和相应的癌旁正常组织MMP11蛋白的表达,运用RT-PCR技术检测22例喉癌和相应的癌旁正常组织冻存标本中MMP11 mRNA水平的表达.结果:采用免疫组织化学法检测喉癌和癌旁正常组织MMP11的表达,癌组织MMP11的表达阳性率明显高于癌旁正常组织(P＜0.01).运用RT-PCR方法检测喉癌和癌旁正常组织MMP11 mRNA的表达,癌组织MMP11 mRNA的表达阳性率明显高于癌旁正常组织(P＜0.01).MMP11蛋白表达在T3 T4组高于T1 T2组(P＜0.01),淋巴结转移组高于非淋巴结转移组(P＜0.05).MMP11 mRNA表达在T3 T4组高于T1 T2组(P＜0.05),淋巴结转移组高于非淋巴结转移组(P＜0.05).MMP11蛋白及MMP11 mRNA的表达与肿瘤原发部位和分化程度无明显相关性(P＞0.05).结论:MMP11的表达与喉癌浸润和转移密切相关,可作为预测喉癌浸润和转移潜能的参考指标之一.