拓扑异构酶I抑制剂对K562细胞的杀伤与诱导凋亡作用

背景与目的:近年发现,拓扑异构酶Ⅰ抑制剂对加速期或急变期的慢性髓细胞白血病有较好疗效。为了深入理解拓扑异构酶Ⅰ抑制剂这一新的药理作用,本研究采用具有慢性髓细胞白血病特征性异常染色体犤t(9;22)犦的K562细胞株为实验对象,进一步探讨拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康(topotecan)对靶细胞的杀伤与诱导凋亡活性。方法:采用MTT法测定拓扑替康对K562细胞的杀伤作用;通过形态学与AnnexinVFITC染色,研究拓扑替康对靶细胞的促凋亡活性;采用caspase-8特异性抑制剂IETD-fmk,分析拓扑替康介导的细胞杀伤或凋亡和caspase活化的关系。结果:经0.15μmol/L拓扑替康处理至12、24、48及72h时,K562细胞的存活率与对照相比,逐渐降至(92±36)%犤P>0.05vs(94±27)%犦、(68±21)%犤P<0.05vs(119±13)%犦、(54±15)%犤P<0.05vs(132±31)%犦及(21±10)%犤P<0.01vs(114±19)%犦;同时,靶细胞出现磷脂酰丝氨酸外翻、细胞固缩、染色质边集、核碎裂,最终解离为大量凋亡小体;经caspase-8抑制剂与拓扑替康联合处理至24、48h时,K562细胞的存活率依然维持在(95±29)%与(87±11)%,后者显著高于单用拓扑替康者犤P<0.05vs(54±15)%犦,且无明确的凋亡小体形成。结论:拓扑异构酶Ⅰ抑制剂拓扑替康对K562细胞具有较强的杀伤活性与诱导凋亡作用     

青蒿素诱导K562细胞凋亡研究

[目的]研究青蒿素对体外培养的K562细胞的凋亡诱导作用及机制。[方法]MTT法测定药物对K562细胞生长的抑制作用；透射电镜观察药物对K562细胞形态学的影响；流式细胞仪检测经药物作用后的细胞凋亡率；用Rhodamine(Rhl23)染色法检测细胞线粒体跨膜电位(Δψm)的变化。[结果]青蒿素对K562细胞生长有明显的抑制作用，细胞经药物作用48小时后的IC50为26．51μmol／L；电镜观察细胞有典型的凋亡形态特征；细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度正相关。给药后跨膜电位明显下降。[结论]青蒿素可抑制K562细胞的生长，诱导K562细胞跨膜电位下降而导致细胞凋亡。     

微波和足叶乙甙诱导K562细胞的凋亡

目的：探讨微波和足叶乙甙体外诱导Ｋ５６２细胞凋亡和可能性及其机制。方法：将微波和足叶乙甙分别单位以及联合作用于正常骨髓细胞和Ｋ５６２细胞株,通过细胞凋亡率和ｂｃｌ－２和ｐ２１＾ｒａｓ蛋白阳性率的测定来评价细胞凋亡的程度并研究其机制。结果：微波和足叶乙甙各自都能诱导正常骨髓细胞和Ｋ５６２细胞的少量凋亡,两者联合作用所诱导的细胞凋亡率较之于足叶乙甙有显著性增加（Ｐ〈０．０５）,其中Ｋ５６２细胞凋亡率的     

肝素干预长春新碱诱导的K562细胞凋亡

目的探讨肝素对长春新碱诱导的K562细胞凋亡及增生的影响。方法肝素预处理K562细胞1h,再经长春新碱（0．05mg／L）处理24h,应用Hoechst33342染色、DNA电泳、FMC等方法检测细胞凋亡。Trypanblue染色及MTr法检测细胞毒性及增生反应。结果Hoechst33342荧光染色见长春新碱凋亡诱导组细胞凋亡率达40．10％,肝素25、50、100、200U／ml组凋亡率依次为32．47％、29．70％、25．50％、19．53％（均P〈0．05）。随肝素浓度增加DNA电泳凋亡梯带亮度逐渐减弱至消失。FACS检测凋亡诱导组凋亡率为21．61％,肝素25～200U／ml组凋亡率依次为13．64％、11．75％、8．59％、6．03％（均P〈0．05）。肝素各组处理K562细胞24h后细胞存活率、活细胞总数及细胞增生水平与正常对照组比较差异均有统计学意义（P〉0．05）。结论肝素浓度在200U／ml内对K562细胞无毒性作用及增生影响,在25～200U／ml以浓度依赖性方式抑制由长春新碱诱导的K562细胞凋亡。     

紫草素诱导人白血病细胞K562的凋亡

目的: 研究紫草素对人白血病细胞株K562增殖抑制和诱导凋亡作用.方法: 四氮甲唑蓝(MTT)观察细胞的生长状况,应用彗星分析法、TUNEL技术和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果: 紫草素在(1-9)×10-5mol/L浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,9 X 10-5mol/L紫草素作用72h的K562细胞株A值最低;彗星分析法显示经紫草素作用的K562细胞出现长的彗尾条带;原位细胞凋亡可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块;流式细胞仪检测细胞凋亡主要发生在G1/S期.结论: 紫草素在体外一定浓度范围内能抑制K562细胞增殖,诱导凋亡.     

N-磷酰化二肽甲酯诱导K562细胞凋亡

背景与目的：磷被认为是生命代谢过程中的中心元素,许多N-磷酰化氨基酸和N-磷酰化肽具有重要的生物活性和药用价值。本实验研究N-磷酰化二肽甲酯诱导人慢性髓性白血病K562细胞凋亡作用。方法：采用四甲基偶氮唑盐还原法[3-（4,5-dimethylthiazo-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]检测15种N-磷酰化二肽甲酯对K562细胞的增殖抑制作用;用Hoeches33258染色后观察细胞核的形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳,双染法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果：MTT法筛选出细胞增殖抑制活性较好的化合物是（DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3,IC50为22.66μmol/L;Hoechst33258染色后细胞核出现明显的凋亡形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的梯状条带;流式细胞仪检测到早期的凋亡细胞。结论：（DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3能够诱导K562细胞凋亡。     

反义ras基因增强足叶乙甙对白血病K562细胞的诱导凋亡作用

目的 研究ras p21蛋白在bcr-abl p210蛋白抗凋亡信号传导通路中的作用。方法 应用逆转录病毒载体pLXSN将反义N－ras1 cDNA转导到K562细胞系中后，通过足叶乙甙对细胞进行诱导凋亡。结果 转导反义N－ras1 cDNA的K562细胞内N－ras p21表达下降。反义N－ras转民细胞较对照细胞K562易发生凋亡，对药物的敏感性显著增高。结论 ras p21蛋白是bcr-abl p210蛋白介导抗凋亡信号的重要的下游蛋白，阻断该蛋白的功能有可能成为治疗人类慢性髓性白血病的1个选择点。     

bcl—xL在姜黄素诱导K562细胞凋亡中的作用及机制

目的:探讨bcl-xL基因在姜黄素诱导K562细胞凋亡过程前后的表达情况及其作用机制.方法:不同浓度的姜黄素作用于K562细胞,MTT检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot分析姜黄素作用前后胃癌细胞中bcl-xL的表达.结果:姜黄素能显著抑制体外培养的K562细胞生长并呈量效和时效关系.流式细胞术检测到亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡率增加.RT-PCR和Western blot结果提示经姜黄素作用后,bcl-xL表达下降.结论:姜黄素能抑制K562细胞的生长并促进其凋亡,其发生与bcl-xL有关.     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的了解三氧化二砷(As2O3)诱导慢粒细胞系K562细胞株凋亡是否与线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potentials,△ψm)改变有关及其可能机制。方法联合应用As2O3、DTT和BSO处理K562细胞株,通过细胞内荧光染料PI/Rh123的色强度分析(△ψm),测定细胞活力、亚G1期细胞含量及形态学观察等鉴定细胞凋亡。结果As2O3可明显诱导K562细胞线粒体△ψm下降。BSO可加强As2O3诱导的K562细胞凋亡和线粒体△ψm下降,而DTT则有部分拮抗作用。在2×10-6mol/L As2O3处理72h的K562细胞,PI-Rh123-细胞达(26.0±2.5)%,当1×10-3mol/LBSO同时处理时,PI-Rh123-细胞和凋亡细胞数上升达(37.2±5.7)%和(39.1±4.5)%;而当2×10-4mol/L DTT同时处理时,PI-Rh123-细胞和凋亡细胞数分别降至(11.5±1.3)%和(15.4±3.5)%。结论线粒体跨膜电位下降是As2O3诱导K562细胞凋亡的关键环节,其机制可能与巯基氧化有关,巯基可能是As2O3凋亡细胞的重要靶分子。     

超声体外诱导白血病细胞K562凋亡的研究

 目的 研究超声对诱导白血病细胞K562凋亡的作用,为超声治疗的临床应用提供实验依据。方法 以人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562为研究对象,用频率为1.8 MHz的超声波辐照白血病细胞K562,用光学显微镜观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 超声辐照K562细胞后24 h,8 mV×5 min组及8 mV×10 min组细胞凋亡率分别为2.3 %和8.28 %;10 mV×5 min及10 mV×10 min组细胞凋亡率分别为9.36 %和21.46 %。电压为7mV时,超声辐照K562细胞后0.5 h,1 h,3 h,5 h细胞凋亡率分别为1.9 %,3.6 %,5.7 %,7.7 %。同时光学显微镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变。结论 超声可以诱导白血病K562细胞凋亡。     

银环蛇毒素对白血病K562细胞株凋亡诱导作用的研究

目的 探讨银环蛇毒素及其若干组分在体外对白血病K562细胞株的凋亡诱导作用。方法 采用阳离子交换层析法分离纯化银环蛇粗毒，应用MTT法、荧光显微镜和流式细胞术等研究毒素对K562细胞株的凋亡作用。结果 除Ⅳ峰毒素外，银环蛇粗毒及分离的部分组分IV峰、Ⅶ峰和Ⅷ峰等毒素的荧光显微图末见特征性的凋亡小体，DNA含量分布组方图中的二倍体峰前末见Gl细胞群。结论 银环蛇毒对K562细胞具有杀伤作用，但并非是细胞凋亡作用，而是致细胞坏死，而粗毒中的某些组分可能具有促K562细胞凋亡作用。     

榄香烯诱导K562细胞凋亡的流式细胞术分析

应用流式细胞分析技术检测了榄香烯作用前后人白血病Ｋ５６２细胞凋亡峰的出现，细胞凋亡百分率、癌基因ｂｃｌ－２蛋白的表达等指标。     

链式CIK细胞对白血病K562细胞的体外杀伤活性

目的： 研究细胞因子诱导的体外细胞经过链式激活后获得的链式CIK细胞对白血病K562细胞的杀伤效应。 方法: 采用血细胞单采机从外周血分离单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）,经过细胞因子诱导、扩增、培养得到链式CIK细胞,以CIK细胞作对照,检测链式CIK细胞的增殖能力, LDH释放法测定其对K562细胞的杀伤活性。 结果: 链式CIK细胞组在培养第5、第14天的细胞数低于CIK细胞组（P<0.01）;链式CIK细胞对K562细胞的杀伤活性在效靶比40 ∶1和20 ∶1时分别为（56.1±2.24）%、（34.4±3.56）%,均低于CIK细胞（均P<0.01）。 结论: 链式CIK细胞是一种培养周期短、对白血病K562杀伤活性较弱的免疫细胞。     

中药苏木提取物诱导K562细胞凋亡的研究

目的：探讨中药苏木提取诱导人类慢性髓性白细胞病K562细胞的凋亡作用。方法：采用MTT法检测苏木提取物对K562细胞增殖抑作用。荧光显微镜观察细胞形态变化,库尔特全自动颗粒粒度分析药物引起K562细胞体积大小的分布变化,琼脂糖凝胶是电泳测定DNAladder及流式细胞术检测细胞周期变化,结果：25μg/ml苏木浸膏能明显诱导K562细胞凋亡,产生凋亡细胞所具有的典型形态学及生化学特征,同时对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用呈一定的浓度依赖性,结论：中药苏木提取物能诱导细胞凋亡,抑制癌细胞增殖呈一定的浓度依赖关系。     

白藜芦醇对MG132诱导K562细胞凋亡影响的研究

目的:研究白藜芦醇能否增加K562细胞对MG132的敏感性.方法:MG132单独及联合白藜芦醇作用于K562细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测PARP剪切水平.结果:＞50 μmol/L白藜芦醇能够有效地抑制K562细胞的活力,P＜0.01;MG132单独处理K562细胞24 h,对细胞活力的抑制呈剂量依赖性,P＜0.01;而联合用药时,白藜芦醇呈剂量依赖性的对抗了MG132对K562细胞的毒性,并且5μmol/L白藜芦醇有效的降低了K562细胞凋亡率,P＜0.05.结论:白藜芦醇具有对抗MG132诱导细胞毒性的潜在作用.     

他莫昔芬诱导K562细胞凋亡的实验研究

 目的 观察他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增生抑制及诱导凋亡作用。方法 在体外设定的浓度梯度和作用时间下用他莫昔芬处理K562细胞,采用锥虫蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率,Wright-Giemsa染色光镜观察细胞形态、琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯带（DNA,ladder）、流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果 他莫昔芬能够抑制K562细胞增生;1 ~ 5μmol／L他莫昔芬可诱导K562他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞。结论 他莫昔芬可抑制K562细胞生长,诱导其凋亡。     

Hsp90抑制剂新生霉素诱导K562细胞凋亡的机制

目的研究Hsp90抑制剂新生霉素（novobiocin,NB）诱导K562细胞凋亡的作用,探讨该作用与线粒体凋亡途径的关系,并进一步研究NB对Hsp90客户蛋白（client protein）AKT和ERK功能的影响。方法细胞用NB处理后,采用AO／EB双染后检测细胞凋亡,分光光度法检测Caspase-9和Caspase-3的活性,用蛋白免疫印迹法检测细胞色素C的含量,以及procaspase-3、p-AKT和p-ERK的蛋白水平。结果NB能显著抑制K562细胞增殖,IC50是0．4353mM;NB能促进细胞色素C释放入胞浆,激活caspase-3／9的活性,触发K562细胞凋亡;NB能抑制AKT和ERK的功能,使细胞内p-AKT和p-ERK的蛋白含量减少。结论NB可通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡,还可干扰Hsp90伴侣功能阻断增殖信号通路,抑制K562细胞生长。     

苦参碱对K562及其多药耐药细胞K562/vin、K562/dox的诱导凋亡作用

目的　明确中药苦参碱对化疗敏感和耐药细胞的诱导凋亡作用。方法　采用MTT法测定苦参碱对各细胞的IC5 0值。K 5 6 2、K 5 6 2 /vin、K 5 6 2 /dox细胞与适宜浓度苦参碱共同孵育于 16 40培养液中 ,一定时间后对细胞行Wright′s Giemsa染色 ,做形态学观察 ,同时行DNA凝胶电泳、流式细胞仪DNA含量分析以检测凋亡。结果　细胞形态学观察可见 0 .2 5～ 1.0 0mg/ml浓度苦参碱作用后的细胞体积缩小、核固缩深染、细胞质空泡化、核碎裂等 ;DNA电泳可见阶梯状条带 ;流式细胞仪检测可见有低G1期细胞出现 ,并S期细胞比例增高。在试验范围内凋亡比率与药物浓度呈一定相关。苦参碱对敏感和耐药细胞的诱导凋亡作用无明显差异。结论　苦参碱可诱导K 5 6 2细胞凋亡 ,对其多药耐药细胞K 5 6 2 /vin、K 5 6 2 /dox亦有诱导凋亡作用 ,其作用与药物浓度呈一定相关性。苦参碱诱导肿瘤细胞凋亡可能与其S期阻滞有关。