多种免疫抑制剂对肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中MMP-9的表达影响

目的探讨免疫抑制剂霉酚酸酯、来氟米特和他克莫司对肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中基质金属蛋白酶-9表达的影响。方法制备肾毒血清性肾炎大鼠模型,并随机分为病理对照组、霉酚酸酯治疗组、来氟米特治疗组和他克莫司治疗组,每组各10只。各治疗组均给予相应药物灌胃给药每天1次,2周后观察血清总蛋白(Tp)、白蛋白(Alb)、血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平。应用免疫组织化学观察肾组织中基质金属蛋白酶-9的表达。结果基质金属蛋白酶-9在病理对照组肾小球和肾小管中的表达均较正常对照组增高(P<0.01);与病理对照组比较,霉酚酸酯、来氟米特和他克莫司治疗后可使其表达减少(P<0.01),且来氟米特治疗组较其它两用药组下降明显(P<0.05)。各治疗组与病理对照组比较Tp、Alb增加(P<0.01),Scr、BUN降低(P<0.01)。结论霉酚酸酯、来氟米特和他克莫司治疗均能减少肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中基质金属蛋白酶-9的表达,改善肾功能,其中来氟米特效果最理想。     

FK506对糖尿病大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响

目的 探讨FK506对糖尿病大鼠肾小管-间质保护作用及可能的机制.方法 应用链脲佐菌素腹腔一次性注射诱导大鼠糖尿病模型,随机分为对照组、模型组、FKS06(0.5、1.0 mg/kg)组.4周后观察大鼠肾重/体重与尿白蛋白排泄率(AER)的变化,并行.肾小管一间质病理形态学分析.应用免疫组化和Westem印迹方法检测骨桥蛋白(Os-teopontin,OPN)及NF-кB p65的表达.结果 FK506 1.0mg/kg给药组大鼠相对肾重明显低于模型组(P<0.05),FK506 0.5与1.0 mg/kg给药组大鼠AER水平明显低于模型组(P<0.05,0.01).FK506 1.0 mg/ks给药组肾小管-间质损伤指数明显低于模型组(P<0.01).免疫组化显示模型组肾小管-间质OPN表达阳性面积明显高于对照组(P<0.01),FK506 0.5 mg/kg与1.0 mg/kg给药组肾小管OPN表达阳性面积明显低于模型组(P<0.01).Western印迹显示模型组肾组织NF-кB蛋白表达较对照组增加6.19倍,FK506 0.5与1.0 mg/kg给药4周分别使肾组织OPN蛋白表达下降25.4%与47.4%.结论 FK506对糖尿病肾小管-间质损伤有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾小管-间质的OPN有关.     

肾毒血清肾炎大鼠肾组织中NF-κB活化及其意义

目的：探讨肾毒血清性肾炎大鼠肾组织核因子—κB(NF—κB)活化及其意义。方法：肾毒血清肾炎应用兔抗鼠肾小球基膜肾毒血清制备。应用凝胶电泳迁移率(EMSA)和Western blot检测。肾毒血清。肾炎大鼠。肾组织中NF-κB活化及IκBα和IκBβ的降解；采用核酸酶保护法检测肾组织中IL-8表达，并分析其与NF—κB活化的关系。结果：模型组肾组织中IL-8表达显著高于正常对照组；肾毒血清肾炎大鼠肾组织中NF—κB活化显著增强，p65由胞质转移至咆核．咆质内IκBα和IκBβ降解明显增加；NF-κB活化与IL-8表达呈显著正相关。结论：NF—κB／IκB信号通路介导小球肾炎肾组织中IL-8表达。     

PDTC对TGF-β_1诱导的大鼠纤维化肺成纤维细胞转分化的影响

目的:通过核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)探讨NF-κB对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞转分化的影响。方法:采用体外细胞培养,免疫细胞化学技术,流式细胞术等技术,检测PDTC对TGF-β1诱导的成纤维细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响。结果:TGF-β1诱导肺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞(MF),表达α-SMA增强(P<0.05),PDTC抑制了TGF-β1的诱导作用(P<0.05),单独应用PDTC对肺成纤维细胞转分化无影响。结论:NF-κB促进TGF-β1诱导肺纤维化模型中肺成纤维细胞转分化成MF。     

大鼠慢性血清病肾炎模型的改进研究

目的 研究提高慢性血清病肾炎模型动物的发病率、降低其制作难度的方法。方法36只Wistar雌性大鼠分为正常对照组、改进造模组、传统造模组3组，每组12只。改进组造模方法为：切除左侧肾脏；3mg牛血清白蛋白(BSA)与佐剂混匀双后足垫注射，然后每隔2周重复皮下多点注射一次；足垫注射BSA后2周开始隔日饮饲含0．1％BSA的6mmol／L．盐酸酸化水；BSA免疫注射3次后测血清抗BSA抗体滴度；达到l：16后开始每日腹腔注射3mg的BSA；3周后，腹腔注射100μg的PS一次；4周后宰杀大鼠。传统造模组按文献方法不做肾切、不饲BSA酸化水、不注射LPS，其中每日腹腔注射BSA改为每日尾静脉注射，其他处理同改进造模组。检测指标有一般情况、肾重指数、肾炎发生率、蛋白尿情况、血生化、病理改变、免疫荧光改变等。结果与对照组比较，两造模组大鼠均出现大量蛋白尿、血白蛋白降低及高脂血症、肾功能降低，病理显示系膜细胞增生、炎细胞浸润、大量蛋白管型等，免疫荧光显示lgG、C3肾小球内沉积等变化。而改进造模组比传统造模组肾炎发生率高，改变更为严重。结论通过切除大鼠一侧肾脏、饮饲BSA酸化水、腹腔注射LPS、改尾静脉注射BSA为腹腔注射等措施，可以降低慢性血清病肾炎模型的制作难度、提高其肾炎发病率。     

姜黄素对大鼠肾毒血清肾炎肾组织细胞外基质积聚的影响

目的:观察姜黄素是否抑制肾炎大鼠肾组织Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白(fibronectin, FN)的积聚而对肾脏起保护作用.方法:72只雄性SD大鼠随机分成3组,每组24只.对照组尾静脉及腹腔注射生理盐水作对照;模型组尾静脉注射肾毒血清0.5 ml/d,连用2 d,腹腔注射二甲亚砜0.5 ml*kg-1*d-1;姜黄素组尾静脉注射肾毒血清0.5 ml/d,连用2 d,同时腹腔注射姜黄素50 mg*kg-1*d-1.分别于第3、7、14、28天各处死6只大鼠,部分肾组织福尔马林固定、石蜡包埋后进行免疫组织化学染色.结果:对照组大鼠肾小球基膜Ⅳ型胶原以及FN染色弱阳性.模型组大鼠肾小球Ⅳ型胶原和FN沉积的范围随着病程的进展逐渐增多,与相应时间对照组比较有显著差异(P ＜0.01).姜黄素组肾小球Ⅳ型胶原和FN沉积的范围亦随时间的发展逐渐扩大,然而Ⅳ型胶原较同期模型组比较染色范围却明显缩小 (P ＜0.01) ,而FN于7 d后才比模型组减少(P ＜0.01). 结论:姜黄素可抑制肾炎组织内Ⅳ型胶原和FN的积聚并可能延缓肾小球硬化的发生发展.     

凉血解毒活血方治疗大鼠肾毒血清肾炎新月体病变

目的：探讨凉血解毒活血方治疗大鼠肾毒血清肾炎(nephrotoxic serum nephritis, NTSN)新月体病变的疗效特点。方法：45只SPF级雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠随机分为正常组、模型Ⅰ组(造模第7天取材)、模型Ⅱ组、甲泼尼龙组和凉血解毒活血方+甲泼尼龙组,每组9只。建立大鼠NTSN模型的方法为：从Sprague Dawley大鼠中提取肾小球基底膜(glomerular basement membrane, GBM)抗原,在新西兰白兔背部行对称多点皮下注射,制备肾毒血清。WKY大鼠预免疫7 d后,尾静脉注射肾毒血清,连续注射3 d即可。除模型Ⅰ组外,其余各组大鼠均在造模第7天开始灌胃,持续7 d,并在末次灌胃后留取24 h尿液。应用Periodic Acid-Schiff(PAS)染色观察各组大鼠肾脏组织病理变化,包括新月体百分比。使用全自动生化分析仪检测各组大鼠24小时尿蛋白定量、尿免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、尿肌酐(creatinine, Cr)水平。采用免疫组织化学法检测各组大鼠肾脏组织整合素β2(integrin ...     

201A中药合剂对大鼠抗肾小球基底膜肾炎免疫功能的影响

目的 观察201A中药合剂防治大鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎的疗效。方法 建立大鼠抗GBM肾炎模型。实验分3组：201A处理组、肾炎对照组及正常对照组。201A处理组大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清后即刻给予201A合剂(0．42g／kg，灌胃)，肾炎对照组大鼠一次性尾静脉注射抗GBM抗血清后则给予等量的生理盐水，均至第21天。定期于第4、14和21天，检测大鼠尿蛋白，并收集血标本检测T淋巴细胞转化功能、血清中循环免疫复合物及抗GBM自身抗体。结果 肾炎对照组大鼠注射抗血清后第4天即出现异常蛋白尿，T淋巴细胞转化功能明显高于正常，并于第14天血中检测到高滴度的抗GBM自身抗体；而201A处理组鼠上述病变均明显好转。结论 201A中药合剂能够改善大鼠抗GBM肾炎的肾功能。     

姜黄素在肾毒血清肾炎中防治作用的初步研究

目的:探讨姜黄素对大鼠肾毒血清肾炎的防治作用,为将其应用于临床治疗肾小球肾炎提供实验依据。方法:将雄性SD大鼠随机分成3组:①正常对照组:从尾静脉注射0.5ml/d生理盐水,连用2日;②模型组:从尾静脉注射免抗鼠肾毒血清0.5ml/d,连用2日;③姜黄素组:于尾静脉注射免抗鼠肾毒血清0.5ml/d,连用2日,同时腹腔注射姜黄素50mg·kg~(-1)·d~(-1)。3组大鼠分别于第3、7、14、28天处死,测定各批次大鼠24h尿蛋白,并观察肾脏病理组织学改变。结果:姜黄素组24h尿蛋白明显低于模型组(P<0.01),半定量分析显示,姜黄素组肾小球细胞数明显低于模型组(P<0.01);间质炎细胞浸润亦少于模型组(P<0.01);14天后肾小管间质损伤指数姜黄素组也明显好于模型组(P<0.01)。结论:姜黄素能明显减轻肾毒血清肾炎蛋白尿程度,抑制肾小球内细胞增殖,减轻肾小管间质损伤及炎细胞浸润,具有肾脏保护作用。     

来氟米特对大鼠肾毒血清性肾炎早期肾损害的保护作用

目的探讨来氟米特（LEF）对大鼠肾毒血清性肾炎早期肾损害的保护作用。方法建立大鼠肾毒血清肾炎模型,随机分为正常对照组、病理对照组、LEF干预组（5mg／kg／d,灌胃）。2周末检测24h尿蛋白含量、血清学指标;观察肾小球病理形态及免疫组化变化。结果病理对照组24h尿蛋白水平明显高于正常对照组（P〈0．01）,血浆白蛋白水平明显低于正常对照组（P〈0．05）,肾小球内细胞数、含新月体肾小球数、硬化肾小球数、肾组织中MCP-1、ED1^＋细胞浸润明显高于正常对照组（P〈0．05）。肾组织中ED1^＋细胞数与尿蛋白排泄量、形成新月体的肾小球百分数呈显著正相关（P〈0．01）,形成新月体的肾小球百分数与尿蛋白排泄量亦呈显著正相关（P〈0．01）。LEF干预组大鼠尿蛋白水平、肾小球细胞总数、硬化肾小球数、新月体数、肾小球ED1^＋细胞浸润及MCP-1表达均明显低于病理对照组（P〈0．01,0．05）。结论LEF能改善肾毒血清性肾炎大鼠早期肾脏病变,其机制可能部分与抑制肾组织MCP-1表达和巨噬细胞浸润有关。     

他克莫司对糖尿病大鼠肾小管间质转分化的影响

目的探讨他克莫司(FK506)对糖尿病大鼠肾小管间质转分化的影响。方法应用链脲佐菌素(65 mg/kg)腹腔注射建立大鼠糖尿病模型。分别给予FK506 0.5、1.0 mg/kg.d灌胃,共4周。随机分对照组、模型组、FK506(0.5,1.0 mg/kg)组。4周后观察大鼠肾重/体重(RKW)与尿白蛋白排泄率(AER),并行肾小管-间质病理形态学分析。应用免疫组化法检测肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与波形蛋白(Vimentin)的表达。结果FK506 1.0 mg/kg给药组大鼠相对肾重、肾小管-间质损伤指数明显低于模型组(P<0.05,P<0.01),FK506 0.5、1.0 mg/kg给药组大鼠AER水平明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。免疫组化显示模型组肾小管间质E-cadherin表达阳性面积明显低于对照组(P<0.01),FK506 0.5、1.0 mg/kg给药组表达阳性面积明显高于模型组(P<0.01),模型组肾小管α-SMA与Vimentin表达明显高于对照组(P<0.01),FK506 0.5、1.0 mg/kg给药组表达明显低于模型组(P<0.01)。结论 FK506可部分上调E-cadherin及下调α-SMA与Vimentin在肾小管间质中的表达,抑制糖尿病大鼠肾小管-间质转分化,从而起到肾脏保护作用。     

酸性成纤维细胞生长因子诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用及机制

目的　探讨酸性成纤维细胞生长因子 (AcidfibroblastgrowthfactoraFGF)在大鼠肾小管上皮细胞株 (NRK)转分化中的作用 ,为肾小管 间质纤维化的防治提供理论依据。方法　在NRK细胞的培养基内加入不同剂量的重组人aFGF ,并在Ⅰ型胶原处理过及未处理的玻璃表面 ,无血清培养 6d。使用透射电镜、免疫细胞化学对肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞形态及表型的转变进行评估。结果　不同剂量的aFGF(1、1 0、50ng/ml)处理后的NRK细胞形态和表型发生不同程度的改变 :体积增大、失去尖端 基底极性和微绒毛、细胞延长、具有浸润特征的前后向双末端极性、出现肌动蛋白中间丝结构。免疫组化和Westernblot分析显示加入aFGF后角蛋白表达减少 ,有肌成纤维细胞的特异性标志物α 平滑肌动蛋白 (α SMA)的表达。α SMA阳性细胞的比例与aFGF的浓度呈正相关 ,亲和抗aFGF抗体可消除这种转分化现象。加入aFGF后 ,在玻璃表面α SMA阳性细胞数 (34 4± 0 0 90 ) %较Ⅰ型胶原处理培养表面α SMA阳性细胞数 (74 6± 0 1 0 1 ) %有显著差异 (P <0 0 5)。结论　aFGF在促进肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞转分化的过程中有重要的意义 ,该过程亦与细胞的生长环境有关 ,提示肾小管上皮细胞的表型转化是肾间质纤维化的重要原因     

芪丹益肾冲剂对大鼠原位免疫复合物性肾炎的作用

[目的]观察复方芪丹益肾冲剂对阳离子化牛血清白蛋白诱导的大鼠原位免疫复合物性肾炎的治疗作用.[方法]将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、芪丹益肾冲剂大、小剂量组及肾炎舒组.除正常对照组外其他4个组大鼠通过注射给予阳离子化牛血清白蛋白建立原位免疫复合物性肾炎模型.建立模型第3周开始给药,建立模型第6周末处死大鼠,采血,取肾脏,测定各项生物化学指标,观察形态学改变.[结果]芪丹益肾冲剂大、小剂量组尿蛋白定量与模型对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.01).血清白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、血肌酐及尿素氮水平与模型对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).芪丹益肾冲剂可减轻原位免疫复合物性肾炎大鼠基底膜增厚,改善电子致密物沉积情况.[结论]芪丹益肾冲剂可降低原位免疫复合物性肾炎模型大鼠的24h尿蛋白定量,改善肾功能,降低血脂水平,减轻肾小球病理改变.     

咪唑立宾对肾小球肾炎的影响

目的观察咪唑立宾对肾小球肾炎的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为正常组、肾炎组和咪唑立宾组,每组10只。肾炎组与咪唑立宾组尾静脉注射OX-7细胞上清液(100 mg.kg-1),正常组注射等量生理盐水。注射后6 h,咪唑立宾组每天给予咪唑立宾20 mg.kg-1,连续给药5 d,正常组及肾炎组给予蒸馏水。考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白定量;过碘酸雪夫染色法评估系膜细胞增殖。结果与正常组比较,肾炎组24 h尿蛋白量明显增多(P<0.05),系膜细胞显著增殖,细胞外基质大量积聚(P<0.05)。与肾炎组比较,咪唑立宾组的24 h尿蛋白量明显减少(P<0.05),系膜细胞增殖及细胞外基质大量积聚程度明显减轻(P<0.05)。结论咪唑立宾能够降低24 h尿蛋白量,抑制系膜细胞增殖,延缓肾小球肾炎的进展。     

蛋白酪氨酸激酶活性在人肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨蛋白酪氨酸激酶(PTKs)活性在人肾小管上皮细胞 (HKC)转分化中的作用.方法将传代的HKC细胞分为:(1)无血清对照组(C);(2)酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)组(A);(3)genistein组(G),加入80ng/ml重组人aFGF条件下,分别加入不同浓度的genistein;培养72h.应用免疫组化检测HKC细胞表达α-SMA(α-smoothmuscleactin,α-SMA)的变化;对转分化过程中PTKs的活性用流式细胞仪加以分析.结果 aFGF(A)组加入80ng/ml aFGF后a-平滑肌动蛋白(a-SMA)表达增强,细胞a-SMA阳性率(60.60±2.70)%较对照组(C)(3.35±1.45)%有非常显著性差异(P<0.01).当G4,5组介入genistein浓度48、96μg/ml时,细胞α-SMA阳性率为(3.90±2.09)%,(3.98±1.75)%,较aFGF组(A)明显降低(P<0.01).PTKs的活性随加入aFGF的浓度增加而增高,当aFGF的浓度为20、40、80ng/ml时,分别比对照组(C)PTKs的活性增加16%、17%、24.6%,当介入genistein剂量为6、12、24、48μg/ml时,分别比aFGF组(A)PTKs的活性下降45.6%、53.5%、66%、81.9%,干预因素作用下HKC细胞PTKs活性与genistein剂量呈负相关(r=-0.987,P<0.05).结论 HKC转分化的机制可能与PTKs活性失控有关,genistein在防治肾间质纤维化中具有很好的应用前途.     

肾毒性血清肾炎对大鼠左心室心肌舒张性能的影响

目的：探讨肾毒性血清肾炎（ＮＳＮ）的大鼠左室心肌舒张性能的影响。方法：３０只ＳＤ大鼠随机分为Ａ、Ｂ和Ｃ组,每组１０只,经静脉分别注射兔抗鼠肾毒血清,正常兔血清和生理盐水,注射后１４ｄ,做心导管检查,结果：Ａ组（ＮＳＮ组）左室－ｄｐ／ｄｔｍａｘ和等容舒张期左室内压下降时间常数分别与Ｂ、Ｃ组比较,均无显著性差异（Ｐ〉０．０５）,结论：悄影响左室心舒张性能。     

黄芪注射液对肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察黄芪注射液对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化(EMT)过程的影响,揭示黄芪注射液治疗肾间质纤维化(RIF)的具体作用机制。方法以正常培养的HK-2细胞为正常组,TGF-β1(8×10-9mg/L)刺激48 h为模型组,TGF-β1(8×10-9mg/L)与黄芪注射液(8×10-6mg/L)共培养48 h为治疗组。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫组化染色法观察细胞内E-钙依赖黏附素(E-cadherin)和a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达变化。结果倒置相差显微镜下观察发现模型组细胞形态经历了由上皮细胞样转变为成纤维细胞样的改变,而治疗组中成纤维细胞数目较模型组减少,并可见大量的上皮样细胞;免疫组化显示模型组细胞中a-SMA的表达较正常组增多,E-cadherin的表达减少,而治疗组细胞中E-cadher-in的表达较模型组增多,a-SMA的表达降低。结论黄芪注射液可在一定程度上抑制由TGF-β1诱导的体外培养HK-2细胞的表型改变,减少细胞内a-SMA的表达,增加E-cadherin的表达,阻断或逆转其EMT的进程。     

Effect and mechanism of tacrolimus on melanogenesis on A375 human melanoma cells

Background Topical tacrolimus has been used for vitiligo as a common treatment option for more than ten years while the underlying mechanism is still uncertain.The aim of this study was to investigate the direct effects of tacrolimus on the melanogenesis and migration on human A375 melanoma cells.The expression of c-KIT mRNA and protein of human A375 cells were also investigated.Methods The cultured A375 human melanoma cells were randomly assigned to control and tacrolimus treatment groups （10,102,103and 104 nmol/L）.The cell proliferation was measured with Cell Counting Kit-8 assays.Melanin content was measured with NaOH method.Transwell migration assay was used to measure cell migration.The expression of c-KIT mRNA and protein were measured with real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction and immunohistochemistry respectively.Results The cell proliferation of the 103 and 104 nmol/L tacrolimus groups were significantly lower （0.666±0.062 and 0.496±0.038） as compared with the control （0.841±0.110,P 〈0.05）.The mean melanin content in all groups treated with different concentration of tacrolimus （10,102,103,104 nmol/L） increased compared with the control group （P 〈0.05）.Dosedependent increase in cell migration were seen in all tacrolimus-treated groups （P 〈0.01）.The expression of c-KIT mRNA level in A375 cells exposed to tacrolimus （103and 104 nmol/L） had significantly increased by 3.03-fold and 3.19-fold respectively compared with the control （P 〈0.05）.Conclusions Although tacrolimus had no effects on cell proliferation on A375 human melanoma cells,it could increase the melanin content and cell migration.The expression of c-KIT mRNA and protein increased dose-dependently in tacrolimus-treated groups as compared with the control.Our study demonstrated that tacrolimus could enhance the melanogenesis and cell migration on A375 cells.