上调表达Smad7显著抑制TGF-β介导的大鼠腹膜间皮细胞Smad2的表达

目的： 探讨外源性转入并上调表达抑制性信号蛋白Smad7对TGF-β₁作用下大鼠腹膜间皮细胞Smad2表达的影响。 方法： 通过脂质体介导的方法，将表达Smad7的重组质粒（PCDNA3-Smad7）转染培养的大鼠腹膜间皮细胞，分别培养于不同浓度TGF-β₁培养液(0、1.25、2.5和10 μg/L)，用RT-PCR及Western blotting的方法检测不同时间（0、5、15、30、60和120 min）Smad2、Smad7表达的水平。 结果： 正常间皮细胞Smad2 mRNA和蛋白在TGF-β₁刺激后5 min开始表达，呈时间依赖性，在30 min达到高峰，而后逐渐减弱；Smad7 mRNA和蛋白也在TGF-β₁刺激后5 min可见表达，但此后逐渐减弱，30 min达到最低，60 min又开始逐渐增强。Smad2 和Smad7 mRNA和蛋白，随TGF-β₁浓度的增高而表达增强。转染后大鼠腹膜间皮细胞可见Smad7 mRNA和蛋白表达显著上调，并可持续高表达。转染后的腹膜间皮细胞在TGF-β₁刺激下，Smad2 mRNA及蛋白的表达均低下，刺激0、5、15、30、60 和120 min后Smad2 mRNA表达分别低33%、56%、67%、71%、63%和57%（P<0.05）。Smad2蛋白表达分别低78%、89%、89%、88%和76%（P<0.05）。 结论： 上调表达抑制性信号蛋白Smad7可显著抑制腹膜间皮细胞中受体调控信号蛋白Smad2的表达和活性，提示Smad7可能对TGF-β₁起反向调控作用。     

慢性丙型肝炎患者血清TGF-β1、CTGF和SS测定的临床意义

目的:探讨慢性丙型肝炎患者血清转化生长因子-β1(TGF-β1),结缔组织生长因子(CTGF)和生长抑素(SS)水平的变化及临床意义.方法:应用放射免疫分析和酶联法对38例丙型肝炎患者进行血清TGF-β1、CTGF和SS检测并与35名正常健康人作比较.结果:慢性丙型肝炎患者血清TGF-β1、CTGF和SS水平均非常显著...     

IL-1β对大鼠腹膜间皮细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响

目的:研究白介素1β(Interleukin-1beta,IL-1β)对原代培养大鼠腹膜间皮细胞(PMCs)葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响,为防治腹透失超滤提供理论依据及方法。方法:胰蛋白酶消化法进行雄性Wistar大鼠PMCs的原代培养及传代,不同浓度IL-1β(0、1、10、50 ng/ml)作用不同时间(0、1、12、24、48小时),逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测GLUT1的mRNA表达,Western blot检测GLUT1蛋白的表达,生化分析仪检测培养液内葡萄糖浓度的变化,以培养液内葡萄糖的减少量作为细胞对葡萄糖的净利用。结果:IL-1β以浓度及时间依赖方式促进GLUT1 mRNA及蛋白的表达(P<0.05),同时伴有葡萄糖向细胞内转运的增加,50 ng/ml IL-1刺激48小时后GLUT1 mRNA表达与对照组相比增加了近4倍(P<0.01)。结论:IL-1β可以使PMCs细胞GLUT-1表达和葡萄糖摄取增加,这为防治腹透相关腹膜纤维化及腹透失超滤提供了线索。     

RRD患者视网膜下液中TGF-β、CTGF和HIF-1α测定的临床意义

目的：为进一步探讨孔源性视网膜脱离（RRD）患者视网膜下液中TGF-β、CTGF及HIF-1α三项生长因子水平的变化与病情进展和预后的关系。方法：40例RRD患者分为三组：按病变分级为,A级组（10例）、B级组（22例）、C级组（8例）;另按视网膜：脱离范围则分为：脱离〈1/4组（7例）、脱离1/4～3/4组（21例）、脱离〉3/4组（12例）。患者TGF-β含量采用放射免疫分析;CTGF及HIF-1α均采用酶联免疫吸附试验法。结果：本文患者脱离1/4～3/4组SRF中TGF-β、CTGF及HIF-1α三项指标均显著高于〈1/4组（P均〈0.05）;脱离〉3/4组患者组则较脱离1/4～3/4组升高更为显著（P〈0.01）。而表2中不同分级组结果表明,B级组三项指标均显著高于A级组（P均〈0.05）;C级组则较B级组升高更为显著（P〈0.01）。相关性分析显示,表1、2中脱离〉3/4组三项指标与C级组相应指标之间各呈显著正相关（r=0.626、r=0.599、r=0.619,P均〈0.01）。结论：RRD患者视网膜下液中TGF-β、CTGF及HIF-1α三项指标的测定对于研究其发病机制及评估预后有一定临床意义。     

灯盏花素对腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞转化生长因子β1的影响

背景：从不同层面了解灯盏花素阻止/延缓腹膜功能衰竭的作用及其机制,从而在临床上推广使用灯盏花素来阻止/延缓腹膜功能衰竭从而延长终末期肾脏病患者腹膜透析时间、提高透析质量、减少透析失败率,提高腹膜透析远期疗效具有广泛的应用前景。 目的：观察灯盏花素对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞转化生长因子β1分泌及其增殖活性的影响。 方法：体外培养人腹膜间皮细胞,分为5组：分别为对照组、腹膜透析液组、灯盏花素终浓度为5,10,20 µmol/L组。检测各组上清液中转化生长因子β1的水平以及间皮细胞的增殖活性。 结果与结论：腹膜间皮细胞在腹膜透析液诱导下,转化生长因子β1分泌显著增加、细胞增殖活性显著降低。灯盏花素5 µmol/L组转化生长因子β1分泌低于腹膜透析液组(P < 0.05),细胞增殖活性高于腹膜透析液组(P < 0.05);灯盏花素10,20 µmol/L组转化生长因子β1分泌显著低于腹膜透析液组(P < 0.01),细胞增殖活性显著高于腹膜透析液组(P < 0.01)。结果显示灯盏花素可以抑制腹膜间皮细胞转化生长因子β1分泌,拮抗腹膜透析液对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用。     

人脐带血干细胞抑制大鼠肺纤维化及肺巨噬细胞TGF-β1的表达

目的 研究人脐血间充质干细胞对博来霉素所致的大鼠肺纤维化及TGF-β1的影响.方法 取清洁级健康雄性SD大鼠60只随机分为博来霉素组(P组)、干细胞治疗组(M组)、地塞米松治疗组(D组)和阴性对照组(N组),取第2代人脐血间充质干细胞培养至第4代;P组、M组和D组分别经气管注入博来霉素制造肺纤维化模型,M组造模后立即经鼠尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的干细胞,D组造模后第2天开始连续7d腹腔注射地塞米松,N组经气管注入等量生理盐水,在第7、14、28天处死各组大鼠,行HE、Masson染色,免疫组织化学法观察TGF-β1表达及标记细胞情况.结果 M组第7、14、28天肺组织均可见标记的干细胞;HE及Masson染色后观察,与N组相比,P组7d时肺泡炎最明显,28 d肺纤维化程度最重,M、D组较P组轻且病理切片可见M组较D组肺泡炎及纤维化程度稍轻;肺组织中TGF-β1在P组7d时最高,M、D组明显少于P组,M组减少更明显,组间差异有统计学意义.结论 人脐血间充质干细胞可以定植于肺组织中,在肺纤维化早期通过抑制TGF-β1的表达,可能减轻肺泡炎及肺纤维化.     

卵巢癌细胞诱导腹膜间皮细胞血管内皮生长因子表达增强

目的探讨卵巢癌细胞对腹膜间皮细胞(HPMC)血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法以卵巢癌细胞SKOV3条件培养液(SKOV3-CM)培育HPMC3~72h,在不同时间点以RT-PCR检测HPMCVEGF基因表达,用ELISA检测HPMC裂解液中VEGF蛋白水平。以SKOV3-CM或SKOV3-CM加转化生长因子β1(TGF-β1)中和抗体培育HPMC24h,检测其VEGF基因及蛋白表达的变化。结果在SKOV3-CM未培育的HPMC中检测到VEGFmRNA及蛋白的表达。HPMC在SKOV3-CM中培育6及12h时,VEGFmRNA及蛋白表达开始增加(P<0.01),并以时间依赖性表达增强(P<0.01),分别在24及48h达高峰,48及72h达到平台期。TGF-β1的中和抗体可部分阻断SKOV3-CM对HPMCVEGFmRNA及蛋白表达的诱导作用(P<0.01)。结论HPMC可合成VEGF,有利于卵巢癌的腹膜转移和腹水形成。卵巢癌细胞分泌的TGF-β1诱导HPMCVEGF表达升高,间接的促进自身腹膜播散。     

姜黄素对SiO_2诱导小鼠矽肺模型TNF-α、TGF-β1表达的影响

目的:研究姜黄素对SiO2所致小鼠矽肺模型血清及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法:将实验小鼠随机分为5组, 即假手术组、模型组、姜黄素干预组(高、中、低剂量).于姜黄素干预第14天、 42天后分别每组各处死6、 9只, 采用ELISA法测定肺组织和血清中TNF-α、 TGF-β1的含量.结果:模型组的肺组织炎症反应、纤维化程度较明显;与假手术组比较, 肺组织匀浆、血清中TGF-β1、 TNF-α含量均明显升高( P < 0.01).给予姜黄素干预后, 可以不同程度地降低肺组织匀浆及血清中TGF-β1、 TNF-α的含量( P <0.05), 同时纤维化程度减轻.结论:姜黄素能降低SiO2致小鼠矽肺模型肺组织和血清中TNF-α、 TGF-β1水平, 可能通过下调上述细胞因子水平而发挥抗肺纤维化作用.     

乙肝后肝硬化患者血清CTGF、PDGF、TGF-β_1测定的意义

目的：探讨乙型肝炎后肝硬化患者血清CTGF、PDGF、TGF-β1水平的变化及临床意义。方法：将50例乙肝后肝硬化患者按不同的病情分为轻度、中度及重度三组;设体检健康人45名作为对照组。血清TGF-β1水平采用放射免疫分析;CTGF及PDGF则采用ELISA测定。并将测定结果进行统计分析。结果：结果显示,血清CTGF水平轻度组与对照组比较略有升高,但无统计学意义（P〉0.05）;中度组患者该指标水平则显著高于对照组（P〈0.05）;重度组水平更为显著（P〈0.01）。且发现其递增规律与肝硬化病情的严重程度呈明显的平行关系。PDGF测定值显示,轻度组水平显著高于对照组（P〈0.05）,中度和重度两组水平则较对照组升高更为显著（P均〈0.01）。其水平的递增关系也与病情的严重程度相一致。TGF-β1水平的变化趋势同PDGF。结论：本文患者三项血清指标水平的变化与乙肝后肝硬化的发病及病情进展有关;其测定有助于了解本病的发生机制和预后评估。     

食管癌患者手术治疗前后血清TGF-α、TGF-β1和血浆VEGF检测的临床意义

目的：探讨了食管癌患者手术治疗前后血清TGF-α、TGF-β1和血浆VEGF水平的变化及意义。方法：应用放射免疫分析和酶免法对33例食管癌患者进行了手术治疗前后血清TGF-α、TGF-β1和血浆VEGF测定,并与35名正常健康人作比较。结果：手术前食管癌患者血清TGF-α、TGF-β1和血浆VEGF水平非常显著地高于正常人组（P〈0.01）,经手术治疗6个月则与正常人组比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：检测食管癌患者血清中TGF-α、TGF-β和血浆VEGF水平的变化对观察病情和预后判定具有重要的临床价值。     

肺癌患者手术前后血清TGF-α、TGF-β1和SE-Cad检测的临床意义

目的:探讨了肺癌患者手术治疗前后血清TGF-α、TGF-β1和SE-Cad水平的变化及意义。方法:应用放射免疫分析和酶联法对32例肺癌患者进行了手术治疗前后血清TGF-α、TGF-β1和SE-Cad检测,并与35名正常健康人作比较。结果:肺癌患者在手术前血清TGF-α、TGF-β1和SE-Cad水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),经手术治疗6个月后则与正常人组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:检测肺癌患者手术治疗前后血清TGF-α、TGF-β1和SE-Cad水平的变化对观察病情和预后判定具有重要的临床价值。     

肺癌患者化疗前后血清TGF-α、TGF-β_1和VEGF测定的临床意义

目的：探讨肺癌患者化疗前后血清TGF-α、TGF-β1和VEGF水平的变化及临床意义。方法：分别应用放射免疫分析和酶联法对33例肺癌患者进行了化疗前后血清TGF-α、TGF-β1和VEGF测定,并与35名正常健康人作比较。结果：在化疗前血清TGF-α、TGF-β1和VEGF水平均非常显著的高于正常人组（P〈0.01）,经化疗后三个月与正常人组比较仍有显著性差异（P〈0.05）。结论：检测肺癌患者化疗前后血清TGF-α、TGF-β1和VEGF水平的变化与肿瘤的发生、发展密切相关。     

TGF-β1、PDGF、CTGF在矽肺患者血清中的表达水平及意义

矽肺是长期工作在较高浓度游离二氧化硅粉尘的环境中,吸入二氧化硅达到一定量后而引起的以肺纤维化为主的疾病,对人体危害严重,而且尚无有效的治疗手段。已有研究表明,一些细胞因子及其形成的网络系统在肺纤维化的发生、发展过程中起着重要作用,其中转化生长因子β1（TGF-β1）、血小板源性生长因子（PDGF）和结缔组织生长因子（CTGF）等对调控肺成纤维细胞的分裂、增殖及胶原蛋白合成与降解起着十分重要的作用。但关于这三种因子的研究多是体外研究,虽然离体实验一定程度可证明这些细胞因子存在相互作用网络关系,但不一定符合体内情况,     

肺癌患者化疗前后血清Hcy、TGF-α和TGF-β1变化的临床评价

目的:探讨肺癌患者化疗前后血清Hcy、TGF-α和TGF-β1水平的变化及临床意义.方法:分别采用放射免疫分析和免疫法对31例肺癌患者进行了化疗前后血清Hcy、TGF-α和TGF-β1测定,同时与35名正常健康人作比较.结果:肺癌患者在化疗前血清Hcy、TGF-α和TGF-β1水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01),化疗后3个月与正常人组比较仍有显著性差异(P<0.05).血清Hcy水平与TGF-α、TGF-β1水平呈正相关(r=0.5132、0.6022,P<0.01).结论:检测肺癌患者血清Hcy、TGF-α和TGF-β1水平的变化与肿瘤的发生和发展密切相关.     

锌离子对TGF-β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响

目的研究锌离子对转化生长因子(TGF-β1)诱导的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转分化的影响,从而为锌离子在腹膜透析中的应用提供理论基础。方法胰蛋白酶消化法原代培养腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组:正常对照组,TGF-β1(10ng/ml作用48h),ZnSO4作用组(30μMZnSO4作用24h,再加10ng/mlTGF-β1作用48h)。采用相差显微镜观察各组细胞表型改变。应用免疫荧光、western blot方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Ⅰ型胶原酶(collagenI)蛋白表达。结果 TGF-β1培养48h后细胞形态由典型的上皮逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞,而ZnSO4作用组细胞形态改变明显减轻。α-SMA在正常组细胞存在少量表达,TGF-β1组荧光强度明显增强,而ZnSO4作用组荧光强度明显低于TGF-β1组。与对照组相比,TGF-β1组RPMC的α-SMA、collagenI蛋白表达明显升高,而E-cadherin蛋白表达降低。与TGF-β1组相比,ZnSO组RPMC的α-SMA、collagenI表达明显降低、E-cadherin蛋白表达增多。结论 4ZnSO4可逆转TGF-β1所致的RPMC的转分化,对腹膜透析过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用。     

TGF-β1 shRNA真核表达质粒抑制人肺成纤维细胞TGF-β1的表达

目的:观察构建成功的三个针对人转化生长因子β1(TGF-β1)的小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒抑制人肺成纤维细胞TGF-β1的表达.方法:将真核表达载体psiSTRIKE-RNAi1、psiSTRIKE-RNAi2、psiSTRIKE-RNAi3和对应的阴性对照载体经酶切鉴定和测序分析后,以Lipofectamine2000介导转染人肺成纤维细胞,48小时后应用实时荧光定量PCR检测人肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA的表达并用ELISA检测细胞上清液中TGF-β1蛋白质的浓度.结果:重组质粒经酶切和DNA测序证实插入片段的碱基序列与预期设计一致.转染组细胞TGF-β1表达受到明显抑制,以psiSTRIKE-RNAi2的抑制效应最为显著(P＜0.01).结论:三个针对TGF-β1shRNA的重组质粒均能抑制TGF-β1在人肺成纤维细胞中的表达.     

慢性乙型肝炎患者血清TGF-β、CTGF、HA和PⅢP检测的临床意义

目的：探讨了慢性乙型肝炎患者血清TGF-B、CTGF、HA和PIIIP的水平变化及其临床意义。方法：应用放射免疫分析和酶联法对36例慢性乙型肝炎患者进行了血清TGF．13、CTGF、HA和PnlP检测,并与35名正常健康人作比较。结果：慢性乙型肝炎患者血清TGF．13、CTGF、HA和PⅢP水平均非常显著地高于正常人组（P〈0．01）。且血清TGF-B水平与CTGF、HA、P11IP水平呈正相关（r=0．6018、0．5784、0．5584,P〈0．01）。结论：检测慢性乙型肝炎患者血清TGF-Ⅲ、CTGF、HA和PIIIP的水平具有重要的临床价值,这些生物标志物的变化,可提高对病情及预后评估的认识。     

蟾蜍灵抑制TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞-间充质细胞系转换

目的探讨蟾蜍灵对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质细胞转换的影响。方法将体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)细胞分为3组:1)对照组;2)TGF-β1组:在细胞培养基中加入TGF-β1(浓度为5μg/L);3)蟾蜍灵+TGF-β1组:在细胞培养基中分别加入蟾蜍灵和TGF-β1(浓度为5μg/L),按蟾蜍灵的浓度分为A、B、C 3个亚组:分别为1×10~(-9)、1×10~(-8)和1×10~(-7)mol/L。72 h后,用倒置相差显微镜观察细胞形态;用实时定量PCR、蛋白印迹法和免疫荧光检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果 TGF-β1组HK-2细胞从原有典型的铺路石样上皮细胞转变为长梭形肌成纤维细胞;胞质内大量表达α-SMA,同时E-cadherin的表达明显减少(P0.01);蟾蜍灵处理后TGF-β1诱导的细胞形态学改变减轻,胞质内α-SMA的表达减少(P0.05),同时E-cadherin的表达明显恢复,且呈剂量依赖性。结论蟾蜍灵能有效抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞转换,对肾脏病治疗具有潜在应用前景。     

MG132抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞活化

目的探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肺成纤维细胞活化的影响及机制。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(MRC-5),随机分为对照组、TGF-β1组(10μg/L)和MG132(0.5μmol/L)处理组。Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1(COL1A1)的表达;RT-PCR和Western blot法分别检测细胞Smad7、核转录共抑制因子SnoN、TGF-βI型受体(TβRI)、Smad2和Smad3 mRNA及蛋白的表达。结果与对照组比较,TGF-β1促进了α-SMA和COL1A1蛋白表达(P0.05),MG132抑制了TGF-β1的上述作用(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN mRNA表达较对照组增加(P0.05)。TGF-β1组Smad7和SnoN蛋白表达较对照组减少(P0.05),而MG132组Smad7和SnoN蛋白水平较TGF-β1组增加(P0.05)。结论 MG132可能通过阻止Smad7和SnoN蛋白泛素化降解,抑制TGF-β1诱导人肺成纤维细胞活化。