人巨细胞病毒立即早期蛋白功能的研究进展

人巨细胞病毒基因表达分为立即早期、早期和晚期三个时相。立即早期基因的表达在病毒基因和宿主细胞基因的表达和调控方面有重要作用,并能够影响宿主细胞周期进程。本文对立即早期蛋白调节病毒复制以及影响细胞周期进程方面的功能作一综述。     

病毒癌基因控制细胞周期的方式

致癌病毒对宿主细胞施加生长刺激，从而增加宿主细胞的繁殖能力．其方式是通过病毒癌基因蛋白质干扰宿主细胞中受体介导的信号传导通路和细胞周期调节蛋白的功能，从而使宿主细胞的细胞周期控制失调，进而诱导细胞周期进行所需的细胞基因进行表达，使宿主细胞不断繁殖，发生癌变。     

病毒癌基因控制细胞周期的方式

致癌平素对宿主细胞施加生长刺激，从而增加宿主细胞的繁殖能力，其方式是通过病毒癌基因蛋白质干扰宿主细胞中受全介导的信号传导通路和细胞周期的调节蛋白的功能，从而使宿主细胞的细胞周期控制失调，进而诱导细胞周期进行所需的细胞基因进行表达，使宿主细胞不断繁殖，发生癌变。     

HSVI立即早期基因研究进展

相对于其它病毒而言，单纯疱疹病毒的基因组巨人，基因数日繁多，根据其基因转录的先后顺序，分为立即早期、早期利晚期基因二类。作为病毒首先表达的立即早期基因，它们的表达产物都为非结构蛋白，可对病毒的复制进行调控，决定了病毒进入细胞后的命运。因此对单纯疱疹病毒的立即早期基因的定位、命名、翻译后修饰以及对其产物功能的分析对该病毒的分子生物学的病理学研究具有重要的意义     

大蒜新素对巨细胞病毒感染细胞周期蛋白基因表达谱的影响

目的 探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)对感染细胞周期蛋白基因表达谱的影响及大蒜新素的干预效应。方法 利用基因芯片技术对比分析大剂量大蒜新素处理正常细胞和感染细胞(MOI=2．5)72h以及同期培养的感染和正常细胞周期相关蛋白基因(239条)表达谱的变化。结果 感染细胞有24条(10．04％)基因发生有意义的差异性表达；其中9条表达增加，15条表达降低。大蒜新素对ll条HCMV感染所致表达改变的基因无影响；使HCMV感染下调作用消除的基因有ll条；使HCMV感染上调作用消除的基因有2条。另外，药物对感染细胞和正常细胞基因表达均有影响的有2条；仅引起正常细胞基因表达改变的有3条。结论 HCMV感染使部分细胞周期相关蛋白基因差异性表达可能是HCMV导致宿主细胞周期紊乱的原因之一。大蒜新素至少可使HCMV所致13条基因差异性表达作用消除，提示药物干预了病毒对细胞周期的影响。     

HSVI立即早期基因研究进展

相对于其它病毒而言,单纯疱疹病毒的基因组巨人,基因数日繁多,根据其基因转录的先后顺序,分为立即早期、早期利晚期基因二类.作为病毒首先表达的立即早期基因,它们的表达产物都为非结构蛋白,可对病毒的复制进行调控,决定了病毒进入细胞后的命运.因此对单纯疱疹病毒的立即早期基因的定位、命名、翻译后修饰以及对其产物功能的分析对该病毒的分子生物学的病理学研究具有重要的意义.     

人巨细胞病毒对体外培养的人涎腺导管上皮细胞周期的影响及其相关机制

目的 研究人巨细胞病毒（HCMV）对人涎腺导管上皮细胞（HSG）细胞周期的影响及其相关机制.方法 体外培养HSG;用RT-PCR及nest-RT-PCR法检测感染HCMV的HSG中立即早期基因（ie1/ie2）的转录;用流式细胞仪检测HCMV对HSG细胞周期的影响;用蛋白印迹技术检测HCMV感染细胞中周期素D1的表达.结果 感染HCMV的HSG中可检测到HCMV ie1/ie2的转录;HCMV通过影响细胞周期的G1/S关卡,使HSG阻滞于G1期;感染HCMV的HSG周期素D1表达下调.结论 在体外HCMV通过作用于细胞周期的G1/S关卡及下调周期素D1抑制涎腺导管上皮细胞的增殖.     

稳定表达人巨细胞病毒蛋白pUL23细胞系建立及其功能研究

目的:建立稳定表达人巨细胞病毒UL23基因的HELF细胞系,研究病毒蛋白在宿主细胞内行为,为进一步研究人巨细胞病毒蛋白pUL23的功能提供依据。方法:通过PCR技术从人巨细胞病毒基因组中扩增出UL23基因,通过分子克隆技术构建重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-N1-FLAG-UL23。将该载体导入Am-phoPackTM-293细胞,收获重组逆转录病毒,然后感染HELF细胞,HELF经持续G418抗性筛选后获得稳定表达UL23基因的细胞系。采用激光共聚焦显微镜观察病毒蛋白在细胞内的定位。结果:RT-PCR、Western blotting结果证实病毒基因UL23能够整合到宿主细胞基因组中,并能在宿主细胞中稳定表达病毒蛋白。共聚焦显微镜观察到病毒蛋白pUL23定位于细胞质,处于细胞核周边。结论:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,成功构建了稳定表达UL23基因的转基因细胞系。该病毒蛋白在宿主细胞质中的定位,提示病毒蛋白发挥功能的空间位于细胞核周边,有利地推进了人巨细胞病毒蛋白pUL23功能研究的进程。     

睾丸高表达蛋白质HSD13调节CHO细胞系周期进程

 目的 研究HSD13蛋白的组织表达定位及其对细胞周期的影响。方法 利用王琳芳教授实验室构建的人睾丸特异ESTs文库，通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD13。通过Northern和Western印迹方法检测HSD13蛋白在不同组织中的表达，并用免疫组化观察其在小鼠睾丸组织中的表达定位。通过构建HSD13过表达的CHO稳定细胞系，用双胸苷阻断法并结合流式细胞术检测对细胞周期的影响。结果 电子克隆获得HSD13基因。HSD13蛋白在睾丸组织中高表达，主要定位于生精细胞中的精原细胞和初级精母细胞。成功构建HSD13过表达和对照的CHO稳定细胞株，过表达HSD13蛋白可以显著加快细胞G2/M期进程。结论 HSD13蛋白于睾丸中精子发生早期表达，其过表达能够加速细胞周期进程。     

E4orf4蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究与应用

 腺病毒早期基因编码产物在病毒感染宿主细胞后，广泛参与对宿主细胞周期的调控，以利于病毒自身的复制及释放。其中，腺病毒基因早期转录区4第4开放读码框（Adenovirus early region 4 open reading frame 4，E4orf4）编码的E4orf4蛋白，近几年来逐渐引起人们的重视。E4orf4蛋白是由114个氨基酸组成的小分子蛋白，实验证明，通过基因转染在哺乳动物细胞内表达的E4orf4蛋白在细胞质、细胞骨架和细胞核均有聚集。E4orf4蛋白作为一种多功能蛋白，可以下调病毒诱导的细胞信号传导、在转录和转录后水平调节宿主细胞及病毒蛋白的表达并诱导不依赖于p53的细胞凋亡。目前，对E4orf4蛋白诱导细胞凋亡的作用机制的研究，主要有3个方面：①通过结合和激活蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2 A，PP2A）来引起细胞凋亡；②通过对Src家族激酶的调节激活胞质凋亡信号；③对肿瘤细胞选择性诱导凋亡的作用。本文主要对E4orf4蛋白诱导细胞凋亡作用的研究进展，以及这种诱导作用对肿瘤细胞的特异性进行综述。......     

慢病毒载体与基因治疗

载体是供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或复制的运载工具。常用的有SV40衍生载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、细小病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等。近几年来。慢病毒载体受到高度重视，慢病毒载体来源于人类免疫缺陷病毒HIV-1、HIV-2、SIV，具有转染分裂和非分裂的T细胞、树枝状细胞、造血干细胞及巨噬细胞^[1]，基因疗法是一种新方法。Hawley^[2]等的文章中指出。由于慢病毒载体可作用于细胞周期的G0／G1期。成为遗传性疾病治疗的有效手段。基因治疗的最初目的是传送特殊的基因至预定的靶细胞，并且直接表达该基因的性质，达到治疗效果。在治疗遗传性、代谢性、神经系统疾病、癌症及艾滋病方面有广泛的应用前景。     

HBx研究现况

由HBVX基因编码的X蛋白(HBx)是一种多功能蛋白,它通过与多种宿主功能蛋白直接或间接地相互作用而调节多种蛋白的功能,具有广泛的反式激活作用,而且可以通过许多复杂的途径,参与细胞凋亡,参与DNA修复调控,促进细胞周期进程,与原发性肝细胞癌的发生有着密切的关系。因此,HBx的生物学功能包括对病毒本身的复制的影响和对宿主细胞的转录、增生、转化、凋亡的调控与致瘤作用。     

慢病毒载体与基因治疗

载体是供插入目的基因并将其导入宿主细胞内表达或复制的运载工具.常用的有SV40衍生载体、逆转录病毒载体、腺病霉载体、腺病毒相关病毒载体、细小病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等.近几年来,慢病毒载体受到高度重视,慢病霉载体来源于人类免疫缺陷病霉HIV-1、HIV-2、SIV,具有转染分裂和非分裂的T细胞、树枝状细胞、造血干细胞及巨噬细胞[1],基因疗法是一种新方法.Hawley[2]等的文章中指出,由于慢病毒载体可作用于细胞周期的G0/G1期,成为遗传性疾病治疗的有效手段.基因治疗的最初目的是传送特殊的基因至预定的靶细胞,并且直接表达该基因的性质,达到治疗效果.在治疗遗传性、代谢性、神经系统疾病、癌症及艾滋病方面有广泛的应用前景[3].     

人乳头瘤病毒E7蛋白生物活性研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)是一种小分子DNA病毒，其早期基因E7编码具有多种生物活性的E7蛋白。E7蛋白与腺病毒EIA及多瘤病毒SV40蛋白有相似的结构，可与pRB、P^53反应，改变宿主细胞G1／S期的转化。E7蛋白还能同多种细胞因子发生反应，影响宿主细胞代谢，直接导致宿主细胞中心体的变化。E7蛋白在HPV的致病性方面发挥重要作用。     

细胞周期调控基因在精子发生中的作用

精子发生是一个特殊的雄性生殖细胞的分化过程，也是一个特殊的细胞周期运行过程。其中，细胞周期相关基因的缺失或过度表达主要影响生殖细胞使其不能发育为成熟精子。本文从细胞周期正、负调控基因和细胞周期的调控途径这三个方面综述了细胞周期调控基因在精子发生过程中的表达和蛋白定位，为深入了解生精过程的分子机制奠定基础。     

HBVx蛋白的生物学功能特点

由ＨＢＶｘ基因编码的ＨＢＶｘ蛋白是一种多功能蛋白,不仅具有广泛的转式激活功能,而且可以通过许多复杂途径参与细胞的凋亡、ＤＮＡ修复的调控,与Ｐ５３的相互作用以及促进细胞周期的进程等,因此ＨＢｘ与病毒本身的复制以及宿主细胞的转录,增生,转化和凋亡有着密切的关系。     

HCMV基因及其产物在感染中的作用

人类巨细胞病毒（HCMV）是人群中普遍存在的病原体，感染率很高。HCMV的毒力较弱，侵入机体后一般不会使器官和组织受到严重损伤，但病毒基因易整合到宿主细胞的相关基因，则可阻止或影响后者的复制和表达，最后导致不可逆的形态和结构的异常，同时HCMV是目前发现的基因组成最复杂的人类病毒，其多种基因产物在感染过程中发挥作用。本文就HCMV基因及其产物对宿主细胞代谢的影响作一综述。     

HCMV IE2蛋白调控功能研究新进展

人巨细胞病毒（ human cytomegalovirus ， HCMV）属于β疱疹病毒亚科，是人类疱疹病毒中最大的一组病毒。在人群中，HCMV感染相当普遍，大多数感染呈临床隐性感染或潜伏感染；但在新生儿、免疫抑制或免疫功能低下的人群中则可引起临床显性感染，出现明显症状，甚至发生致死性疾病。而在孕妇，则可发生垂直传播，导致死胎、畸形以及婴幼儿神经系统发育障碍、智力低下等。 HCMV基因组全长超过240 kb的双链DNA，整个基因组含有250个开放阅读框（ ORF ）。在病毒感染过程中， HCMV基因的表达表现一定的时序性，可分为早早期（ IE ）、早期（ E）和晚期（ L）基因。病毒穿入细胞后， IE基因被宿主细胞因子激活并最早表达，编码两种重要的调控蛋白 IE1（ IE72）和 IE2（ IE86）。其中 IE2（ IE86）蛋白是从 HCMV 基因组的开放阅读框UL122上翻译过来的，是一种重要的反式激活因子并在HCMV感染中发挥了重要作用。已有研究表明，IE2（ IE86）能反式激活细胞周期蛋白cyclinE启动子，并能延缓宿主细胞进入S期［1-2］。近年有资料证实，IE2（ IE86）调节许多与控制细胞周期相关的因子。 IE2（ IE86）是一种重要的病毒蛋白质，而缺少IE2（ IE86）的HCMV子代突变体不能进行复制。下面主要就IE2（ IE86）蛋白对病毒蛋白表达调控的作用作一综述。     

人巨细胞病毒编码US28分子可促进CREB相关转录活性

目的:构建人巨细胞病毒(HCMV)编码的趋化因子受体类似物US28基因真核表达载体并观察其对通用转录因子磷酸化的环单磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)的表达量和相关转录活性的影响.方法:从病毒原液中扩增人巨细胞病毒编码US28基因,构建含US28基因真核表达载体,将该载体与CREB转录活性报告基因和恒定表达的内对照质粒组成的双萤光素酶报告基因系统共转染至HEK293细胞中,Western blot法检测CREB活性形式p-CREB的表达量,并分析US28促使的CREB相关的相对转录活性变化.结果:经PCR鉴定及测序结果证实,所构建的重组载体正确.US28可有效促进p-CREB的表达量与其提升转录的功能活性,揭示了US28与CREB相关转录活性增强的密不可分的关系.结论:人巨细胞病毒可利用宿主通用转录因子CREB增强相关基因转录,从而有可能促进病毒的活化进程.     

人乳头瘤病毒E7蛋白生物活性研究进展

人乳头瘤病毒(HPV)是一种小分子DNA病毒,其早期基因E7编码具有多种生物活性的E7蛋白.E7蛋白与腺病毒EIA及多瘤病毒SV40蛋白有相似的结构,可与pRB、P53反应,改变宿主细胞G1/S期的转化.E7蛋白还能同多种细胞因子发生反应,影响宿主细胞代谢,直接导致宿主细胞中心体的变化.E7蛋白在HPV的致病性方面发挥重要作用.