2011—2017年实验动物遗传质量评价能力验证结果分析

目的 通过分析2011—2017年实验动物遗传质量评价能力验证计划的结果,旨在发现各实验室在实验动物遗传质量评价方面存在的问题,了解我国实验动物质量控制的发展趋势。方法 按照ISO/IEC17043实施6次能力验证计划,统计各实验室检测能力的变化,对所有参加实验室的能力给予评价。结果 全国各实验室累计57次参加了2011—2017年的6次能力验证活动,整体满意率为82.5%。6次能力验证活动的满意率分别为60.0%、80.0%、90.0%、80.0%、90.9%和81.8%,个别实验室出现多次不满意结果。结论 通过开展能力验证活动,全国实验动物检测实验室的检测能力得到提升,为我国实验动物质量检测评价体系的建设提供了重要支撑。     

实验动物能力验证计划肽酶-3检测

目的 通过组织实施能力验证计划，评价实验室的实验动物质量检测能力，提高实验室质量控制水平。方法依据CNAS-CL03能力验证提供者认可准则组织实施能力验证计划，样品通过均匀性和稳定性检验。参加单位在规定时限内提交检测结果和相关原始记录，将实验室结果与标准结果进行对比分析。结果 共有8家实验室参加本次能力验证计划，其中6家实验室提交了满意结果，本次能力验证计划的满意率为75%。结论 实验动物质量控制实验室肽酶-3的整体检测水平较高，少数实验室存在可提升空间。     

实验动物支气管鲍特杆菌检测能力验证结果与分析

目的 开展2017年能力验证活动,评价国内实验动物检测实验室对支气管鲍特杆菌的检测能力。方法 依据CNAS相关文件,中国食品药品检定研究院作为能力验证提供者,制备含有支气管鲍特杆菌及产气巴斯德杆菌和大肠杆菌为干扰菌的比对样品,提供给参加实验室,要求在规定时限内反馈检测结果及报告。结果 所制备三种样品的平均含菌量均大于1×108CFU/mL,37 ℃加速稳定性时间不少于20 d,符合比对要求。全国共有18个省市的25个实验动物检测实验室参加,均按时反馈结果和报告,满意率88%。结论 本次能力验证为实验动物呼吸道细菌比对项目的进一步开展奠定了基础。大部分参加实验室具备一致可靠的支气管鲍特杆菌检测能力。     

氨浓度检测的溯源验证实验

摘要: 目的在采用纳氏试剂比色法进行动物室氨浓度检测时用国家标准物质进行验证,以保证实验室检测结果的准确性。方法取十份样品分别用氨标准样品与实验室配置的氨溶液进行平行实验,同时绘制氨标准曲线进行比对。结果实验室配置的氨溶液标准曲线与氨标准样品标准曲线的偏差为－ 1. 79%。结论氨浓度检测受多种因素影响,为使检测结果准确性和一致性得以保证,应进行实验室验证、校准工作。     

广西环境检测实验室土壤重金属检测能力验证

【目的】了解广西环境检测实验室检测土壤中重金属砷(As)、铅(Pb)、镉(Cd)、汞(Hg)的能力。【方法】采用分割水平对样品进行检测,并利用四分位稳健统计方法对广西33个实验室的检测能力进行评价。【结果】32家实验室完成汞、铅、镉、砷4个项目的检测,1家实验室完成铅、镉2个项目的检测。砷的检测满意率81.3%,铅的检测满意率75.8%,镉的检测满意率66.7%,汞的检测满意率71.9%。32家完成4个检测项目的实验室中有18家检测结果满意,满意率56.25%。【结论】广西环境检测检测实验室具备较好的土壤重金属检测能力。     

微生物能力验证样品制备工艺及水产品企业水平测试结果评价

为了提高舟山市水产品企业实验室微生物检测能力,保证企业自检结果准确可靠,根据舟山市进出口检验检疫工作的特点,选取了水产品中3个常规的微生物检测项目,即菌落总数、副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌检测,采用了真空冷冻干燥技术制备一系列微生物能力验证样品,对舟山市88家水产品企业的实验室进行微生物能力验证。结果表明采用本工艺制备的能力验证样品具有稳定性好、贮存方便、保存期长等优点。从水产品企业微生物水平测试结果来看,菌落总数项目的满意率为81.8%;副溶血弧菌检测的正确率为93.8%,而金黄色葡萄球菌检测的正确率为82.1%。检测结果存在偏差的主要原因是检测中未使用标准菌株进行参照、试剂在使用前无进行质量核查、对某些生化反应判断失误等。     

实验小鼠细小病毒(MMV)抗体的实验室检测能力验证结果评价

目的通过实验小鼠细小病毒(Murine minute virus,MMV)抗体检测能力验证实施计划,了解我国实验动物检测机构的检验能力,促进实验动物质量检测水平的提高。方法按照CNAS批准的能力验证方案,血清经过标定后,经过稳定性和均匀性等检验合格,作为能力验证样本。对血清样本采用随机编号形式发放给能力验证参加单位,并附作业指导书。本次能力验证为定性检测,检测方法采用ELISA方法。要求参加单位在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,满意结果为样品的检测结果与预检结果一致,不满意结果为样品检测结果与预检结果不一致或参加单位未反馈结果。结果样本血清均匀性试验和稳定性试验结果显示,样本均符合能力验证样本均匀性和稳定性要求。本次能力验证共有19个省市的33个实验动物检测机构报名参加。33个检测机构均提交了满意结果,满意度为100%。结论实施此次能力验证计划能够反映我国实验动物检测实验室的检测能力和水平,我国实验动物质量检测机构对实验小鼠细小病毒(MMV)抗体检测的能力较高。     

检测和校准实验室能力认可准则在实验动物检测领域应用说明的详解

摘要: 实验动物检测是中国合格评定国家认可委员会( CNAS) 对实验室的认可领域之一。在该领域,实验动物作为检测对象和实验对象,广泛应用于食品、医药、卫生防疫、生物安全、动物检疫、农业、化工、环境保护等学科。为了进一步规范该领域实验室认可活动的一致性、有效性,CNAS 特制定了检测和校准实验室能力认可准则在实验动物检测领域应用说明( CNAS-CL58) 。本文对该应用说明的相关要求进行了重点解读,包括组织、服务和供应品的采购、记录的控制、管理评审的管理要素和人员、设施和环境条件、方法、检测和校准物品( 样品) 的处置、检测和校准结果质量保证的技术要素。     

实验动物质量检测信息资源的建设与共享

摘要: 实验动物质量检测信息资源共享是我国实验动物管理工作顺应社会信息化潮流的趋势所在。文章在正确认识实验动物质量检测信息资源内涵、具体分析实验动物质量检测信息资源共享现状的基础上,系统论述了实现实验动物质量检测信息资源的共享协调解决机制。     

实验大鼠仙台病毒抗体检测能力验证结果评价

目的了解全国实验动物检测相关实验室在大鼠仙台病毒抗体检测项目上的技术水平,发现并解决检验中存在的问题,促进各实验室加强质量管理,提高检测水平。方法制备标准实验大鼠血清样品,经过标定后分装,按照CNAS的要求进行均一性和稳定性验证,标定好的样品随机编号并随机发放给各参加实验室,每个实验室3个样本,在规定时间内反馈结果,结果以阳性或阴性表示,与预期结果均一致者判为满意结果,不完全一致或逾期未反馈结果者判为不满意。结果来自18个省市自治区的28家单位报名参加本次比对实验,均在规定时间反馈了结果,其中25家单位获得满意结果,占参加比对实验室的89.3%;结果不满意的3家单位,其中1家有1个样品与预期结果不符,另外2家均有2个样品与结果不符。28家单位中有27家采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测,另外1家用免疫荧光法(IFA)检测。反馈的原始记录总体真实可信,个别参加单位存在检测试剂来源不清、操作过程不详及阳性结果未进行复检等问题。结论各实验动物检测机构大鼠仙台病毒总体检测能力较高,本次能力验证计划的实施能够反映实验室的检测水平。     

长爪沙鼠仙台病毒( SeV) 抗体ELISA 检测方法的建立与应用

摘要: 目的建立长爪沙鼠仙台病毒( SeV) 抗体ELISA 检测方法,用于长爪沙鼠体内仙台病毒抗体的检测。方法孵育鸡胚,接种SeV,制备鸡胚尿囊液正常抗原和SeV 特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、精密性、稳定性实验。结果正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0. 1 μg /mL、2 μg /mL 和1∶ 5 000; 正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为9. 6% 和8. 4%,批间平均变异系数分别为9. 0% 和5. 9%; 检测灵敏度为1∶ 10 240; 与沙鼠小鼠肝炎病毒( MHV) 、小鼠肺炎( PVM) 、呼肠孤病毒3 型( Reo3) 均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA 方法特异性、敏感性强,重复性、稳定性好,检测结果,准确、可靠。可用于长爪沙鼠体内SeV 抗体的检测。     

病理学监测在实验动物质量评价中的地位

摘要: 目的从病理学角度评价啮齿类实验动物的健康情况,为实验动物质量评价提供依据。方法采集不同等级啮齿类实验动物的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠和小肠,经10% 中性福尔马林固定液固定,通过石蜡切片、HE 染色、PAS 染色、冰冻切片、油红O 染色后于显微镜下观察。结果虽然被检测动物的微生物学、寄生虫学和遗传学等指标都能达到或符合国家质量标准,但是病理学监测中都能观察到不同程度的组织病理学损伤,主要出现在肝脏、肺脏和肾脏,有时也发生在心脏、消化道和淋巴器官等。结论该结果说明,虽然啮齿类实验动物符合国家微生物学等标准,但仍有部分实验动物处于亚健康状态。病理学监测在实验动物质量评价中有着不可替代的重要作用。相关监管部门应该尽快制定实验动物病理学诊断的国家及地方标准,完善实验动物质量监测体系。     

猫耳部肿瘤病理诊断及分析

摘要: 目的对8 例猫耳部肿物进行病理学诊断和分析,探讨猫耳部肿瘤发生的规律。方法中国农业大学教学动物医院2009 ～ 2015 年进行手术治疗的8 例猫耳部肿物,制成切片,根据病理学观察进行诊断并分析其组织来源、年龄及发生部位的规律。结果猫耳部鳞状细胞癌、耵聍腺瘤/癌和肥大细胞瘤发生比率均各占25%、25%、37. 5%; 猫耳部肿瘤0 ～ 4. 9 岁发生占12. 5%,5 ～ 9. 9 岁占37. 5%,≥10 岁占50%; 肿瘤均发生于外耳,中耳和内耳未见。结论耳部好发鳞状细胞癌、耵聍腺瘤/癌和肥大细胞瘤; 猫耳部肿瘤发病率随年龄增长呈上升趋势,易发生在中老年; 耳部肿瘤易发生在外耳。     

犬耳部肿物病理诊断及分析

摘要: 目的对32 例犬耳部肿物进行病理学诊断和分析,探讨犬耳部肿瘤发生的规律。方法将中国农业大学教学动物医院2009 ～ 2015 年进行过手术治疗的32 例犬耳部肿物,制成切片,根据病理学观察进行诊断并对其组织来源、年龄、发生部位及品种进行分析。结果犬耳部毛母细胞瘤和组织细胞瘤发生比率均各占26. 7%; 犬耳部肿瘤在0 ～ 4. 9 岁个体中发生率占20%,5 ～ 9. 9 岁占40%,≥10 岁占40%; 肿瘤均发生于外耳,中耳和内耳未见; 在品种方面,发生率较高的是可卡犬共8 例,其余品种均为2 ～ 3 例。结论犬耳部好发毛母细胞瘤和组织细胞瘤,且发病率随年龄增长呈上升趋势,但组织细胞瘤例外。耳部肿瘤易发在可卡犬品种,均发生在外耳。     

大鼠经皮电阻试验方法研究

摘要: 目的评价改良的大鼠经皮电阻试验方法的可行性。方法取28 ～ 30 日龄大鼠背部皮肤制成直径约20 mm的皮片,筛选电阻值大于20 kΩ 的皮片用于试验。8 个受试物,每个受试物设3 个平行样,分别取150 μL 样品加至皮片表皮层,作用24 h。然后洗去受试物,测定皮片电阻值,对电阻值≤15 kΩ 的皮片进行罗丹明B 染色、提取、565 nm测定吸光度值,计算皮片染料吸收量,进而判定受试物的腐蚀性。结果与传统动物试验方法结果比较,改良的大鼠经皮电阻试验方法灵敏度为100%、特异度83%、准确度88%,均符合经济合作与发展组织对该方法的要求。结论改良的大鼠经皮电阻试验方法在本实验室是可行的。     

破壁灵芝孢子粉胶囊毒性的实验研究

摘要: 目的观察破壁灵芝孢子粉胶囊毒性。方法( 1) 急性毒性试验: 选用昆明种小鼠20 只,雌雄各半,实验前禁食16 h, 24 h 内灌胃3 次,剂量为15 g /kg BW。灌胃后,连续观察7 d,记录中毒表现及死亡情况。( 2) 30 d 喂养试验: 断乳大鼠,体质量60 g 左右, 80 只,雌雄各半。随机分为4 组,即对照组和高、中、低剂量实验组( 1. 5、0. 75、0. 375 g /kg BW) ,各剂量组在基础粉料中分别掺入1. 5%、0. 75%、0. 375% 的受试物,单笼喂养,自由饮食,记录大鼠进食量、体质量,连续喂养并观察30 d。观察动物的一般表现、体质量、食物利用率,血常规及生化指标: 白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白。结果各剂量组动物体质量、食物利用率与对照组比较差异无显著性( P ＞ 0. 05) 。其血液指标: 白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白; 生化指标: 谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三脂、血糖、总蛋白、白蛋白均在正常值范围; 病理学检查未见有意义的病理变化。该受试物对两种性别小鼠的急性毒性LD50均大于15 g /kg BW。结论破壁灵芝孢子粉胶囊属无毒级。     

实验动物从业人员培训考核系统的应用与推广

摘要: 实验动物从业人员培训考核系统的7 个子系统已经全部建立起来,并在推广中不断完善。其中,实验动物从业人员上岗证考试系统于2014 年4 月份正式在北京地区推广使用,到2015 年6 月底,北京举行99 场考试,参考7 439人,合格人数为6 709 人,合格率95. 35%; 同时,黑龙江、内蒙、天津、辽宁、陕西和四川等地也已组织考试或正在准备采用该系统考试。实验动物从业人员培训考核管理系统的推广和应用,规范了不同省市间实验动物人员培训内容,统一了考核标准,达到了全国实验动物从业人员素质评价的一致性。     

DAP 玻璃化冷冻液对小鼠2-细胞胚胎的冷冻保存

摘要: 目的探索和优化小鼠2-细胞胚胎冷冻效果,建立小鼠胚胎冷冻保存技术以及超低温保存模型动物胚胎实验室所需的相关技术。方法选择3 个品系( C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － ) SPF 级4 周龄雌性小鼠,运用超数排卵、体外受精、玻璃化冷冻法,以及二细胞期胚胎复苏、体外培养等技术方法,观察上述实验效果。结果C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － 3 个品系小鼠超数排卵平均值分别为42. 98 个/只、27. 93 个/只、23. 11 个/只,体外受精2-细胞期胚胎率分别为68. 79%、32. 70%、23. 08 %,胚胎冷冻复苏后胚胎回收率72. 77%、80. 87%、83. 33%,存活率分别为56. 92%、54. 84%、70%,存活胚胎体外培养发育到囊胚比率分别为72. 37%、60. 78%、25%。结论选择4 周龄小鼠,按预定相同的技术方法做超数排卵、体外受精、胚胎冻存、胚胎复苏,呈现出较好效果,C57BL/6 小鼠优于基因工程小鼠,基本建立起小鼠2-细胞胚胎冷冻保存技术。     

显色平板与Baird-Parker平板在金黄色葡萄球菌能力验证中的比较分析

目的:通过参加中日联合微生物检测技能考核(2021年第1回合)项目金黄色葡萄球菌(定量)检验,提高实验室竞争力,比较分析显色平板与Baird-Parker平板菌落计数结果的差异性.方法:采用GB4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》,同时采用显色平板进行计数,对可疑菌落采用全自动微生物菌种鉴定系统进行结果验证.结果:样品21-Q669用Baird-Parker平板计数结果为20 000 CFU/mL,显色平板计数结果为19 000 CFU/mL,经Duncan法单因素方差分析,差异不显著(P＞0.05),反馈结果为满意.结论:显色平板在能力验证中可以进行平板计数,通过参加技能考核,提升了实验室竞争力,可以为能力验证活动及食品中金黄色葡萄球菌检测提供指导.     

野生东方田鼠的实验动物化及标准的建立

摘要: 东方田鼠是重要的实验动物资源之一,本文总结了本实验室过去十几年来对东方田鼠进行的实验动物化工作,包括生物学性状、建群者与群体的有效大小、驯养、驯化( 实验动物化) 及进化动力等方面的研究以及实验动物化结果的评估和地方标准的制定。展望了以新一代基因组测序技术为基础进行的抗性基因的寻找与新品系的精细培育新方法的摸索。