死亡受体的信号传导途径及其调节机制

细胞凋亡是多细胞生物保证个体正常发育成熟和维持正常生理过程所必需的。凋亡细胞表面有特定的感应器即死亡受体 ,死亡受体可以接受胞外的死亡信号而激活细胞内的凋亡机制。本文简要综述了死亡受体的信号传导途径及其调节机制的研究进展。死亡受体 CD95、TNFR1和 DR3的信号传导途径相似 ,均有死亡结构域结合蛋白 FADD和死亡效应蛋白 caspase- 8的参与 ,而 DR4和 DR5的信号传导途径研究得不是十分清楚 ,可能存在FADD依赖性和不依赖性两条不同的信号传导途径     

13-MTD通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的： 探讨侧链饱和脂肪酸13-甲基十四烷酸(13-MTD)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用机制。方法：140 mg/L 13-MTD处理体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞和人乳腺正常细胞,采用流式细胞仪检测技术观察13-MTD对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,免疫印迹法检测13-MTD处理后细胞内c-Jun氨基末端激酶(JNK）,p38, Fas 相关死亡结构域蛋白(FADD)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)等蛋白磷酸化变化。结果：流式细胞仪实验结果显示13-MTD能有效地诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,但不引起正常人乳腺上皮细胞凋亡。免疫印迹检测显示经13-MTD处理后的人乳腺癌MCF-7细胞JNK和p38磷酸化蛋白明显增加,Akt磷酸化蛋白明显减少。结论：13-MTD是一个新的安全高效抗肿瘤药物,其作用机制可能是通过激活MAPK途径和抑制Akt存活途径来诱导肿瘤细胞凋亡。     

Bax基因过表达与A549细胞凋亡的关系

目的 研究bcl-2基因家族促凋亡蛋白Bax在细胞凋亡中的作用，同时评价它作为肿瘤治疗潜在靶基因的可能性。方法 采用一种可诱导性表达的MT-Ⅱ调节系统，在外加锌离子(ZnSO4，100μmol／L)的条件下诱导目的基因表达。快速生长的A549细胞系作为靶细胞，获得表达Bax基因的稳定转染子。结果 Bax基因过表达的细胞显示广泛的细胞死亡。TUNEL实验证实细胞核的碎片化，从而提示这种细胞死亡是凋亡。流式细胞仪显示在诱导后24h，有14．68％的细胞发生凋亡。结论 结果表明这个表达系统能够在体外评价Bax基因的抗肿瘤效果；Bax基因能够诱导A549细胞发生凋亡。因此，Bax基因可能成为肿瘤基因治疗的靶基因。     

免疫细胞死亡受体的信号传导途径及其调节

死亡受体 (DeathReceptor)是肿瘤坏死因子受体(TNFR ,TumorNecrosisFactorReceptor)基因超家族的成员 ,具有富含Cys的胞外结构域[1] 和胞内死亡结构域 (DD ,DeathDomain)。死亡结构域具有诱导细胞凋亡的功能 ,有时也可抑制细胞凋亡或介导其它生物学功能。死亡受体包括 :CD95 (也称Fas或Apol)、TNFR1(也称p5 5或CD12 0a) [1,2 ] 、DR3(DeathReceptor 3) (Apo3,WSL 1,TRAMP ,LARD) [3 ] 、DR4 [4]和DR5 (也称Apo2 R ,TRAIL R2 ,TRICK 2 ,或KILL ER) [5] 、p75神经生长因子受体 (NGFR) [6] 和禽源的CAR1[7] 等。…     

FADD缺失突变重组体转染的人β胰岛细胞株的建立及其生物学特性的研究

目的 建立Fas相关死亡域（FADD）缺失突变体的表达细胞系，阻断Fas死亡信号传导，以便今后更深入的探讨通过基因水平修饰靶细胞，改变靶细胞的反应状态，对移植免疫和自身免疫性疾病的可能的影响。方法 用RT-PCR从感染患者外周血淋巴细胞中获得缺失FADD死亡域目的基因片段（FADDdel)，利用双酶切将FADDdel定向导入真核表达载体pUC-pIC；用电穿孔法将重组子导入人β胰岛细胞株（NIT）中，采用FACS法检测sFasL所引起的转染前后NIT凋亡情况，同时在In-ternet中通过计算机数字化分子模型技术，成功模建FADDdel的3D结构并与FADD的立体结构进行比较与分析。结果 RT-PCR法得到约500bp的目的基因片段，转化子用BglⅡ，XbaⅠ酶切后得到3个特异性片段，经酶切和测序鉴定为FADD缺失突变的重组体（pFADDdel)。将pFADDdel导入NIT后，筛选出高表达细胞系F15，在IFN-γ和TNF-α存在时F15仍能有效拮抗sFasL诱导的凋亡；并对FADD和FADDdel功能结合域和结合位点分析，阐明了FADDdel蛋白质分子在阻断细胞凋亡胞内信号传导通路的分子机制，结论 成功建立了FADDdel稳定表达的人胰岛细胞株：pFADDdel能有效抑制Fas和TNFR1介导的胞内凋亡信号通路；为进一步研究移植免疫和器官特异性自身免疫性疾病的发生机制提供了理论依据。     

FADD研究进展

FADD是Fas系统的一个信号连接蛋白,是死亡受体与胞浆成分之间联系的纽带,可将膜表面受体与胞浆中细胞凋亡的终末酶联接起来,从而向胞内传递凋亡信号,介导细胞凋亡,与多种疾病过程有关。同时,FADD在T细胞增殖中也起一定的作用。现就有关FADD与细胞凋亡、T细胞增殖以及在疾病中作用的研究进展加以综述。     

截短型人凋亡诱导因子AIF1-400对HeLa细胞的促凋亡作用

目的:观察人截短型AIF(AIF△1-400)对HeLa细胞的促凋亡作用。方法:在AIF△1-120基因克隆成功的基础上进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH结合结构域(1～400位氨基酸)编码序列的AIF△1-400基因,将其克隆入pcDNA3真核表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过Western blot检测该基因在转染细胞中的表达通过电镜观察截短型分子对肿瘤细胞的具有促凋亡活性。结果:经酶切鉴定与测序证实,AIF△1-400的真核表达载体构建成功。通过Western blot证实截短型基因在HeLa细胞中表达,电镜观察可见转染细胞骨架的破坏和细胞核固缩等凋亡特征。结论:人截短型AIF(AIF△1-400)基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡。     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人淋巴瘤细胞凋亡的机制

目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时,cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937。采用流式细胞仪、Westernblot、台盼蓝染色及RTPCR等研究其在不同时间条件下诱导U937细胞凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬时转染U937细胞48h,可出现明显的凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin基因的转染时间有关。诱导后24h,U937细胞中出现磷酸化的JNK蛋白的表达,诱导后48h达高峰;而非磷酸化的JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导U937细胞凋亡的作用。JNK信号通路的激活,可能在apoptin基因诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥着重要作用。     

重组Caspase-3基因的构建及其诱导胰腺癌细胞凋亡的观察

通过对Caspase—3(半胱氨酸蛋白酶3)大亚基(LS)，小亚基(SS)的重组，构建重组型Caspase—3基因(r—caspase—3)，并探讨r—Caspase—3基因诱导胰腺癌细胞凋亡的可能性，以寻求肿瘤基因治疗的新途径。采用分子生物学方法克隆Caspase—3的大、小亚基，体外进行重新排列组合，使大、小亚基原来的排序颠倒，构建出pcDNA3．1( )／r—Caspase—3真核表达质粒；利用脂质体瞬时转染人胰腺癌细胞PC—Ⅰ，RT—PCR检测r—Caspase—3mRNA的表达；流式细胞技术(FCM)检测转染胰腺癌细胞凋亡状况。结果显示：Caspase—3的大、小亚基被完整克隆，r—Gas—pase—3基因测序结果证实小亚基位于大亚基之前；RT—PCR扩增出894bp大小片段，流式细胞检测可见明显的凋亡峰出现。以上结果表明，重组r—Caspase—3基因其mRNA可在胰腺癌细胞中表达并自催化诱导细胞凋亡，可作为胰腺癌基因治疗的目的基因。     

FADD、Caspase-3与稽留流产的关系探讨

目的探讨FADD及Caspase-3在稽留流产绒毛滋养细胞中的表达及其关系。方法随机选取早孕稽留流产组35例（实验组）和正常早孕绒毛组30例的绒毛（对照组）检测两组绒毛滋养层细胞FADD和Caspase-3表达。结果FADD和Caspase-3在两组滋养层细胞中均有阳性表达,表达部位均以合体滋养层细胞为主。FADD和Caspase-3在稽留流产组绒毛滋养细胞中表达明显强于对照组,差异有显著性意义（P〈0.01）。结论Fas凋亡途径可能是滋养层细胞凋亡的主要凋亡途径,FADD、Caspase-3是滋养层细胞凋亡中重要的促凋亡因子,滋养层细胞凋亡的增加可能参与了稽留流产的发生。     

PUMA的研究进展

PUMA(p53 up-regulated modulator of apoptosis)是近年发现的可被内外源性p53快速诱导、具有强大促凋亡作用的Bcl-2蛋白家族一员。它通过BH3结构域与其他Bcl-2家族蛋白相互作用,诱导细胞色素c释放,引起凋亡。PUMA引起的凋亡有两种(p53依赖的和p53不依赖的)调控通路,已有研究表明PUMA敲除可显著抑制细胞凋亡。对于该基因的调控机制、作用机制及在肿瘤治疗中的应用等方面的问题,正待深入研究。     

问号钩端螺旋体在体外诱导细胞凋亡及相关信号通路的研究

目的 了解问号钩端螺旋体诱导不同宿主细胞凋亡的作用及相关胞内信号传导通路.方法 建立问号钩体黄疸出血群赖型赖株小鼠单核-巨噬样细胞J774A.1、人脐静脉内皮细胞EVC304和人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549感染模型.采用FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况.分别采用荧光比色法和Western blot检测感染的J774A.1细胞caspase-3,-8,-9活性和凋亡相关蛋白FADD(Fas-associated death domain)表达水平.结果 问号钩体赖株感染1～6 h后,36.70%～63.70%的J774A.1细胞可H{现明显的早期凋亡,感染12 h时转变为晚期凋亡或坏死为主(53.68%).78.52%问号钩体赖株感染的A549细胞仪出现晚期凋亡或坏死.问号钩体赖株感染的EVC304细胞无细胞凋亡或坏死现象.感染的J774A.1细胞caspase-3和-8最大活性分别为(1453.41±36.07)和(1402.15±59.09)Fu,是未感染细胞的16.38和29.99倍.感染的J774A.1细胞caspase-9虽略有升高为(89.42±5.08)Fu,但明显低于caspase-3和-8(P<0.001).随着感染时间的延长,感染的J774A.1细胞FADD蛋白表达量逐步增加.结论 问号钩体诱导宿主细胞凋亡的效应町因细胞种类不同而有明显差异,FADD→caspase-8→caspase-3是介导问号钩体感染J774A.1细胞凋亡的主要信号通路.     

基因转移及其诱导的肿瘤细胞凋亡

凋亡是一种特殊类型的细胞死亡，受某些基因及分子的调控。基因转移可导肿瘤细胞凋亡，根据不同肿瘤基因变异或基因表达的特点，采用不同的目的基因对肿效率细胞进行基因修饰以诱导细胞凋亡的发生可能成为肿瘤免疫基因治疗的有效手段。     

RASSF1A基因甲基化与肿瘤的关系

RASSF1A(Ras association domain family 1 Agene) 是RAS相关结构域家族RASSF1基因的转录本A, 它编码一组RAS效应蛋白,它的启动子高甲基化及其基因外失活已在多种人肿瘤细胞株和原发性癌组织中普遍存在,它在多种恶性肿瘤的发生和诱导细胞凋亡的过程中发挥作用。     

缺氧诱导因子1研究进展

缺氧诱导因子1(HIF-1)在缺氧诱导的哺乳动物细胞中广泛表达,为缺氧应答的全局性调控因子。HIF-1由HIF-1α和HIF-1β两种亚基组成,为异源二聚体转录因子。HIF-1α、HIF-1β和近年来发现的HIF-2α一样均属于bHLH转录因子超家族中的PAS亚族。HIF-1α的bHLH和PAS结构域与二聚化及DNA结合活性有关,TAD结构域则主要参与转录激活。HIF-1α的全长基因已克隆并在人和小鼠中定位。通过作用于靶基因的缺氧反应元件(HRE),HIF-1参与缺氧诱导的一系列基因的表达调控。HIF-1在生物体的氧气供应、细胞代谢、心血管发育以及一系列疾病生理病理中起重要作用,其活性调节存在多种层次。HIF-1/HRE基因选择表达系统已被应用于基因治疗中。     

Toll样受体信号介导细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡在病毒、细菌等感染的过程中和肿瘤等疾病的发生发展中起至关重要的作用。Toll样受体(TLR)存在于巨噬细胞、肿瘤细胞等细胞表面,能直接识别并结合病原微生物和宿主细胞表面的病原相关分子模式,然后通过髓样分化因子88/Fas相关死亡结构域/caspase-8、TIR结构域接头蛋白/蛋白激酶/干扰素调节因子和核因子κB路径等信号途径对巨噬细胞、肿瘤细胞等细胞的凋亡起调节作用。随着对TLR介导的细胞凋亡中Fas相关死亡结构域、TIR结构域接头蛋白等多种信号分子的深入研究,有助于了解它们在细胞凋亡中的作用,并为感染和肿瘤等疾病的分子靶向治疗提供新的目标。     

产单核细胞李斯特菌诱导胸腺细胞凋亡及其基因调控

为研究产单核细胞李斯特菌 (LM )感染对小鼠胸腺细胞凋亡的诱导作用及胸腺细胞凋亡过程中的基因调控 ,小鼠经尾静脉注射LM后 ,以DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪 (FCM )检测细胞凋亡及凋亡细胞的基因产物表达水平。结果表明LM能诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,琼脂糖凝胶电泳分析显示胸腺细胞出现典型的DNA“梯状带” ,FCM分析显示特征性的凋亡峰。胸腺细胞凋亡于LM (5× 10 5CFU )感染后 8h出现 ,48h达高峰。胸腺细胞凋亡百分率随LM感染剂量增加而增高。LM诱导小鼠胸腺细胞凋亡中p5 3、Bax及c myc基因表达产物明显增加 ,而Bcl 2基因表达产物水平无明显改变。提示LM以时间和剂量依赖方式诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,p5 3、Bax及c myc基因在LM诱导小鼠胸腺细胞凋亡的基因调控中起重要作用。     

PUMA的研究进展

PUMA(p53 up-regulated modulator of apoptosis)是近年发现的可被内外源性p53快速诱导、具有强大促凋亡作用的Bcl-2蛋白家族一员。它通过BH3结构域与其他Bcl-2家族蛋白相互作用，诱导细胞色素c释放，引起凋亡。PUMA引起的凋亡有两种(p53依赖的和p53不依赖的)调控通路，已有研究表明PUMA敲除可显著抑制细胞凋亡。对于该基因的调控机制、作用机制及在肿瘤治疗中的应用等方面的问题，正待深入研究。     

MicroRNA-1对肝癌细胞BAG4表达的影响

目的观察microRNA-1(miR-1)对肝癌细胞系Hep3B死亡结构域沉默子(BAG4)的表达及细胞凋亡的影响。方法 Western blot检测肝癌组织中BAG4蛋白表达情况;将过表达miR-1的质粒转染肝癌细胞Hep3B,分别用RT-qPCR及Western blot检测BAG4 mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡;生物信息学软件分析miR-1和BAG4 3’UTR作用关系。结果 BAG4蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织;Hep3B转染miR-1过表达质粒后,相较于阴性对照(NC)组,BAG4mRNA和蛋白水平的表达均有所降低;早期凋亡率明显增高。生物信息学分析提示BAG4是miR-1潜在靶基因。结论 miR-1可以诱导肝癌细胞Hep3B凋亡,其作用可能和抑制BAG4表达有关。     

survivin基因与胶质瘤研究进展

细胞凋亡受多个基因的调控 ,其中抑制凋亡的基因主要包括 bcl- 2基因家族和凋亡抑制蛋白 (IAP)基因家族 ,surv-ivin基因是 IAP家族新成员 ,在各种胶质瘤中高表达 ,并能强烈抑制胶质瘤细胞的凋亡。survivin在胶质瘤中的研究表明它是一种有效的判断胶质瘤患者预后的指标 ,并有望成为胶质瘤基因治疗的新靶点