二苯乙烯苷、远志皂苷元及其合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞作用的比较研究

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)、远志皂苷元(TEN)及二者合用对Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用及相关机制。方法 PC12细胞采用Aβ25-35诱导建立阿尔茨海默病的损伤模型。用析因设计,设立正常组、模型组(20μmol/L Aβ25-35)、TSG组(100μmol/L TSG)、TEN组(50μmol/L TEN)、TSG+TEN组(100μmol/L TSG+50μmol/L TEN),每组分设6个复孔。检测各组细胞存活率、乙酰胆碱酯酶(Ach E)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,统计各组细胞分化率。结果 TSG组、TEN组及TSG+TEN组细胞存活率、SOD活力及细胞分化率均明显高于模型组(P均<0.05),Ach E活力、MDA含量均明显低于模型组(P均<0.05)。且细胞存活率、细胞分化率从高到低依次为TSG+TEN组、TSG组、TEN组(P均<0.05),Ach E活力从低到高依次为TSG+TEN组、TSG组、TEN组(P均<0.05)。TSG组和TSG+TEN组Ach E活力和MDA含量均明显低于TEN组(P均<0.05),SOD活力均明显高于TEN组(P均<0.05),TSG+TEN组SOD活力和MDA含量与TSG组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 TSG与TEN合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞具有明显协同作用,机制可能与明显改善神经胆碱能系统功能、保护神经细胞突触可塑性有关,而与对氧化应激系统的影响关系不显著;TSG对PC12细胞的保护作用优于TEN,机制可能与TSG改善神经胆碱能系统功能、神经细胞抗氧化应激功能及保护神经细胞突触可塑性的作用较TEN显著有关。     

石菖蒲有效成分配伍对Aβ损伤PC12细胞的保护作用

目的观察石菖蒲有效成分β-细辛醚和丁香酚组合对β-淀粉样蛋白毒性损伤PC12细胞的保护作用,探讨中药有效成分配伍的优越性。方法观察给药后PC12细胞形态、细胞存活率、细胞内Ca2 浓度和NO的变化。结果β-细辛醚10μmol/L 丁香酚3μmol/L组合能有效减少细胞内Ca2 浓度,抑制NO的产生,提高细胞存活率。结论石菖蒲有效成分的配伍,能更好地发挥保护PC12细胞免受β淀粉样蛋白毒性损伤的作用。     

知母总皂苷对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用

[目的]探讨知母总皂苷对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的保护作用。[方法]用10～40μMAβ25-35分别刺激PC12细胞48h,MTT法测定细胞活力改变。分组:正常组,模型组,知母保护组。用0.5～40mg/L知母总皂苷和20μMAβ25-35共同作用PC12细胞48h,倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化,MTT测其活力改变。[结果]MTT法显示不同浓度Aβ25-35可引起不同程度凋亡,成剂量依赖关系。不同浓度知母总皂苷保护PC12细胞,可抑制这种凋亡,5～20mg/L效果显著(P<0.01)。[结论]Aβ25-35能诱导PC12细胞凋亡,知母总皂苷对其诱导的细胞凋亡有明显保护作用。     

β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35建造体外PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达的影响。结果 10μmol/L的Aβ25-35与PC12细胞共培养24 h出现明显损伤,细胞活力下降,培养液中LDH含量增多,Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平增高。15 mg/L、30 mg/L、60 mg/Lβ-细辛醚可有效改善Aβ25-35引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少LDH渗漏,明显降低Aβ25-35引起的PC12细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平。结论β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞损伤有保护作用。     

PI3K/Akt通路在芍药苷抗Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的:研究PI3K/Akt通路在芍药苷对PC12细胞神经保护中的作用。方法:芍药苷组(5,10,20μmol·L-1)预处理30 min,然后加入Aβ25-35(20μmol·L-1)共同作用24 h;抑制剂LY294002(10μmol·L-1)于芍药苷(10μmol·L-1)作用前预处理30 min。用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染检测细胞凋亡率,以及Western blot法检测p-Akt,Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3蛋白表达。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,其保护作用可能是通过上调Akt磷酸化水平,增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制caspase-3等的激活而实现的;抑制剂LY294002可减弱上述芍药苷的保护作用。结论:芍药苷可通过激活PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡与线粒体跨膜电位影响

目的探讨白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位的影响。方法 20μmol/LAβ25-35刺激PC12细胞后分别给予160,80,40,20μg/L,CCK-8法检测细胞活力,AnnexinV-FITC流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态,罗丹明染色后测线粒体跨膜电位。结果与模型组比较,白藜芦醇呈剂量依赖性的提高Aβ25-35诱导的PC12细胞存活率和线粒体跨膜电位,降低PC12细胞凋亡率,有统计学差异(P<0.05)。结论白藜芦醇对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡有保护效应。     

β-细辛醚,丁香酚和远志皂苷对Aβ25-35神经细胞毒性的保护作用

目的:优选β-细辛醚,丁香酚和远志皂苷对Aβ25-35诱导的海马神经细胞的保护作用,确定三者最佳配比。方法:采用体外细胞培养的方法,通过NF染色鉴定,建立大鼠海马神经细胞Aβ25-35损伤模型。利用正交实验设计,测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,确定最佳三种药物最佳配比;通过观察细胞形态,利用Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况。结果:L9(34)正交设计实验结果表明β-细辛醚(20,40,80μmol/L),丁香酚(2,4,8μmol/L),远志皂苷(10,20,40μmol/L)合用的最佳优化配比剂量分别为40μmol/L,2μmol/L,20μmol/L,可显著降低Aβ25-35(1μmol/L)诱导的神经细胞凋亡率(P<0.01)和LDH活性,提高细胞相对生存率。结论:三种药物联用可有效保护海马神经细胞免受β淀粉样蛋白的毒性损伤。     

黑逍遥散含药血清对PC12两种AD模型的LDH、T-SOD、MDA的影响

目的 研究黑逍遥散含药血清对Aβ25-35/H2O2分别诱导的PC12细胞模型酶学指标的影响.方法 经体外培养的大鼠肾上腺嗜铬肿瘤细胞(PCl2细胞)分为空白对照组(常规培养液)、Aβ25-35/H2O2损伤组(常规培养液+Aβ25-35或H2O2)、黑逍遥散含药血清组(常规培养液+Aβ25-35或H2O2+不同浓度的黑逍遥散含药血清).MTT检测细胞各组存活率,比色法检测LDH、T-SOD、MDA酶学指标.结果 Aβ25-35/H2 O2损伤组细胞存活率均显著低于空白对照组(P＜0.05),黑逍遥散血清组细胞存活率均高于损伤组,以10％含药血清组最为明显(P＜0.05);黑逍遥散含药血清可提高LDH、T-SOD活性,降低MDA含量,但以10％组最为明显(P＜0.05).结论 在两次实验中,黑逍遥散均能够不同程度的保护PC12细胞,其机制可能和抗氧自由基有关.     

回神颗粒含药脑脊液对Aβ_(25-35)所致PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:观察回神颗粒含药脑脊液对Aβ_(25-35)所致PC12细胞损伤的保护作用。方法:采用PC12细胞建立24 h Aβ_(25-35)所致损伤模型。实验分成6组,即正常组,模型组,回神颗粒含药脑脊液高、中、低剂量组(20%、15%、5%),空白脑脊液组。将各剂量回神颗粒含药脑脊液与20μmol/L Aβ_(25-35)同时加入PC12细胞中培养24 h后,MTT法检测细胞活力。结果:回神颗粒含药脑脊液各剂量组均能显著提高Aβ_(25-35)所致受损PC12细胞的生存率,与模型组比较,差异均有显著意义(P0.05)。结论:回神颗粒含药脑脊液能减轻Aβ_(25-35)所致的PC12细胞损伤,具有细胞保护作用。     

丹参水溶性成分丹参素对A β 25-35损伤的PC12细胞保护作用

目的:研究丹参水溶性成分丹参素对抗Aβ25-35而对PC12细胞的保护作用及其相关作用机制。方法:体外培养PC 12细胞,通过不同剂量Aβ25-35对于PC 12细胞的损伤,CCK8法检测细胞活性,得出20μmol/LAβ25-35作用于PC12细胞24h后作为建立细胞损伤模型,采用40、80、160μmol/L的丹参素对损伤细胞进行干预治疗。分为对照组、模型组、丹参素高、中、低剂量五个组。对LDH、Caspase3、Bcl-2、Bax、TNF-a、NF-κB这几个指标检测。结果:丹参素可以降低LDH、Caspase3、Bax、TNF-a、NF-κB表达,升高Bcl-2表达。结论:丹参素对PC12受Aβ25-35而产生的损伤发挥保护作用,其可能通过抗凋亡途径保护细胞。     

复方益智颗粒对Aβ_(25-35)致PC12细胞损伤的神经保护作用研究

目的:探讨复方益智颗粒对Aβ_(25-35)导致PC12细胞损伤的保护作用,为进一步研究该产品改善阿尔茨海默症记忆功能障碍的作用机制奠定基础。方法:取经不同处理的PC12细胞分为正常对照组、Aβ_(25-35)模型组、Aβ_(25-35)+正常血清组、Aβ_(25-35)+CYZG含药血清组(不同浓度)。正常对照组:DMEM培养基培养48 h,Aβ_(25-35)模型组:DMEM培养基培养24 h后换含20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h,Aβ_(25-35)+正常血清组:正常血清预处理24 h后加入20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h,Aβ_(25-35)+CYZG含药血清组:不同浓度CYZG含药血清预处理24 h后,加入20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h。分别采用MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测PC12神经细胞凋亡情况。结果:Aβ_(25-35)时间依赖性地抑制PC12细胞的生长,不同浓度CYZG含药血清对其造成的细胞损伤有保护作用,随着含药血清剂量的增加,细胞的存活率增加,生长抑制率减少。Aβ_(25-35)能显著引起PC12细胞凋亡,不同浓度CYZG含药血清对其造成的细胞凋亡有抑制作用。结论:复方益智颗粒对Aβ_(25-35)引起的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其神经保护作用可能与抑制Aβ_(25-35)引起的PC12细胞凋亡有关。     

芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究芍药苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:用Aβ25-35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,Annexin-V/PI双染流式细胞计量法检测细胞凋亡,JC-1和Fluo-3荧光探针法分别观察线粒体膜电位和细胞内钙离子变化,Western印迹法检测Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,观察芍药苷对PC12细胞损伤的保护作用。结果:芍药苷可抑制Aβ25-35所诱导的PC12细胞毒性和凋亡,并呈剂量相关性,其保护作用可能是通过提高线粒体膜电位、降低Ca2+浓度;增加Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的激活而实现的。结论:芍药苷对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

姜黄素对Aβ25-35诱导的PC12细胞线粒体内细胞色素C表达的影响

目的:探讨姜黄素对β淀粉样蛋白25-35(β-amyloid protein 25-35,Aβ_(25-35))诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡及线粒体内细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)表达的影响,探讨其抗PC12细胞凋亡的线粒体机制。方法:以Aβ_(25-35)作用于PC12细胞,建立阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)细胞模型,分别以0(空白组),1.25,2.5,5,10,20,40μmol·L-1不同浓度的姜黄素进行处理,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素对细胞存活率的影响。实验随机分为空白组,模型组,姜黄素低、高(10,20μmol·L-1)浓度组,采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测凋亡情况;JC-1染色分析检测线粒体膜电位(Δψm)的变化;免疫荧光分析检测Cyt C的分布;蛋白质印迹法(Western blot)检测线粒体内Cyt C蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组PC12细胞存活率显著降低,凋亡率升高(P0.01);与模型组比较,姜黄素可显著升高PC12细胞存活率,降低凋亡率(P0.01)。与空白组比较,模型组PC12细胞Δψm降低,Cyt C由线粒体释放至胞浆增多,线粒体内Cyt C的表达下调(P0.01);与模型组比较,姜黄素可显著升高PC12细胞Δψm,抑制Cyt C由线粒体释放至胞浆并上调线粒体内Cyt C的表达(P0.05,P0.01)。结论:姜黄素可抑制线粒体凋亡途径,从而抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡。     

茶藨子木层孔菌多糖对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的研究茶藨子木层孔菌多糖(PRG)在阿尔兹海默症病理损伤中的保护作用。方法利用Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,观察PRG的预保护、修复损伤及抑制凋亡作用,MTT法检测细胞存活率,Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率。结果不同浓度PRG对Aβ_(25-35)诱导的神经细胞损伤具有预保护作用,提高存活率,分别为74%(10μg/ml)、81%(50μg/ml)、88%(150μg/ml);不同浓度PRG均能修复细胞损伤,提高存活率,分别为53%(10μg/ml)、55%(50μg/ml)、59%(150μg/ml);不同浓度PRG均能降低Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡,降低凋亡率,分别为28.6%(10μg/ml)、19.3%(50μg/ml)、14.1%(150μg/ml)。结论茶藨子木层孔菌多糖PRG对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

二苯乙烯苷对Aβ25-35致神经干细胞损伤的保护作用

目的:观察不同浓度二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样肽(Aβ25-35,25μmol· L-1)致损伤的神经干细胞(NSCs)生长、增殖及自我更新能力的影响,探讨TSG对Aβ25-35致NSCs损伤的保护作用.方法:从孕14 d昆明小鼠体外提取神经干细胞,以25 μmol·L-1浓度Aβ25-35诱导NSCs建立稳定的AD细胞模型,与不同浓度二苯乙烯苷共同孵育,分为对照组、模型组(Aβ25-3525 μmol· L-1)、TSG 1×10-8mol· L-1+ Aβ25-35组、TSG 1×10-7 mol·L-1+ Aβ25-35组、TSG 1×10-6mol·L-1+ Aβ25-35组,共5组,分别采用EDU化学荧光染色法检测NSCs增殖情况;采用WST-1细胞增殖及细胞毒性检测法检测不同时段NSCs的细胞活性;体外培养7d后通过神经干细胞球计数法观察NSCs的自我更新能力.结果:与模型组相比,二苯乙烯苷各剂量组均能在一定程度上抑制Aβ25-35对NSCs的损伤,细胞生长状态良好,细胞增殖率、细胞活性及神经干细胞球计数与模型组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论:二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导的神经干细胞损伤具有一定保护作用.     

人参皂苷Rgl对Atβ25-35诱导的BT325细胞株脑啡肽酶表达的影响

目的：本研究拟探讨人参皂苷Rgl对Atβ25-35诱导的BT325细胞株脑啡肽酶表达的影响。方法：应用MTT比色法检测一定剂量Atβ25-35(25μmol／L)和不同浓度人参皂苷Rgl(5、10、20μmol／L)对BT325细胞存活率的影响，应用RT-PCR观察细胞中NEP基因表达的变化。结果：25μmol／L的Atβ25-35作用于BT325细胞株，BT325细胞存活率下降，细胞内NEP的表达降低。人参皂苷Rgl能提高Atβ25-35处理的BT325细胞存活率，使细胞内NEP表达增高。结论：一定剂量的Atβ25-35能造成细胞损伤和细胞内NEP表达降低的模型，人参皂苷Rgl对Atβ25-35造成的细胞毒性具有拮抗作用，增高细胞内NEP的表达。     

基于PI3K/AKT/Gsk3β/p53信号通路探究解毒益智方对Aβ25-35诱导PC12细胞神经毒性保护作用机制

目的 基于PI3K/AKT/Gsk3β/p53信号通路探究解毒益智方对β淀粉样蛋白25-35片段（Aβ25-35）诱导肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞神经毒性保护作用机制。方法 Aβ25-35诱导PC12细胞损伤作为阿尔茨海默病（AD）细胞模型,以解毒益智方含药血清作为治疗药物。实验分为空白组、模型组、解毒益智方（低剂量组、中剂量组及高剂量组）。用噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率及毒性;蛋白免疫印记法（Western Blot,WB）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)蛋白及p53蛋白的表达。结果40μmol/L Aβ25-35为阿尔茨海默病最佳诱导浓度;10%解毒益智方大鼠含药血清为最佳干预浓度;与空白组相比,模型组PC12细胞存活率下降,细胞密度较小,无明显触角,形态类似圆形,且PI3K、p-Akt蛋白表达下调及GSK3β、p53蛋白表达上调（P <0.05）;与模型组相比,解毒益智方低、中、高剂量组细胞存活率增多,细胞悬浮死亡现象好转,以高剂量组效果显著;解毒益智方各剂量组PI3K、p-Akt蛋白表达上调及GSK3β、...     

原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

细叶远志皂苷通过Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对氧化应激及炎症因子的影响

目的 探讨细叶远志皂苷（Tenuifolin, Ten）对Aβ_25-35诱导PC12细胞氧化应激及炎症因子的影响。方法 根据前期实验结果,20μM Aβ_25-35作用于PC12细胞,建立细胞损伤模型。40μg/ml TEN予以细胞保护作用。实验分为空白组、模型组、TEN组。试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）表达水平;Western Blot检测白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）蛋白水平。结果 高与空白组比较,SOD、GSH水平下降,MDA水平升高;细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达升高;与模型组比较,TEN能提高SOD、GSH水平,降低MDA水平;降低细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平。结论 TEN能减轻Aβ_25-35诱导PC12细胞的细胞炎性反应及氧化应激,起到细胞保护作用。     

玉郎伞多糖对β淀粉样蛋白所致PC12细胞损伤的影响

目的 探讨玉郎伞多糖(YLSP)对β淀粉样蛋白(β amyloid pepitide,Aβ25-35)损伤大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的保护作用.方法 取对数生长期的PC12细胞分为6组:空白对照组、Aβ25-35模型组、阳性对照药组、不同浓度(0.01,0.1,1.0 μg·ml-1)YLSP处理组,各组按要求处理后收集细胞进行检测.MTT比色法分析细胞存活率,试剂盒检测细胞培养上清液LDH水平,流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位(MMP)水平.结果 MTT显示YLSP处理组细胞存活率明显高于Aβ25-35模型组(P＜0.01);细胞损伤模型组细胞培养液中LDH及细胞内ROS水平均较正常对照组高(P＜0.05或P＜0.01),MMP水平较正常对照组低(P＜0.01),YLSP各剂量组细胞培养液中LDH及细胞内ROS水平均较模型组低(P＜0.05或P＜0.01),MMP水平除低剂量组外,均较模型组高(P＜0.05或P＜0.01).结论 YLSP对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤有保护作用.