四种固定液对肾上腺组织冰冻切片固定效果的比较

目的　以肾上腺组织为例观察比较丙酮、4%多聚甲醛、AAF和95%乙醇四种固定液的固定效果,为临床做出更好的快速冰冻切片,及时、准确的做出病理诊断提供实验基础。 方法　取人正常肾上腺组织,冰冻切片后分别用四种固定液进行固定,然后行HE染色,观察各组的组织结构、细胞核染色、细胞质染色和核质对比度情况。 结果　经冷丙酮固定的肾上腺组织切片,镜下组织结构清晰,高倍镜下观察：细胞核形态清晰完整,核染色和胞质染色清晰对比度好;经4%多聚甲醛固定的切片,镜下组织结构不清,细胞核形态较清晰,核染色和胞质染色对比度差;经AAF液固定的组织切片,镜下组织结构尚清晰,细胞核部分溶解,核染色均一,胞质染色较清晰;经95%乙醇固定的组织,组织结构尚清晰,核溶解普遍,胞质染色不清晰。 结论　四种固定液都可用于固定肾上腺组织及其它细胞成分较多的病理肿瘤组织,但冷丙酮效果最好。     

两种冻存液中海马神经元细胞复苏后生物学特性比较

目的:建立海马神经元适宜的冻存方法.方法:将新生24 h以内的大鼠海马消化成单个细胞后分别直接冻存于血清浓度不同的冻存液中,复苏后进行台盼蓝染色观察细胞活性;培养后观察其生长状态并在第7天固定细胞,分别进行Hoechst,微管蛋白(Tubulin)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)显色后,荧光显微镜下计数海马神经元、胶质细胞的百分率,从而建立最佳冻存方法.结果:冻存于高浓度血清冻存液中的神经元百分率为87.5%,冻存于低浓度血清冻存液中的神经元百分率为73.8%,高浓度血清冻存液中的细胞复苏后的状态及神经元存活率明显优于保存于低浓度血清冻存液中的;而冻存于高低浓度血清冻存液中的胶质细胞百分率分别为9.5%和16.5%,胶质细胞在高浓度血清的相对含量明显低于低血清组.结论:高浓度血清冻存液更利于海马神经细胞冻存后的复苏和生长.     

同时显示大鼠中枢神经系统神经元和神经纤维的全程连续切片方法

目的　探索一种简便易行并能同时显示大鼠中枢神经系统 (CNS)神经元和神经纤维的全程连续切片方法。　方法　经过灌流固定的CNS组织低温冰箱速冻后连续冰冻切片和改良的苏木精染色方法。　结果　大鼠全程CNS连续切片各断面上神经元呈蓝黑色 ,神经纤维呈蓝色 ,背景淡黄色。　结论　运用低温速冻、连续冰冻切片、改良的苏木精染色方法可制作同时显示CNS神经元和神经纤维的全程连续切片。     

地高辛标记的原位缺口平移法

目前已公认细胞死亡时有两种完全不同的细胞形态学变化.细胞坏死时细胞肿胀,胞内物质溢出,导致周围组织发生炎症.细胞正常死亡时细胞收缩,无炎症反应.后一种死亡称为细胞凋亡(Apoptosis)或称为细胞编程死亡(Programmed Cell Death).近年来对细胞凋亡的研究表明,在细胞进行上述死亡过程中,DNA断裂成约核小体长短的片段,本文介绍的原位缺口平移法(in situ nick translation ISNT)就是检测凋亡细胞中的DNA片段,从而在组织原位显示凋亡细胞.1 材料与方法材料为人神经胶质细胞瘤,手术后将瘤组织固定于4%多聚甲醛和0.3%饱和苦味酸混合液中24h,然后浸入20%蔗糖PBS至组织块下沉.恒冷冰冻切片机切片,厚10μm,切片贴于涂有铬明胶的载片上后,37℃烘箱烘烤过夜,然后再于4%多聚甲醛和0.3%饱和苦味酸混合液中12h.ISNT程序:(1)切片预处理:①0.1mol/L Tris-HCl(pH8.0)缓冲液漂洗3次,每次5min.     

三种固定液对Feulgen反应显示DNA的比较

<正>本实验用10%福尔马林(10%FA),FAA液(甲醛、95%酒精、冰醋酸按10:85:4体积比)及Carnoy氏液作为固定液,对一个月SD大鼠睾丸组织(约3mm~2/块)进行固定.制得5μm的切片后,分别用Felugen反应显示DNA和H—E染色法染切片,并对Feulgen染色切片中的糖原细胞用图象分析仪进行DNA定量测定.结果发现:(1)选择60个左右大小、染色深浅均相近的精原细胞进行图象分析,用平均光密度值进行比较.发现Carnoy固定的切片,其均值最大而变异系数(CV)最小;10%FAA固定的居中,FAA固定的切片均值最小而CV最大.在镜下观察中,发现10%FA及FAA液固定后的切片染色均匀而Carnoy所染切片中曲细精管着色深浅不一.所以我们认为,(1)用10%FA作固定液对DNA的定量分析较适合.(2)对细胞核及细胞质的形态而言,经FAA液和Carnoy氏液固定的组织,其染色效果较由10%FA固定的组织好.经 FAA液和Carnoy氏液固定的切片,低倍镜下可见曲精小管管腔内初级精母细胞的丝状染色体及其他细胞的颗粒状染色质,高倍镜下核的结构更加清晰.而经10%FA固定的组织切片,低倍镜下管腔内的各级生精细胞的胞核呈现均匀成片的紫红色,观察不到丝状染色体,高倍镜下仔细分辨,才可隐约见到.但因Carnoy氏液固定的组织块脆性大,不易切片,所以FAA液固定最适于形态观察.     

石蜡切片显示大脑神经细胞方法探讨

以片显示大脑各种神经细胞一般都是用含有重铬酸钾的固定液固定,用硝酸银浸染的方法进行,所以要想制作大批教学标本只能用传统的方法。而大脑神经细胞的特殊染色,只能用火棉胶切片或冰冻切片制作标本,操作步骤复杂、时间长。为此我们对石蜡切片、镀银染色显示大脑神经细胞的方法进行了探讨。本实验选用小白鼠大脑,组织块大小为2×2cm,勿超过3cm;固定后入1%～1.5%硝酸银水溶液浸染5～7天;蒸馏水洗2分钟;用还原液作用24小时;组织块脱水、透明、浸蜡、包埋、切片,因低浓度酒精易使组织块退色,因此组织块经还原后在酒精内的脱水时间一定要精确。…     

靶组织冰冻切片雌激素受体的放射化学测定法

作者介绍的方法具有快速、简易、重复性好等特点。将6μ厚未固定的冰冻组织切片置于用明胶——铬矾包被的盖玻片上,置室温干燥后,用100μlTED缓冲液(含0.1～8.0nM[~3H]-雌二醇,测非特异性结合时再加200倍过量的己烯雌酚)复盖在切片上。分别于4℃、23℃及37℃保温1～20小时。保温结束后,组织切片用TED缓冲液冲洗,再用液闪法直接测定切片结合的受体量。切片同时作组织学染色,并按Lowvy法测定蛋白质含量。Scatchard分析表明,靶组织(牛及大鼠子宫)的冰冻切片的复盖液和冲洗后的切片中均存在高亲和力、低容量的Ⅰ型雌激素结合位点,解离常数为     

显示大脑皮质神经元的银浸改良法

本文以Lindere银浸技术为基础,在方法上进行了改进.改良后的方法,能够同时显示出大脑皮质多种神经元,并可使其胞体、突起、神经纤维以及神经元上的棘状突起显示得清晰可辨.此法特异性强,结果可靠,操作简便.便于观察大脑皮质各层神经元的形态结构、分布以及相互联系,为教学及研究提供一种简便可行的方法.1 材料和方法1.1 取材与固定 采用健康成年Wistar大鼠4只,体重200～250g断头处死,立即取出大脑皮质,固定于10%甲醛钙液或Bouin液中12～16h或者采用4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.2灌注内固定处理12h,然后取出大脑皮质,再固定于上述固定液中4h,制作厚10μm的石蜡切片或厚20μm的冰冻切片.1.2 试剂配制(1)三甲基吡啶缓冲贮存液 取三甲基吡啶6.5ml加大约450ml双蒸水制备0.lmol/L溶液,过滤后,加入足量的10%硝酸溶液,调pH至7.2然后再加入双蒸水至500ml.此液在4℃冰箱中可长期保存.(2)稀释工作缓冲液取8ml三甲基吡啶缓冲贮存液加入92ml双蒸水制备成工     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶(ATPase)和AchE是在科学研究中常用的两种酶,在科学研究中为了同时观察肌肉和神经中两种酶的分布和酶的活性,经实验研究,将两种酶是时显示在一张切片上,收到良好效果,特介绍如下。1　材料和方法1.1　组织的制备,取新鲜的动物肌组织,平铺于滤纸上,用冰冻切片机上,行纵行切片,厚度可切10～30μm,用4%中性甲醛固定保存在0～4℃的冰箱内,时间不宜过长,如固定24～48小时内,仍可收到良好效果。1.2　结合染色程序(1)ATPase显色,将切片放在下列的孵育液内。孵育液为:0.1巴比妥纳20ml,0.1gM氯化钙10ml,双蒸溜水30ml,ATP钠盐152mg。…     

大鼠视网膜标本石蜡切片的固定方法

目的探讨制备大鼠视网膜石蜡切片的固定方法。方法将大鼠眼球固定于4%多聚甲醛(PFA)和不同浓度(1%、5%、10%、20%)甲醇组成的混和固定液中并制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果经4%PFA+不同浓度甲醇固定的眼球外形均无明显变形和收缩。用添加1%和5%甲醇固定液固定的标本未见明显的视网膜脱离,而用添加10%和20%甲醇固定液的眼球的周边部视网膜出现轻度脱离。显微镜下视网膜组织结构完整清晰,各层细胞排列紧密,无明显裂隙,染色鲜艳。相反,采用福尔马林固定的视网膜发生严重脱离。结论 4%PFA+甲醇的固定方法即可保持视网膜结构完整,无脱离,又能提高抗原保存性,效果优于福尔马林固定液,是适合大鼠眼球,尤其是视网膜固定的一种有效方法。     

微波二次固定提高肿瘤组织冰冻切片及苏木素—伊红染色质量的研究

冰冻切片质量的好坏直接关系到能否准确及时地作出病理诊断,以指导手术治疗方式,近年来,国内外学者对如何提高冻冻切片及染色质量做了大量工作,但仍然存在着组织结构被冰晶破坏,对比染色差,细胞核着色不清晰等缺点,我们应用微波加热固定液对组织块进行预固定,切片后再次固定的“二次固定技术”处理肿瘤组织,获得了比单纯脱脂固定切片更好的效果.1 材料与方法1.1 材料 选用我院1994～1995年外科送检需要急诊冰冻的乳腺、胃、肠、卵巢、甲状腺及脑等处的肿瘤组织,取材2cm×1.5cm×0.5cm数块.YWY781A型医用微波炉为浙江临安爱迪电子仪器厂产品,有8个功率选择开关,最大输出功率为500W.1.2 方法(1)将肿瘤组织分为不处理和处理组,处理组分别用生理盐水,10%甲醛和Bouin液在80℃恒温水浴固定5min,用微波2档(输出功率250W)固定1min.(2)将上述肿瘤组织用恒冷切片机切成5μm厚的冰冻切片数张,贴片稍于后分成不固定组和固定组,固定组分别用酒精-冰醋酸-甲醛固定液(AAF).改良的     

小胶质细胞镀银方法介绍

小胶质细胞制片的难度比较大,不易成功;我经过摸索改良,终于取得较好的效果。我所用方法基本上是翻译国外的Hortega方法,但是完全按他的方法做,底色不好,沉淀多,小胶质数量少。经过改良,克服了上述缺点,本文着重介绍改良之处。1.取材:成年兔大脑切2—5mm,室温最好22℃—25℃。2.固定:用福尔马林溴化铵(FAB)固定液固定,4—8天均好,时间愈长效果愈好,可据需要选择。冰冻切片前,将脑组织放入新鲜FAB固定液里,加温至49℃—50℃,保温10分钟,换入蒸馏水,如FAB固定液内冷却效果更好。     

应用Linder银浸改良法显示胃肠内分泌细胞

应用Linder银浸改良法显示胃肠内分泌细胞,并与Grimelius嗜银法和M-H亲银法进行了比较研究.结果表明,Linder银浸改良法显示胃肠内分泌细胞优于Grimelius嗜银法,其所显示的胃肠内分泌细胞的形态及胞质嗜银颗粒清晰可辨,背景浅染,反差明显.此法特异性强,结果可靠,简便省时,不失为神经内分泌细胞研究与教学的一种简便可行的方法.1材料和方法(1)标本制备与处理 采用5～6个月新鲜胎儿与成年大鼠的胃和小肠,分别固定于下述固定液中,10%甲醛钙液、Bouin液、4%多聚甲醛磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH7.2)、Carnoy液和IFAA液.然后,分别制备8μm厚的恒冷箱连续冰冻切片和7μm     

OR-VB显示脂质和弹力纤维的组合染色法及其应用

在实验动物脂质代谢模型的建立中 ,分别对组织的脂质代谢和纤维进行染色与组合对照染色。本实验选用改进的ＯｉｌｒｅｄＯ乙醇饱和液 ,能较好的显示脂质成分 ,Ｖｉｃｔｏｒｉａｂｌｕｅ改造染色液 ,能显示冰冻切片组织中的弹力纤维。经过二种试剂组合染色后 ,能够同时显示血管组织内的脂质和管壁弹力纤维成分 ,色彩鲜艳 ,是较为理想的组合染色方法。1　材料和方法1 1　材料选用　材料来源于本学校实验动物中心的兔脂质代谢模型组织 ,经过 1 5 %中性甲醛固定液 ,能够使组织得到充分的固定[1] ,再进行冰冻切片和染色。1 2　试剂配制　 (1 )…     

改良的Cajal—Faworsky组织块神经浸染法在神经病理切片染色中的应用

改良的Cajal-Fanwersky组织块浸染法(简称C-F法),系作者在神经病理科研过程中,经过多种方法的对比,并进行适当改进而成。此法染色性能稳定,效果较好,尤其在观察连续切片时更为适用。一、材料与方法: (一)试剂配制: 1.冰醋酸酒精固定液: 80%乙醇98ml 冰醋酸2ml 2.氨酒精溶液: 95%乙醇100ml 1～2滴浓氨水3.还原液: 焦性没食子酸2g 中性Formalin 10ml 蒸馏水90ml     

改良快速高尔基法显示少突胶质细胞

我们曾用多种Golgi法试染神经细胞,有时也有较好的星状胶质细胞或少突胶质细胞出现。Vogt(1981)曾指出“用较稀浓度的固定液和浸染液可获得较少的神经元”。在此启示下,我们按照Peters等(1981)报导的Golgi电镜技术中介绍的固定液,并在浸染液和硝酸银的处理方面作了些改良,从而使显示少突胶质细胞取得了较为满意的效果。现将经过改良的方法介绍如下:1.材料:小猫或幼年大鼠或小鼠的大脑皮质、脑干等,材料宜新鲜。2.灌注固定:动物用36％水合氯醛进行腹腔内注射(0.1ml/100g体重)。从左心室心尖区先灌注生理盐水约200ml,再用     

简易骨切片制作法

脱灰骨切片的制作,一般采用火棉胶切片或冰冻切片,用特殊方法染色,在切片制作上都比较麻烦,而骨磨片是将未脱钙的骨,经过仔细研磨制成不染色的较薄磨片,用空气封闭法封片或用特殊染色法染色均能显示骨陷窝及骨小管.这种方法在磨片过程中比较困难,费时费力.作者从以上两种方法得到启发,用脱钙骨切片,并用空气封闭法封片,显示骨陷窝及骨小管,此法操作简便,易掌握,结果优良,与骨磨片相一致.1 材料与方法取人的新鲜肱骨一块,用10%福尔马林固定1周左右,中间换几次固定液,然后锯成1～2mm厚的骨片.流水冲洗24小时,进入100%酒精充分脱脂后,再浸入100%酒精数次,将最后一次酒精倒出50%于水中,与水充分混合,若无脂类悬浮物存在,说明脱脂充分,蒸馏水洗.入下列脱钙液快速脱钙:7.5%硝酸3小时,10%盐酸3小时,5%蚁酸5小时,三氯醋酸3小时     

提高病理冰冻切片质量的体会

目的通过自身的工作体会,探讨提高冰冻切片质量的技巧及方法.方法对乳腺、子宫、甲状腺、胃肠等几种不同组织进行冰冻切片比较、观察.结果切片完整,厚薄均匀,染色核浆对比鲜明,细胞形态及组织结构清晰,符合术中快速冰冻诊断要求.结论一张优质的冰冻切片需要技术员对不同的组织区别对待,从取材、冷冻、切片、固定、染色等环节认真做起.     

胆固醇组织化学方法的改良

Schultz组化方法显示胆固醇对多种组织都是常用的。但按原方法要费时半月,且因要以冰冻切片作捞片,在染色过程中极易使切片破损,对本即松散的组织捞片,甚至可使得染色反应无法进行。我们对此方法做了重要改进,大大缩短了时程(后半月余减至4～5天),并把捞片改为恒冷切片后直接粘贴于载片或盖片上,大大改善了切片在染色过程中的完整性,使松散组织亦可进行染色。现将改良方法简介如下:1.取新鲜材料恒冷切片20μm,直接敷贴于载片上,空气干燥。2.CCF液     

大鼠未固定神经组织DiI荧光示踪方法的研究

目的用DiI荧光示踪剂对大鼠未固定神经组织染色,观察神经组织在冰冻保存条件下DiI的示踪效果,以及扩散距离和扩散时间,从而获得使用DiI示踪未固定神经组织的良好方法。方法大鼠脑和脊髓组织取材,放置在-20℃条件下冰冻,用DiI标准溶液表面涂布小脑皮质或脊髓断端,保持-20℃冰冻,染色达到一定时间后用多聚甲醛固定液固定组织,以阻断DiI的传导,冰冻切片观察。结果大鼠未固定神经组织冰冻后,DiI扩散速度较快,均可见顺向。逆向示踪显示,神经元胞体及突起染色效果良好。结论大鼠未固定神经组织在离体后冰冻保存较用固定液保存,其DiI扩散速度明显加快。