A Novel Reassortant H2N3 Influenza Virus Lsolated from China

Objective To analyze the genetic composition of a novel H2N3 virus isolate identified from a duck cage swab in a live poultry market （LPM） in 2009 in Guangdong province of China. Methods PCR-positive specimens were inoculated into embryonated chicken eggs and subtyped by conventional RT-PCR. All segments of the virus A/environment/Guangdong/2/2009 were sequenced, and phylogenetic trees were constructed and analyzed. Results The genes of this virus belong to Eurasian-lineage avian viruses. The virus is a reassortant with the HA gene from an H2N2 virus and the NA gene from an H5N3 virus. The PB1, PB2, and NP genes were from an H4N6 virus, the PA was from an H3N8 virus, the M gene was from an H1N3 virus, and the NS gene was from an H10N6 virus. Conclusion market. Its A novel avian-origin reassortant H2N3 influenza virus was detected in a live poultry potential impacts and evolution should be closely monitored.     

A Novel Reassortant H3N8 Influenza Virus Isolated from Drinking Water for Duck in a Domestic Duck Farm in Poyang Lake Area

ObjectiveTo conduct a full genome sequence analysis for genetic characterization of an H3N8 influenza virus isolated from drinking water of a domestic duck farm in Poyang Lake area in 2011.MethodsThe virus was cultivated by specific pathogen free (SPF) chicken embryo eggs and was subtyped into hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) by real-time PCR method. Eight gene segments were sequenced and phylogenetic analysis was conducted.ResultsThe NA gene of this virus belongs to North American lineage; other seven genes belong to Eurasian lineage. Compared with the viruses containing NA gene, the PB2 and PB1 gene came from different clades. And this indicates that the virus was a novel reassortant genotype. The HA receptor binding preference was avian-like and the cleavage site sequence showed a low pathogenic feature. There was no drug resistance mutation of M2 protein. The mutations of Asn30Asp, and Thr215Ala of the M1 protein implied the potential of pathogenicity increase in mice.ConclusionThe finding of novel genotype of H3N8 virus in drinking water in this duck farm near Poyang Lake highlighted the importance of strengthening the surveillance of avian influenza in this region, which could contribute to pinpointing the influenza ecological relations among avian, swine, and human.     

常见市售流感病毒抗原试剂对 H6N2 H7N3 H9N2禽流感病毒检测效果的比较

目的：比较4种商品化的甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒对甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒抗原的检测效果。方法：以H6N2、H7N3、H9N2禽流感毒株作为检测毒株,以倍比稀释法将毒液稀释成不同浓度,严格按照试剂盒说明进行操作,观察这4种试剂盒（3种胶体金法和1种免疫渗滤法）对甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒株的检出情况并比较其对毒株的检测下限。结果：4种试剂盒均可检测出甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒抗原,检测下限范围（ log10 TCID50/mL）分别为国产1：1．6～2．4,国产2：3．3～4．1,国产3：3．3～4．1,进口：2．3～2．8。结论：4种试剂盒均可检出甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒抗原;国产1的检测效果较好,操作简便快捷。这些检测试剂都可考虑作为禽流感可疑病例的筛查使用。     

Cross-neutralizing Anti-hemagglutinin Antibodies Isolated from Patients Infected with Avian Influenza A(H5N1) Virus

Objective To recover broad-neutralizing monoclonal antibodies(Bn Abs) from avian influenza A(H5N1)virus infection cases and investigate their genetic and functional features.Methods We screened the Abs repertoires of expanded B cells circulating in the peripheral blood of H5N1 patients.The genetic basis,biological functions,and epitopes of the obtained Bn Abs were assessed and modeled.Results Two Bn Abs,2-12 D5,and 3-37 G7.1,were respectively obtained from two human H5N1 cases on days 12 and 21 after disease onset.Both Abs demonstrated cross-neutralizing and Ab-dependent cellular cytotoxicity(ADCC) activity.Albeit derived from distinct Ab lineages,i.e.,V_H1-69-D2-15-J_H4(2-12D5) and V_H1-2-D3-9-J_H5(3-32 G7.1),the Bn Abs were directed toward CR6261-like epitopes in the HA stem,and HA_2 I45 in the hydrophobic pocket was the critical residue for their binding.Signature motifs for binding with the HA stem,namely,IFY in V_H1-69-encoded Abs and LXYFXW in D3-9-encoded Abs,were also observed in 2-12D5 and 3-32 G7.1,respectively.Conclusions Cross-reactive B cells of different germline origins could be activated and re-circulated by avian influenza virus.The HA stem epitopes targeted by the Bn Abs,and the two Ab-encoding genes usage implied the V_H1-69 and D3-9 are the ideal candidates triggered by influenza virus for vaccine development.     

1999-2007年佛山市流感病毒活动情况及甲3亚型病毒HA1基因分析

目的 总结1999-2007年佛山市流感病毒流行情况,分析甲3亚型(H3N2)毒株流行与其HA1基因进化的关系.方法 用MDCK细胞分离流感病毒,培养后血凝阳性者进行型别鉴定.随机抽取每年2～3株甲3亚型毒株的细胞培养物提取RNA后进行HA1基因的逆转录.对其核苷酸和氨基酸序列及亲缘关系进行分析.结果 甲型和乙型流感病毒在佛山市人群中同时流行.甲型流感毒株是人群感染流感的主要型别.HA1区氨基酸序列与历年的流感疫苗推荐株相比,点突变率为0.3%～6.08%.发生替换的重要位点包括了抗原决定簇的17个位点、抗体结合部位的10个位点和1个糖基化位点.结论 佛山市的甲1和甲3亚型流感毒株活动呈此起彼伏的优势株转换现象.甲3亚型新旧毒株交替迅速,大致按照毒株分离的年代聚类成进化树的不同小侧枝,表明新的流行株出现后可能迅速突破地域局限.提示地区实验室及时监测和研究流感毒株的发生和发展是流感监测网络建设的基础.     

雪貂感染流感病毒H3N2动物模型的建立

目的建立甲型流感病毒H3N2感染的雪貂动物模型。方法按实验要求筛选出流感抗体反应阴性的雪貂,经兽用氯胺酮轻度麻醉后进行滴鼻感染H3N2流感病毒株A/Brisbane/10/07,设立两个稀释度106和107 TCID50,每个稀释度接种3只雪貂,感染后第5天安乐处死。感染前采集鼻甲骨活检,感染后1～5 d鼻甲骨活检检测病毒载量,每天记录雪貂一般临床变化。处死时取雪貂肺、肝、脾、小肠、脑组织作病毒滴度检测,肺组织做病理检查。结果 106和107TCID50的H3N2病毒分别感染雪貂,没有雪貂死亡。雪貂感染后都出现一过性的体温升高,体重的下降,流涕、打喷嚏等症状。在鼻甲骨活检物中可测到病毒载量,肠组织可分离到病毒。肺组织以轻度性间质性肺炎为主要病理变化。结论雪貂感染H3N2病毒株A/Brisbane/10/07后,临床表现、病毒学、分子生物学、病理学方面的检测都可以证实雪貂感染H3N2病毒动物模型已建立,其中106 TCID50病毒滴度的是一个建立感染动物模型比较合适的剂量。     

2009年成都市流感活动情况及H3N2亚型流感病毒HA1基因特性分析

目的 分析2009年成都市流感流行情况,探讨甲3流感病毒(H3N2)亚型分离毒株的流行及HA1基因变异和进化.方法 MDCK细胞对咽拭子样品进行病毒分离鉴定,提取病毒核酸,用RT-PCR法扩增HA1基因,对H3N2分离株核酸及氨基酸序列进行亲缘关系分析.结果 甲型流感H1N1、H3N2、甲1、B型流感病毒分离率分别为2...     

H3N2流感病毒冷适应株的无血清培养

目的：探索无血清培养H3N2流感病毒冷适应株的适宜条件。方法以无血清适应的Vero细胞为介质,对流感病毒冷适应株（H3N2）的培养条件进行优化,以得到较优的基础培养基、pH值、TPCK胰酶添加量及其补加时间、病毒接种量和病毒收获时间。结果 H3N2流感病毒冷适应株能够感染无血清适应的Vero细胞;经过优化,病毒培养液适宜pH为7．15～7．64, BSA和TPCK胰酶添加量均为0．8～1．2μg／ml,细胞培养36h接种病毒,接种量MOI为0．05～0．10,于25℃培养168h收获时病毒效价达最高。结论优化了H3 N2流感病毒冷适应株无血清培养的适宜条件。     

2008年深圳市甲3亚型流感病毒基因特异性分析

目的了解2008年深圳市H3N2亚型流感流行及病毒变异情况。方法用狗肾传代细胞(MDCK)和鸡胚进行流感病毒分离,收获病毒后提取病毒RNA,进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后送大连宝生物公司纯化及测序,测序结果用SIMMONIC软件和MEGA3.1软件进行序列分析。结果深圳2008年流行的H3N2亚型流感病毒血凝素与深圳2007年流行的差异不大,而与同期疫苗毒株A/Wisconsin/67/2005比较有一定的差异,B抗原决定簇上有1个位点发生替换,158位R替换了K;1个糖基化位点增加,在122位氨基酸由D变成了N;与世界卫生组织推荐的2009年流感疫苗毒株比较差异不大。结论深圳市2008年流行的H3N2亚型流感病毒并未形成新的变种,其漂移趋势与世界H3N2亚型流感漂移趋势一致。     

姜黄素体外抗流感病毒H1N1、H3N2实验研究

目的:观察姜黄素提取物体外对流感病毒H1N1、H3N2的抑制作用.方法:用狗肾细胞(MDCK)观察姜黄素体外对A型流感病毒H1N1亚型、A型流感病毒H3N2亚型病毒的直接杀灭作用.结果:姜黄素最大无毒浓度为12.5g/L,对H1N1有效抑制浓度为6.25g/L,对H3N2有效抑制浓度为1.56g/L.结论:姜黄素提取物确有明显的抗H1N1、H3N2复制作用.     

新型甲型H1N1流感研究进展

2009年初全球爆发了新型甲型H1N1流感,而且至今仍在流行.虽然到目前为止该疾病病情温和,但新型甲型H1N1流感病毒传染性强,人群因对这个新型病毒缺乏免疫力而普遍易感,导致疾病在短时间内迅速播散至全球大流行?该流感的命名从发病初期的“猪流感”几经变更,最后确定为新型甲型H1N1流感;人们对该疾病的认识也从发病初期的恐慌到现在的平静甚至平淡地面对.但新型甲型H1N1流感并没有结束,病毒变异的可能性随时存在,本文从这个新型流感的病毒起源、流行病史、传播途径、临床表现、病原学检测、治疗、个人和社区防控措施等方面对本次流感爆发以来的相关研究结果进行了总结,为人们全面认识这次流感的发生发展、正确面对流感的持续流行、科学应用防控措施提供指导。     

H7N9禽流感病毒小鼠感染动物模型的建立

目的 建立H7N9小鼠感染动物模型。方法 1?08,1?07或1?06 TCID50H7N9禽流感病毒原液（A/Anhui/1/2013）滴鼻感染BALB/c小鼠。主要观测指标：临床症状、死亡率、病理变化、病毒载量和血清抗体检测。结果 被感染的小鼠表现为竖毛、弓背、体重下降;病理表现为间质性肺炎,感染后第2天开始在呼吸道脱落细胞中检测到病毒;免疫组化或病毒分离方法在肺、肾、脑、肠、脾等组织检测到病毒;感染后14d在小鼠血清中血凝抑制试验特异性抗体效价达到160;淋巴细胞减少,单核细胞增多。结论 H7N9感染BALB/c小鼠模型与人类禽流感感染疾病的基本特征相似,为研究该病的发病机制及药物疫苗的研发提供了工作基础。     

Characterization of Highly Pathogenic Avian Influenza H5N1 Viruses Isolated from Domestic Poultry in China

正The highly pathogenic avian influenza(HPAI)H5N1 virus has caused several outbreaks in domestic poultry.Despite great efforts to control the spread of this virus,it continues to evolve and poses a substantial threat to public health because     

甲型H1N1流感病毒的分子特征

当前新型甲型H1N1流感病毒的暴发,引起全球的关注。本文对甲型H1N1流感病毒的分类地位、结构特征、基因复制、蛋白功能进行介绍,说明新型甲型H1N1流感病毒是甲型流感病毒通过抗原漂移和抗原转换所产生的,对奥塞米韦(达菲)敏感,但对金刚烷胺有抗药性。     

甲型H1N1流感二例报告并文献复习

目的提高对甲型H1N1流感的认识以及探讨中西医结合治疗的疗效。方法结合2例甲型H1N1流感患者的临床资料进行文献复习,并对甲型H1N1流感并发白细胞变化、肝肾功能异常进行分析。结果2例患者入院前均有发热症状,体温38.0℃以上,2次鼻咽拭子甲型H1N1流感病毒逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）核酸检测均为阳性,诊断为甲型H1N1流感。入院后给予盐酸奥司他韦抗病毒治疗,以及中药和对症治疗。体温正常第4天,完成5d的抗病毒疗程后第1天和第2天开始出现甲型H1N1流感病毒核酸检测阴性。治疗过程中均有白细胞异常、淋巴细胞的变化和肾功能异常。甲型H1N1流感病毒核酸检测阳性持续5-7d从发病到恢复。结论甲型H1N1流感并发症较轻,中西医结合治疗效果明显。     

A型流感病毒株A/Henan/703/2001(H3N2)核蛋白部分序列的原核表达

目的构建A型流感病毒核蛋白（NP）基因部分序列的原核表达质粒。并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白。方法采用PCB方法扩增NP基因部分序列,并定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中。转化大肠杆菌BL21．将阳性菌落经IPTG诱导目的基因融合蛋白的表达。结果扩增到NP基因部分序列,构建成重组表达质粒pGEX—S NP,并在大肠杆菌中进行了表达。结论成功构建A型流感病毒NP部分基因序列的原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了目的基因融合蛋白。     

季节性流感病毒H1N1实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种快速定量检测季节性流感病毒H1N1核酸的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒。方法选择季节性流感病毒H1N1的保守基因NP基因作为检测靶目标,应用Clustal W软件进行序列同源性比对分析,筛选出季节性流感病毒H1N1特异性的保守序列作为引物候选区域,然后应用Primer Express及PrimerPremier 5.0软件包对候选引物进行进一步配对及筛选,得到最优特异性检测引物。同时,由病毒全长cDNA扩增出NP基因,琼脂糖凝胶电泳检测NP基因的扩增情况并对目的条带进行切胶回收及纯化,对回收后的NP全长基因进行核酸浓度测定,并换算成拷贝数,作为定量标准品。结果应用ABI公司的Power SYBR Green PCR MasterMix及StepOne实时荧光定量PCR仪,该检测系统灵敏度可达102 copies/μL,不同梯度标准品间线性关系(R2)达0.999,斜率为-0.3433,扩增效率为95.572%,所有标准品均在83.2℃出现尖且窄的特异性熔解峰。结论利用该检测系统可以快速定量检测季节性流感病毒H1N1,灵敏度高,可用作基础及临床实验室对季节性流感病毒H1N1感染的辅助诊断方法和临床效果的监测手段,对实验操作者要求相对较低,具有实际的应用价值。     

Replication and Pathology of Duck Influenza Virus Subtype H9N2 in Chukar

正To investigate the susceptibility of Chukars to duck avian influenza virus H9N2 and explore their role in interspecies transmission of influenza viruses.Chukars were inoculated with duck avian influenza viruses H9N2.The present study     

A（H3N2)亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法的建立

［摘要］目的　建立A（H3N2）亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法．方法 由NCBI获取的6株流感疫苗株及2012年～2015年本实验室分离的17株,共计23条A（H3N2）亚型毒株NA基因全序列．根据序列比对结果,特异性设计针对R292K和N294S突变位点的TaqMan-MGB探针及引物进行3重realtime RT-PCR检测方法．使用倍比稀释的方法检测其敏感性．并利用临床标本,其他亚型流感及其他常见呼吸道病毒验证该方法的特异性． 结果　设计的TaqMan-MGB探针可以检测到107（1000 copies）稀释度的对应模板,使用其他亚型流感病毒与常见呼吸道病毒验证该引物无交叉反应．通过对57份日常监测分离毒株进行检测,未发现耐药位点突变株． 结论　建立了A（H3N2）亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法;验证了该引物探针具有较高的敏感性与特异性,具有实际应用潜力．     

甲型H1N1流感病毒感染小鼠的发病机制

目的 甲型H1N1 流感病毒A/California/7/2009感染BALB/c小鼠,研究甲型H1N1流感病毒病毒性肺炎发病机制.方法 4～6 周龄雌性BALB/c 小鼠60只,随机分为2组,实验组和对照组,每组30只.CA7 流感病毒滴鼻制备甲流病毒感染小鼠模型.攻毒后第5天解剖实验和对照组小鼠,取肺组织,测定肺组织中IL-2,IL-6,TNF-α含量.结果 结果实验组肺组织中IL-6,TNF-α,水平明显高于对照组,IL-2水平明显低于对照组,差异均有显著性(P<0.05).结论 IL-6、TNF-α、IL-2这3种细胞因子在感染甲流病毒后的显著性变化与病毒感染后的肺组织病理损伤有密切的关系.