二步酶解法制备鱼鳞明胶抗氧化肽及其抗氧化活性研究

通过碱性蛋白酶进行第一步酶解,胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶分别进行第二步酶解制备鱼鳞明胶抗氧化肽。结果表明,二步酶解法能有效提高酶解物的水解度,降低水解物的分子量,碱性蛋白酶—胰蛋白酶水解物具有显著的自由基清除能力和Fe~(2+)螯合能力。通过响应面优化的胰蛋白酶最佳二步酶解工艺为:底物浓度100 mg/mL、pH 7.8、温度53℃、时间50min,该条件下制备的水解物的Fe~(2+)螯合率为65.72%,清除DPPH·、·OH和O_2~-·的IC_(50)值分别是7.39,0.68,1.84mg/mL。     

贻贝中ACE抑制活性肽的酶解制备及表征

以贻贝为原料,制备具有血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)抑制作用的活性肽.采用水解度DH、蛋白质回收率及ACE抑制活性为指标,筛选水解贻贝粗蛋白的最适酶种;通过响应面分析(RSM)对水解贻贝粗蛋白的工艺条件进行优化;探讨水解度(DH)与ACE抑制活性的关系;利用HPLC方法分析活性肤的相对分子质量分布.试验结果表明碱性蛋白酶Alcalase 2.4 L是水解贻贝粗蛋白的最适酶种;碱性蛋白酶在[E]/[S]1.64、pH 9.12、温度57 ℃水解条件下,酶解物的ACE抑制作用最强,其DH26.41%,IC50 34.64g/mL.就贻贝粗蛋白的水解而言,控制水解度为25%～30%为宜.碱性蛋白酶水解贻贝粗蛋白所得活性肤,主要是以相对分子质量较小的短肽组成,其中,相对分子质量在1 000 Da以内的占90.42%.本研究结果表明以贻贝为原料,可以开发具有显著ACE抑制活性的降血压肤.     

利用牡蛎制备ACE抑制肽的工艺优化

运用正交试验和响应面法优化牡蛎血管紧张素转换酶(angiotensin-Ⅰconverting enzyme,ACE)抑制肽的分步酶解制备工艺。采用复合蛋白酶和碱性蛋白酶对牡蛎进行分步酶解,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析和ACE抑制率为考核指标优化工艺参数。结果表明,第1步复合蛋白酶最佳工艺参数为:料液比1∶4、加酶量1.2%、pH 7.0、反应温度50℃、酶解时间1 h;第2步碱性蛋白酶最佳工艺参数为:加酶量0.42%、pH 8.3、反应温度53℃、酶解时间73 min。凝胶过滤色谱法测得牡蛎酶解液分子质量在3 000 D以下小肽所占比例为99.72%,其ACE抑制活性IC50为0.8 mg/mL。同时,氨基酸组成分析表明,牡蛎肽中Glu含量最高,Cys含量最低;必需氨基酸和疏水性氨基酸含量分别占总氨基酸的36.6%和37.2%。本研究制备的低分子质量、高ACE抑制活性牡蛎肽,可为牡蛎资源的开发利用提供理论参考。     

鱼鳞血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的制备工艺研究

采用酶法酶解鱼鳞制备血管紧张素转化酶（angiotensin-I converting enzyme,ACE）抑制肽。以鱼鳞水解度、相对分子质量分布、游离氨基酸含量以及ACE抑制活性为指标,从五种蛋白酶中选取来源于枯草芽孢杆菌的中性蛋白酶作为水解鱼鳞制备ACE抑制肽的最适酶种。经Box-Behnken响应面分析法得到其最佳酶解工艺条件为:pH6.4,温度50℃,加酶量（[E]/[S]）5%,底物浓度（[S]）5%（w/v）,水解3h。在此条件下得到的水解度为19.26%。酶解产物富含脯氨酸和甘氨酸,其次是丙氨酸,缺乏色氨酸。疏水性氨基酸约占总氨基酸的28%,相对分子质量主要分布在80⁸00之间,约为2⁶个氨基酸的寡肽。      

富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的酶解工艺优化及活性研究

以富硒辣木叶为原料提取富硒辣木叶蛋白,通过单因素实验和响应面优化富硒辣木叶蛋白血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的制备工艺,并对最优酶解物的ACE抑制活性、氨基酸组成和硒含量进行分析表征。结果表明,富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的最佳酶解条件为时间3 h,pH7.5、酶底比0.23%、底物浓度5.97%、温度39.2℃。该条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制活性较强(IC50=0.522 mg/mL),富含必需氨基酸(24.05%)和疏水性氨基酸(20.6%),其硒含量是辣木叶原料中硒含量的1.86倍。富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽具有功能因子和天然食物的双重特性,此研究可为降血压药物及相关功能性食品的开发提供理论依据。     

富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的酶解工艺优化及活性研究

以富硒辣木叶为原料提取富硒辣木叶蛋白,通过单因素实验和响应面优化富硒辣木叶蛋白血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的制备工艺,并对最优酶解物的ACE抑制活性、氨基酸组成和硒含量进行分析表征.结果表明,富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的最佳酶解条件为时间3 h,pH7.5、酶底比0.23％、底物浓度5.97％、温度39.2℃.该条...     

基于体外模拟消化的糖基化草鱼鱼鳞明胶抗氧化性研究

以糖基化反应后的草鱼鱼鳞明胶为原料,通过模拟体外消化实验,研究糖基化鱼鳞明胶消化后多肽的抗氧化活性。结果表明,在胃部模拟消化过程中,随着糖基化反应时间的延长,DPPH·、·OH的清除能力先增强后减弱,而Fe~(2+)螯合能力先减弱后增强。在胃肠道消化过程中,DPPH·清除能力不断增强至稳定,糖基化产物的·OH清除能力均小于未糖基化的鱼鳞明胶,而Fe~(2+)螯合能力未发生发生明显变化。随着糖基化反应时间的延长,糖基化反应程度逐渐增加,且糖基化反应会降低鱼鳞明胶在胃肠道中的消化特性,并影响其消化产物的抗氧化性。     

三斑海马蛋白肽ACE抑制活性的研究

本文通过三斑海马酶解液的制备、ACE抑制活性肽的分离和体外消化模型的建立研究了三斑海马蛋白肽的ACE抑制活性。利用碱性蛋白酶制备得到具有ACE抑制活性的三斑海马酶解液,经葡聚糖凝胶层析分离纯化后,得到具有较高ACE抑制活性的组分(其IC50为0.91 mg/m L);通过对该组分的氨基酸组成和体外消化模型分析,发现该组分中疏水性氨基酸的含量为50.48%,消化酶作用后,显著提高ACE抑制活性,经判断,该组分中的蛋白肽为前体型抑制剂。      

分步酶解法制备菜籽肽及其分子量分布与抑制ACE活性关系研究

选取胰蛋白酶和Flavourzyme风味蛋白酶,采用超声波辅助分步酶解法制备菜籽肽;测试不同条件下的水解度、混合肽分子量分布和ACE活性抑制率。结果显示随着酶解液的水解度提高,混合肽中小分子量(3ku以下)的可溶性肽含量不断提高,ACE活性抑制率也不断升高,也说明使用该方法制备的菜籽肽具有ACE活性抑制作用。同时,这一结果有助于菜籽蛋白的开发将更加广泛。     

棉籽蛋白ACE抑制肽的酶法制备及其体外稳定性研究

食源性血管紧张素转化酶(angiotensin-I-converting enzyme, ACE)抑制肽因安全、无副作用、易吸收等优点,对防治高血压、提高居民健康水平具有重要作用。利用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶水解棉籽蛋白制备ACE抑制肽,通过单因素实验优化水解条件,分离纯化水解物并鉴定其活性肽段组成,评价水解物的体外消化吸收稳定性。结果表明,棉籽蛋白经复合蛋白酶(1500U/g)在pH值为8.0和55℃下水解5h,蛋白回收率为39.8%,ACE抑制率可达93.7%。棉籽蛋白复合蛋白酶水解物经分离得到5个组分,其中组分4(F4)的ACE抑制活性最高(IC₅₀=220.1μg/mL)。从该组分中发现3条新型ACE抑制肽:VFNNNPQE、LLSQTPRY和VFPGCPET,其中LLSQTPRY的活性最高(IC₅₀=105.2μmol/L)。经人工胃肠液消化和Caco-2细胞单层膜吸收后,棉籽蛋白复合蛋白酶水解物仍具有一定ACE抑制活性,分别为53.8%和20.5%。研究结果表明,棉籽蛋白的复合蛋白酶水解物有望作为一种功能性食品配料,用于开发降压食品。     

Optimization of Hydrolysis Conditions for the Production of Antioxidant Peptides from Fish Gelatin Using Response Surface Methodology

Abstract: Fish skin gelatin was hydrolyzed with papain to produce antioxidant peptides. Response surface methodology (RSM) was applied to optimize the hydrolysis conditions (including enzyme to substrate ratio [E/S], hydrolysis time, and temperature). The highest degree of hydrolysis (DH) (50.1 ± 1.1%) was obtained at an E/S of 2% at 56.8 °C, 2.11 h, and was not significantly different from the predicted values within a 95% confidence interval. The highest 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) (96.8 ± 0.9%) and 2,2′-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS^•+) (9.80 ± 0.11 mM Trolox [6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethychroman-2-carboxylic acid]) radical-scavenging activities of fish gelatin hydrolyzates were obtained at an E/S of 3% at 52.1 °C, 2.65 h, and both DPPH and ABTS^•+ radical-scavenging activities were not significantly different from the predicted values 97.3% and 9.86 mM Trolox within the 95% confidence interval. Therefore, RSM is an efficient way to optimize fish gelatin hydrolysation and the resultant hydrolyzates show promise as antioxidant peptides. Practical Application: There is a growing interest in the use of fish gelatin as an alternative to mammalian gelatin. One potential use is as a source of widely acceptable functional compounds. In this study, a search for antioxidant peptides from fish gelatin prepared by an enzymatic method has been successfully done. This suggests that this is a practical way to obtain bioactive peptides.     

鱼皮明胶的制备、特性及应用

由于传统哺乳动物明胶带来的传染病问题以及穆斯林、犹太等特定消费者的需求,鱼明胶受到了很大的关注。本文叙述了鱼皮明胶的制备方法,并在分析其结构的基础上,论述了鱼皮明胶的胶凝特性、成膜性和感官特性,同时对鱼皮明胶在食品中的应用作了简单介绍。     

双酶法制备沙丁鱼ACE抑制肽的工艺研究

本实验以广东大宗低值沙丁鱼为原料,采用不同蛋白酶降解沙丁鱼以筛选合适的酶组合,然后对原料的酶解制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺进行研究。结果表明,制备沙丁鱼ACE抑制肽的酶组合为:木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶;酶解的最佳工艺参数为:第一步采用木瓜蛋白酶进行酶解,酶解温度70℃、p H7.5、反应时间2.25 h、酶添加量4000 U/g、料液比30%(w/v);采用碱性蛋白酶进行第二步酶解,酶解温度70℃、p H10.0、反应时间2.0 h、酶添加量5000 U/g。通过工艺优化,沙丁鱼蛋白质的水解度提高到28.44%,并且最终水解蛋白肽的ACE抑制率为73.44%。      

响应面试验优化双酶酶解法制备鱼鳞抗菌肽工艺及其抑菌性能分析

采用双酶酶解法制备鱼鳞抗菌肽,进行酶筛选并通过响应面法优化酶解条件;通过葡聚糖凝胶G-25分离纯化酶解液,研究有效抑菌组分对不同菌的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）。结果表明,当采用碱性蛋白酶结合酸性蛋白酶分步酶解鱼鳞,底物质量浓度为30?g/100?mL时,最适酶解条件为碱性蛋白酶在pH?9.5时首次酶解,酶解时间62?min,酶解温度55?℃;酸性蛋白酶在pH?3.0时再次酶解,酶解时间3?h,酶解温度34.4?℃。此条件下制备的酶解液对副溶血性弧菌的抑菌圈直径为27.72?mm,与预测值基本相符。酶解液经层析后,其抑菌性G2组分对假单胞菌和希瓦氏菌的MIC为1.56?μg/mL,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门菌及副溶血性弧菌的MIC为6.25?μg/mL。可见,双酶酶解法制备的鱼鳞抗菌肽具有较强的抑菌性。     

鱼鳞明胶与哺乳动物明胶性质的比较

研究了酶法制备的草鱼鱼鳞明胶的理化性质,并将其与哺乳动物明胶的性质作了比较。研究发现,草鱼鱼鳞明胶中富含甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸和丙氨酸,而亚氨基酸、总疏水性氨基酸的含量以及平均疏水性值要小于哺乳动物明胶;分子质量分布主要以α组分和β组分为主,占明胶分子总量的88%;胶凝温度和熔化温度分别为20.8℃和26.9℃,低于哺乳动物明胶;特性黏度约为0.73;表面疏水性指数为259.59,有较好的乳化性和起泡性。此外发现,明胶的高凝胶强度和胶凝速度主要取决于明胶(α+β)组分的含量,而明胶胶凝和熔化温度则主要取决于亚氨基酸的含量,不同来源明胶的特性黏度η仅与其α组分(α1+α2)的含量存在线性相关。     

秋刀鱼抗氧化肽制备及其抗氧化活性的研究

本文选择胰酶对秋刀鱼蛋白进行酶解,以蛋白质利用率和氧化自由基吸收能力(ORAC值)为指标,运用响应面分析法优化秋刀鱼蛋白制备抗氧化肽的酶解工艺,并且对酶解产物的特性进行了研究。结果表明:最优酶解条件为加酶量1085 U/g蛋白,水料比3:1,酶解时间8 h时,此时蛋白质利用率和ORAC值分别为76.86%和883.40μmol Trolox equivalent/g。秋刀鱼酶解产物的总氨基酸含量为4576.69 mg/100 mL,其中游离氨基酸和肽态氨基酸分别占34.28%和65.31%;总氨基酸中必需氨基酸占34.76%,抗氧化活性氨基酸和支链氨基酸占26.25%,说明秋刀鱼酶解产物具有较高的营养价值。秋刀鱼酶解产物中相对分子质量在1000~3000 Da之间的组分最多,占44.18%。秋刀鱼酶解产物清除DPPH·的IC50值为3.32 mg/mL,清除O2-·的IC50值为5.08 mg/mL,当秋刀鱼酶解产物的蛋白浓度为10 mg/mL时,其吸光值为0.67,说明秋刀鱼酶解产物具有较高的抗氧化活性。     

Influence of Transglutaminase-Induced Cross-Linking on Properties of Fish Gelatin Films

ABSTRACT:  Fish gelatin (FG) is a potential alternative to current mammalian (beef and pork) gelatin. However, its physical and thermal properties limit its use in many applications. The treatment of microbial transglutaminase (MTGase) on FG could be a practical way to increase the use of FG films in various applications. Physical properties, barrier properties, and molecular weight change of FG films were measured. The viscosity of the MTGase-treated FG solution significantly ( P < 0.05) increased from 6.81 ± 0.65 cP to 35.04 ± 3.59 cP as the reaction time and concentration of MTGase increased. After employing 2% of MTGase into FG solution, the tensile strength increased from 48.03 ± 5.45 MPa to 68.00 ± 1.9 MPa, while percent elongation decreased from 13.1%± 2.90% to 1.47%± 0.05%. Oxygen barrier property was significantly ( P < 0.05) increased from 7.24 ± 1.48 cc·m/m²·d to 17.69 ± 3.08 cc·m/m²·d, while water vapor permeability was not statistically ( P < 0.05) different. The melting temperature ( T _m) measured by differential scanning calorimetry increased from 124.78 ± 1.98 °C to 158.49 ± 2.68 °C as the enzyme reaction time increased. The color values of L *, a *, and b * were changed from 95.56 ± 0.09 to 95.50 ± 0.06, from −0.17 ± 0.01 to −0.23 ± 0.00, and from 3.17 ± 0.04 to 3.47 ± 0.09, respectively. The opacity significantly ( P < 0.05) increased from 1.43%± 0.32% to 2.87%± 0.06%. SDS-PAGE results showed that the molecular weight of fish gelatin films increased when the MTGase reaction takes place.     

基于鱼鳞贮藏方式改善鳙鱼鱼鳞明胶的功能特性

鱼鳞的贮藏方式会影响鱼鳞明胶的品质,本实验研究了太阳晒干后室温贮藏、4 ℃贮藏、－20 ℃贮藏和 60 ℃热风干燥后室温贮藏对鳙鱼鱼鳞明胶凝胶强度、乳化活性和起泡能力的影响,并通过傅里叶变换红外光谱、 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和扫描电子显微镜表征经不同方式贮藏后制备得到的鱼鳞明胶的结构特性。 结果表明：4 种贮藏方式不会破坏明胶的分子质量分布（α链、β链和高分子聚合物）和傅里叶变换红外光谱的特征 性吸收峰（酰胺A带、酰胺I带、酰胺II带和酰胺III带）。4 种贮藏方式都能提升鱼鳞明胶的乳化活性和起泡能力, 其中,－20 ℃贮藏鱼鳞1 个月改善明胶乳化活性和起泡能力的效果最佳。除60 ℃热风干燥之外,其他贮藏方式均 能改善鱼鳞明胶的凝胶强度,这可能与其相应的结构特征变化有关。相比新鲜鱼鳞和60 ℃热风干燥鱼鳞,太阳晒 干和低温方式（4 ℃和－20 ℃）贮藏鱼鳞使得鱼鳞明胶α链、β链和高分子聚合物含量增加,酰胺A带吸收峰的波数 降低,鱼鳞明胶网络结构的致密性增加。     

鱼鳞明胶的提胶工艺

根据单因素试验结果,利用正交试验,考察了提胶温度、pH值和时间对鱼鳞明胶品质的影响。并得到提胶条件为:提胶温度为55℃,pH值为6,时间为5h。在该条件下明胶的提取率达到58%,6.67%的明胶溶液在60℃时的黏度为8.16mPa·s,7℃下保温18h后凝胶强度为1 202.65g,约290Bloom,凝胶温度和熔化温度分别为20.8℃,26.9℃,等电点约为pH 7,可达到高品质明胶的要求。