血管紧张素II及其受体在血管平滑肌细胞迁移中的作用

目的:探讨血管紧张素II(AngII)及其受体(ATRs)在局部血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用及其机制。方法:以体外培养VSMC为基础,采用细胞化学和改良Boyden'schamber的方法,观察AngⅡ干预VSMC后AngII受体的表达、VSMC迁移能力的变化、肌动蛋白纤维丝的动态组装变化,并探讨AT₁R拮抗剂、AT₂R拮抗剂对上述观测指标的影响。结果:AngII10^-7mol/L可以刺激VSMC发生迁移,该作用是通过影响VSMC内应力纤维动态组装而实现的;AngII干预VSMC后可使AT₁R表达上调,随着作用时间延长AT₁R表达水平下降。AT₁R拮抗剂可下调AT₁R表达。AngII通过AT₁R的介导发挥其影响VSMC迁移能力的生物学效应。AT₂R对此无明显影响。结论:AngII通过AT₁R介导来调节VSMC内肌动蛋白微丝的动态组装,进而改变VSMC的迁移能力,从而发挥其介导VSMC迁移的生物学效应。     

内源性血管紧张素Ⅱ对大鼠血管钙化的作用

目的:在大鼠血管钙化模型上观察内源性血管紧张素II(AngⅡ)对大鼠血管钙化的影响。方法:用VitD₃皮下注射和尼古丁灌胃诱导大鼠血管钙化模型。测定血管组织中钙含量、[⁴⁵Ca²⁺]聚集及碱性磷酸酶活性作为观察钙化的指标。结果:钙化血管组织中钙含量,[⁴⁵Ca²⁺]摄入及碱性磷酸酶活性分别高于对照组。血管组织中的血管紧张素原mRNA、血浆和血管AngⅡ含量均高于对照组水平。血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利和AngⅡ受体AT₁阻断剂洛沙坦处理的大鼠血管内钙含量、[⁴⁵Ca²⁺]聚集及碱性磷酸酶活性显著低于单纯钙化组。卡托普利处理的钙化大鼠血浆和动脉中AngⅡ含量、动脉中血管紧张素原mRNA的含量也显著低于钙化组水平。结论:钙化大鼠血浆和血管组织中AngⅡ水平上调,卡托普利和洛沙坦可减轻大鼠血管钙化程度。     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌血小板源生长因子

目的:观察血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌血小板源生长因子(PDGF)受体β亚单位的调节,探讨两条信号转导途径的交互作用在血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的意义。方法:制备两肾一夹肾性高血压大鼠模型,免疫印迹法检测主动脉组织PDGF受体β亚单位的含量。培养大鼠主动脉VSMC,观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对PDGF受体β亚单位的影响。结果:两肾一夹大鼠术后8周动脉血压明显增高,同时主动脉PDGF受体β亚单位的表达高于对照组126.6%(P＜0.05)。AngⅡ刺激培养的VSMC可导致PDGF受体β亚单位上调192.74%(P＜0.01),该效应可被Ⅰ型AngⅡ受体(AT₁)的拮抗剂losartan和磷脂酶C(phospholipasec,PLC)的抑制剂U73122完全阻断(P＜0.01),但仅被丝裂原活化蛋白激酶激酶抑制剂PD98059部分阻断(P＜0.01)。结论:AngⅡ可以通过AT₁及下游的信号分子PLC上调PDGF受体β亚单位的表达,而细胞外信号调节激酶可能参与AngⅡ的胞内信号转导。     

S-亚硝基谷胱甘肽对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增生的影响

目的：探讨脂溶性NO前体药物S-亚硝基谷胱甘肽（GSNO）对血管紧张素-Ⅱ（AT-Ⅱ）诱导的培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,用同位素掺入法测定其增殖率的变化,观察不同浓度AT-Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖的影响以及不同浓度的GSNO对AT-Ⅱ作用的预防和逆转作用。结果：AT-Ⅱ可以使血管平滑肌细胞的吸光度A值（MTT法测定）、[³H]-胸腺嘧啶核苷（[³H]-TdR）的掺入量、细胞数量明显高于对照组（P<0.05）。而用GSNO干预后,与对照组相比AT-Ⅱ的上述作用被明显抑制（P<0.05）。结论：GSNO可以抑制AT-Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

抑制一氧化氮合酶对大鼠主动脉血管紧张素Ⅱ受体的影响

目的:本文应用NO合酶(NOS)竞争性抑制剂左旋硝基精氨酸(L-NNA)诱导大鼠高血压,观察对主动脉血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和AngⅡ受体的影响。方法:采用腹腔注射L-NNA复制大鼠高血压模型,分别用放射免疫法测定主动脉AngⅡ、放射配基结合法测定主动脉组织AngⅡ受体和Griess法测定血浆NOx含量。结果:L-NNA使大鼠血压明显高于对照组(+142%,P＜0.01),4周组心系数高128%(P＜0.01),血浆NOx水平低于对照组48%,血浆AngⅡ水平无明显差异;血管组织AngⅡ含量4周组显著高612%(P＜0.01),且4周组[¹²⁵I]-AngⅡ最大结合能力(Bmax)高6倍(P＜0.01),亲和力(Kd)高1倍(P＜0.01)。结论:抑制NOS诱导高血压主要是通过局部组织肾素-血管紧张素系统(RAS)发挥作用的,长期慢性抑制NOS可使血管组织AngⅡ水平升高并导致血管AngⅡ受体上调,此结果为"NOS抑制诱发AngⅡ依赖型高血压"假说提供新的依据。     

培养的大鼠血管平滑肌细胞中bFGF基因表达与血管紧张素Ⅱ释放的相互关系

采用Northern杂交检测培养的自发性高血压人鼠（SHR）和正常血压WKY大鼠的血管平滑肌细胞（VSMC）中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因表达，用紫外法和放免法分别测定培养液中血管紧张素转换酶（ACE）活性和血管紧张素Ⅱ（Aug11）含量。发现AugⅡ能明显促进VSMC中bFGF基因表达，而bFGF则能明显诱导ACE活性和提高AugⅡ释放，臣SHRVSMC的bFGF基因表达、ACE活性和AugⅡ释放均显著高于WKY大鼠。结果提示，VSMC中bFGF基因表达和AugⅡ释放间存在相互促进的正反馈联系。     

培养的大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体的基因表达及调节

在培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和正常血压ＷＫＹ大鼠的主动动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）模型，应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，分别检测ＡＳＭＣ中碱性成纤维细胞生长因子（ｈＦＧＦ）和血管紧张素Ⅱ（ＡＮＧⅡ）Ｉ型受体（ＡＴ１Ｒ）的基因表达。结果表明：ＳＨＲＡＳＭＣ中ｈＦＧＦ基因的基础表达和ＡＮＧⅡ刺激后的表达水平元旦明显高于ＷＫＹ大鼠；ｂＦＧＦ（１０ｎｍ／ｍｌ）对两种     

内皮素和血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞分裂的促进作用

血管平滑肌细胞(SMC)的增生、肥厚是高血压的一个重要致病因素,但其机制尚不清楚。本工作选用自发性高血压大鼠(SHR)和其对照大鼠(WKY)培养的SMC,以细胞计数和[~3H]-Thymidine参入为指标,观察到内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)以剂量依赖方式刺激SMC的增殖和细胞内DNA合成,但其效应在SHR SMC更明显;心钠素(ANF)可显著抑制上述效应。SHR SMC对ET和ANGⅡ促分裂作用的反应性增强以及ANF对其抑制效应提示,ET和ANGⅡ的促血管壁增生作用在高血压的发生发展中起着重要作用,ANF可能具有机体内源性抗高血压因子的作用,抑制和缓解高血压的发生发展。     

Losartan对神经肽Y诱导血管平滑肌

目的:观察神经肽Y(NPY)与血管紧张素受体拮抗剂losartan对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)中PCNA、PDGF、c-myc癌基因表达的影响,从分子生物学的角度探讨NPY在高血压、动脉粥样硬化发生中的作用和losartan的逆转作用。方法:应用荧光免疫组化定量技术(ACAS570共聚焦激光扫描显微细胞仪)。结果:NPY刺激VSMC增殖,使其PCNA、PDGF和c-myc癌基因的表达明显高于对照组;losartan则可逆转NPY对VSMC增殖的刺激作用,使PCNA、PDGF和c-myc癌基因表达的平均荧光值降低。结论:NPY促进VSMC的增殖,其作用与高血压的发生有关;而losartan对高血压的治疗作用可能与拮抗NPY对VSMC增殖的刺激作用有关。     

Caveolin-1在内皮素-1诱导血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 探讨caveolin-1蛋白在VSMC的分布、在ET-1诱导的VSMC增殖中表达的变化情况。方法: 在培养的VSMC上,使用 TdR掺入法观察ET-1和BQ123对其DNA合成的影响;用荧光免疫组化方法观察caveolin-1蛋白在VSMC的分布,ET-1对caveolin-1蛋白表达的影响;用Western blot检测ET-1和BQ123对caveolin-1蛋白表达的影响。结果: ET-1可以呈浓度梯度地刺激VSMC的增殖,ETAR特异性阻断剂BQ123可以抑制ET-1的作用;免疫荧光证实了在VSMC上,caveolin-1分布于细胞表面,在ET-1刺激增殖过程中,VSMC上caveolin-1蛋白荧光强度下降;Western blot证实ET-1可以抑制caveolin-1蛋白的表达。结论: 在VSMC上,caveolin-1主要分布于细胞表面,在ET-1刺激增殖过程中,caveolin-1蛋白表达发生了变化,ET-1可通过ETAR抑制caveolin-1蛋白的表达。     

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:研究金属硫蛋白(MT)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法:以[³H]-TdR掺入法测定VSMCs增殖程度,免疫沉淀法测定VSMCs内丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性,[¹⁰⁹Cd]-血红蛋白饱和法测定MT含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,NADH氧化法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:Hcy(10^-6-10^-4mmol/L)呈浓度依赖性的刺激培养大鼠VSMCs[³H]-TdR掺入,0.1mmol/LHcy刺激[³H]-TdR掺入比对照组高4.2倍(P＜0.01)。Hcy亦呈浓度依赖性地激活VSMCsMAPK活性、增加细胞MDA的生成和LDH的漏出(P均<0.01)。单独MT孵育,对VSMCs的上述指标均无明显影响(P＞0.05)。但MT(10^-6-10^-4mol/L)呈浓度依赖性抑制100μmol/LHcy的促增殖效应(r=0.98,P＜0.01)。MT显著抑制Hcy对VSMCs的MAPK活性、MDA生成和LDH漏出的激活作用(均P＜0.01)。以0.5mmol/LZnCl₂预孵育6h后,VSMCsMT含量比非诱导细胞高5.7倍(P＜0.01),这种内源性MT高表达的细胞,显著抵抗Hcy刺激的-TdR掺入和MAPK激活;抑制Hcy的促细胞MDA生成与LDH漏出效应(均P＜0.01)。结论:MT能有效抑制Hcy促大鼠VMSCs增殖作用,其机制可能与MT拮抗Hcy对MAPK的激活和其抗氧化作用有关。     

血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂抑制动脉损伤后中膜平滑肌细胞血小板源性生长因子的表达及细胞迁徙

目的： 研究球囊导管损伤后早期血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1）拮抗剂对损伤后大鼠动脉中膜平滑肌细胞血小板源性生长因子（PDGF）的表达及细胞迁徙影响。方法： 12周雄性Wistar大鼠颈动脉用球囊导管损伤，分成实验组和对照组，分别于术前2 d给予血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂CV-11974（5 mg·kg-1·d-1）和溶剂，术后2 d、3 d、5 d和14 d处死。用原位杂交、免疫组织化学和病理组织学进行研究。结果： 实验组术后第2 d、3 d和5 d中膜平滑肌细胞PDGF-A mRNA和PDGF-A、PDGF B、PDGF-α（R）、β（R）阳性细胞率以及迁徙率明显低于对照组（P<0.01）。实验组的中膜平滑肌细胞表型处于收缩型。结论： 血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂明显抑制损伤后动脉中膜平滑肌PDGF及其受体的表达和平滑肌迁徙。     

硫化氢对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨硫化氢(H₂S)对内皮素-1(ET-1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法:体外培养雄性SD大鼠主动脉VSMC, 将细胞分成对照组、血清组、内皮素组、NaHS组、血清+NaHS组和内皮素+NaHS组进行研究, 以不同浓度梯度NaHS处理VSMC, 观察对VSMC[³H]-TdR掺入和MAPK活性的影响。结果:加入5×10^-5-5×10^-4mol/LNaHS可明显浓度依赖性地抑制由内皮素诱导的VSMC增殖, 其[³H]-TdR掺入量减低, 抑制率分别为16.8%-37.4%(P＜0.01), 其MAPK活性明显减低, 抑制率为7.4%-33.6%(P＜0.05或P＜0.01)。结论:H₂S对内皮素诱导的VSMC增殖有抑制作用, 同时使MAPK活性下调。推测H₂S对VSMC增殖的抑制效应可能由MAPK信号途径所介导。     

转录调节因子Ets-1在大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡中的作用

目的： 研究转录调节因子Ets-1对大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响及其可能的机制。 方法： 用定量细胞DNA片段的方法观察大鼠血管平滑肌细胞增殖与凋亡。用Western印迹法检测磷酸化视网膜母细胞瘤（RB-P）蛋白表达。 结果： Ets-1抑制大鼠血管平滑肌细胞凋亡。反义P21WAF1/CIP1能够阻断Ets-1的抗凋亡作用，并抑制Ets-1诱导的平滑肌细胞增殖。Ets-1能够上调RB-P蛋白表达，反义P21WAF1/CIP1可以阻断Ets-1诱导的RB-P蛋白表达。 结论： 在大鼠血管平滑肌细胞中，Ets-1通过P21WAF1/CIP1旁路发挥抑制凋亡和促进增殖作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对人脑动静脉畸形血管平滑肌细胞增殖和表达骨桥蛋白的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养的人脑动静脉畸形（CAVM）血管平滑肌细胞（VSMC）增殖和表达骨桥蛋白的影响。方法： 应用胶原酶消化法培养人CAVM的VSMC，MTT法检测VSMC的增殖，免疫印迹法检测VSMC骨桥蛋白的表达。结果：bFGF作用于VSMC后，细胞增殖活性明显增加。实验组骨桥蛋白的表达显著高于对照组 (P<0.05)。结论： 体外条件下，bFGF可以刺激CAVM的VSMC增殖，并能促进其表达骨桥蛋白。     

重组人IL-10抑制TNF-α和PDGF-BB所致大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察重组人白介素10(rhIL-10)对SD大鼠血管平滑肌细胞及血管损伤后新生内膜增殖的影响。方法:培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态,应用流式细胞术测定细胞周期。利用大鼠血管损伤模型,观察rhIL-10对新生内膜增殖的影响。结果:与对照组相比,rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响(P>0.05)。rhIL-10可抑制在TNF-α和血小板源性生长因子分别刺激下的血管平滑肌细胞的生长(P<0.05)。流式细胞术测定的结果显示rhIL-10分别可以使TNF-α和PDGF-BB作用下的VSMC大部分处于G₀/G₁期,与对照组相比有明显差异(P<0.01)。大鼠颈动脉损伤后,rhIL-10治疗组的动脉血管新生内膜/中层面积比低于对照组约45%(P<0.01)。结论:抗炎细胞因子rhIL-10可抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

抑制大鼠动脉损伤后早期中膜平滑肌细胞增殖可降低内膜肥厚

目的:探讨早期中膜平滑肌细胞增殖与内膜肥厚的关系。方法:球囊导管损伤大鼠动脉后,在不同时期投予血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)(temocapril-HCl,10mg·kg^-1·d^-1),观察平滑肌细胞BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶尿苷)标记率和内膜面积。结果:损伤后动脉中膜平滑肌BrdU阳性细胞出现于术后24h,BrdU标记率呈双峰期变化,第1期在1-3d,峰值在2d为5.3%,第2期在3-7d,峰值在5d为2.7%。在第1个增殖期投予temocapril显著抑制第2个增殖期的BrdU标记率(0.05±0.02)%,对照组为(4.50±0.27)%(P＜0.01),同时也显著抑制了术后10d内膜面积的增加(10670.1μm²±7713.3μm²)(P＜0.01)。而仅在第2个增殖期投药,则不能抑制内膜面积的增加(83499.5μm²±31360.0μm²)(P＞0.05),其程度与未投药组相当。结论:球囊导管损伤后动脉中膜平滑肌细胞第1个增殖期是内膜形成所必需的。