细胞外钙调素与细胞增殖的调控

０引言钙调素（ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）作为一种耐热的脑环核苷酸磷酸二酯酶的激活剂,于１９７０年分别被Ｃｈｅｕｎｇ（张槐耀）和Ｋａｃｈｉｕｃｈｉ发现。１９７３年Ｔｅｏ和Ｗａｎｇ阐述了激活机制。随后Ｂｒｏｓｔｒｏｍ等发现该蛋白激活脑腺苷酸环化酶,Ｌ...     

重组人钙调素对细胞增殖作用的研究

目的：搪塞外源性重组人钙调素对细胞的增殖作用。方法将ＳＰ２／０细胞接种于２４孔或９６孔培养板,加入不同浓度ｒｈＣａＭ、ＣａＭ拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）或兔抗ＣａＭγ（ＲＡＣａＭ）培养４８ｈ后,用显微计数法和ＭＴＴ比色法检测细胞增殖状况。结果：外源性ｒｈＣａＭdisplay structure     

重组人钙调素对白芷细胞增殖及结核杆菌生长的影响

目的 :探讨重组人钙调素 ( rh Ca M)对白芷悬浮细胞及结核杆菌增殖作用的影响。　方法 :用基因重组技术获得人钙调素基因 ( h Ca M c DNA)重组表达质粒 h Ca M / p BV2 2 0 ,将其转化大肠杆菌 DH5α。用 Phenyl-Sepharose CL -4 B疏水亲和层析法纯化重组菌超声上清表达产物。将纯化 rh Ca M加入悬浮培养的白芷细胞及结核杆菌培养基中 ,观察 rh Ca M对其增殖作用的影响。　结果 :含 h Ca M / p BV2 2 0的重组菌经温度诱导可高效表达Ca M蛋白 ,经 15 % SDS-PAGE分析 ,可观察到一相对分子质量为 170 0 0的表达条带 ,Western blot结果证实 ,此表达条带可与标准鼠抗 Ca M Mc Ab起特异反应。每 1L菌液经 Phenyl-Sepharose CL -4 B疏水亲和层析法纯化可获Ca M纯品 3～ 4mg。rh Ca M对白芷细胞增殖作用影响的研究结果表明 ,rh Ca M在低细胞密度培养条件下对白芷细胞有促进增殖作用 ,效果高于标准植物 Ca M。本研究同时还发现一定浓度的纯化 rh Ca M( 1、10μg/ ml)可促进牛型结核杆菌的生长。　结论 :rh Ca M对植物细胞和细菌均有细胞外促增殖作用     

血小板衍生生长因子诱导人血管平滑肌细胞增殖时钙调素的变化

目的:观察血小板衍生生长因子(PDGF)对培养的人血管平滑肌细胞增殖及钙调素含量变化的作用.方法:应用3H-TdR掺入法和磷酸二酯酶法,观察不同浓度(1、10、20、30、40 ng/ml)PDGF-BB对培养的人血管平滑肌细胞DNA合成和钙调素含量变化的影响及其时间效应.结果:不同浓度PDGF-BB作用后,处于静止状态的人血管平滑肌细胞DNA的合成增加,并呈现明显的浓度依赖关系,在40 ng/ml浓度时DNA的合成达到高峰(P＜0.01).平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后,细胞内钙调素含量逐渐增加,在9 h时出现一个短暂的高峰,随后逐渐下降;不同浓度PDGF-BB作用后,钙调素含量增加,并呈现出明显的浓度依赖关系,30 ng/ml浓度时作用最为显著(P＜0.01).结论:PDGF可促进培养的人血管平滑肌细胞增殖,该作用可能与增加钙调素含量有关.     

钙调素的分子识别研究进展

钙调素 (CaM ) ,作为细胞内Ca2 信号传导途径中的主要信号转导分子 ,普遍存在于真核细胞中 ,介导调控由Ca2 引起的一系列生理生化反应 ,参与并调节细胞的增生、分化、运动等基本代谢过程。对CaM的结构及分子识别机制的研究 ,有助于更好地理解细胞信号传导、蛋白质相互作用的分子机制 ,对新药开发和临床治疗具有重要的指导意义。本文作者就近几年来有关CaM结构及分子识别机制的研究现状作一概述。     

胆囊癌细胞增殖与凋亡分子机制的研究进展

胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤 ,约占全部胆道恶性肿瘤的 64 .7%。我国的胆囊癌发生率在消化系统肿瘤中占第 6位 ,仅次于胃癌、大肠癌、食管癌、肝癌和胰腺癌。胆囊癌在临床上却并不十分常见 ,约占全部癌肿的 0 .8%～ 1 .2 % ,故对于胆囊癌细胞的增殖与凋亡分子机制的研究相对较少。但胆囊癌的预后一般不良 ,因此对于其细胞增殖与凋亡方面机制的研究尤为重要。近年来该方面的研究已取得了一定的进展 ,本文就此内容进行综述 ,以供参考。1　胆囊癌的细胞周期及其调控目前认为 ,细胞周期控制系统由细胞周期素(cyclin)、细胞周期素依赖激酶 …     

异搏定对小鼠肝癌腹水瘤细胞钙调素含量的影响

小鼠肝癌腹水瘤细胞ＨＣａ／Ａ２－Ｐ用含用不含异博定的培养基体外培养９６ｈ,利用钙调素对环核苷酸磷酸二酯酶的激活作用测定胞液钙调素含量,用药组钙调素平均浓度为１９．１μｇ／ｍｇ蛋白（ｎ１＝６）,对照组为２５．６μｇ／ｍｇ蛋白（ｎ２＝６）,用药组胞液钙调素含量明显降低（Ｐ〈０．００５）,提示屏搏定可能通过影响Ｃａ＾２＋／钙调素信号途径来影响此肿瘤细胞的生理过程。     

人钙调素基因表达研究及应用

主要获得以下成果：1．用基因重组技术在大肠杆菌DH5α中高效表达并纯化重组人钙调素(rhCaM)蛋白。2．将纯化的rhCaM加到体外培养的Sp2／0、K562、人脐静脉内皮细胞及白芷等细胞中进行培养。结果表明，外源性rhCaM在一定浓度范围内能促进上述细胞的增生。     

癲痫钙调素的研究进展

钙调素(CaM)是70年代末期发现的存在于细胞内的具有重要生理功能的钙离子(Ca~(2 ))受体。人类中枢神经系统尤其是大脑皮质内,CaM含量极高。研究发现,中枢神经系统内,CaM不但调节环磷酸腺苷/环磷酸鸟苷(cAMP/cGMP)的作用,而且和其一道共同参与调节神经细胞兴奋性、神经递质的合成和释放等一系列与癫痫发病密切相关的生理过程。     

穿心莲内酯对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨穿心莲内酯(Andro)对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖及细胞周期的影响,为其应用于乳腺癌的治疗提供理论基础.方法 将实验分为对照组及Andro组,Andro组加入终浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L的Andro[Andro粉末先用DMSO溶解,再用培养基稀释至细胞处理浓度,控制DMSO的含量为0.1%(v/v)],对照组仅用0.1%DMSO溶剂.采用CCK8检测Andro不同浓度及不同处理时间(24、48、72 h)对MCF-7细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测两组细胞周期分布情况;应用预胶化淀粉细胞块制作方法 ,将两组细胞制作成石蜡切片,应用免疫组织化学方法 检测切片中MCF-7细胞增殖相关的核抗原Ki67及细胞周期相关抗原周期素D1(Cyclin D1)及周期素依赖性激酶4(CDK4)的表达.结果 CCK8检测结果 显示Andro浓度为10、20、40、60、80、100μmol/L显著抑制MCF-7细胞的增殖,IC50值为25μmol/L,并且在IC50浓度下24、48、72 h Andro均显著抑制MCF-7细胞的增殖,并随着作用时间的延长,抑制作用越明显.细胞周期检测结果 Andro处理后G0/G1期细胞数量达(75.51±1.56)%,与对照组(49.16±1.35)%比较,显著升高(P<0.05),而S期的细胞数量仅为(12.69±0.87)%,与对照组(44.07±0.98)%比较,显著降低(P<0.05).细胞块免疫组织化学结果 显示对照组与Andro组Ki67的表达分别为(91.77±2.75)%、(78.05±2.61)%,显著降低(P<0.05),Cyclin D1的IOD值分别为(2.14±0.17)×107、(1.27±0.22)×107,显著降低(P<0.05),CDK4的IOD值分别为(1.14±0.014)×107、(1.16±0.024)×107,无明显差异.结论 Andro可通过抑制MCF-7细胞的增殖及抑制Cyclin D1的表达从而阻断MCF-7细胞的细胞周期进程从而发挥抗肿瘤作用,Andro不能通过影响CDK4的表达发挥阻断MCF-7细胞周期.     

钙调素拮抗对贮脂细胞胶原合成的影响

为探讨ＣａＭ在ＦＳＣ胶原合成和基因表达过程中的作用，并导找防治肝纤维化的新方法，本文应用＾Ｈ３－Ｐｒｏｌｉｎｅ掺入法观察了ＣＡ（Ｗ－７和ＡＣＮＳ２５μｍｏｌ／Ｌ）对ＦＳＣ细胞胶原代谢的影响；进一步应用斑点杂交结合图象分析的方法，对ＣＡ在胶原基因表达中的作用进行了半定量分析。实验发现，ＣＡ可以抑制ＦＳＣ胶原的合成和胶原基因的表达（方差分析，Ｐ〈０．０５）。结果表明ＣａＭ参与ＦＳＣ胶原代谢的调节，应用     

钙调素拮抗剂对大鼠蓄积和排泄镉的影响

用低剂量对ＳＤ大鼠连续染毒７天，并用钙调素拮抗剂氯丙嗪进行防护性干预在染毒第４天时，防护组动物尿ＮＡＧ明显低于单纯镉染毒组；第７天时防护组的尿镉含量显著高于单纯镉染毒组，血镉水平则明显降低；停止染毒后第３周时，防护级肾皮内镉的蓄积亦显著减少，电镜下观察到肾皮质的超微结构受到氯丙嗪的保护。氯丙嗪对镉引起的肾皮质ＣａＭ含量降低有轻度保护作用。提示，钙调素拮抗剂对镉中毒机体有一定的保护作用，镉对机体的损     

大黄素对人结肠癌Lovo细胞增殖周期影响的实验研究

目的 观察大黄素对人结肠癌Lovo细胞增殖及周期的影响.方法 采用MTT法检测大黄素不同浓度梯度(20、40、80 μmol/L)和时间梯度(12、24、48 h)处理后Lovo细胞的增殖活力;采用流式细胞仪检测Lovo细胞周期变化.结果 大黄素对Lovo细胞的增殖抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性,流式细胞仪分析发现在大黄素作用下Lovo细胞被阻滞于G0/G1期,阻止细胞进入S期,并成剂量依赖性.结论大黄素对结肠癌Lovo细胞增殖具有显著的抑制作用;且使Lovo细胞增殖周期停滞于G0/G1期,而阻止其进入S期,具有良好的结肠癌临床应用前景.     

槲皮素对细胞增殖影响的研究进展

细胞分裂增殖是机体基本生物学过程和生命基本特征之一，它对于生命的维持及种族的繁衍均有着十分重要的意义。细胞分裂增殖是一个复杂的生物学过程，受很多因素影响和调控，若细胞分裂增殖失去正常调控则导致增殖性疾病或肿瘤的发生。槲皮素（Quercetin,QUE）是广泛存在于植物界的黄同类化合物，毒性很低，具有多种生物学活性[1]。在众多的生物学活性中，QUE引人注目的特点之一是它的抗细胞增殖活性，它可通过多种途径抑制细胞增殖。因此，①记在抗细胞增殖的研究中被广泛应用并被深入研究。本文将就QIJE抑制细胞增殖的研究概况作一综…     

胞外钙调素对大鼠创面愈合的作用研究

目的研究胞外钙调素对大鼠创伤的促愈合作用。方法建立大鼠背部刀割伤模型,用创面照像、透明膜描记扫描记录伤后第4、8、12、16d的创面面积。结果实验组愈合时间为13.5d,对照组愈合时间为15.8d,创伤愈合时间明显缩短(P<0.05)。结论显示胞外钙调素具有促进大鼠皮肤创伤愈合的作用,其作用机理可能与促进细胞增殖、分裂有关。     

薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响

目的研究薯蓣皂苷元对人宫颈癌细胞增殖的影响。方法培养人宫颈癌细胞株Hela,不同浓度的薯蓣皂苷元干预24、48、72h,采用MTF、EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,WesternBlot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin B1。结果薯蓣皂苷元在20μmol／L浓度时抑制Hela细胞活力（P〈0．01）,呈现量效和时效特征;薯蓣皂苷元作用后EdU阳性细胞明显减少,薯蓣皂苷元引起G0／G1期细胞阻滞,减少S期细胞,降低Cyclin D1蛋白表达,而对Cyclin B1蛋白表达没有明显影响。结论薯蓣皂苷元通过阻滞细胞G0／G1期来抑制人宫颈癌Hela细胞株的增殖。     

四乙胺对肝星状细胞钾通道及细胞增殖的影响

目的 探讨肝星状细胞钾通道对肝星状细胞增殖的影响,观察钾通道阻滞剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)对肝星状细胞增殖和钾离子电流的作用.方法 以TEA作用于传代培养的肝星状细胞,通过MTT法、流式细胞术及单通道细胞膜片钳技术,分别检测TEA对肝星状细胞的增殖、细胞周期及细胞膜钾通道的影响.结果 TEA对肝星状细胞的增殖抑制效应具有时间依赖与剂量依赖的特点,使细胞周期阻滞于G0/G1期.单通道细胞膜片钳发现肝星状细胞上有大电导离子通道存在,其电导值为(210.86±5.49)ps(n=7).TEA可明显减少外向该离子通道开放概率,TEA 0.0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0mmol/L组的开放概率为(0.327±4.80)、(0.316±4.38)、(0.279±1.72)、(0.245±1.21)、(0.194±1.13)和(0.118±1.62)(F=22.561,其中10.0、20.0和40.0mmol/L组分别与0.0mmol/L组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肝星状细胞上有大电导钾通道存在,阻断钾通道可抑制肝星状细胞增殖,钾通道对细胞增殖可能具有调控作用.     

泛素结合酶-10表达对结直肠癌细胞增殖的影响

目的 探讨泛素结合酶-10(Ubiquitin-conjugafing enzymes,UbcH10)表达对结直肠癌细胞增殖的影响.方法 采用脂质体LipofectamineTM 2000转染人UbcH10的真核表达载体pcDNA3.1-UbcH10及其对照载体pcDNA3.1至结直肠癌细胞LoVo,蛋白印迹(West...     

中等强度静磁场对白血病细胞增殖和细胞周期的影响

目的：研究0．2～0．4T中等强度静磁场对人T淋巴细胞白血病细胞及小鼠白血病细胞增殖及细胞周期的影响．方法：人白血病细胞JurkatcloneE6—1和小鼠白血病细胞L1210在0．2～0．4T中等强度静磁场中培养1,2,3,4,5d后,分别采用倒置显微镜观察细胞形态变化;CellCountingKit-8（CCK-8）法检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期．结果：曝磁3d后,与对照组相比,JurkatcloneE6—1细胞团变小,但L1210细胞以单细胞分散生长的特性无明显变化．当细胞接种密度为4× 10^7个／L时,与对照组相比,2种细胞曝磁1,2,3d后增殖能力均受到明显抑制,细胞增殖抑制率JurkateloneE6-1细胞分别为14．58％,39．88％,6．77％（P〈0．05）,L1210细胞分别为8．82％,10．81％,5．40％（P〈0．05）．然而曝磁4,5d后,2种细胞的增殖能力明显增强,细胞增殖抑制率JurkatcloneE6-1细胞分别为-8．21％（P〈0．05）和-2．49％（P〉0．05）,L1210细胞分别为-13．01％和-19．46％（P〈0．05）．当细胞接种密度为8× 10^7个／L时,其结果与4× 10^7个／L接种密度时相反．曝磁1,2,3d后,2种细胞增殖能力增强,细胞增殖抑制率JurkateloneE6．1细胞分别为-12．64％,-20．36％,-61．43％（P〈0．05）,L1210细胞分别为-14．08％,-13．09％,-3．18％（P〈0．05）．曝磁4,5d后2种细胞增殖受到抑制,细胞增殖抑制率JurkatcloneE6—1细胞分别为42．20％,95．32％（P〈0．05）;L1210细胞分别为46．99％,41．97％（P〈0．05）．曝磁4d后,与对照组相比,JurkatcloneE6—1细胞S期所占比例由44．94％上升至77．92％;L1210细胞G2期所占百分比由5．28％上升至9．22％．结论：0．2～0．4T中等强度静磁场影响了JurkatcloneE6—1,L1210的细胞增殖及细胞周期,且磁场对细胞增殖的抑制作用与细胞密度及曝磁时间有关．