基因缺陷型2型糖尿病模型动物db/db小鼠早期生物学特性研究

目的 研究基因缺陷型2型糖尿病模型动物db/db小鼠的早期生物学特性,为db/db小鼠应用于降糖药物的研究奠定基础。方法 采用db/db小鼠为模型组动物,db/m小鼠为对照组动物,测定两组小鼠的体质量、食量、饮水量、空腹血糖、正常饮食血糖、糖耐量、胰岛素耐量;于第14周眼底静脉丛取血,分离血清,测定糖化血清蛋白（GSP）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）;取肝、胰腺、腹部脂肪等主要脏器组织进行组织病理学检查。结果 与对照组比较,db/db小鼠体质量、食量、饮水量显著增加;空腹血糖及正常饮食血糖显著升高,整个实验期血糖水平稳定;糖耐量异常、胰岛素耐量异常,对外源胰岛素敏感性显著降低;血清GSP、TG、TC含量显著升高,腹部脂肪质量显著增加,肝组织不同程度的空泡变性,脂肪组织中脂肪细胞体积增大,胰腺中胰岛细胞胞浆减少、血管扩张。结论 db/db小鼠早期脂质代谢紊乱,血糖、血脂显著升高,糖耐量及胰岛素耐量异常,血糖水平稳定,是研究2型糖尿病较为理想的模型。     

诱发性2型糖尿病小鼠模型与自发性db/db小鼠特性的比较

目的 建立诱发性2型糖尿病小鼠模型,并将其与自发性2型糖尿病小鼠db/db进行比较分析.客观评价两种2型糖尿病小鼠模型,为糖尿病研究中动物模型的选择与实际应用提供实验依据.方法 高脂饲料喂养C57BL/6J小鼠4周,腹腔连续3次注射STZ,建立诱发性2型糖尿病小鼠模型.感染后4周,大体肉眼观察小鼠的肝脏、肾脏,测定糖耐量,血清生化指标及血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-10表达量,将其与同龄的自发性2型糖尿病小鼠db/db进行比较分析.结果 肉眼观察发现,两组模型小鼠的肝脏、肾脏与对照组均具有明显差异.糖耐量分析中,两组模型小鼠与对照组小鼠各时间点的血糖值均具有统计学差异(P<0.05),耐糖功能低下,两组模型小鼠间血糖值无统计学差异.血液生化指标中,与对照组小鼠相比,两组模型小鼠GLU、CHOL、LDLC明显升高(P<0.05);两组模型小鼠相互比较,诱发性2型糖尿病小鼠血脂水平较高(P<0.05).免疫指标比较显示:除IL-2外,两组模型小鼠血清中细胞因子水平均较对照组小鼠明显升高(P<0.05),而db/db 小鼠血清中细胞因子表达较诱发性糖尿病小鼠高,其中IL-6、IFN-γ、TNF-α具有显著性差异(P<0.05).结论 两组2型糖尿病模型小鼠均在一定程度上模拟了人类糖尿病患者症状,但由于糖尿病产生的原因不同而存在着一定的差异,研究者可根据实际需要参照相关数据进行选择.     

2型糖尿病db/db小鼠肾脏动态病理特点

目的：探讨2型糖尿病db/db小鼠肾脏动态病理特点,阐明其糖尿病肾病的发生发展机制,为糖尿病肾脏并发症的研究提供实验依据。方法：选取SPF级7~8周龄雄性db/db小鼠（模型组）和同龄雄性db/m小鼠（正常组）各16只,分别于8、16和32周龄时检测2组小鼠体质量和空腹血糖（FBG）水平,每组各处死小鼠8只,取肾组织行HE和Masson染色观察其病理形态表现,电镜下观察其超微结构。结果：与正常组比较,模型组小鼠8、16和32周龄时体质量增大（P<0.01）,FBG水平明显升高（P<0.01）,双肾指数明显降低（P<0.01）;32周时模型组小鼠双肾指数明显低于16周时（P<0.05）。HE和Masson染色,16周龄时模型组小鼠肾组织可见明显病理改变,主要是肾小球体积增大和肾小管上皮细胞明显水肿;32周龄时病变明显加重,肾组织中可见大量蓝染胶原物质。电镜观察,16周龄时模型组小鼠肾组织以肾小球基底增厚、足突融合、肾小管上皮细胞线粒体数目减少及形态肿胀为主;32周龄时病变明显加重,可见大量胶原纤维。结论：16周龄糖尿病db/db小鼠肾脏有明显病理改变,主要是肾小球基底增厚、足突融合,32周龄时小鼠肾组织呈明显纤维化。     

Ⅱ型糖尿病模型C57BL／KsJ-db／db小鼠的生物学特性研究

目的对C57BL／KsJ—db／db小鼠进行生物学特性研究，满足国内糖尿病研究者的需要。方法随机选取实验鼠进行繁殖性状数据及生长数据测试；并测定其空腹、随机血糖，以及进行糖耐量试验。结果C57BL／KsJ—db／db小鼠从3周龄开始体重迅速增加，显示过度肥胖和糖尿病症兆，并且随年龄增加血糖逐步升高。结论对C57BL／KsJ—db／db小鼠所做的相关生物学特性检测，可供糖尿病研究参考。     

中药复方对db/db糖尿病小鼠血糖的影响

目的研究中药复方对db/db糖尿病小鼠的治疗效果,为其应用于临床提供理论依据。方法 8周龄的db/db和db/m小鼠分为5组:A:db/m正常小鼠对照组;B:db/db糖尿病小鼠对照组;C:db/db糖尿病小鼠中药组[0.1 346g/kg.d];D:吡考啉酸铬组[0.0 032g/kg.d]。db/m正常小鼠对照组和db/db糖尿病小鼠对照组每日灌服生理盐水0.2mL,各组液体体积均相同,均连续4周。测定各组小鼠血糖、胰岛素、血脂和糖化血红蛋白,观察小鼠体质量以及24h进水量和进食量。结果中药复方组降血糖作用明显强于吡考啉酸铬组,同时能够降低胰岛素抵抗,保护胰岛功能,改善糖尿病小鼠"三多一少"等症状。结论中药复方对db/db糖尿病小鼠具有良好的治疗效果。     

Ⅱ型糖尿病肾病模型db/db小鼠血浆的代谢组学研究

目的采用基于核磁共振的代谢组学技术研究糖尿病肾病模型db/db小鼠血浆中小分子代谢物的变化。方法用核磁共振技术检测db/db小鼠（6只）和db/m小鼠（6只）血浆中的小分子代谢物,应用模式识别技术对积分数据进行正交偏最小二乘辨别（OPLS-DA）分析及相关性分析,利用MATLAB软件做相关系数图。结果统计分析结果显示,与对照组db/m小鼠相比,试验组db/db小鼠血浆中葡萄糖和氧化三甲胺（TMAO）的含量升高,多种氨基酸含量下降。结合代谢途径分析发现,糖尿病肾病小鼠体内存在氨基酸代谢异常和能量代谢异常,肾脏受到损伤。结论本文所采用的基于核磁共振的代谢组学技术能全面客观地反映糖尿病肾病小鼠血浆中的代谢物变化,潜在的代谢标志物分析及代谢途径探讨将为临床诊断及机制研究提供新思路。     

山茱萸总萜对db/db糖尿病小鼠的降血糖作用

为评价山茱萸总萜对2型糖尿病的降血糖作用,对db/db糖尿病小鼠每日灌胃给予25,50,100 mg/kg山茱萸总萜共10周,每2周眼眶采血测定空腹血糖1次。于末次给药24 h后采血测定空腹血糖、胰岛素(Ins)、糖化血清蛋白(GSP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)。给药第8和10周分别进行葡萄糖和淀粉糖耐量试验。结果显示,给药4周后,山茱萸总萜各剂量组db/db小鼠的空腹血糖有明显降低(P<0.05)。给药10周后,山茱萸总萜25,50,100 mg/kg组db/db小鼠血清中TC、TG水平显著降低(P<0.05),血清糖化蛋白水平明显降低(P<0.05),db/db小鼠的葡萄糖耐量和灌胃淀粉糖耐量也有明显改善(P<0.05)。研究结果提示,山茱萸总萜可调节体内糖、脂等代谢过程,对糖尿病具有一定的治疗作用。     

蒙药哈利雅素对db/db小鼠自发性糖尿病的作用

目的 哈利雅素是动物源蒙药材,本研究利用db/db自发性糖尿病小鼠探讨了哈利雅素治疗糖尿病的作用特点。方法 动态监测哈利雅素连续给药8周对db/db自发性糖尿病小鼠摄食量、空腹血糖(fasting blood glucose, FBG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(Triglyceride, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol, LDL-C)水平的影响,实验结束后称取内脏脂肪重量(visceral fat mass, VFM)并计算内脏脂肪系数(visceral fat coefficient%, VFC%),最后进行免疫系统研究。结果 哈利雅素可降低db/db小鼠的摄食量和VFC%,改善腹型肥胖;持续稳定的降低FBG、TG、TC、LDL-C等糖脂代谢水平同时增强细胞免疫和体液免疫能力。结论 哈利雅素具有改善食欲和腹型肥胖并显著降低血糖、血脂水平的作用,且对内分泌和免疫功能紊乱具有调节和改善作用,具有作为治疗糖尿病新药的研究开发的前景。     

VEGF在db/db自发性糖尿病小鼠颌下腺的表达

目的 :应用光镜及免疫组织化学技术观察转基因糖尿病小鼠颌下腺的形态学改变以及血管内皮生长因子 (Vascularendothelialcellgrowthfactor ,VEGF)在颌下腺表达的变化 ,旨在说明糖尿病时颌下腺功能损害与上述因子间的关系。方法 :引进日本C5 7BL/ksj—db/ m表型正常隐性基因小鼠 ,近亲交配 ,其纯合子后代 ,即为db/db(单基因遗传自然发病型 )糖尿病小鼠。取 3、4、6、8、10月龄db/db糖尿病小鼠及相应年龄段的db/ m正常小鼠 (对照组 )颌下腺 ,常规固定包埋 ,切片 ,行HE及SP免疫组化染色 ,图象分析仪计数颌下腺内VEGF免疫阳性的细胞数。结果 :随着糖尿病进展 ,颌下腺组织萎缩 ,但间质增生 ,可见血管增多。在db/db糖尿病小鼠VEGF阳性细胞数随着糖尿病进展有一明显增多趋势 ,且与各同龄对照组相比明显增强 (p <0 .0 5 )。结论 :VEGF在糖尿病颌下腺表达增强,可能与缺氧有关 ,进而导致间质血管增生 ,新血管形成 ,这也是糖尿病性微血管病变的相关因素之一。     

2型糖尿病肾病db/db小鼠的中医证候演变分析

目的:分析2型糖尿病肾病(T2DN)db/db小鼠的中医证候演变规律,为db/db小鼠在中医药干预T2DN研究中的应用提供依据.方法:建立中医证候表征体系,采集并分析8～20周龄db/db小鼠及同窝野生型小鼠的中医证候表征信息,包括形体、活动、二便、舌色、进食、体质量、空腹血糖(FBG)、血脂、24 h尿量、尿微量白蛋...     

db/db2型糖尿病模型小鼠肠道多形拟杆菌实时荧光定量PCR标准品制备方法的比较研究

目的比较研究db/db 2型糖尿病模型小鼠肠道多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)实时荧光定量PCR 2种标准品制备方法。方法收集2型糖尿病小鼠db/db模型组和db/m对照组肠道内容物,同时以多形拟杆菌ATCC29148为标准菌株,提取微生物DNA,用16SrRNA V6区多形拟杆菌引物,采用实时荧光定量PCR标准品制备中标准菌株法和正常组高阳性法2种标准品制备方式进行定量检测,比较2种方法的差异性。结果标准菌株法与正常组高阳性法测定db/m对照组和db/db模型组小鼠肠道多形拟杆菌的数量分别为(5.23×106±2.30×106)、(1.52×107±3.23×106)和(5.23×106±2.25×106)、(1.45×107±3.39×106),与db/m对照组相比,db/db模型组多形拟杆菌数量多,差异有统计学意义(P<0.05);标准菌株法与正常组高阳性法对检测多形拟杆菌的差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量PCR的标准品制备中标准菌株法与正常组高阳性法均可检测出较多的多形拟杆菌,并且2种检测方式都可以对肠道菌群进行检测。     

Effects of phlorizin on vascular complications in diabetes db/db mice

Background  Diabetic macrovascular complications are important causes of cardiovascular and cerebrovascular diseases and also one of the major causes of morbidity and mortality in patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM). Phlorizin has been reported to be effective in reducing the blood glucose level in diabetic mellitus, while little is known about its effects on vascular complications. This study aimed to observe the effects of phlorizin on the aorta of diabetes db/db mice and explore its mechanism.

Methods  Diabetic db/db mice (n=16) and age-matched db/m mice (n=8) were divided into three groups: normal control group (CC group, db/m mice, n=8), untreated diabetic group (DM group, db/db mice, n=8) and diabetic group treated by phlorizin (DMT group, db/db mice, n=8). Phlorizin (20 mg/kg body weight) was given in normal saline solution intragastrically for 10 weeks. Animals were weighed weekly. At the 10th weekend, all mice were fasted overnight and then sacrificed. Fasting blood was collected, and the aortas were dissected. The blood samples were analyzed for fasting blood glucose (FBG), serum advanced glycation end products (AGEs), malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) activity, the aortic ultrastructure was studied.

Results  The weight and serum concentration of FBG, AGEs, and MDA in the DM group were higher than that in the CC group (P <0.01), and they were significantly lower in the DMT group (P <0.05). Serum SOD activity was lower than that in the CC group (P <0.01), and it is significantly higher in the DMT group (P <0.05). The severity of aorta damage in the DMT group was less than that in the DM group.

Conclusions  Phlorizin protected the db/db mice from diabetic macrovascular complications, attributed to the decreasing of blood glucose and AGEs level, and its antioxidant potential. This study may provide a new natural medicine for treating diabetic macrovascular complications.

     

2型糖尿病小鼠小脑代谢物的~1H NMR研究

目的:通过离体的高分辨核磁共振氢谱(1H NMR)技术研究2型糖尿病db/db小鼠小脑的代谢变化。方法:采用8只15周龄2型糖尿病模型db/db小鼠为实验组,11只15周龄野生正常小鼠为对照组,对其小脑组织进行离体的1H NMR检测分析。结果:实验组与对照组相比小脑的代谢模式明显不同,甘氨酸(Gly)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、丙氨酸(Ala)等代谢物浓度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);谷氨酰胺(Gln)、牛磺酸(Tau)、乳酸(Lac)等代谢物水平显著上升,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:代谢组学结果说明2型糖尿病模型db/db小鼠小脑中糖代谢、氨基酸代谢出现了紊乱,这为进一步认识糖尿病脑病的发病机制提供了线索。     

两种2型糖尿病小鼠溃疡创面愈合比较

目的比较目前常用的基因自发突变2型糖尿病小鼠C57BL/6J-db/db和STZ诱导的C57BL/6J小鼠的溃疡创面愈合特征,为应用稳定的糖尿病小鼠溃疡模型进行相关动物实验研究提供依据。方法建立糖尿病小鼠溃疡模型,统计0、3、5、7、10、14 d小鼠创面动态愈合率及愈合时间;7、14 d取组织,HE染色和Masson染色,免疫组化(CD31和PCNA)观察创面病理组织变化;荧光定量测定愈合相关因子collagen-IIIα、α-SMA的基因表达。结果基因突变db/db小鼠较STZ诱导小鼠的创面愈合时间显著延迟,由(16.6±0.8)d延长至(20.2±1.3)d(P0.001);db/db组较STZ组肉芽组织生长缓慢,新生上皮长度不足、胶原沉积紊乱,创面愈合较差;7 d,db/db组的CD31和PCNA显著性低表达(P0.01);7、14 d,db/db组基因上调量的倍数明显低于STZ组。结论两种糖尿病小鼠创面均出现愈合延迟,但基因突变糖尿病db/db小鼠相比于STZ诱导组小鼠在创面愈合延迟的程度上和愈合难易程度上,更适合进行糖尿病溃疡创面的研究。     

清化颗粒对db/db糖尿病小鼠肠道苦味受体的影响

目的:探讨清化颗粒对db/db糖尿病小鼠肠道苦味受体(taste receptor type 2,TAS2Rs)的影响。方法:将db/db糖尿病小鼠随机分为模型对照组及清化颗粒低、中、高剂量组,db/m小鼠为空白对照组。清化颗粒低、中、高剂量组分别灌胃给药(3.77、7.54、15.08 g·kg-1·d-1),模型对照组和空白对照组灌胃等体积的生理盐水,均干预4周。干预结束后,腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)观察每组小鼠血糖水平变化;ELISA法分析小鼠血清胰高血糖素样肽-1(GLP-1)浓度;qRT-PCR测定每组小鼠肠道苦味受体(TAS2R7、TAS2R9和TAS2R38)的mRNA水平;Western blot检测小鼠肠道苦味信号通路因子磷酸二酯酶1A(PDE1A)的蛋白水平。结果:清化颗粒各剂量组的空腹血糖水平均较模型对照组显著降低(P0.01),血清GLP-1浓度显著高于模型对照组(P0.01);清化颗粒中、高剂量组的TAS2R7、TAS2R9和TAS2R38的mRNA水平较模型对照组显著增加(P0.01);清化颗粒各剂量组的PDE1A的蛋白水平较模型对照组显著增加(P0.01),呈剂量依赖效应。结论:清化颗粒能够降低db/db糖尿病小鼠的空腹血糖水平,其机制可能与促进肠道GLP-1分泌的苦味信号通路有关。     

荞麦花叶发酵提取物对2型糖尿病db/db小鼠肾损伤的影响

目的：探讨荞麦花叶发酵提取物（EFBFL）对自发肥胖2型糖尿病db/db小鼠肾脏损伤的保护作用,从肾脏过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）和核因子κB（NF-κB）的蛋白表达水平阐明其可能的机制。方法：选择8周龄雄性db/db小鼠,以同窝db/m小鼠为正常对照组,db/db小鼠随机分为模型组、低剂量EFBFL组和高剂量EFBFL组,每组10只。低和高剂量EFBFL组小鼠分别为给予50和100 mg·kg^-1 EFBFL灌胃,正常对照组和模型组小鼠给予等量蒸馏水灌胃,每天1次,连续8周。于给药前后检测各组小鼠空腹血糖（FBG）,全自动生化分析仪检测血清中血肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）水平,计算肾脏指数,通过HE和Masson染色观察小鼠肾组织形态表现,免疫组织化学法和Western blotting法检测小鼠肾组织PPARγ和NF-κB蛋白表达水平。结果：与模型组比较,EFBFL组小鼠FBG及血清中SCr、BUN水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,肾脏指数增加（P<0.01）。与正常对照组比较,模型组小鼠肾组织中肾小球萎缩,肾小球基底膜弥漫性增厚,足突融合甚至消失,肾组织纤维化程度严重;与模型组比较,EFBFL组小鼠上述表现不同程度改善,以高剂量EFBFL组尤为明显。与模型组比较,EFBFL组小鼠肾组织PPARγ蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,NF-κB蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论：EFBFL可改善自发肥胖2型糖尿病db/db小鼠肾损伤,其机制可能与降低小鼠血糖、促进肾PPARγ蛋白的表达及下调NF-κB的蛋白表达有关。