舌癌细胞系T-TFL的建立和生物学性状检测

背景基因治疗已成为恶性肿瘤研究领域的热点和发展趋势,但舌癌基因治疗的研究报道极少.目的构建含相关死亡结构域蛋白(FADD)及肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)基因功能结构域的融合基因TFL,稳定转染入人舌鳞状细胞癌细胞系(Tca-8113)中,检测建系细胞T-TFL的生物学性状,探讨一种更有利于舌癌患者治疗期及治疗后期内生活质量的治疗手段.设计以诊断为依据,前瞻性研究.地点和对象实验在第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科完成,研究对象为人舌鳞状细胞癌细胞系(Tca-8113),上海第二医科大学口腔医学院建系.干预反转录PCR获得人FADD及TNFR1基因cDNA,重组PCR法构建含二者功能结构域的融合基因TFL,通过阳离子脂质体法稳定转染TFL基因入Tca-8113细胞中.主要观察指标Western blot检测融合蛋白TNFR1/DED表达,通过形态学观察、生长曲线等检测T-TFL细胞的生物学性状.结果获得了人FADD及TNFR1基因并构建成功融合基因TFL,转染入Tca-8113细胞后,能表达融合蛋白TNFR1/DED活性,且T-TFL细胞与亲本Tca-8113细胞的生物学性状无明显差异.结论T-TFL细胞能表达融合蛋白TNFR1/DED活性,可以为进一步深入研究舌癌基因治疗提供实验基础.     

TNF生物学检测法质量控制的初步探讨

为探讨肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）生物学检测的质量控制管理的方法,以Ｌ９２９细胞为靶细胞,ＴＮＦ标准品为考核标准,比较了细胞数量、细胞胞龄和放线菌素Ｄ浓度的影响,并用自制室内质控血清进行监控。结果表明靶细胞龄以传代后续培养２４￣４８ｈ为最适。     

多发性骨髓瘤肿瘤坏死因子及其受体 1检测及临床意义

多发性骨髓瘤 (ＭＭ)细胞的生长受白细胞介素 6 (ＩＬ 6 )及肿瘤坏死因子α(ＴＮＦα) [1] 等细胞因子调节 ,ＴＮＦα与ＩＬ 6协同作用可阻止瘤细胞凋亡并刺激瘤细胞增殖。我们对ＴＮＦα及其可溶性受体 1(ｓＴＮＦ Ｒ1)在ＭＭ中的作用及其临床意义进行了探讨。一、材料和方法1.研究对象 :2 0 0 0年 6月～ 2 0 0 1年 11月本院及外院住院及门诊ＭＭ病人 72例 ,男 44例 ,女 2 8例 ,平均年龄 6 2岁。均符合血液病诊断标准[2 ] 。按病程分类 :初发患者 40例 ,复发患者 14例 ,治疗平稳期患者 18例。初发及复发病人中Ⅰ期 3例 ,Ⅱ期 2 1例 (Ⅱａ 1…     

生殖器支原体的生物学性状与检测

生殖器支原体是目前已知能在无生命培养中生长，具有能自我复制最小基因组的原核细胞微生物，本文对该支原体生物学性状，现有的检测技术进行了综述，并与肺炎支原体进行了比较。     

肿瘤坏死因子受体的生理作用及在疾病检测中的意义

肿瘤坏死因子受体（TNF－R）在抗TNF、抗炎、刺激细胞增殖、诱导细胞毒等方面具有重要的生理活性，其表达量的多少与某些疾病密切相关．TNF－R的检测对这些疾病的诊断、治疗及预后等具有一定意义。     

阿糖胞苷耐药细胞株的建立及其相关生物学检测

蒽环类药物的应用可以导致多药耐药基因的产生，而阿糖胞苷(Ara—C)作为白血病治疗的常用药，阻碍其疗效发挥的重要原因也是耐药问题，Ara—C的应用是否会导致耐药的产生，耐药细胞的生物学特点是否变化以及参与耐药的主要机制是什么目前都不完全明确：我们利用逐渐增加浓度的方法建立了Ara—C的耐药细胞株，并且对其生物学特点和耐药机制进行了系统的探讨。     

干细胞的生物学特性：异基因骨髓细胞防治小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病

目的:研究可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰的粒-巨噬细胞集落刺激因子短期培养的异基因骨髓细胞,对小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病的防治及与移植物抗白血病的关系.方法:实验于2002-06/2003-03在第二军医大学免疫研究所完成.选择纯种近交系C57BL/6小鼠作为供,BALB/c小鼠作为受,用^60Coγ射线照射后,随机分为5组,每组10只.①未处理组:接受照射后,尾静脉注射磷酸盐缓冲液.②移植物抗宿主病组:照射后移植骨髓细胞和脾细胞.③粒-巨噬细胞集落刺激因子组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养的骨髓细胞和脾细胞.④LacZ基因修饰组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养后LacZ基因修饰的骨髓细胞和脾细胞.⑤可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养后可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰的骨髓细胞和脾细胞.经上述处理后主要观察:①各组小鼠生存期.②隔3日鼠尾静脉采血检测各组小鼠外周血白细胞的变化,以观察不同方法对造血功能恢复的影响.③各组小鼠脾脏淋巴细胞杀伤活性的改变.结果:纳入BALB/c小鼠50只,均进入结果分析.①小鼠生存期:可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组平均存活期较移植物抗宿主病组明显延长(35 d,12.5 d,P＜0.05).②小鼠脾脏淋巴细胞杀伤活性的改变:可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组小鼠脾脏淋巴细胞杀伤同种肿瘤细胞的活性明显高于LacZ基因修饰组和粒-巨噬细胞集落刺激因子组.③对造血功能恢复的影响:处理后各组小鼠外周血白细胞计数均明显降低.6 d白细胞开始逐渐回升,尤以移植粒-巨噬细胞集落刺激因子组、LacZ基因修饰组和可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组小鼠白细胞回升明显.结论:可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰的骨髓细胞能有效地抑制移植物抗宿主病的产生,有利于骨髓移植小鼠恢复造血功能.骨髓细胞异基因移植是一种有效防治移植物抗宿主病的新方法.     

恶性肿瘤患者治疗前后血清NO/ET-1、血浆TNF-α/sTNF-R的检测及临床意义

为了观察恶性肿瘤患者治疗前后血清一氧化氮 (ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅ,ＮＯ) /内皮素 (Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ ,ＥＴ)、血浆肿瘤坏死因子 α(ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ α,ＴＮＦ α) /可溶性肿瘤坏死因子受体(ＳｏｌｕｂｌｅＴＮＦＲｅｃｅｐｔｏｒ ,ｓＴＮＦ Ｒ)水平变化 ,采用硝酸还原酶法、放射免疫法及双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法 ,对 2 8例患者进行了血清ＮＯ、ＥＴ 1和血浆ＴＮＦ α、ｓＴＮＦ ＲⅠ、ｓＴＮＦ ＲⅡ的检测 ,旨在探讨其治疗前后水平变化特点及临床意义。1　材料与方法1.1　研究对象　恶性肿瘤组 :2 8例不同类…     

测定GITR和GITRLELISA的建立及其临床初步应用

目的建立测定糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体（GITR）及其配体（GITRL）的定量酶联免疫吸附试验（ELISA）,并探讨GITR及GITRL定量测定在类风湿性关节炎（RA）及肿瘤疾病的诊断或病情监测中的临床应用。方法以鼠抗人GITR、GITRL单克隆抗体为包被抗体,以生物素-辣根过氧化物酶标记链霉亲和素（SA-HRP）检测系统,建立GITR和GITRL定量检测的双抗体夹心ELISA。测定105例RA患者、54例肿瘤患者及100名健康体检者的血清GITR、GITRL含量,并探讨其与疾病的关系。结果建立的测定GITR、GITRL定量ELISA线性相关系数的平方（r2）分别为0.94和0.90。RA组血清中GITR、GITRL含量均明显高于正常对照组（P均〈0.001）;肿瘤组GITR高于正常对照组（P〈0.001）,GITRL与正常对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论本研究成功建立了GITR、GITRL定量ELISA,血清GITR、GITRL含量测定可能会成为RA新的辅助性诊断指标和病情监测指标。     

Ⅱ型糖尿病患者NO、TNF-α和sTNF-R水平检测及意义

目的探讨非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNF-R)及一氧化氮(NO)水平变化及意义. 方法TNF-α、sTNF-R采用双抗体夹心ELISA法,NO采用硝酸还原酶法. 结果NIDDM患者TNF-α、sTNF-R显著升高(P＜0.01),随病程的延长而升高,且有无并发症患者水平也相差显著.TNF-α、sTNF-R水平与患者病程及病情呈正相关.NO水平显著性降低(p＜0.01),NO水平与患者病程及病情呈负相关.结论检测NIDDM患者TNF-α、sTNF-R及NO水平,对诊断病情、并发症的预测及治疗,可能有一定使用价值.     

PCR-RFLP法检测肿瘤坏死因子受体基因多态性

目的：建立聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（PCR－RFLP）检测肿瘤坏死因子受体Ⅱ（TNF R2）第6外显子基因多态性的方法。方法：用碘化钾法从外周血白细胞中提取基因组DNA，PCR扩增其TNF R2包括编码196位氨基酸残基在内的第6外显子基因，扩增产物用限制性内切酶NIa Ⅲ酶切后干含溴化乙锭的35g/L琼脂糖凝胶中电泳，紫外灯下直接观察TNF R2的基因型。结果：通过观察电泳条带可确定TNF R2的三种基因型，196R／R纯合子、196M／M纯合子、196M／R杂合子分别出现一、二、三条条带；江苏地区健康汉族人TNF R2第6外显子各基因型的频率为：196M／M61．6％，196R／R5．6％，196M／R32．8％；等位基因的频率为196M77．9％，196R22．1％。结论：RCR－RFLP是一种高效敏感、简单快速、准确可靠的分析TNFR2基因多态性的方法，适于普通实验室开展。     

SLE,RA患者血清中白细胞介素1和肿瘤坏死因子水平的检测

ＳＬＥ、ＲＡ患者血清中白细胞介素１和肿瘤坏死因子水平的检测严俊，付翠梅，刘恭植（镇江医学院镇江２１２００１）邵翔（镇江市第一人民医院）近年来关于细胞因子与自身免疫性疾病的关系报道很多，认为在自身免疫性疾病患者中检测到的各种细胞因子如白细胞介索（ＩＬ）...     

干细胞的生物学特性:异基因骨髓细胞防治小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病

目的:研究可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰的粒-巨噬细胞集落刺激因子短期培养的异基因骨髓细胞,对小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病的防治及与移植物抗白血病的关系。方法:实验于2002-06/2003-03在第二军医大学免疫研究所完成。选择纯种近交系C57BL/6小鼠作为供者,BALB/c小鼠作为受者,用60Coγ射线照射后,随机分为5组,每组10只。①未处理组:接受照射后,尾静脉注射磷酸盐缓冲液。②移植物抗宿主病组:照射后移植骨髓细胞和脾细胞。③粒-巨噬细胞集落刺激因子组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养的骨髓细胞和脾细胞。④LacZ基因修饰组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养后LacZ基因修饰的骨髓细胞和脾细胞。⑤可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组:照射后移植粒-巨噬细胞集落刺激因子培养后可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰的骨髓细胞和脾细胞。经上述处理后主要观察:①各组小鼠生存期。②隔3日鼠尾静脉采血检测各组小鼠外周血白细胞的变化,以观察不同方法对造血功能恢复的影响。③各组小鼠脾脏淋巴细胞杀伤活性的改变。结果:纳入BALB/c小鼠50只,均进入结果分析。①小鼠生存期:可溶性肿瘤坏死因子受体基因修饰组平均存活期较移植物抗宿主病组明显延长(35d,12.5d,P<0.05)。②小鼠脾脏淋巴细胞杀伤活性的     

人工关节松动的生物学因素:细胞因子和人工关节骨溶解

影响人工关节远期寿命的最主要原因是远期松动。而大量的证据表明松动的主要元凶是磨损颗粒引起的假体周围的骨溶解。在骨溶解过程中,细胞因子对成骨细胞、破骨细胞的发生、分化、成熟、死亡起着重要的调节作用。这些细胞因子主要包括:白介素1,肿瘤坏死因子(TN)F,前列腺素等。磨损颗粒释放入关节腔后,首先被巨噬细胞吞噬巨噬细胞不仅本身分泌因子作用于成骨细胞、破骨细胞,其本身可能也参与骨溶解过程。解决骨溶解的基本策略是减少交界组织处磨损颗粒的数目和增加骨-植入物界面的完整性。通过药物可以阻止某些细胞因子如TNF的分泌,进而达到预防无菌性松动的目的。     

实时逆转录聚合酶链反应检测细胞因子表达相对定量方法的建立

目的 建立一种实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞因子表达相对定量方法。方法 以肿瘤坏死因子α(TNFα)为待测基因，以葡萄糖3—磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参照进行检测。当靶基因和内参照基因片段克隆入载体后，进行纯化和定量及系列稀释，建立标准曲线，确定实时RT-PCR的扩增效率；同时优化反应条件，使扩增效率接近100％。然后，检测14份待检标本的TNFα和GAPDH的循环阈值(Ct)。结果 该法检测的最低拷贝数为10^3，线性范围为10^3～10^9拷贝，批内变异系数(CV)和批间CV分别为1％和8％。采用2^△△Ct法进行数据分析后，处理组TNFα的相对表达量比对照组高8．6—9．8倍，平均为9．2倍。结论 新建立的方法敏感，重复性好，数据处理简便、可靠，适用于检测任何基因的相对表达。     

增生性瘢痕组织中肿瘤坏死因子α R1 mRNA的表达及意义

目的：从基因水平探讨肿瘤坏死因子受体(TNF-α R1)在增生性瘢痕组织发生、发展过程中的作用，为增生性瘢痕的基因治疗探索一条有效途径。方法：以正常瘢痕为对照，利用RT-PCR技术检测1年以上增生性瘢痕组织成纤维细胞中TNF-α R1 mRNA的表达情况。结果：1年以上增生性瘢痕组织中TNF-α R1 mRNA的表达稳定，与正常瘢痕比较含量明显下降。结论：增生性瘢痕的形成与TNF-α R1的表达低下有一定关系。用基因治疗的方法提高早期增生性瘢痕中TNF-α的含量或者提高靶细胞膜上TNF-α R1的数目与活性可能为增生性瘢痕的康复治疗的有效途径。     

肺癌患者血清肿瘤坏死因子受体检测的诊断价值

可溶性肿瘤坏死因子受体（ｓｏlｕｂｌｅ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＳＴＮＦＲ）是从细胞膜上通过蛋白酶水解下来的肿瘤坏死因子受体片段,存在于人的各种体液中与膜表面受体相对应,具有２种存在形式即ＳＴＮＦR Ⅰ、ＳＴＮＦＲ Ⅱ［1,2］。ＳＴＮＦＲ能竞争性结合ＴＮＦ,以阻断ＴＮＦ与细胞膜表面的ＴＮＦ受体结合,从而间接抑制了ＴＮＦ的生物活性。本文就ＳＴＮＦＲⅠ测定对肺癌的诊断、分期和预后的临床应用价值方面进行了初步探讨。１ 材料与方法１．１ 临床资料 ６２例肺癌患者为１９９６年１…