氯离子参与心肌细胞缺氧复氧损伤机制的研究

目的研究氯离子参加心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的机制。方法采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤模型,去除细胞外的氯离子(Cl--free),或分别给予Na+-K+-2Cl-共同转运体阻断剂bumetanide,Cl-/HCO3-离子交换系统抑制剂SITS和氯通道阻断剂9-AC,观察细胞存活率、MDA含量、LDH、SOD、GSH-Px酶活性变化及细胞内的钙含量、NF-κB活性变化。结果A/R组与对照组比,MDA含量、LDH活性、细胞内的钙含量、NF-κB活性升高,细胞存活率、SOD、GSH-Px活性降低;bumetanide及9-AC组与A/R组比,各项指标无统计学意义。Cl--free、SITS处理后较A/R组,MDA含量、LDH活性、细胞内的钙含量、NF-κB活性降低,而细胞存活率、SOD、GSH-Px明显升高。结论Cl-/HCO3-离子交换系统在心肌细胞A/R损伤中起了重要作用,Cl-参与心肌A/R损伤的机制与钙超载及NF-κB活性升高有关。     

Pim-3对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的研究

目的研究原癌基因Pim-3对心肌细胞急性缺氧/复氧(A/R)损伤的保护作用。方法采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤和缺氧预适应(APC)保护模型,将已经构建好的pEGFP-N2/Pim-3质粒导入原代培养的乳鼠心肌细胞中,实验结束后测定Pim-3mRNA及蛋白表达水平(RT-PCR、Western blot法)的改变,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡。结果RT-PCR和Western blot结果显示,Pim-3在正常组几乎不表达,A/R组表达明显升高,缺氧预适应(APC)+A/R组表达则进一步升高;转染pEGFP-N2/Pim-3质粒后24h,荧光倒置显微镜显示转染效率达30%;在A/R损伤后,Pim-3基因转染组较未转染组的心肌细胞LDH值明显降低,细胞存活率则明显升高,心肌细胞的凋亡指数明显下降。结论在细胞水平,Pim-3参与心肌APC保护作用,导入外源性的Pim-3基因能对抗急性A/R损伤。     

大蒜素对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤细胞凋亡的影响

目的 探讨大蒜素对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用及对心肌细胞凋亡的影响。方法 利用乳鼠培养心肌细胞缺氧／复氧（A／R）损伤模型,将培养心肌细胞分为正常对照组（C组）、缺氧预处理组（AP组）、缺氧/复氧组（A／R组）、大蒜素预处理组（G组）,测定各组缺氧后、复氧后细胞损伤指标乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量,并应用DNA琼脂糖凝胶电泳及原位末端标记（TUNEL）法检测各组凋亡指数（AI）。结果G、AP组LDII、MDA明显较A／R组降低（P＜0．01）,SOD明显增高（P〈0．01）;A／R、AP、G组AI较C组明显增高（P〈0．01）,AP、G组AI较A／R组显著降低（P〈0．01）,G组AI较AP组稍高（P〉0．05）。结论 大蒜素具有抗心肌细胞凋亡作用。可减轻心肌细胞A／R损伤。     

缺氧后处理对成年大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的：通过建立成年大鼠心肌细胞缺氧复氧模型观察缺氧后处理的心肌保护机制。方法雄性SD大鼠,体质量250～350 g ,随机分为3组：正常组（NOR组）、缺氧组（H／R组）、缺氧后组（HP组）。采用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential , MMP）、细胞内钙离子荧光强度以及 Western blot方法测定磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶（p‐p38MAPK）表达量。结果（1）与正常组比较,H／R组和 HP组 MMP显著降低（P＜0．05）;HP组MMP明显高于 H／R组（P＞0．05）;（2）与正常组和 HP组比较,H／R组细胞内钙离子荧光强度显著升高（P＜0．01）;HP组和正常组间差异无统计学意义（P＞0．05）;（3）与正常组和 HP组比较,H／R组p‐p38MAPK表达量显著升高（P＜0．05）;HP组和正常组间表达量差异无统计学意义（P＞0．05）。结论缺氧后处理可对缺氧复氧成年大鼠心肌细胞产生保护作用,其机制可能与下调心肌细胞p‐p38M A PK 表达量、抑制线粒体膜电位下降以及防止钙超载进而抑制凋亡有关。     

阿魏酸钠对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制

目的研究阿魏酸钠(SF)预适应对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法采用1～3 d新生SD大鼠,常规方法培养心肌细胞,给予模拟缺氧(缺血)液、模拟复氧(再灌注)液以及药理性预适应药物阿魏酸钠以分析K⁺_ATP通道、NO及PKC的影响。结果与对照组比,单纯缺氧/复氧使LDH,CK,MDA及LD水平显著升高,细胞搏动频率、细胞存活率和SOD,GSH-Px活力显著下降。SF预适应后明显减轻上述变化。Glib,L-NAME和Ploy B均部分取消SF预适应的减轻作用。结论SF预适应对心肌细胞缺氧/复氧损伤有显著的保护作用;此保护心肌过程是多种因素综合作用的结果。     

大蒜多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

大蒜(Garlic)为百合科葱属多年生草本植物,现代医学研究证明[1]:大蒜具有降血脂、防治冠心病、消炎杀菌、抗肿瘤、保护肝脏、降血压、降血脂和延缓衰老等作用,其作用可能与大蒜多糖(Garlic polysaccharide,GP)有关.GP约占大蒜干物质总量的80％以上,是一种新的食品资源[2].     

川芎嗪对复氧后损伤心肌细胞的影响

目的：观察川芎嗪对大鼠心室肌细胞缺氧－复氧损伤的作用,方法：在缺氧－复氧条件下,测量对照组和不同浓度川芎嗪组对杆形心肌细胞百分比,心肌细胞释放乳酸脱氢酶（LDH）和心肌细胞类脂过氧化产物－丙二醛（MDA）含量。结果：缺氧－复氧对大鼠心室肌细胞有损伤作用。浓度为4umol/L的川芎开始对缺氧－复氧损伤细胞有保护作用,它能抑制损伤细胞挛缩,提高损伤细胞生存率,抑制细胞LDH的释放,减少MDA的生成,且剂量越大,保护作用越好,即川芎嗪对缺氧－复氧损伤细胞的保护呈剂量依赖性,结论：川芎嗪对缺氧一复氧损伤的心肌细胞具有保护作用。它能显著地对抗缺氧－复氧对心室肌细胞的损伤。     

附子多糖对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的保护机制

目的 以细胞凋亡的线粒体信号通路为着眼点,对附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制进行探讨。方法 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧后适应组和附子多糖组。缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3 h后复氧6 h;缺氧后适应组在细胞缺氧3 h后,复氧前即给予3个循环的5 min复氧/5 min缺氧,随后复氧6 h;附子多糖组在缺氧3 h后,将心肌细胞换入含附子多糖浓度为10 g·L^-1的培养液中常规培养6 h。流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率和线粒体膜电位,进行凋亡诱导因子(AIF)的Western blotting分析,检测心肌细胞内SOD活性和MDA含量。结果 与缺氧/复氧组相比较,附子多糖后处理可以保护心肌细胞SOD活性,减少MDA的生成,阻止线粒体膜电位的下降,抑制AIF自线粒体向胞浆的释放,减少心肌细胞凋亡率。结论 附子多糖后处理对缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制与其抗氧化损伤,抑制细胞凋亡的线粒体信号途径有关。     

阿片受体激活对培养心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的：观察δ阿片受体激活剂D-丙（2）-D-亮（5）脑啡肽（DADLE）对培养心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的保护作用。方法：采用培养的SD大鼠乳鼠的心肌细胞，建立H／R损伤模型，检测指标包括：（1）心肌细胞形态；（2）心肌细胞存活率；（3）超氧化物歧化酶（SOD）活性；（4）丙二醛（MDA）含量；（5）乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果-模型组缺氧后心肌细胞存活率降低，复氧30min后进一步下降，各个时间点细胞内SOD活性下降，MDA含量升高，LDH活性升高，与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．01），复氧60min后各指标逐渐趋于正常状态；DADLE 1μmaol／L组细胞存活率升高，LDH活性降低，MDA含量逐渐趋于正常，SOD活性逐渐回升，表明经DADLE干预后，心肌细胞抗损伤能力加强，发生损伤的程度减轻；δ阿片受体抑制剂纳曲吲哚10μmol／L抑制DADLE的保护作用。结论：DADLE通过δ阿片受体对乳鼠心肌细胞H／R损伤具有保护作用。     

丹红注射液预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制

目的探讨丹红注射液(DH)预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其相关机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,分离培养SD乳鼠心肌细胞,在培养3d后随机分为5组(每组实验重复6次):正常对照(control)组、缺氧/复氧(A/R)组,丹红注射液低剂量(终浓度为0.2μmol/ml)(DHL+A/R)组,丹红注射液中剂量(终浓度为0.6μmol/ml)(DHM+A/R)组,丹红注射液高剂量(终浓度为1.8μmol/ml)(DHH+A/R)组。测定各组心肌细胞存活率,培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量,以及细胞内ATP水平。结果与对照组比较,A/R组心肌细胞存活率、细胞培养液中SOD活性和细胞内ATP水平均明显降低(均P<0.01),而培养液中LDH水平明显增加(P<0.01)。与A/R组比较,DH+A/R各剂量组心肌细胞存活率、细胞内SOD含量和细胞内ATP水平均明显增加(均P<0.01),而培养液中LDH水平均明显降低(P<0.01);其中又以DHH+A/R组细胞的存活率升高明显,与DHL+A/R组比较有显著差异(P<0.05)。结论丹红注射液预处理可减轻心肌细胞A/R损伤,其机制可能为丹红注射液增加了细胞的内源性抗氧化剂活性,改善了心肌细胞能量代谢;且在一定范围内呈剂量依赖性,随着剂量的升高,保护作用更明显。     

Bcl-2介导的芹菜素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤作用

目的探讨芹菜素(apigenin,Api)在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用,并阐明Api对心肌损伤的保护作用是否主要由Bcl-2介导。方法培养H9c2心肌样细胞;随机分为正常对照(Cont)组、缺氧/复氧(Anoxia/Reoxygenation,A/R)组、Api预处理组、Api+ABT-737组。MTT法检测细胞存活率;Western blot法检测Bcl-2表达;比色法检测培养液LDH活性、细胞SOD及GSH-Px活性、MDA含量;流式细胞仪检测心肌细胞ROS含量、线粒体膜电位及细胞凋亡。结果 Api预处理25 h后,心肌细胞Bcl-2表达呈剂量依赖性上调(P<0.01);细胞存活率升高,培养液LDH活性降低,细胞SOD、GSH-Px活性升高,MDA含量与ROS生成减少,线粒体膜电位更为稳定,细胞凋亡减少(P<0.01);Bcl-2抑制剂ABT-737则可取消Api的上述心肌保护作用。结论Api抗心肌A/R损伤作用涉及Bcl-2信号通路,至少部分依赖于其对Bcl-2表达水平的上调。     

白藜芦醇对抗线粒体电压依赖性阴离子通道介导心肌损伤作用的研究

目的从细胞水平探讨白藜芦醇抗心肌损伤保护作用机制,明确其与线粒体电压依赖性阴离子通道(VDAC)的关系。方法以pFLAG质粒为载体,构建VDAC1真核表达载体pFLAG-VDAC1。H9c2心肌细胞随机分为5组,Control组、缺氧/复氧(A/R)组、白藜芦醇组、pFLAG-VDAC1-白藜芦醇组和pFLAG-白藜芦醇组。Western blot法测定VDAC1的蛋白表达,MTT法检测细胞存活率,生化自动分析仪测定LDH、CPK活性,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔道(mPTP)的开放。结果 A/R处理后,VDAC1表达上调,细胞存活率下降,LDH和CPK活性增高,mPTP开放;而白藜芦醇则能抑制VDAC1的上调,并降低mPTP开放程度,对抗A/R损伤;但VDAC1高表达的pFLAG-VDAC1-白藜芦醇组则可取消白藜芦醇的心肌保护作用。结论白藜芦醇抗A/R损伤作用与VDAC1密切相关,其可通过下调VDAC1从而防止mPTP的开放,保护心肌细胞。     

卡托普利对培养大鼠心肌细胞缺氧和复氧损伤的保护作用

应用细胞内微电极技术观察列卡托普利(captopril, Cap)在40mg·L~(-1)浓度下能延长培养大鼠心肌细胞在缺氧环境中的搏动时间,减少搏动节律失常的发生。部分纠正由复氧所致异常心肌细胞电活动参数,缓解心肌细胞复极后再次停搏的发生,     

黄芪多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对乳大鼠培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法取体外培养的乳大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型,实验分为5组:空白对照组;模型组(A/R组);3个APS给药组,于缺氧及复氧开始时分别加入终浓度为10、30、100mg·mL-1的APS,观察APS对细胞上清液中缺氧/复氧后LDH、CK、AST漏出量、MDA含量、SOD活性。用MTT法检测APS对缺氧/复氧损伤心肌细胞存活率的影响。用流式细胞仪测定APS对缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡的影响。结果 APS可明显减少缺氧/复氧后LDH、CK、AST漏出量(P<0.05或P<0.01);降低MDA含量,提高SOD活性(P<0.05或P<0.01);明显提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率,并能明显抑制缺氧/复氧损伤心肌细胞凋亡。结论 APS对培养心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,作用机制与其增强细胞抗氧化作用,减少自由基及脂质过氧化物导致的细胞膜损伤和抑制细胞凋亡有关。     

丹参对缺氧/复氧心肌的保护作用涉及百日咳毒素敏感的G蛋白

目的研究丹参注射液对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其机制.方法采用酶解分离成年大鼠心室肌细胞化学缺氧模型,用视频跟踪计算机系统、细胞内双波长钙荧光系统和光学法分别观察心肌细胞收缩力学、细胞内钙和乳酸脱氢酶(LDH)释放等指标.结果丹参(3g/L)处理后降低心肌细胞最大收缩和舒张速率、收缩幅度以及电刺激诱导的钙瞬态幅度.缺氧导致细胞收缩力和钙瞬态幅度降低、舒张末细胞长度缩短、舒张末钙水平增高,复氧后各指标有所回复.缺氧/复氧引起LDH释放增多.用3g/L的丹参处理后,缺氧/复氧引起的心肌细胞最大收缩和舒张速率、收缩幅度和电刺激诱导的钙瞬态幅度高于单纯缺氧组,舒张末钙水平低于单纯缺氧组,LDH释放减少.预先用百日咳毒素处理,丹参引起的心肌保护作用被减弱.结论丹参可能通过百日咳毒素敏感的G蛋白发挥对缺氧/复氧损伤心肌的保护作用.