隐孢子虫免疫学检测方法研究进展

隐孢子虫病是一种重要的人兽共患机会性致病原虫病,可通过食源和水源等途径传播,主要引起免疫抑制人群和易感动物腹泻,有重要的公共卫牛意义.免疫学检测方法有特异性强、灵敏度高等特点,应用广泛.该文主要介绍了免疫荧光榆测、酶免疫分析法、免疫层析法、酶联免疫电转印法、免疫磁珠分离法、流式细胞仪技术等几种常用的隐孢子虫免疫学检测方法,并初步分析了各种方法的优、缺点.     

人隐孢子虫的研究进展

人隐孢子虫（C．horni。is）为近年来被新命名的隐孢子虫种之一，作为引起人体隐孢子虫病的主要病原之一，受到研究者的广泛关注，近年来对其生物学特性，流行病学，基因组学等相关方面开展了大量的研究，本文主要从上述3方面综述了人隐孢子虫的研究现状。     

隐孢子虫免疫学检测方法研究进展

隐孢子虫病是一种重要的人兽共患机会性致病原虫病,可通过食源和水源等途径传播,主要引起免疫抑制人群和易感动物腹泻,有重要的公共卫牛意义.免疫学检测方法有特异性强、灵敏度高等特点,应用广泛.该文主要介绍了免疫荧光榆测、酶免疫分析法、免疫层析法、酶联免疫电转印法、免疫磁珠分离法、流式细胞仪技术等几种常用的隐孢子虫免疫学检测方法,并初步分析了各种方法的优、缺点.     

隐孢子虫免疫学检测方法研究进展

隐孢子虫病是一种重要的人兽共患机会性致病原虫病,可通过食源和水源等途径传播,主要引起免疫抑制人群和易感动物腹泻,有重要的公共卫牛意义.免疫学检测方法有特异性强、灵敏度高等特点,应用广泛.该文主要介绍了免疫荧光榆测、酶免疫分析法、免疫层析法、酶联免疫电转印法、免疫磁珠分离法、流式细胞仪技术等几种常用的隐孢子虫免疫学检测方法,并初步分析了各种方法的优、缺点.     

隐孢子虫免疫学检测方法研究进展

隐孢子虫病是一种重要的人兽共患机会性致病原虫病,可通过食源和水源等途径传播,主要引起免疫抑制人群和易感动物腹泻,有重要的公共卫牛意义.免疫学检测方法有特异性强、灵敏度高等特点,应用广泛.该文主要介绍了免疫荧光榆测、酶免疫分析法、免疫层析法、酶联免疫电转印法、免疫磁珠分离法、流式细胞仪技术等几种常用的隐孢子虫免疫学检测方法,并初步分析了各种方法的优、缺点.     

隐孢子虫免疫学检测方法研究进展

隐孢子虫病是一种重要的人兽共患机会性致病原虫病,可通过食源和水源等途径传播,主要引起免疫抑制人群和易感动物腹泻,有重要的公共卫牛意义.免疫学检测方法有特异性强、灵敏度高等特点,应用广泛.该文主要介绍了免疫荧光榆测、酶免疫分析法、免疫层析法、酶联免疫电转印法、免疫磁珠分离法、流式细胞仪技术等几种常用的隐孢子虫免疫学检测方法,并初步分析了各种方法的优、缺点.     

隐孢子虫免疫学检测方法研究进展

隐孢子虫病是一种重要的人兽共患机会性致病原虫病,可通过食源和水源等途径传播,主要引起免疫抑制人群和易感动物腹泻,有重要的公共卫牛意义.免疫学检测方法有特异性强、灵敏度高等特点,应用广泛.该文主要介绍了免疫荧光榆测、酶免疫分析法、免疫层析法、酶联免疫电转印法、免疫磁珠分离法、流式细胞仪技术等几种常用的隐孢子虫免疫学检测方法,并初步分析了各种方法的优、缺点.     

隐孢子虫病分子检测技术进展

隐孢子虫病是由隐孢子虫引起的一类严重的机会致病性人兽共患寄生虫病.隐孢子虫卵囊很小,在光镜下观察缺乏明显的特征,检测相当困难.为寻找高效的检测方法,近年来在隐孢子虫分子检测方面进行了大量的研究,该文对各种PCR以及基因芯片检测技术作一综述.     

隐孢子虫免疫学检测方法研究进展

隐孢子虫病是一种重要的人兽共患机会性致病原虫病,可通过食源和水源等途径传播,主要引起免疫抑制人群和易感动物腹泻,有重要的公共卫牛意义.免疫学检测方法有特异性强、灵敏度高等特点,应用广泛.该文主要介绍了免疫荧光榆测、酶免疫分析法、免疫层析法、酶联免疫电转印法、免疫磁珠分离法、流式细胞仪技术等几种常用的隐孢子虫免疫学检测方法,并初步分析了各种方法的优、缺点.     

夹心ELISA检测微小隐孢子虫抗原方法的建立及初步应用

目的 建立检测隐孢子虫的夹心ELISA方法。方法 本试验以纯化的抗隐孢子虫IgG、IgY分别作为包被抗体和捕获抗体,棋盘滴定法确定夹心ELISA的最适工作条件。用基于18SrRNA的PCR方法评估饱和蔗糖溶液、饱和食盐水漂浮和PBST洗涤剂洗涤3种方法预处理样品对夹心ELISA检测效果的影响。结果 建立的夹心ELISA捕获抗体、抗原、检测抗体、酶标二抗最佳工作浓度分别是1∶800、2.5 μg/mL、1∶100和1∶5 000,最适捕获抗体包被、抗原抗体反应、酶标二抗反应条件分别为37 ℃作用1 h后4 ℃过夜、37 ℃作用30 min、45 min;最适终止条件是2 mol/L H₂SO₄,50 μL/孔;TMB室温显色10 min;特异性试验结果显示仅可以检出隐孢子虫抗原,而与常见肠道寄生的球虫卵囊、圆线虫和蛔虫虫卵无交叉反应。批间和批内变异系数均小于10%。3种方法前处理粪便用于ELISA检测与nested-PCR检测结果总符合率分别为95.83%、91.67%和83.33%,以饱和蔗糖溶液漂浮法处理检测样品的效果最佳。与爱德士的隐孢子虫检测试剂盒比较,结果显示,本方法敏感性低于爱德士试剂盒的最低检出量(6×10³个/mL),整个试验过程比试剂盒多用15 min,但特异性和重复性均一致,且本试验方法更加经济实用。结论 该方法简便,快速,灵敏,可用于临床粪样中隐孢子虫病原检测或隐孢子虫流行病学调查研究。     

间接ELISA法检测血清隐孢子虫抗体IgG及IgM的实验研究

目的　间接ELISA法检测小鼠隐孢子虫抗体诊断隐孢子虫病的敏感性和实用性。方法　经过方阵滴定检测确定最佳的酶标抗体的工作浓度和最佳的抗原包被量 ,进一步测定血清隐孢子虫抗体的光密度 ,并设立阴性对照组比较。结果　 10、5 0、10 0、5 0 0个卵囊剂量组和阴性对照组比较均具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;将剂量对数与OD490 值作相关分析 ,IgG的相关系数r=0 .990 ,P <0 .0 5 ;IgM的相关系数r=0 .95 4 ,P <0 .0 5 ;各组剂量对数与OD490 作回归分析 ,呈线性关系 ,P <0 .0 5。结论　间接ELISA法检测血清隐孢子虫抗体具有较高的敏感性和特异性 ,适合常规的流行病学调查     

Human cryptosporidiosis and Cryptosporidium spp. in Haiti

Contamination by water-born infectious diseases is closely linked to urban slums conditions such as overcrowding and high level of faecal pollution by animal and human excreta. In this environment, cryptosporidiosis is a major cause of acute diarrhoea in children and chronic persistent diarrhoea in AIDS patients, resulting in increased morbidity and mortality in both populations. The aims of this study conducted in Port-au-Prince, Haiti were to: (i) determine the frequency of Cryptosporidium infection in two populations of patients with diarrhoea, children and AIDS patients, and the existence of Cryptosporidium carriage in healthy adults living in close contact with them; (ii) identify by molecular genotyping the Cryptosporidium species involved; and (iii) evaluate the viability of Cryptosporidium oocysts isolated from human stools. From January 2000 to January 2001, 158 of 1529 diarrhoea stool samples collected from 93 patients with diarrhoea, 57 adults followed at Centres GHESKIO and 36 children admitted at the University Hospital in Port-au-Prince contained Cryptosporidium oocysts (10.3%). The majority of adult patients (98%) were HIV-infected whereas the majority of children (81%) tested negative for HIV. Cryptosporidium was documented in only 1/102 healthy persons living in contact with Cryptosporidium infected patients and infection was with the same genotype as that of the contact patient. Among the 69 Cryptosporidium isolates studied for genotyping, three species were identified: C. hominis (59%), C. parvum (38%) and C. felis (3%). The two C. felis cases are the first reported from AIDS patients in the Caribbean. Most of the children regardless of their HIV status were infected with C. hominis (72%), whereas AIDS patients were more likely to be infected by either human or animal genotypes. These data confirm that immunocompromised individuals are susceptible to a wide range of Cryptosporidium spp. Viability of Cryptosporidium oocysts were determined in an experimental mouse model for 17/18 specimen studied including in 12/13 C. hominis, 4/4 C. parvum and 1/1 C. felis. Infectivity in newborn mice was found to be dose-dependent and more effective with C. parvum than the other two genotypes. Cryptosporidiosis remains a frequent hazard for both AIDS patients and young children in Haiti because of poor hygiene, particularly contaminated water and overcrowded conditions associated with urban slums.     

长春地区医院就诊患者隐孢子虫感染的血清学检测

表达并纯化微小隐孢子虫表面抗原CP23重组蛋白,蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫反应性。采集2010年8～11月份长春市部分医院的各年龄段患者血清,用间接ELISA法检测血清中抗CP23的IgG抗体。Westernblotting分析结果显示,重组蛋白CP23能被感染微小隐孢子虫的牛血清和人阳性血清识别,不能被感染日本血吸虫的小鼠血清、恶性疟患者血清和人阴性血清识别。共采集血清2 046份,总阳性率为3.2%(65/2 046),男性和女性阳性率分别为2.7%(28/1 036)和3.7%(37/1 010),性别间差异无统计学意义(P>0.05)。不同年龄段人群的阳性率差异有统计学意义(P<0.05),71～80岁年龄段的阳性率最高(8.6%,13/152)。     

利用PCR技术检测阴道毛滴虫体内的人型支原体

采用人型支原体16S rDNA的特异引物，对从广州市多所医院门诊患者分离到的28株阴道毛滴虫进行PCR检测，结果有12株感染了人型支原体，感染率为42.9%。这显示了阴道毛滴虫和人型支原体之间的共生关系在中国具有普遍性。     

PCR-ELISA检测弓形虫实验研究

目的建立快速、敏感、特异、稳定的PCR—ELISA方法，并用其检测感染动物体内的弓形虫。方法将生物素标记的PCR产物与地高辛标记的特异性探针杂交，再通过酶免显色反应测出OD值。以判断弓形虫感染情况。测定该方法的敏感性、特异性及稳定性。再分别以10^4、10^3弓形虫RH株速殖子腹腔接种小鼠。取全血、肝组织用PCR—ELISA检测小鼠感染情况。结果本实验中，PCR-ELISA方法的检测闻值为20fg弓形虫DNA，其灵敏度是电泳法的10倍，并且与人、小鼠、疟原虫、旋毛虫等DNA均无交叉反应。同一样本重复测试5次，结果经统计学检验，一致性良好（Alpha=0．72）。检测感染动物肝组织及全血标本，10^4、10^3组分别在感染后第二d、第三d即可测出阳性，两种标本的阳性检出效率无统计学差异（P〉0．05）。结论PCR—ELISA是一种快速、敏感、特异、稳定的检测方法，可试用于临床弓形虫病的诊断及流行病学调查。     

基于SYBR Green检测微小隐孢子虫的实时荧光定量PCR方法的建立及应用

目的建立一种方便快捷的检测微小隐孢子虫的实时荧光定量PCR（Real-time PCR）方法。方法根据GenBank公布的微小隐孢子虫18s rRNA基因序列设计1对引物,通过质粒DNA和卵囊检测标准曲线的绘制及特异性和重复性的研究,建立检测微小隐孢子虫的基于SYBR Green的Real-time PCR方法,进而对奶牛粪便进行检测。结果建立的Real-time PCR法对检测微小隐孢子虫具有很高的特异性,质粒DNA和卵囊的检测阈值分别达到1个拷贝和10个卵囊,奶牛粪便阳性率为25.93%（21/81）,高于普通PCR检测率20.99%（17/80）。结论建立的Real-timePCR方法简便、快速,特异性强,敏感度高,可用于微小隐孢子虫的快速定量检测。     

静脉吸毒人群隐孢子虫感染血清免疫学调查

目的调查静脉吸毒人群的隐孢子虫感染情况。方法采集588例静脉吸毒人群及384例健康人群血清标本,用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中隐孢子虫抗体阳性率。比较各组差异。结果588例静脉吸毒人员隐孢子虫血清阳性率为69．90％,而健康人群阳性率为29．43％,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。女性静脉吸毒人员隐孢子虫血清阳性率为79．01％,男性为65．85％,两者差异有统计学意义（P〈0.05）。隐孢子虫感染率在不同年龄组、不同吸毒年限组和丙型肝炎抗体阳性组差异无统计学意义。结论静脉吸毒人群隐孢子虫感染率高于普通人群,其中女性吸毒人群高于男性吸毒人群。应加强对吸毒人群隐孢子虫病的防治。