肝硬化患者外周血单核细胞内毒素受体表达与慢性炎症反应关系的临床意义

背景:内毒素受体在内毒素、细胞因子等介导的炎性信号转导过程中具有重要作用。目的:了解肝硬化患者外周血单核细胞(PBMC)内毒素受体的表达变化与慢性炎症反应关系的临床意义。方法:应用荧光素标记的抗人Toll样受体(TLR)4/抗人CD14单抗,以流式细胞术检测40例肝硬化患者和15名健康志愿者PBMC内毒素受体TLR4和CD14蛋白的表达;以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内毒素受体TLR4 mRNA、CD14 mRNA和信号转导分子MyD88 mRNA的表达;以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;以偶氮基质显色法测定血浆内毒素水平。结果:肝硬化患者PBMC内毒素受体TLR4和CD14蛋白的表达水平显著高于对照组(P<0.05),但不同Child-Pugh分级组间差异无统计学意义;与对照组相比,PBMC内毒素受体TLR4 mRNA、CD14 mRNA和信号转导分子MyD88 mRNA的表达水平也有增高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);肝硬化患者血清细胞因子IL-1β、IL-10和TNF-α水平,以及血浆内毒素水平均较对照组显著升高(P<0.05),且高内毒素水平患者内毒素受体的表达显著高于低内毒素水平患者(P<0.05),细胞因子水平也较低内毒素水平者增高。结论:肝硬化患者PBMC内毒素受体的表达明显上调,与患者的慢性炎症反应状态一致。     

乙型病毒性肝炎肝硬化患者血清TLRs、vWF水平与肝功能的相关性

[目的]观察乙型病毒性肝炎(乙肝)肝硬化患者血清单核细胞Toll样受体(TLRs)、血管性假血友病因子(vWF)水平;分析二者与患者肝功能的相关性,为后期评估、预测乙肝肝硬化患者肝功能提供新的标志物。[方法]将入选本院收治的87例乙肝肝硬化患者设为乙肝肝硬化组,另选取同期本院接收的80例未发生肝硬化的乙肝患者设为对照组;参照肝功能Child-Pugh分级标准评估乙肝肝硬化患者肝功能分级情况。检测入选患者血清vWF水平、血清TLR2、TLR4表达,分析乙肝肝硬化患者血清TLRs(TLR2、TLR4)、vWF水平与肝功能的关系。[结果]乙肝肝硬化组患者TLR2、TLR4、vWF表达均高于对照组(P<0.001);乙肝肝硬化组患者经评估肝功能A级、B级、C级患者分别有34例、31例、22例;肝功能B级、C级者血清TLR2、TLR4、vWF表达高于肝功能A级者,且肝功能C级者血清TLR2、TLR4、vWF表达高于肝功能B级者(P<0.001);相关性检验结果显示,乙肝肝硬化患者血清TLR2、TLR4、vWF表达与肝功能分级均呈正相关(r>0,P<0.05);绘制ROC曲...     

肝硬化患者外周血单核细胞表面TLR4和TLR2表达的临床意义

目的:探讨肝硬化患者外周血中单个核细胞(PBMC)表面Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)、TLR2表达与肝硬化患者细菌感染的关系,观察抗生素治疗对TLR4与TLR2表达的影响.方法:采用三色荧光染色法,荧光素标记的抗TLR2/抗TLR4/抗CD14mAb对42例肝硬化患者及正常人的血液单核细胞表面TLR2、TLR4及CD14分子进行免疫荧光染色,应用流式细胞仪检测.结果:肝硬化腹水组TLR2和TLR4表达(n=30,TLR2,47.65±0.75;TLR4,22.28±0.80)与正常对照组(n=15,TLR2,24.40±2.77;TLR4,14.45±3.23)比较有显著性差异(P<0.05),肝硬化腹水患者治疗前(n=20,TLR2,47.79±0.76;TLR4,28.58±0.79)和治疗后(n=20,TLR2,17.22±2.48;TLR4,12.37±0.35)比较有显著性差异(P<0.05);肝硬化腹水患者与肝硬化无腹水患者组(n=12,TLR2,25.37±1.62;TLR4,14.81±0.29)比较有显著性差异(P<0.05);肝硬化无腹水患者组与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05).结论:肝硬化腹水患者TLR4与TLR2的表达显著上调,抗生素治疗后显著下调.     

急性冠状动脉综合征患者循环血单核细胞Toll样受体4的表达及其意义

目的:探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者循环血单核细胞Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和超敏C反应蛋白(hsCRP)的表达及其临床意义.方法:92例入选者分为4组:ACS组,48例(其中急性心肌梗死24例,不稳定型心绞痛24例);稳定型心绞痛组,12例;正常对照组,32例.比较各组间TLR4 、TNF-α、hsCRP表达差异, 分析TLR4与TNF-α、hsCRP的相关性.结果:ACS组TLR4、TNF-α、hsCRP的表达均较稳定型心绞痛组和正常对照组显著增高(P<0.05),TLR4与TNF-α、hsCRP呈正相关(P<0.05).结论:ACS患者TLR4的表达增高,提示TLR4启动的免疫炎症机制参与冠心病的发生、发展.     

Toll样受体4在猪急性坏死性胰腺炎肠道组织中的表达及其意义

目的:探讨猪急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)回肠组织中Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)的表达及其意义.方法:选择太湖梅山猪,随机分成对照组(C,n=4)、急性坏死性胰腺炎组(ANP,n=4).诱导制备ANP模型.用分光光度法检测血清及回肠组织匀浆中二胺氧化酶(DAO)活性;动态比浊法检测血浆内毒素水平;RT-PCR检测回肠黏膜组织TLR4、TNF-α及IL-6mRNA表达.结果:ANP组回肠组织DAO水平明显低于C组,血清中DAO明显升高(P<0.05).ANP组血浆内毒素水平较C组明显升高(P<0.05);回肠黏膜组织TLR4、TNF-α、IL-6mRNA在C组表达非常低,ANP组表达明显增加;TLR4mRNA表达水平与肠黏膜DAO水平呈负相关(r=-0.762,P=0.028),与血浆内毒素呈正相关(r=0.778,P=0.023).结论:ANP时回肠组织内TLR4mRNA表达上调,可能与ANP肠黏膜屏障功能障碍有关;其可能机制与TLR4介导激活核转录因子NF-αB信号转导途径有关.     

Sema4D在乙型肝炎肝硬化患者外周血T淋巴细胞和血清中的表达及意义

目的 研究乙型肝炎肝硬化患者外周血T淋巴细胞和血清中Sema4D的表达，分析其与临床指标的相关性。方法 纳入2020年10月—2021年11月在联勤保障部队第九四〇医院就诊的20例慢性乙型肝炎(CHB)患者，68例乙型肝炎肝硬化患者以及20例健康对照者。根据Child-Pugh分级标准将乙型肝炎肝硬化患者分为Child-Pugh A级组(n=24)、B级组(n=24)和C级组(n=20)。采集患者外周血，分离血清及外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测PBMC中膜结合型Sema4D(mSema4D)⁺CD4⁺T、mSema4D⁺CD8⁺T淋巴细胞的表达，酶联免疫吸附实验检测血清中可溶型Sema4D(sSema4D)的表达，分析其与病毒复制、肝脏炎症指标的相关性。符合正态分布的计量资料多组间比较用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验；非正态分布的计量资料多组间比较用Kruskal-Wallis H检验，进一步两两比较采用Mann-Whitney U检验；采用Spearman进行相关性...     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体表达与调节性T细胞相关性分析

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体2、4、9(TLR2,TLR4,TLR9)表达及PBMC中CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)特点和影响因素.方法 采用流式细胞术检测PBC患者(52例)和健康对照者(22例)外周血PBMC中TLR2、4、9阳性细胞及Tregs比例,比较其在PBC患者和健康对照者中的差别并分析TLR与Tregs相关性.结果 PBC患者Tregs比例低于健康对照者[(1.53+1.33)vs(4.42±1.43),P＜0.0001],TLR4阳性细胞比例高于健康对照者[(36.95±3.53)vs(32.84±8.06),P=0.003];PBC患者Tregs比例与TLR9阳性细胞比例呈负相关(R2 =0.115,P=0.016),健康对照者Tregs比例与TLR2,4和TLR2,4,9联合表达阳性细胞比例呈负相关(R2=0.326,P=0.007;R2 =0.226,P=0.034).结论 PBC患者外周血PBMC中Tregs比例降低,TLR4表达升高,可能受肝硬化失代偿期腹腔感染的影响.     

Toll样受体4在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达的实验研究

目的 观察心肌缺血再灌注早期Toll样受体4 mRNA(TLR4 mRNA)及蛋白表达,探讨TLR4在心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠随机分为2组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组),每组36只,建立大鼠心肌缺血再灌注模型,按照不同的再灌注时间(0、0.5、1、24和8 h)处死动物.光镜和电镜观察心肌组织形态及超微结构改变.免疫组化检测心肌TLR4蛋白表达情况.实时定量逆转录聚合酶链反应定量心肌TLR4 mRNA表达水平.酶联免疫吸附试验测定心肌中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 (1)Sham组心肌组织形态及超微结构改变不明显;IR组心肌损伤较重,缺血心肌恢复血液灌注8 h内,其病理学变化未见显著改善.(2)Sham组与IR组TLR4蛋白都有阳性表达,IR组TLR4表达增加,且以再灌注1 h最为明显(19.62±3.84,P＜0.01).(3)与Sham组比较,IR组心肌,TLR4 mRNA表达水平均出现不同程度上调,以再灌注1 h达到峰值[(4.03±0.85)×10-2,P＜0.01],而Sham组各时间点未见明显改变.(4)IR组心肌TNF-α水平高于各对应时间点Sham组(P均＜0.05),且心肌TLR4 mRNA表达与TNF-α呈正相关(r=0.728,P＜0.01).结论 心肌缺血再灌注早期,心肌TLR4表达迅速上调,TLR4的激活可能通过促进TNF-α等炎性因子的产生分泌增多来介导心肌缺血再灌注损伤.     

TLR2信号通路对急性冠状动脉综合征患者冠脉病变的影响

目的：探讨TLR2信号通路激活对急性冠状动脉综合征患者冠脉病变的影响。 方法：选择2015年1月至12月在我院行冠状动脉造影确诊的180例急性冠状动脉综合征患者为研究组;对照组是因胸痛入院但经冠状动脉造影排除冠状动脉粥样硬化,并除外其他疾病的患者50例。用流式细胞仪检测单核细胞表面TLR2蛋白表达,ELISA 法检测血清TNF-α、IL-6水平,免疫浊度法测定 hsCRP,冠状动脉造影评价：冠状动脉造影评分采用 Gensini 评分标准,并根据Gensini 评分将患者分为低Gensini组(n=44)、中Gensini组(n=95)及高Gensini组(n=41)组,比较各组之间TLR2表达比例、TNF-α、IL-6及hsCRP水平。术后电话随访1月、3个月、6个月不良心血管事件的发生情况。 结果：急性冠状动脉综合征患者单核细胞TLR2表达比例、TNF-α、IL-6及hsCRP均较对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05)。多支病变组和两支病变组外周血单核细胞表面TLR2表达水平及TNF-α、IL-6及hsCRP高于单支病变组,差异有统计学意义(P＜0.05)。Gensini评分高者,单核细胞TLR2表达比例高（90.33±12.46）%,TLR2水平与Gensini评分呈正相关(r=0.297,P=0.009) ,TNF-α、IL-6、 hsCRP 与 Gensini 评分呈正相关(r=0.396,P=0.019;r=0.113,P=0.024;r=0.201,P=0.005),高Gensini组比低Gensini组不良心血管事件比例高（10.52% vs 4.76%）,差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论:急性冠状动脉综合征患者单核细胞TLR2蛋白表达水平能预测冠脉病变严重性,TLR2信号通路激活对冠心病风险的预测价值。 关键词 急性冠状动脉综合征;Toll样受体2;冠状动脉狭窄;危险因素     

肝硬化患者的内毒素和脂多糖结合蛋白水平及其与预后的关系

背景脂多糖结合蛋白(LBP)是介导脂多糖(LPS)活化单核/巨噬细胞的关键因子。尽管内毒素在慢性肝病和肝硬化中具有重要作用,但其结合蛋白在肝硬化中的意义尚不清楚。目的了解肝硬化患者的内毒素和LBP水平,并探讨其与预后的关系。方法分别以基质显色法鲎试验和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平;伴腹水患者同时测定腹水内毒素和LBP水平,并进行2个月的短期随访,记录存活情况。结果肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平均显著高于健康对照者(P<0.05),其中伴腹水患者的血浆内毒素水平显著高于无腹水患者(P<0.05)。Child鄄PughC级肝硬化伴腹水患者的腹水内毒素水平显著高于B级患者(P<0.05),而B级患者的血浆LBP水平显著高于C级患者(P<0.05)。短期随访显示肝硬化伴腹水死亡患者的腹水内毒素水平显著高于存活者(P<0.05)。结论肝硬化患者的血浆内毒素和LBP水平均升高,LBP水平升高可能是对肝硬化肠源性内毒素血症的一种持续的慢性炎症应答。腹水内毒素水平可以作为肝硬化伴腹水患者短期生存的一个预测指标。     

Plasma erythropoietin level in patients with cirrhosis and its relationship to the severity of cirrhosis and renal function

BACKGROUND AND AIM: The level of plasma erythropoietin (EPO) in patients with cirrhosis is controversial. It is known that overproduction of nitric oxide (NO) plays, in part, a role for the development of peripheral arterial vasodilatation in cirrhosis with portal hypertension. It has also been hypothesized that a possible interaction is noted between endogenous EPO and NO production. The current study was undertaken to evaluate the relationship between plasma EPO levels and the severity of liver disease, hemodynamic values, renal functions, and plasma nitrate/nitrite levels in patients with cirrhosis. METHODS: The authors measured the biochemistry, plasma EPO and nitrate/nitrite levels in 67 patients with cirrhosis (Child-Pugh class A in 23 and Child-Pugh class B and C in 44) and compared their values with those in 34 healthy subjects. Systemic and splanchnic hemodynamic measurements and effective renal plasma flow were obtained from cirrhotic patients. RESULTS: Plasma EPO and nitrate/nitrite levels were significantly increased in patients with cirrhosis compared with healthy subjects. Additionally, plasma EPO values were higher in cirrhotic patients with ascites or with anemia than in those without ascites or without anemia, respectively. Plasma EPO levels were positively correlated to the hepatic venous pressure gradient (HVPG) and Child-Pugh score, negatively correlated to the renal and hepatic blood flows, but were not correlated to nitrate/nitrite level and systemic vascular resistance in cirrhotic patients. Multiple regression analysis showed that HVPG and renal plasma flow were independent predictors for the elevated EPO level in cirrhotic patients. CONCLUSIONS: Plasma EPO levels were increased in patients with cirrhosis compared with those in healthy subjects. The increase in plasma EPO levels is related to the degree of portal hypertension, the severity of cirrhosis and the renal plasma flow. In contrast, the EPO levels had no correlation to the nitrate/nitrite levels and systemic vascular resistance in patients with cirrhosis.     

肝硬化患者血浆亮啡肽,神经肽Y含量的变化及临床意义

目的　探讨肝硬化患者血浆亮啡肽（ＬＥＮＫ）、神经肽Ｙ（ＮＰＹ）含量的变化规律及其临床意义。方法用放射免疫法检测４９例肝硬化患者血浆ＬＥＮＫ、 ＮＰＹ含量，并以１８例慢性肝炎、１４例急性肝炎和１０名健康者作对照。结果　肝硬化患者血浆ＬＥＮＫ含量显著高于正常人和急、慢性肝炎（Ｐ＜０．０５），有腹水、肝性脑病者分别显著高于无腹水和无肝性脑病者（Ｐ＜０．０５）；而血浆ＮＰＹ水平肝硬化患者明显下降（Ｐ＜０．０５），有腹水或肝性脑病者下降更明显（Ｐ＜０．０５）。结论肝硬化患者血浆ＬＥＮＫ、ＮＰＹ等内源性神经肽水平明显变化，且以有腹水、肝性脑病等严重并发症者更为明显，提示这些神经肽可能参与了肝硬化患者的高动力状态循环异常，并与腹水及肝性脑病形成有关。     

外周血单核细胞Toll样受体4、肿瘤坏死因子-α表达与糖尿病心肌病心功能的相关性

目的探讨外周血单核细胞Toll样受体4（TLR4）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达与糖尿病心肌病（DCM）心功能的关系。方法选取2008年6月至2011年7月在广东医学院附属医院心血管内科住院的单纯2型糖尿病（T2DM）患者36例,DCM患者48例,另选同期体检的40名健康人作为对照组。按纽约心脏病协会（NYHA）心功能分级进行临床评价。检测并比较各组间外周血TLR4、TNF—α、N端B型脑钠肽（NT—BNP）表达及左心室射血分数、左室舒张末径的差异,以多元逐步回归分析法分析外周血TLR4、TNF-α与心功能的相关性。结果（1）DCM组患者的外周血单核细胞TLR4mRNA和TNF-α均高于健康对照组和T2DM组,且NT—BNP、左室舒张末径水平增加,而左心室射血分数降低（均P〈0．05）。（2）DCM组患者外周血单核细胞TLR4 mRNA在NYHA分级中呈梯次增高（Ⅰ-Ⅳ级分别为2．1±0．4、3．1±0．4、4．1±0．6、5．1±0．5,均P〈0．05）;TNF-α表达水平在NYHA分级中呈梯次增高[Ⅰ-Ⅳ级分别为（302-4-92）、（414±102）、（658±116）、（1035±108）mmol／L];NT—BNP、左室舒张末径在Ⅳ级组均显著高于Ⅰ-Ⅲ级组（均P〈0．05）,两者在Ⅰ-Ⅲ级组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）;左心室射血分数水平呈梯次减少（P〈0．05）,但两者在Ⅲ、Ⅳ级组问比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）TLR4、TNF—α与NYHA心功能分级存在线性相关（r=0．61、0．26,均P〈0．05）,其中以TLR4相关性最好,但与NT—BNP、左室舒张末径、左心室射血分数无相关关系（均P〉0．05）。（4）经多元线性回归分析显示,仅TLR4是DCM患者NYHA心功能分级的独立相关因素（回归系数=0．371,P=0．000）。结论TLR4／TNF—α信号通路与DCM心功能的严重程度正相关,可能促进DCM患者心力衰竭的发生、发展。     

内皮素在原发性胆汁性肝硬化中作用的初步研究

目的 通过观察原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血清内皮素(ET)水平以及应用熊去氧胆酸(UDCA)治疗前后血清中ET的变化,并与肝功能指标进行相关性分析,寻找ET与PBC疾病进展的关系.通过ET作用于外周血单个核细胞(PBMC)引起其分泌的肿瘤坏死因子(TNF)-α及白细胞介素(IL)-6的变化,探讨ET在PBC发病机制中可能的作用.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测量PBC患者外周血清ET的浓度.用ET-1刺激患者PBMC,检测分泌细胞因子的变化.应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)判断TNF-α基因表达的改变.结果 24例PBC患者血清ET水平为(6.0±2.8)pg/ml,明显高于健康对照组的(2.3±3.4)pg/ml.UDCA治疗前患者ET水平为(7.5±1.6)pg/ml,治疗后为(6.2±2.7)pg/ml,在90%可信区间内具有统计学意义(P=0.084).血清ET水平与患者的肝功能生化指标无明显相关性.ET-1刺激后PBC患者TNF-α的产生有明显增加(P<0.05),IL-6无显著性改变.RT-PCR证实,ET-1刺激PBMC引起TNF-α mRNA的表达增加.结论 PBC患者外周血清中ET浓度明显高于健康志愿者,且可在UDCA治疗后下降.ET-1作用于人PBMC可引起TNF-α mRNA表达上调,TNF-α分泌增加,进而可能激活前炎症因子的级联放大反应,导致PBC疾病的发生发展.     

肝硬化患者血浆VIP、CCK水平与胆囊排空功能的关系

探讨肝硬化时血浆胃肠激素水平对胆囊运动的影响。用放免法测定肝硬化患者及对照者血浆血管活性肠肽 (VIP)和胆囊收缩素 (CCK)含量 ;用B超测定餐前、餐后胆囊容积及排空率。结果 :肝硬化时血浆VIP、CCK均明显增高 (P <0 0 1,P <0 0 5 ) ;胆囊空腹容积、剩余容积均明显增大 (P <0 0 1,P <0 0 0 1) ,最大排空率较对照组无明显差异 (P >0 0 5 ) ,但Child -PughC级降低 (P <0 0 5 )。肝硬化组胆囊最大排空率与VIP呈负相关 ,胆囊空腹容积及剩余容积与VIP均呈正相关 ,胆囊空腹容积、剩余容积及最大排空率与CCK均无相关。提示肝硬化时VIP增高既抑制胆囊运动 ,又明显降低胆囊张力 ,肝硬化时可能存在对CCK的抵抗。     

2型糖尿病肾病患者外周血单个核细胞Toll样受体4的表达及TNF-α水平的研究

目的研究2型糖尿病肾病患者Toll样受体4的表达及血清TNF-α浓度水平,探讨其在糖尿病肾病发病中的作用及其可能的机制。方法将70例2型糖尿病患者（T2DM）根据尿白蛋白排泄率（UAER）分为正常白蛋白尿组（NA组,35例）、微量白蛋白尿组（MA组,23例）和大量白蛋白尿组（CP组,12例）,取20例健康体检者做为对照组,分别运用RT—PCR法、ELISA法测定其外周血单个核细胞Toll样受体4的表达及血清TNF-α浓度。结果NA组、MA组和CP组TLR4MRNA表达水平逐渐增高,MA组、CP组显著高于对照组（P〈0．01）,各组血清TNF-α浓度也逐渐升高,均显著高于对照组（P〈0．01）。TLR-4mRNA表达水平与血清TNF-α水平及UAER呈正相关（P〈0．05,P〈0．01）。结论糖尿病肾病患者外周血单个核细胞TLR4MRNA表达水平上调,血清TNF-α水平也同步升高,TLR4可能通过调节炎症反应介导糖尿病肾病炎症损伤。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞Toll样受体4的表达及其与TGF-β的关系

目的了解慢性乙型肝炎、肝硬化患者外周血单个核细胞（PBMC）中Toll样受体4（TLR4）的表达变化及其意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR方法分别检测28例慢性乙型肝炎、25例肝硬化及10例健康对照者PBMC中TLR4mRNA的表达;ELISA法检测上述患者血清转化生长因子p（TGF-β）;放射免疫法检测血清透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原蛋白（PCIH）及Ⅳ型胶原（CIV）的水平。结果各实验组TLR4mRNA的表达均明显高于健康对照组（P〈0．01）,且与患者血清TGF-β表达水平呈显著正相关（r值=0．875,P〈0．01）,与HA、LN、PCIn、CIV表达水平之间呈正相关（r值分别为0．647、0．525、0．556、0．682）。结论慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞TLR4的表达增高可能与肝纤维化的形成密切相关。     

Alterations in Tumor Necrosis Factor-α, Interferon-γ, and Interleukin-6 Production by Natural Killer Cell-Enriched Peripheral Blood Mononuclear Cells in Chronic Alcoholism: Relationship with Liver Disease and Ethanol Intake

No previous studies have been reported on human alcoholism in which the pattern of cytokine secretion by natural killer (NK) cells is explored. The goal of the present study was to evaluate the role of NK cells in the production of cytokines in patients with chronic alcoholism, analyzing at the same time the possible relationship between cytokine production and both alcoholic liver disease and ethanol (EtOH) intake. A total of 30 chronic alcoholic patients—11 without liver disease [alcoholics without liver disease (AWLD) group] and 19 diagnosed of alcoholic liver cirrhosis—were included in this study. Twenty-five age- and sex-matched healthy volunteers were analyzed as controls. Production of interferon (IFN)-γ, tumor necrosis factor-α (TNF-α), and interleukin (IL)-6 was performed on NK-enriched peripheral blood mononuclear cells (PBMC) after stimulation with IL-2 and IFN-α. In AWLD patients, the production of TNF-α was significantly reduced, compared with normal controls, under both IFN-α (p < 0.01) and IL-2 (p < 0.05) stimulation. In patients with cirrhosis, TNF-α production by PBMC enriched in NK cells varied depending on the EtOH intake status at the moment of evaluation. Accordingly, an increased concentration of this cytokine was detected in the supernatants of cirrhotic patients and active EtOH intake, particularly after IFN-α stimulation (p < 0.05); whereas, in patients with at least 1 year of alcohol withdrawal, TNF-α levels remained within normal range. The results on the production of IL-6 and IFN-γ in AWLD and cirrhotic patients showed that only cirrhotic patients with a prolonged EtOH withdrawal period display abnormal production. Accordingly, in this group of patients, a significantly increased release of IL-6 was observed after both IFN-α and IL-2 stimulation (p < 0.01 and p < 0.05, respectively). By contrast, a lower IFN-γ production (p < 0.005) was detected with respect to the control group. Our results point to the existence of an abnormal cytokine secretion by NK cells from chronic alcoholism patients, which depend on both the existence of liver disease and the status of EtOH intake.