神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化研究

神经生长因子是分子量26 000道尔顿的多肽。在神经元的发育,分化及生存中起着重要的作用。神经母细胞瘤的发生可能为神经母细胞的分化受到某种阻滞的结果。因而有人推测神经生长因子可能诱导神经母细胞瘤的细胞分化,但世界范围内尚无肯定的结论。我们应用18个神经母细胞瘤系系统研究了神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化的规律和特点。我     

表达反义N-myc逆转录病毒载体对神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化的影响

目的研究反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染后人神经母细胞瘤细胞在神经生长因子处理后的诱导分化情况,探讨Ｎ－ｍｙｃ在神经生长因子诱导分化中的意义。方法用基因重组技术构建表达反义Ｎ－ｍｙｃ的逆转录病毒载体。用ＴｒａｎｓｆｅｃｔａｍＲｅａｇｅｎｔ等多种基因转染方法,转染已经基因转染恢复了神经生长因子受体表达的人神经母细胞瘤系,建成表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系。用神经生长因子处理转化细胞系,观察ＮＧＦ是否能诱导分化。同时用ＴＵＮＥＬ原位凋亡检测技术及超微结构技术研究表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系凋亡的情况。结果表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系经单链ＲＮＡ探针杂交,证实其Ｎ－ｍｙｃ的表达明显降低。用神经生长因子处理这些转化细胞系,细胞出现明显的形态学分化。ＴＵＮＥＬ技术及超微结构研究表明,经反义Ｎ－ｍｙｃ转染的细胞系细胞凋亡增多。结论反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染能有效抑制Ｎ－ｍｙｃ的表达,进而促进神经生长因子诱导人神经母细胞瘤细胞的分化。反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染能使神经母细胞瘤细胞凋亡增多。     

全反式维甲酸体外诱导神经母细胞瘤细胞分化的实验研究

目的体外观察全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞系SH-SY5Y(SY5Y)细胞生长及分化的影响及其可能的分子机制。方法用RT-PCR方法检测ATRA作用前后SY5Y细胞TrKA mRNA表达情况;采用台盼蓝拒染法检测ATRA对SY5Y细胞的体外抗增殖作用;用倒置相差显微镜观察细胞形态变化。结果ATRA作用7d后SY5Y细胞TrKA mRNA表达增高;ATRA对SY5Y细胞有抗增殖作用和诱导细胞分化作用,并呈一定时间和剂量依赖关系。结论ATRA对SY5Y细胞有生长抑制及诱导分化作用,该作用与上调SY5Y细胞TrKA mRNA表达水平有关。     

神经生长因子在诱导树突状细胞分化中的作用

目的：在体外探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中的作用。方法：首先取C57BL/6小鼠股骨、胫骨骨髓细胞,按培养过程中干预因素不同分为 磷酸盐缓冲液(phosphate buff ered saline,PBS)刺激组(PBS组,n=6)、NGF刺激组(NGF组,n=6)、粒巨噬细胞集落刺激 因子(granulocyte monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)和IL-4共刺激组(GM-CSF+IL-4组,n=6)、NGF加GM-CSF和 IL-4共刺激组(NGF+GM-CSF+IL-4组,n=6),培养第7天采用流式细胞仪比较各组间CD11c+细胞阳性率和CD8a−亚型比 例;然后用GM-CSF+IL-4刺激培养未成熟的DCs,经CD11c免疫磁珠阳性分选得到纯化的未成熟DCs,将其分为PBS组 (n=6)、NGF组(n=6)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(LPS组,n=6)、NGF+LPS组(n=6),分别用PBS,NGF,LPS, NGF+LPS诱导细胞成熟,24 h后酶联免疫吸附分析法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清液中IL-6, IL-10和IL-12的水平。结果：1) NGF组CD11c+DCs百分比高于PBS组,低于GM-CSF+IL-4组(均P<0.05);GM-CSF+IL-4 组与NGF+GM-CS F+IL-4组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),且在4组中均以CD8a−DCs为主;2)NGF可以增强 LPS诱导的DCs分泌IL-6,IL-10和IL-12(均P<0.05),而单独NGF刺激对DCs分泌IL-6,IL-10和IL-12无影响(均P>0.05)。 结论：NGF可以诱导小鼠骨髓细胞向CD11c+DCs的定向分化,并且以CD8a−亚型为主;NGF能增强LPS诱导的DC分泌 IL-6,IL-10和IL-12。     

维甲酸及其受体与神经母细胞瘤细胞分化的研究进展

神经母细胞瘤(Neuroblastoma NB)是儿重常见的一种交感神经系统的恶性胚源性肿瘤，部分NB细胞具有自行分化消退的特性。如何利用人为方法使NB细胞分化逆转消退，是当今肿瘤研究的热点问题。由于NB具有自行消退逆转的独特生物学特性，所以为NB分化诱导疗法提供了理论依据。维甲酸(retinoic acid ra)及其受体具有控制细胞分化、增生和凋亡的能力，用维甲酸来治疗神经母细胞瘤，使其发生逆转是近来研究的热点。     

神经干细胞分化及诱导的研究进展

神经干细胞(NSC)的分化及诱导是目前神经科学研究的热点。因其有着巨大的潜在应用价值和重大的理论研究意义，越来越引起学者们的关注。为此，作者从NSC的体内发育、分化开始，到体外培养分化诱导的研究，从内因(基因)和外因(细胞因子、微环境)两个方面对近年来NSC诱导分化研究的一些进展作一综述。     

Γ干扰素诱导功能性TrkA的表达激活NGF/TrkA传导通路诱导原代神经母细胞瘤细胞分化的实验研究

目的在骨髓转移的神经母细胞瘤（Neuroblastoma,NB）细胞及人KP-N-RT细胞系中分别应用IFN-γ、NGF及联合应用IFN-γ和NGF作为诱导剂诱导NB细胞分化。方法NB骨髓转移细胞的原代培养以及人KP-N-RT细胞系培养10d。第10天在原代培养细胞及KP-N-RT细胞中应用RT-PCR法检测TrkA表达水平;同时应用Western法和免疫沉降法检测KP-N-RT细胞中TrkA及磷酸化TrkA蛋白表达的不同。结果第10天观察细胞形态学变化,在NB原代培养及KP-N-RT细胞中同时负荷IFN-γ和NGF的细胞表现出比单独负荷IFN-γ或NGF更加显著的形态学分化（P〈0.01）。前者细胞增殖抑制明显（P〈0.01）。在IFN-γ组,TrkAmRNA表达增加,NGF组未见明显改变,联合用药组有明显减少或消失。在KP-N-RT细胞中,在25IU/mLIFN-γ处理的细胞中用NGF刺激5min可致磷酸化TrkA蛋白表达增加。结论IFN-γ通过磷酸化NGF受体激活NGF/TrkA信号传导系统诱导NB细胞的分化,甚至在侵袭性表型的NB中也有相似结果。     

神经生长因子诱导神经干细胞分化的作用机制探讨

目的探讨神经生长因子(NGF)对体外培养的小鼠神经干细胞(NSCs)分化为神经元的作用及可能机制。方法以无血清培养法从孕13～14 d的昆明小鼠大脑皮质分离培养获得NSCs,传至3代后,进行NGF处理,并对培养的细胞进行MAP-2免疫细胞化学染色,荧光显微镜下对MAP-2阳性细胞进行计数。同时运用蛋白免疫印迹法(Western blot)考察NGF对TrkA、Akt、Erk磷酸化水平的影响;在研究NGF作用的信号转导通路时,预先给予各种信号通路抑制剂处理,再进行NGF干预,通过MAP-2染色及Western blot考察NGF促进神经干细胞分化为神经元的信号通路。结果 NGF可以显著促使NSCs分化为神经元并可以促进TrkA、Akt和Erk的磷酸化,呈现剂量和时间依赖性;各种通路抑制剂结果显示PI3K/Akt抑制剂可以阻断NGF对Akt的磷酸化作用,同时阻断了NGF对NSCs的促分化作用,MAPK抑制剂处理可以阻断NGF对Erk的磷酸化作用,但未见明显阻断NGF的促分化作用。结论 NGF可以促进NSCs分化为神经元,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

TRAIL联合化疗药物诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合化疗药物治疗神经母细胞瘤（NB）的作用及其可能机制。方法：不同浓度的TRAIL、化疗药物或TRAIL和化疗药物联合处理NB细胞株SMS-KCNR，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞毒作用，应用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率，透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果：KCNR细胞对TRAIL不敏感，对化疗药物相对敏感，存在剂量依赖性细胞毒效应；TRAIL与亚毒性浓度的化疗药物联用对细胞的杀伤作用显著增强：透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论：KCNR对TRAIL不敏感，但TRAIL与亚毒性浓度化疗药物联用可增强杀伤效应，这种细胞毒作用主要由凋亡介导。     

神经母细胞瘤

神经母细胞瘤(Neuroblastoma)是小儿最常见的实质恶性肿瘤(Solid Malignant Tumot),此瘤源自神经嵴,可从颈部至骨盘之交感神经节链(Sympathetic Ganglion Chain)或肾上腺髓质发生。其发病原因不明,恶性度极高,因为临床上的表现相当特异而治疗结果不理     

神经母细胞瘤

<正> 神经母细胞瘤是小儿常见的恶性肿瘤之一,据日本国立癌中心统计,占小儿全部恶性肿瘤的8.4%,但国内报告尚不多,且生前约半数误诊或未能作出诊断。本文报告两例经尸检证实的肾上腺(区)神经母细胞瘤,并结合有关文献就诊断、鉴别诊断、误诊原因等加以讨论,以提高对神经母细胞瘤的认识。例1 女,6岁,以不规则发热,进行性苍白乏力四月余之主诉入院。查体:重度贫血     

DMSO 联合神经营养因子BDNF 诱导BMSCs 向神经样细胞分化

目的：探讨脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）联合二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）诱导骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）向神经样细胞分化的效果,初步检测miRNA-26a 在神经细胞分化过程中的表达量变化。方法：从大鼠股骨抽取骨髓分离BMSCs,DMSO 对其预诱导,随后用含BDNF 的神经细胞培养基培养BMSCs,诱导其分化为神经细胞。免疫组化鉴定分化神经元样细胞特异标记物：神经元特异烯醇酶（neuron specifi c enolase,NSE）。实时定量PCR 法检测神经分化前后酪氨酸磷酸酶蛋白（tyrosine phosphatase protein,PTEN）基因/mTOR 和miRNA-26a 的表达变化。结果：100 ng·mL-1 BDNF 联合3% DMSO 可诱导BMSCs 向神经元样细胞分化,分化后神经细胞标志物NSE 蛋白表达呈阳性,且神经分化过程中miRNA-26a PTEN/mTOR 的含量明显上调。结论：3%DMSO 和 100 ng·mL-1 BDNF 的混合诱导剂可诱导大鼠BMSCs 向神经元样细胞分化,而miRNA-26a 可能通过PTEN/mTOR 调节神经分化。     

凝血酶对神经母细胞瘤细胞分化过程中细胞数和细胞周期的影响

目的：研究凝血酶对实验性神经细胞分化（老化）过程中细胞数和细胞周期的影响。方法：采用小鼠神经母细胞瘤细胞株（NBA2）无血清培养神经细胞分化模型，用倒置相关显微镜和流式细胞仪观察低浓度凝血酶对无血清培养过程中细胞数和细胞周期的影响。结果：无血清培养液中添加凝血酶（0．05－5U／ml）能延缓培养过程中的细胞数下降和细胞周期向G1／G0期转换。结论：低浓度凝血酶具有延缓神经细胞分化的潜能。     

组织因子表达影响阿霉素诱导人神经母细胞瘤凋亡的研究

目的 研究组织因子（TF）表达对阿霉素诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的影响。方法 以Western印迹法检测TF表达，以WST法检测阿霉素的细胞毒性。以Western印迹法检测阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解，以Hochest33342染色，倒置荧光显微镜下检测凋亡细胞。结果 人神经母细胞瘤系SH-EP1高表达TF而SK-N-SH细胞系中TF表达水平低。以TF基因表达载体TF-pcDNA3转染SK-N-SH细胞，显著增强其TF表达水平。以不同浓度阿霉素处理48h后，可见转染TF-pcDNA3的SK-N-SH细胞的存活数较对照细胞明显增多。转染TF-pcDNA3的SK-N-SH细胞及转染pcDNA3质粒的对照细胞分别以阿霉素处理4h、8h、24h，可见转染TF基因的细胞与对照细胞相比，Caspase．3、PARP裂解减弱。以Hochest33342染色检测到转染TF-pcDNA3的SK-N-SH细胞经阿霉素处理后的凋亡细胞数为134．33±21．00，与转染pcDNA3的对照组相比（232．33±8．84）显著减少（P〈0．05）。结论TF在人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH中的强制表达，可抑制阿霉素诱导的肿瘤细胞凋亡。肿瘤细胞中TF的异常高表达可能参与阿霉素诱导细胞凋亡的调控，影响肿瘤细胞对化疗药物的耐受性和疾病进展。     

二十二碳六烯酸对甲基苯丙胺诱导的人神经母细胞瘤细胞神经毒性的影响

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对甲基苯丙胺(METH)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞神经毒性的作用及其作用机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为Control组、METH组以及METH+DHA组。显微镜下观察SH-SY5Y细胞形态,测量并计算细胞长轴和短轴的比值,通过流式细胞术检测各组SH-SY5Y细胞凋亡水平。采用蛋白质组学分析METH引起的SH-SY5Y蛋白组改变,并筛选加入DHA后表达回调的蛋白。结果与Control组比较,METH组SH-SY5Y细胞神经突明显短缩,长轴与短轴比值减小(均P <0.05);与METH组比较,METH+DHA组神经突伸长,细胞长轴与短轴比值增大(均P <0.05)。与Control组比较,METH组早期细胞凋亡和晚期细胞凋亡比例升高,且总凋亡细胞比例也明显升高(均P <0.05);与METH组比较,METH+DHA组晚期细胞凋亡和总凋亡细胞比例降低(均P <0.05)。蛋白组学分析显示,加入DHA可以将22个METH诱导下表达变化的蛋白反向调节,涉及了核糖体、细胞骨架和谷胱甘肽代谢等生物学功能。结论 DHA可减...     

三氧化二砷抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖及诱导凋亡的初步研究

目的：探讨三氧化二砷（AS2O3)抑制神经母细胞瘤SK－N－SH细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法：①采用MTT法测定不同浓度的As2O3在不同时间对SK－N－SH细胞增殖的抑制率；②用TUNEL－POD法检测不同浓度的As2O3诱导SK－N－SH细胞凋亡的情况。结果：①各浓度组As2O3均可抑制SK－N－SH细胞增殖，而且延长作用时间比增加作用浓度更能增强药物的抑制作用；②两个浓度的As2O3均可诱导SK－N－SH细胞凋亡，且凋亡指数与浓度高低有关。结论：As2O3可以通过诱导神经母细胞瘤SK－N－SH细胞凋亡而抑制其增殖，有一定的临床应用价值。     

颅神经嵴干细胞成牙本质样细胞分化诱导的体内实验研究

目的观察诱导颅神经嵴干细胞(cranial neural crest stem cell,CNCSC)后的裸鼠体内成牙本质样细胞表型分化,探讨CNCSC用于牙再生研究的可行性。方法颅神经管组织块无血清条件培养法获取CNCSC,体外经成纤维生长因子8(FGF8)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质基质非胶原蛋白等因子诱导后,与胶原-壳聚糖三维凝胶支架复合植入裸鼠背部皮下,免疫组织化学方法检测型胶原表达、牙本质涎磷蛋白(DSPP)表达,鉴定其成牙本质样细胞表型分化特征。结果诱导后CNCSC植入体内后1月表现为型胶原及DSPP阳性表达,2月后DSPP表达增强,局部区域可见极性栅栏状排列的细胞分布,并可见明显的细胞外基质形成。结论CNCSC在体内可向成牙本质样细胞表型分化,为进一步开展牙再生研究奠定了基础。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化及凋亡的研究

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经细胞诱导分化的潜能,及分化后的凋亡情况?方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,用含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基对第三代MSCs进行诱导分化,诱导分化的细胞按分化时间3?7?14 d分成A?B?C三组?三组诱导分化细胞分别进行NSE免疫组织化学,MAP2免疫荧光化学以及TUNEL凋亡细胞检测?结果:A?B?C三组细胞在细胞形态上与神经细胞相似,并且表达神经细胞特异性标记抗原NSE?MAP2,但是C组细胞表达强度弱于B组,并且阳性细胞比例少于B组(P < 0.05)?A?B?C三组TUNEL凋亡阳性细胞比例呈逐渐增多趋势(P < 0.05)?结论:含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基可以诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,随着诱导时间的推移,分化细胞状态下降,凋亡比例增多?     

颅神经嵴干细胞成牙本质样细胞分化诱导的体内实验研究

目的观察诱导颅神经嵴干细胞（cranial neural crest stem cell，CNCSC）后的裸鼠体内成牙本质样细胞表型分化，探讨CNCSC用于牙再生研究的可行性。方法颅神经管组织块无血清条件培养法获取CNCSC，体外经成纤维生长因子8（FGF8）、骨形态发生蛋白2（BMP2）、转化生长因子β1（TGFβ1）、牙本质基质非胶原蛋白等因子诱导后，与胶原-壳聚糖三维凝胶支架复合植入裸鼠背部皮下，免疫组织化学方法检测Ⅰ型胶原表达、牙本质涎磷蛋白（DSPP）表达，鉴定其成牙本质样细胞表型分化特征。结果诱导后CNCSC植入体内后1月表现为Ⅰ型胶原及DSPP阳性表达，2月后DSPP表达增强，局部区域可见极性栅栏状排列的细胞分布，并可见明显的细胞外基质形成。结论CNCSC在体内可向成牙本质样细胞表型分化，为进一步开展牙再生研究奠定了基础。