三氧化二砷白蛋白微球抑制人膀胱癌细胞生长的实验研究

目的：研究三氧化二砷白蛋白微球(AsO3—HAS—NS)对人膀胱癌细胞生长的抑制作用。方法：用交联固化的方法制备As2O3—HAS—NS，用原子吸光光度法测量微球中的砷浓度，采用显微镜观察和MTT法研究As2O3—HAS—NS对细胞生长的抑制作用，用^3氢—胸腺嘧啶核苷(^3H—TDR)掺人法测定其体外杀伤活性。用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果：显微镜观察及MTT法显示As2O3—HAS—NS对人膀胱癌EJ细胞体外生长有明显抑制作用，呈现出时间及剂量依赖性。^3H—TDR掺人法测得As2O3—HAS—NS作用的EJ细胞存活率开始较高，但随着时间的延长，较As2O3降低快。流式细胞分析显示As2O3—HAS—NS有明显地促进EJ细胞凋亡的作用，Gn／G1期百分比明显减少，而G2／M期百分比明显增多，至24h达57．1％。24h Sub—G1期细胞占9．4％。结论：As2O3—HAS—NS对EJ细胞的作用优于单纯As2O3，可能成为实体肿瘤治疗的更优剂型。     

PCNA反义寡核苷酸抑制人膀胱癌EJ细胞增殖活性的实验研究

目的 探讨全硫代修饰型ＰＣＮＡ反义寡核苷酸（ＡＳＯ）对人膀胱癌ＥＪ细胞体外增殖活性及裸鼠体内致瘤性的影响。方法 ＰＣＮＡ－ＡＳＯ在脂质体介导下转染ＥＪ细胞后,运用细胞计数,ＭＴＴ法,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验,流式细胞术（ＦＣＭ）,克隆形成率（ＣＦ）,ＳＡＢＣ免疫组化,建立裸鼠动物模型等方法分析其体内外抗瘤活性及机制。结果 在脂质体介导下,０．４－２．０μｍｏｌ／Ｌ ＰＣＮＡ－ＡＳＯ对人膀胱癌ＥＪ细胞     

细胞周期蛋白D1在三氧化二砷抑制人胆囊癌细胞生长中的作用

目的 探讨细胞周期蛋白(Cyclin)D1在三氧化二砷(As2O3)抑制人胆囊癌细胞体外生长中的作用.方法 不同浓度的As2O3作用于胆囊癌细胞GBC-SD,MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期分布.Western印迹和RT-PCR检测Cyclin D1、D2、D3和CDK4、K6的蛋白和mRNA表达.构建Cyclin D1的表达质粒并转染GBC细胞,观察Cyclin D1过表达时细胞周期的变化.结果 As2O3能抑制胆囊癌细胞生长,作用呈时间、剂量一效应关系;流式细胞仪检测发现As2O3可将增殖过程中的胆囊癌细胞阻滞于G1期;Western印迹及RT-PCR检测显示Cyclin D1表达下降;过表达Cyelin D1逆转了As2O3对细胞周期的改变.结论 Cyclin D1在As2O3抑制人胆囊癌细胞的生长中起重要作用.     

三氧化二砷抑制肝癌细胞侵袭转移的实验研究

目的了解三氧化二砷（As2O3）对肝癌HepG2细胞体外黏附、侵袭和迁移的抑制作用。方法采用MTT法观察As2O3对HepG2细胞黏附能力的影响,以Transwell检测As2O3对HepG2细胞迁移、侵袭能力的影响。结果As2O3作用后30、60、90、120min时的细胞黏附率较对照组均明显下降,不同时间组与对照组之间差异均有显著性（P〈0.05）;As2O3作用后游走及侵袭穿膜细胞数也较对照组明显下降（P〈0.01）。结论As2O3可明显抑制HepG2细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力。     

ω-6不饱和脂肪酸促进结肠癌变的实验研究

目的 探讨ω-6不饱和脂肪酸是否通过下调P53依赖的生长抑制来促进结肠癌变.方法 通过氧化偶氮甲烷（AOM）腹腔注射来诱导结肠的癌变.实验大鼠被分为基本饮食加生理盐水腹腔注射（Control组）、高ω-6不饱和脂肪酸饮食加生理盐水腹腔注射（Corn oil组）、基本饮食加AOM腹腔注射（AOM组）和高ω-6不饱和脂肪酸饮食加AOM腹腔注射（Corn oil＋AOM组）.通过亚甲蓝染色检测结肠黏膜异型隐窝（ACF）的形态,并计算其数量 采用RT-PCR、Western Blot及免疫组织化学染色检测结肠黏膜中P53和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况.结果 Control组、Corn oil组、AOM组和Corn oil＋AOM组大鼠结肠ACF的数量分别为（1.2±0.3）个、（1.3±0.4）个、（41.0±4.8）个和（73.3±9.9）个,差异有统计学意义（P＜0.05）.4组大鼠结肠黏膜PCNA相对表达量分别为0.17±0.03、0.35±0.05、0.74±0.11及1.10±0.13,差异有统计学意义（P＜0.05）.AOM可明显抑制结肠黏膜P53 mRNA和蛋白的表达,并减少细胞核和细胞质P53的含量 高ω-6不饱和脂肪酸饮食则明显促进了AOM对P53表达的抑制作用.结论 高ω-6不饱和脂肪酸饮食能增强致癌因子AOM对结肠黏膜P53的抑制作用,增加PCNA的表达,从而促进结肠ACF的形成,诱导结肠癌的发生.     

三氧化二砷对人结肠腺癌裸鼠肝转移癌胚抗原水平的影响

目的：探索应用三氧化二砷（As2O3）治疗人结肠腺癌肝转移后对荷瘤裸鼠血清、腹水及癌组织中癌胚抗原（carcinoembryonic，CEA）水平的影响。方法：在建立人结肠腺癌裸鼠肝转移模型后15min（早期治疗组）、10d（中期治疗组）、20d（晚期治疗组）经尾静脉注射As2O3（5mg／kg·d）；并以模型建立后10d经尾静脉注射生理盐水作为对照组。于接种癌细胞4周后，采集血、腹水和癌结节，分别检测其CEA含量。结果：早期治疗组的血、腹水和癌结节中的CEA含量均明显低于对照组（P〈0．01）；晚期治疗组与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：早期应用As2O3能有效刚氐荷瘤裸鼠的血清、腹水和癌结节中CEA水平。     

反义PCNA联合wt-p53基因转染抑制膀胱癌细胞生长的实验研究

我们通过共转染方法观察了反义增殖细胞核抗原 (PCNA)联合野生型 p5 3(wt p5 3)基因对膀胱癌EJ细胞体外生长活性的抑制作用及其分子机制 ,现报告如下。材料与方法　PCNA反义表达载体pLAPSN和 pcDNA wt p5 3由本室常规保存。设置正常对照组、反义PCNA转染组、wt p5 3转染组、反义PCNA +wt p5 3转染组。参照脂质体lipofectamine 2 0 0 2说明书进行基因转染。细胞生长活性检测采用细胞计数法[1] 。DNA合成速率检测采用3 H TdR掺入法[1] 。细胞周期时相分析 :参照文献 [1]进行。基因表达检测采用RT PCR法[2 ] 。细胞凋亡检测采用…     

脂质体介导增殖细胞核抗原反义寡核苷酸抑制人肝癌细胞增殖的实验研究

目的 观察脂质体介导增殖细胞核抗原（PCNA）对肝癌细胞增殖的影响。方法：根据PCNA cDNA序列设计合成与PCNAmRNA AUG起始密码子后的18位碱基序列互补的PCN反义寡核苷酸，脂质体介导转染人肝癌细胞析，通过细胞生长曲线测定，MTT比色法检测PCNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞的生长抑制率，比较阳离子脂质体介导转染法与直接转染法的区别。结果 PCNA反义寡核苷酸作用后的肝癌细胞、生长明显受到抑制。应用阳离子脂质体介导转染能显著提高PCNA反义寡核苷酸的抑增殖效应。结论 利用阳离子脂质体介导转染PCNA反义寡核苷酸能显著提高对人肝癌细胞增殖的抑制效应。     

三氧化二砷抑制人膀胱癌细胞BIU-87体外生长的实验研究

目的：观察三氧化二砷对人膀胱癌细胞的生长抑制作用,并探讨其机制。方法：采用ＭＴＴ法检测不同浓度的Ａｓ２Ｏ３对人膀胱细胞株ＢＩＵ＿８７的生长抑制率,原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡,ＳＡＢＣ免疫组织化分析ＢＩＵ－８７中ｂｃｌ－２的表达。结果：Ａｓ２Ｏ３可有铲地抑制ＢＩＵ＿８７细胞生长,具有时间、浓度依赖性特点;经药物作用后,膀胱癌凋亡细胞明显增多,凋亡率随作用时间的延长而增高,ＢＩＵ－８７细胞中的     

Hic-5/ARA55抑制大肠癌细胞生长的实验研究

目的 研究Hic-5/ARA55对大肠癌细胞生长的影响及其机制.方法 流式细胞仪检测已稳定转染Hic-5/ARA55的大肠癌细胞系(Lovo-Hic-5/ARA55组)的细胞周期,用未转染质粒(Lovo组)和转染空质粒的Lovo细胞(Lovo-Vector组)作为对照.Western blot方法检测各组细胞之间主要细胞周期蛋白的表达差异,Luciferase Assay进一步研究Hic-5/ARA55与细胞周期蛋白的作用机制.建立裸鼠皮下种植瘤模型,7周后切取瘤体并称重,应用免疫组织化学方法检测各组皮下种植瘤的Hic-5/ARA55及相关细胞周期蛋白的表达差异.结果 Lovo-Hic-5/ARA55组细胞由G0/G1期进入S期明显延迟,并且细胞周期蛋白P27表达升高,Luciferase Assay证明Hic-5/ARA55在转录水平上调P27的表达.Lovo-Hic-5/ARA55组皮下种植瘤质量[(0.33±0.23)g]明显低于Lovo组[(1.20±0.39)g]和Lovo-Vector组[(1.30±0.49)g],差异有统计学意义(P＜0.05).Lovo-Hic-5/ARA55组种植瘤Hic-5/ARA55和P27均高表达,而Lovo组和Lovo-Vector组均低表达或阴性表达,差异有统计学意义(P＜0.05),并且Hic-5/ARA55和P27的表达呈正相关(r=0.816,P＜0.05).结论 Hic-5/ARA55在体外和裸鼠体内均通过在转录水平上调细胞周期抑制蛋白P27的表达来抑制大肠癌细胞的生长.     

反义增殖细胞核抗原联合p16基因转染抑制膀胱癌细胞生长的研究

目的 探讨膀胱癌联合基因治疗的新策略。方法 反义增殖细胞核抗原(PCNA)联合p16转染膀胱癌细胞，观测共转染1—7d后癌细胞增殖活性、DNA合成速率、细胞周期时相、克隆形成能力、细胞凋亡和PCNA、p16基因表达情况。结果 联合转染后癌细胞PCNA表达减弱，p16表达显著增强，增殖活性抑制15．45％—68．47％(P＜0．01)，DNA合成速率减慢65．77％(P＜0．01)，细胞周期阻滞于G0／G1期，克隆形成率抑制64．49％(P＜0．01)，凋亡率为22．00％(P＜0．01)。结论 反义PCNA与p16共转染具有抑制增殖、诱导凋亡的双重作用，有望成为膀胱癌联合基因治疗的新途径。     

非甾体类消炎药抑制结肠癌细胞株细胞生长的实验研究

目的 研究非甾体类消炎药（NASIDs）通过产生一氧化氮的亚硝基谷胱甘肽（GSNO）对结肠癌细胞生长的影响及其机制。方法 采用细胞生长曲线和流式细胞仪方法研究细胞凋亡，竞争酶联免疫分析测定细胞培养上清PGE2的环氧化酶2（PGE2）表达水平，Western Blot法检测COX-1／COX-2蛋白表达。结果 在不同时间和浓度梯度中，GSNO处理可增加PGE2的产量。用500μmol／L处理48h后，COX-1和COX-2的蛋白表达水平增加。NASIDs可以阻断PGE2的产生，但对于GSNO诱导的细胞生长抑制无影响。结论 GSNO可促进细胞产生PGE2增加，并诱导COX-1和COX-2蛋白呈时间依赖和剂量依赖性表达；高浓度的GSNO可抑制细胞生长，并诱导3种细胞株凋亡，而不受COX-2表达及其活性的影响。NADIs能阻断PEG2产生，但对于GSNO诱导的结肠癌细胞株生长抑制并无协同作用。     

PCNA反义cDNA基因转导抑制人膀胱癌细胞增殖的研究

目的 探讨增殖细胞核抗原（PCNA）基因反义cDNA对人膀胱癌细胞体外增殖活性的抑制作用。方法 构建PCNA反义cDNA真核表达载体并转染膀胱癌DJ细胞,通过细胞生长曲线、MTT比色分析、H^3-TdR掺入法检测癌细胞增殖活性,流式细胞仪（FCM）分析细胞周期时相变化,SABC免疫组化观察癌细胞PCNA蛋白表达水平。结果 PCNA反义cDNA导入后,膀胱癌DJ细胞生长速率显著减慢（P＜0．01）,增殖活性抑制率59．02％（P＜0．05）,DNA合成速率降低52．31％（P＜0．01）,S期细胞减少,细胞周期阻滞于G0／G1期,PCNA蛋白表达显著减弱（P＜0．05）,差别均有显著性意义。结论 PCNA反义cDNA基因转导能有效抑制膀胱癌细胞的PCNA蛋白表达及体外增殖活性,为肿瘤基因治疗提供了有效途径。     

结直肠腺瘤细胞凋亡和增殖与bcl—2和P53蛋白表达的关系

目的 探讨结直肠腺瘤中细胞凋亡和增殖与ｂｃｌ－２和Ｐ５３蛋白表达的关系。方法 对４５例结直肠腺瘤用原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法检测细胞凋亡;以增殖细胞核抗原标记增殖检测其增殖活性;用免疫组织化学检测ｂｃｌ－２和Ｐ５３蛋白表达,另选结直肠高分化腺癌和五常黏膜各１０例作对照检测。结果 ４５例结直肠腺瘤细胞的凋亡指数（ＡＩ）为（９０．８５&;#177;０．２４）％,结直肠腺癌细胞的ＡＩ为（１．８６&;#177;０．１５）％,两者ＡＩ均高于正常结直肠黏膜（Ｐ〈０．０１）,而腺瘤与腺癌ＡＩ值差异也有显著性（Ｐ〈０．０５）;ｂｃｌ－２和Ｐ５３蛋白的表达率与细胞ＡＩ呈显著互相关（ｒｓ＝－０．６５和ｒｓ＝－０．６０）,Ｐ５３蛋白表达与细胞增殖活性呈正相关（ｒｓ＝０．８６）,而ｂｃｌ－２蛋白表达与细胞增殖无相关性,结论ｂｃｌ－２和Ｐ５３蛋白过度表达与细     

反义核酸抑制增殖细胞核抗原表达的研究进展

反义核酸是天然存在于原核生物内或根据碱基互补原理人工合成的短片断寡聚核苷酸,通过与靶基因或mRNA配对结合,阻断基因转录和翻译,从而特异性抑制靶基因的表达。1978年Zamecnik等〔1〕首次将反义技术应用于抑制病毒基因表达研究并获得成功,从而进入了应用反义技术研究基...     

维甲酸对大肠粘膜细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察维甲酸对大肠粘膜细胞增殖力学变化的影响。方法应用维甲酸对大鼠大肠癌的诱发过程进行干预治疗,观察癌变率及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达。结果维甲酸治疗组（Ⅱ组）较未加维甲酸治疗的对照组（Ⅰ组）大肠癌发生时间晚且发生率显著降低（Ｐ＜００５）。Ⅰ、Ⅱ组ＰＣＮＡ指数显著高于未用诱癌剂的Ⅲ、Ⅳ组（Ｐ＜００１）。组内对比结果显示,Ⅰ组ＰＣＮＡ表达有随着诱癌时间延长而增强的趋势（Ｐ＜００５）,至诱癌后期ＰＣＮＡ指数已达１６８±１４,接近高分化腺癌水平,低于低分化腺癌。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组内比较差异无显著意义。Ⅱ组ＰＣＮＡ指数早期与Ⅰ组差异无显著意义。中后期显著低于Ⅰ组（Ｐ＜００１）。结论我们认为维甲酸可完全或部分阻逆实验性大肠癌的癌变过程,降低其发生率,为临床应用维甲酸防治大肠癌提供了理论资料。     

PCNA反义寡核苷酸抑制人肝癌细胞体外增殖的研究

目的 观察增殖细胞核抗原（PCNA）反义寡核苷酸对人肝癌细胞株体外增殖的影响及生物学特性的改变，方法 MTT法，集落形成试验观察PCNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞的生长抑制，免疫组化技术检测PCNA的蛋白表达，流式细胞仪分析细胞周期变化。结果 PCNA反义核酸作用后的肝癌细胞生长明显受到抑制，抑制效应于作用后48h最为明显，并于72h后逐渐减弱，集落形成率明显下降，PCNA蛋白表达明显下降，细胞周期中S期细胞数明显减少。结论 PCNA反义寡核苷酸能显著抑制人肝癌细胞的生长。     

乳腺癌中C—erbB—2和Ki—67度表达与癌细胞生长,增殖的关系

采用免疫组化方法对Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因进行标定，通过Ｋｉ－６７抗体的表达揭示癌细胞增殖状况。综合分析二者的表达状态与癌瘤大小等的关系，认为Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因与癌瘤大小无显著关系。     

Vpr对人结肠癌细胞的抑制作用及其机制

目的 探讨人类免疫缺陷病毒1型( HIV-1)病毒蛋白r(Vpr)对人结肠癌细胞HCT-8的抑制作用及其机制.方法 将细胞分为空白对照组、空载体转染组和Vpr转染组.空白对照组:细胞不予干预;空载体转染组:对数生长期的细胞加入不同感染复数(MOI)的空载体腺病毒;Vpr转染组:加入不同MOI的含有HIV1-Vpr基因的重组腺病毒(Adv-Vpr).应用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及线粒体膜电位,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达.多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验;或采用双因素方差分析,组内比较采用t检验.结果 Vpr显著抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,Adv-Vpr转染72 h后(MOI=200),Vpr转染组细胞MTT值为1.03±0.04,与空载体转染组(2.46 +0.15)及空白对照组(2.51±0.14)比较,差异有统计学意义(F=144.6,P＜0.05);Adv-Vpr转染48 h后(MOI=200),Vpr转染组处于G2/M期的细胞比例及线粒体膜电位下降的细胞比例增加,分别为37.31％±5.90％和32.07％±5.64％,与空载体转染组(18.30％±6.04％、3.32％±0.79％)及空白对照组916.66％±3.51％、2.76％±1.43％)比较,差异有统计学意义(F=10.08,64.45,P＜0.05).Adv-Vpr转染72 h后(MOI=200),Vpr转染组细胞凋亡率为37.62％±6.48％,与空载体转染组(3.44％±1.11％)及空白对照组(2.93％±1.07％)比较,差异有统计学意义(F=122.4,P＜0.05).Adv-Vpr处理48 h后(MOI=200),Westem blot检测发现Vpr导致了Caspase-9、Caspase-3剪切为活性片段,p-Chk1-S345磷酸化增加,而Fas、Fas-L、ERK1及ERK2表达未见上调.结论 Vpr在体外能够有效抑制结肠癌细胞株HCT-8增殖,并诱导其细胞周期G2期阻滞及凋亡,其机制分别与DNA损伤信号通路激活及线粒体凋亡通路启动有关.Vpr在结肠癌的治疗中具有潜在的应用前景.     

Fas、FasL和Bcl-2在膀胱癌组织的表达及意义

目的　研究Fas蛋白 (CD95 /Apol 1,Fas)、Fas配体 (Fasligand ,FasL)及Bcl 2在膀胱癌组织中的表达 ,并探讨其临床意义。方法　采用免疫组化LSAB法检测 5 0例膀胱癌组织及 6例正常膀胱黏膜中Fas、FasL和Bcl 2的表达。结果　Fas、FasL及Bcl 2在膀胱癌组织中的阳性表达率分别为 5 0 %、38%、4 2 %。膀胱癌组织FasL和Bcl 2的阳性表达率明显高于正常组织 (P <0 .0 5 ) ,Fas明显低于正常组织 (P <0 .0 5 )。Fas的表达与膀胱癌病理分级、复发有关 (P <0 .0 5 ) ;FasL、Bcl 2表达与各项病理指标均无关 (P >0 .0 5 )。结论　Fas的表达降低与膀胱肿瘤的恶性化程度有关。